Universidade Camilo Castelo Branco Instituto de Engenharia Biomédica NAYARA GOMES FELIX DA SILVA ANÁLISES DE PARÂMETROS BIOQUÍMICOS EM INDIVÍDUOS SUBMETIDOS AO TESTE DE ESFORÇO E UTILIZAÇÃO DE ROUPAS IMPREGNADAS COM BIOCERÂMICA BIOCHEMICAL BLOOD ANALYSIS AFTER PHYSICAL EFFORT IN INDIVIDUALS WEARING FUNCTIONALIZED CLOTHES São José dos Campos, SP 2014 II Nayara Gomes Felix da Silva ANÁLISES DE PARÂMETROS BIOQUÍMICOS EM INDIVÍDUOS SUBMETIDOS AO TESTE DE ESFORÇO E UTILIZAÇÃO DE ROUPAS IMPREGNADAS COM BIOCERÂMICA Orientador: Prof. Dr. Egberto Munin Co-orientadora: Profa. Dra. Adriana Barrinha Fernandes Moretti Dissertação de Mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduação em Bioengenharia da Universidade Camilo Castelo Branco, como complementação dos créditos necessários para obtenção do título de Mestre em Bioengenharia. São José dos Campos, SP 2014 III Ficha Catalográfica IV V DEDICATÓRIA Dedico esse trabalho à Deus, pela Fé que tenho no Senhor, aos meus pais: Francisco e Iracema que sempre incentivaram no meu aprendizado e acreditaram no meu trabalho e ao meu irmão Pedro. VI AGRADECIMENTOS Agradeço a inúmeras pessoas que me ajudaram para a conclusão desse trabalho: Meus pais Francisco e Iracema que sempre estiveram ao meu lado, me apoiando e acreditando no meu esforço. Á Nina e Neguinha que sempre estiveram ao meu lado nas horas de estudos. Aos meus voluntários que são minhas jóias raras, pois sem eles esse trabalho não estaria concluído. Ao Nilton Boer que sempre esteve ao meu lado, me ajudando, dando sugestões, como sempre digo: foi como um PAI durante esse trabalho. Ao Laboratório de Análises Clínicas da Fundação Educacional de Fernandópolis e seus colaboradores: Maria Lais, Veida, Jeferson, Daiane e Vania pela ajuda na coleta, separação e envio de amostras. Aos meus colegas de curso, onde fiz novas amizades, sempre estivemos juntos durante as aulas, trabalhos e apresentação de resultados. Ao Cléber Vergílio que durante o “desespero” nas análises estatísticas me ajudou e orientou. Ao Conrado por ter acreditado no trabalho e permitiu a utilização de suas roupas para a concretização de tudo isso. E especialmente ao meu orientador Egberto Munin e Co-orientadora Adriana Barrinha pelo stress vividos, orientações feitas e conclusão do trabalho, muito obrigada Munin. VII ANÁLISES DE PARÂMETROS BIOQUÍMICOS EM INDIVÍDUOS SUBMETIDOS AO TESTE DE ESFORÇO E UTILIZAÇÃO DE ROUPAS IMPREGNADAS COM BIOCERÂMICA RESUMO Significativas incidências de lesões nas estruturas musculoesqueléticas dos membros inferiores podem ocorrer em indivíduos sedentários que resolvem praticar atividade física. Fatores como a falta de orientação das pessoas no momento de optar pela modalidade esportiva; de como realizar corretamente a técnica da modalidade; a frequência a ser realizada e intensidade podem agravar ainda mais a incidência. O objetivo do presente estudo foi analisar a variabilidade de parâmetros bioquímicos (Creatina Cinase-CK e Lactato), indicadores de lesão muscular, realizando coletas sanguíneas nos tempos: basal, pré e pós teste de esforço realizado com oclusão corporal parcial por meio de roupas impregnadas com nano-cerâmica em voluntários irregularmente ativos. Foi realizado um estudo duplo-cego, de maneira cross-over, ou teste pareado, assim todos os voluntários da presente pesquisa realizaram o mesmo teste em duas situações: traje com a biocerâmica incorporada e placebo. A análise dos resultados de dosagem de CK por meio do teste t pareado indicou que a média das diferenças pareadas entre os grupos não difere significantemente de zero, ou seja, a utilização de roupas contendo particulado cerâmico não promoveu alterações nos níveis séricos de CK. A análise de dados mostrou uma menor dispersão nas concentrações séricas de lactato para voluntários que utilizaram a roupa contendo particulado cerâmico, comparativamente aos voluntários que utilizaram a roupa placebo. Portanto, a oclusão corporal com roupas contendo particulado cerâmico produziu ação modulatória na cadeia de produção e depuração do lactato, interferindo consequentemente nos níveis séricos deste composto, por mecanismos ainda não elucidados. Palavras-chave: Lesão muscular, CK, lactato, e biocerâmica. VIII BIOCHEMICAL BLOOD ANALYSIS AFTER PHYSICAL EFFORT IN INDIVIDUALS WEARING FUNCTIONALIZED CLOTHES ABSTRACT Significant effects of lesions in the musculoskeletal structures of the lower limbs may occur in sedentary individuals