IMOBILIZAÇÃO DE HRP EM AMBERLITE IRC 748 ATRAVÉS DE
COMPLEXAÇÃO COM NÍQUEL (II)
HARYEL LIMA SANTOS1; MARIA ANTONIA CARVALHO LIMA DE JESUS1;
HEIDDY MARQUEZ ALVAREZ1.
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UNIVERSIDADE ESTADUAL DE FEIRA DE SANTANA
Introdução: As peroxidases são oxidases que oxidam uma grande variedade
de compostos orgânicos e inorgânicos. Uma dessas enzimas é a peroxidase de
raiz forte (HRP). Ela apresenta alta estabilidade, baixo custo e apresenta
resposta em um amplo intervalo de pH. As enzimas podem participar das
reações de biotransformação na forma livre ou na forma imobilizada. Entre os
métodos de imobilização mais utilizados encontra-se a forma por adsorção.
Este mecanismo acontece através de ligações fracas como forças de Van der
Waals e /ou interações eletrostáticas e hidrofóbicas. Neste trabalho utilizamos
como suporte a resina Amberlit IRC 748, a qual adsorve íons metálicos através
de interações iônicas oferecendo uma maior seletividade do que as resinas
convencionais. Objetivos: Imobilizar a HRP comercial na resina Amberlite IRC
748 pura e modificada através da troca iônica com os ions metálicos Ni(II) e
estabelecer condições ótimas de imobilização de HRP por adsorção. Métodos:
Coloca-se de 1g à 4g de suporte em seringas de 10mL. Em seguida, preparase soluções 0,4M de NiSO4 em água deionizada, adicionando-se 20mL às
seringas. Posteriormente o volume total do eluente é avolumado num balão
volumétrico de 25mL. O conteúdo das seringas é seco e reservado para outro
experimento. Adiciona-se as seringas contendo amberlite-Ni2+ 10mL da solução
de 0,08mg.mL-1 de HRP em solução tampão fosfato 100mM de pH=6,0 e de
pH=8,0. Realiza-se no espectrofotômetro de UV-Vis a leitura da absorbância
dos eluentes de Ni2+ para comprimento de onda de 722nm. Faz-se a
determinação da atividade da HRP por método colorimétrico baseado na
mudança de absorbância a 470 nm devido à formação do produto do
tetraguaiacol durante três minutos. Resultados: As resinas modificadas foram
caracterizadas através de Espectroscopia de Infravermelho com Transformada
de Fourier (FTIR) e Termogravimetria (TG). Observou-se que a quantidade
residual de Ni2+ no eluente era muito baixo da ordem de 12 % quando se
utilizava a seringa carregada com 4 g de resina. Conclusão: O processo de
imobilização aconteceu melhor em pH 8. Estudos de eficiência de imobilização
e atividade residual da HRP ainda estão sendo realizados.
Palavras-chave: HRP; imobilização; amberlite IRC 748.