who solve physical activity. Factors such as the lack of guidance from people when you opt for the sport, how to properly perform the technique of the sport, to be held the frequency and intensity may further aggravate the incidence. The objective of this study was to analyze the variability of biochemical parameters (Creatine Kinase- CK and lactate), indicators of muscle injury, performing blood collections in time: basal, pre and post stress test performed with partial occlusion body through impregnated clothing with nanoceramic irregularly active volunteers. Costume with built bioceramic and placebo: a doubleblind study, so cross-over, or paired test, so all of this research volunteers underwent the same test was conducted in two situation. The results of measurement of CK by using the paired t test indicated that the mean difference between the paired groups are not significantly different from zero, the use of clothing impregnated ceramic particles did not change in serum CK. Data analysis showed a lower dispersion in serum lactate for volunteers who used the machine containing ceramic particles, compared to volunteers who used the placebo clothing. Therefore, the occlusion body with clothing containing ceramic particles produced modulatory action on the production and clearance of lactate chain, thus interfering in the serum levels of this compound, by mechanisms not yet elucidated . Keywords: Muscle Injury, CK, lactate, bioceramics. IX LISTA DE FIGURAS Figura 1: Ciclo de Krebs. .......................................................................................................... 20 Figura 2: Roupa sem marcação= BC+ (a). Roupa com marcação= placebo (b) ...................... 28 Figura 3: Fluxograma dos procedimentos experimentais. ........................................................ 31 Figura 4: CK (U/L) pré-teste em função de CK (U/L) basal, para a primeira tomada de dados. A linha cheia corresponde ao ajuste linear aos pontos experimentais. A linha de identidade está representada em pontilhado. ..................................................................... 33 Figura 5: Dependência entre o parâmetro ∆CK (U/L) e os níveis de CK Pré (U/L) medidos previamente ao teste de Cooper. A linha tracejada é para visualização de tendência....... 33 Figura 6: CK (U/L) pré-teste em função de CK (U/L) basal para a segunda tomada de dados. A linha cheia (azul) corresponde ao ajuste linear aos pontos experimentais. A linha de identidade está representada em preto............................................................................... 35 Figura 7: Dependência entre o parâmetro ∆CK (U/L) e os níveis de CK (U/L) medidos previamente ao teste de Cooper. A linha tracejada é para visualização de tendência....... 35 Figura 8: Lactato Pré (mmol/L) em função do Lactato Basal (mmol/L) para as medidas do dia 1/09/2012. A linha pontilhada corresponde à linha de identidade (coeficiente angular 1). ........................................................................................................................................... 38 Figura 9: Lactato Pré (mmol/L) em função do Lactato Basal (mmol/L) para as medidas do dia 22/09/2012......................................................................................................................... 39 Figura 10: a, b, c: Análise com os dados integrados na (a) coleta basal, (b) pré e (c) pós-teste de Cooper. ......................................................................................................................... 41 Figura 11: Comparação da roupa placebo e BC+ por meio da variação basal e pós-teste. ...... 42 Figura 12: Variação de ∆LCTb% (mmol/L) em função do Lactato Basal (mmol/L) comparado nos dois dias de coleta com a utilização de roupas placebo e BC+. As linhas cheias correspondem aos ajustes dos pontos experimentais a modelos exponenciais decrescentes simples............................................................................................................................... 43 X LISTA DE TABELAS Tabela 1: Adaptação da tabela referente à distância (m) no teste de Cooper através da capacidade aeróbica em homens ....................................................................................... 25 Tabela 2: Valores medidos para CK referente à primeira tomada de dados em 1/09/2012. .... 32 Tabela 3: Valores medidos para CK referente à segunda tomada de dados no dia 22/09/2012. ........................................................................................................................................... 34 Tabela 4: Análise da ∆CK % para os dois dias de medidas. .................................................... 36 Tabela 5: Dados para Lactato referente à primeira tomada de dados em 1/09/2012................ 37 Tabela 6: Dados para o Lactato referente a segunda tomada de dados em 22/09/2012. .......... 38 Tabela 7: Análise integral nos dois de coleta para lactato basal, pré e pós teste de Cooper, comparando a roupa placebo com a roupa impregnada, juntamente com a média e desvio padrão dos grupos. ............................................................................................................ 40 XI LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS 1,3-BPG- 1,3 Acetil-CoA Bifosfoglicerato Acetil coenzima A ADP ATP ATP-CP ATP+C BC+ CK CK BB CK MB CK MM CDC CP+ADP D FAD+ Adenosina Difosfato Adenosina Trifosfato Adenosina Trifosfato – Creatina Fosfato (Sistema Fosfagênico) Adenosina Trifosfato- Creatina Roupa contendo particulado cerâmico Creatina Cinase Creatina Cinase (Brain Brain) Creatina Cinase (Muscle Brain) Creatina Cinase (Muscle Muscle) Center of Disease Control Creatina Fosfato + Adenosina Difosfato Distância Total Percorrida Flavina Adenina Dinucleotídeo Oxidada Flavina Adenina Dinucleotídeo Flavina Adenina Dinucleotídeo Reduzido Fundação Educacional de Fernandópolis Gliceraldeído 3- Fosfato Desidrogenase Questionário Internacional de Atividade Física Índice Massa Corpórea Infra Vermelho Infra Vermelho Longo Lactato Desidrogenase Metal Nicotinamida Adenina Dinucleotídeo Oxidada Nicotinamida Adenina Dinucleotídeo Nicotinamida Adenina Dinucleotídeo Reduzida Não Metal Fosfocreatina Sólido Elementar Não Metálico Unidades Internacionais Volume Máximo Oxigênio FAD FADH2 FEF G3PHD IPAQ IMC IV IVL LDH M NAD+ NADH NADH2 NM PC SENM U.I. VO2máx XII LISTA DE SÍMBOLOS α Alfa α- TCP Alfa Tricálcio Fosfato β Beta β- TCP Beta Tricálcio Fosfato ∆CK Variação Absoluta de CK ∆CK% Variação Relativa de CK ∆LCTb% Variação Relativa de Lactato C3H6O3 Ácido Lático H+ Hidrogênio n número O2 Oxigênio pH Potencial Hidrogeniônico Pi Fosfato Inicial U/L Unidades por Litro XIII SUMÁRIO 1. INTRODUÇÃO ................................................................................................................ 14 1.1 Objetivos gerais ......................................................................................................... 16 1.2 Objetivos específicos ................................................................................................. 16 2. REVISÃO BIBLIOGRÁFICA.......................................................................................... 17 2.1 Lesão muscular .......................................................................................................... 17 2.2 Bioenergética ............................................................................................................. 18 2.3 Glicólise ..................................................................................................................... 18 2.4 Sistema aeróbico, ciclo de Krebs e cadeia respiratória .............................................. 19 2.5 Creatina cinase ........................................................................................................... 20 2.6 Lactato ....................................................................................................................... 21 2.7 Biocerâmica ............................................................................................................... 22 2.8 Bioestimulação ........................................................................................................... 23 2.9 Teste de Cooper ......................................................................................................... 24 3. MATERIAL E MÉTODOS .............................................................................................. 26 3.1 Data e local da pesquisa ............................................................................................. 26 3.2 Aspectos éticos .......................................................................................................... 26 3.3 População e amostra .................................................................................................. 26 3.4 Classificação IPAQ .................................................................................................... 27 3.5 Critérios de inclusão .................................................................................................. 27 3.6 Critérios de exclusão .................................................................................................. 27 3.7 Roupas utilizadas no estudo ....................................................................................... 27 3.8 Divisão dos grupos ..................................................................................................... 29 3.9 Protocolo da punção sanguínea e do teste de Cooper ................................................ 30 3.10 Análise estatística ...................................................................................................... 31 4. RESULTADOS ................................................................................................................. 32 4.1 Análise da CK total .................................................................................................... 32 4.2 Análise do lactato ....................................................................................................... 37 5. DISCUSSÃO..................................................................................................................... 44 6. CONCLUSÕES ................................................................................................................. 48 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ..................................................................................... 49 ANEXO A - TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO ......................... 53 ANEXO B-QUESTIONARIO ................................................................................................. 56 ANEXO C - BULAS DOS KITS ............................................................................................. 59 ANEXO C - PARECER CONSUBSTANCIADO DO CEP .................................................... 78 14 1. INTRODUÇÃO Significativas incidências de lesões nas estruturas musculo-esqueléticas dos membros inferiores podem ocorrer em indivíduos sedentários que resolvem praticar atividade física. Fatores como a falta de orientação das pessoas no momento de optar pela modalidade esportiva; de como realizar corretamente a técnica da modalidade; a frequência a ser realizada e intensidade podem agravar ainda mais a incidência (VAN DAN, 1992). O “Teste de Cooper” é amplamente utilizado quando necessita-se avaliar a condição física de um indivíduo em um dado momento. Iniciou-se no ano de 1968 onde o coronel médico da Força Aérea, Kenneth Cooper buscava um método rápido e eficiente para testar o nível de preparo físico dos cadetes, com isso criou um sistema simples de pontuação, baseado na distância que um indivíduo era capaz de cobrir em 12 minutos de caminhada ou corrida (COOPER, 1968). No teste de Cooper, o VO2máx é um parâmetro utilizado para avaliação da função cardiorrespiratória máxima e reserva funcional (GRANJA FILHO; POMPEU; SILVA, 2005). Além disso, a mensuração do VO2máx pode ser proposta por várias razões, desde a análise da função cardiorrespiratória, em pneumo e cardiopatas até a predição do desempenho em atletas e sedentários (SILVA; TORRES, 2002). Segundo Tricoli (2001), medidas séricas das concentrações de CK e Lactato são citadas frequentemente nos trabalhos que se referem às lesões de fibras musculares. A concentração plasmática de CK é amplamente utilizada como marcador de lesão muscular, por ser uma molécula citoplasmática que não têm a capacidade de atravessar a barreira da membrana sarcoplasmática. A CK atinge o pico no sangue em 1-4 dias após o exercício e permanece elevada por vários dias, porém sua liberação já é significativa em alguns minutos após o exercício (ANTUNES NETO et al., 2007; BRANCACCIO; MAFFULI; LIMONGELLI, 2007; FOSCHINI; PRESTES, CHARRO, 2007; MOUGIOS, 2007; PETERSEN et al., 2001). Quanto mais intenso e duradouro for o treinamento, maior é a quantidade de microtraumas musculares que permitem o extravasamento desta enzima para o meio extracelular (BRANCACCIO; MAFFULI; LIMONGELLI, 2007). Creatina Cinase (CK) é a enzima que catalisa a fosforilação do ADP a partir da creatina fosfato. Cinco isoformas são conhecidas, sendo três isoformas citoplasmáticas: 15 CKMM, CK-BB e CK-MB; e duas isoformas mitocondriais: sarcomérica e não-sarcomérica (BRANCACCIO; MAFFULI; LIMONGELLI, 2007; DIAS et al., 2007). Durante a glicólise há formação de ácido pirúvico, onde penetra nas células musculares e reage com oxigênio para formar mais ATP. Porém se houver oxigênio insuficiente para o metabolismo da glicose o ácido pirúvico será transformado em ácido lático, que se difunde das células musculares para a circulação (GUYTON; HALL, 2002). Segundo Hopkins (1991), as concentrações de lactato sanguíneo podem ser medidas durante sessões normais de treinamento de ritmo constante, quando o objetivo é caracterizar ou acertar a intensidade do treino diretamente em termos de uma concentração específica de lactato. Erradicar ou diminuir tais exposições são fatores cruciais para melhorar a função muscular, promovendo melhor capacidade ao exercício, controle de força, aumento do limiar álgico e consequente melhor aptidão funcional. A hipótese de que os tecidos impregnados com particulados inorgânicos – biocerâmicas possuem efeito biomodulador, inclusive nas enzimas musculares, nos incentivam a pesquisar e analisar tais métodos. Semelhante ao laser de baixa potência, trabalhos têm mostrado que dispositivos contendo alguns tipos de cerâmicas emissoras de radiação infravermelha, também são capazes de promover o efeito de biomodulação tecidual por mecanismos ainda não completamente esclarecidos (KO; BERBRAYER, 2002; YOO et al.; 2002). A radiação luminosa na região do vermelho e infravermelho próximo catalisam reações bioquímicas que conduzem a variações no metabolismo celular (KARU, 1987; RIGAU, 1996). A cerâmica é uma classe de emissores de radiação infravermelha que, na forma de pó, permite sua incorporação em cremes e tecidos. Esses materiais cerâmicos emitem radiação infravermelha longínqua, quando submetidos à temperatura corporal. Há relatos publicados na literatura sobre uma melhora significativa em condições patológicas, como a dor e discrasias sanguíneas e celulite mediante a utilização de acessórios contendo emissores de cerâmica (CONRADO; MUNIN, 2011; KO; BERBRAYER, 2002; YOO et al.; 2002). A importância deste estudo é creditada à relevância clínica de uma nova terapia não invasiva e benéfica ao organismo. 16 1.1 Objetivos gerais Analisar a variabilidade de parâmetros bioquímicos, indicadores de lesão muscular, basal, pré-teste e pós-teste de esforço realizado com oclusão corporal parcial por meio de roupas impregnadas com nano-cerâmica em indivíduos irregularmente ativos. 1.2 Objetivos específicos Analisar comparativamente, por meio de testes bioquímicos, as seguintes variáveis: - CK Total; - Lactato. 17 2. REVISÃO BIBLIOGRÁFICA 2.1 Lesão muscular A alta prevalência de lesões musculares é, de certa forma, compensada pela capacidade regenerativa do tecido muscular, o que garante a manutenção da funcionalidade da musculatura esquelética (CHARGÉ; RUDNICKI, 2004). A ocorrência da lesão repetida ou grave implica a submissão do tecido muscular à vários ciclos de degeneração-regeneração, o que pode levar a uma redução significativa da função muscular, além de um quadro de fibrose, e consequentemente à redução da capacidade motora e a um tempo de recuperação maior que o normal (JÄRVIVEN et al., 2005; MIDDLETON; SMITH, 2007). A lesão é uma ocorrência lamentável na vida cotidiana. Enquanto algumas pessoas sofrem lesões mais graves e frequentes do que outros, ninguém é poupado da dor, do transtorno e da incapacidade causados por uma lesão. Contudo, qualquer que seja a lesão ela é acompanhada por custos físicos, emocionais e econômicos inevitáveis ocasionando perda de tempo e função normal dos indivíduos (WHITING; ZERNICK, 2001). Quando o esforço é intenso, e o período de recuperação é insuficiente, os benefícios do esporte não acontecem, consequentemente há possibilidade do surgimento de lesões musculares (HUG et al., 2006). A resposta imediata à lesão muscular é um estágio inicial de autólise, onde uma das razões para que isso ocorra é a falta de homeostasia do cálcio celular (SMITH, 1991; TIDBALL, 1995). A diminuição da homeostasia leva a ativação de proteases cálciodependente como proteínas miofibrilares e citoesqueléticas (TIDBALL, 1995). Geralmente quando acontece uma lesão muscular após o exercício, os músculos demonstram-se rígidos e sensíveis ao toque devido ao inchaço, com diminuição da capacidade de gerar força e a amplitude de movimento fica reduzida (ISPIRLIDIS et al., 2008; PROSKE; MORGAN, 2001). 18 2.2 Bioenergética As células musculares armazenam quantidades limitadas de ATP. Consequentemente como o esforço físico necessita de suprir constantemente de ATP para fornecer a energia necessária à contração, devem existir vias metabólicas celulares com produção rápida de ATP (POWERS; HOWLEY, 2000). Existem três processos produtores de energia para a formação de ATP: (1) o sistema ATP-CP (ou sistema fosfagênio), onde a energia para ressíntese do ATP provêm da fosfocreatina (PC); (2) glicólise anaeróbica, o sistema gera ácido lático, mas que proporciona ATP a partir da degradação parcial da glicose ou do glicogênio; e (3) o sistema aeróbico onde envolve o uso de O2, onde apresenta duas partes: parte A consiste no término da oxidação dos carboidratos e B envolve a oxidação dos ácidos graxos e de alguns aminoácidos, contudo ambas as partes do sistema aeróbico possuem o Ciclo de Krebs como sua via final de oxidação (FOX; FOSS; KETEYIAN, 2000). 2.3 Glicólise A glicólise é uma via bioenergética relativamente insuficiente, a qual recupera apenas aproximadamente 5% da energia disponível através do metabolismo oxidativo da glucose na células que possuem mitocôndrias. Porém nas células anaeróbicas com mitocôndrias, como as células cerebrais, hepatócitos e miócitos, o metabolismo oxidativo da glucose se dá através da glicólise (BAYNES; DOMINICZAK, 2000). Ela pode ser dividida em quatro etapas, onde a primeira reação da glicólise é a conversão da glicose para glicose 6-fosfato. Esta reação é irreversível e catalisada por hexoquinases, onde nos tecidos vertebrados, são encontrados quatro isoenzimas, denominadas I a IV. A glicose 6-fosfato, ao contrário da glicose, é incapaz de atravessar a membrana plasmática, garantindo a sua permanência dentro das células (MARZZOCO; TORRES, 2007). A segunda etapa da glicólise é a clivação da frutose 1,6-bifosfato em diidroxiacetona fosfato e gliceraldeído 3-fosfato por ação da aldolase. A conversão de diidroxiacetona fosfato em gliceraldeído 3-fosfato possibilita que uma molécula de glicose seja convertida de gliceraldeído 3-fosfato, com isso possibilita que todos os carbonos da glicose sejam oxidados a piruvato (MARZZOCO; TORRES, 2007). Na terceira etapa o gliceraldeído 3-fosfato reage com o grupo sulfidrila de um resíduo de cisteína de enzima, formando-se um tio-hemiacetal, com isso ocorre a oxidação do tio- 19 hemiacetal e a redução de um NAD+, e o NADH ligado a enzima é trocado por uma molécula livre de NAD+ (MARZZOCO; TORRES, 2007). A quarta etapa produz 4 moles de ATP, onde 2 moles de ATP por mol de glucose é convertida em lactato. Uma vez que dois fosfatos ficam disponíveis nesta etapa, um por mol de triose fosfato, dois fosfatos adicionais devem ser recrutados a partir do pool citoplasmático solúvel. A reação é catalisada pela gliceraldeído 3-fosfato desidrogenase (G3PDH), fornecendo 1,3-bifosfoglicerato (1,3-BPG) com a redução do NAD+ e a formação em NADH (BAYNES; DOMINICZAK, 2000). 2.4 Sistema aeróbico, ciclo de Krebs e cadeia respiratória A produção aeróbica de ATP ocorre no interior das mitocôndrias e tem o envolvimento de duas vias metabólicas: o Ciclo de Krebs e a Cadeia Respiratória (POWERS; HOWLEY, 2000). O piruvato gerado a partir da glicólise é transportado para as mitocôndrias para que possa ocorrer o Ciclo de Krebs. Consequentemente o piruvato é convertido em oxalacetatovia piruvato carboxilase e em acetil-CoA via piruvato desidrogenase. O oxalacetato e acetil-CoA geram o ácido cítrico pela citratosintetase. Ocorrerá uma β-oxidação e serão liberados íons H+ e elétrons, reduzindo as NAD+ e FAD em NADH2 e FADH2, para sua posterior utilização na cadeia respiratória (CURI et al.; 2003). NADH2 e FADH2 trazem acoplado o H+ para o espaço intermembranas. O processo gera a força próton motriz, formada por dois componentes: o pH resultante da diferença de concentração de prótons através da membrana mitocondrial, e o potencial de membrana, advindo da diferença do potencial elétrico entre as duas fases aquosas separadas pela membrana. Nas mitocôndrias, a força próton motriz direciona a síntese de ATP, a partir de ADP e fosfato inorgânico, através da enzima ATP sintetase. Assim, com a utilização do substrato, o O2 é consumido na medida em que é reduzido em H2O, e de forma acoplada, o ATP é sintetizado (NICHOLLS; FERGUSON, 2002). 20 Figura 1: Ciclo de Krebs. Fonte: Curi et al. (2003) 2.5 Creatina cinase O método mais simples e rápido de produção de ATP envolve a doação de um grupo fosfato e de sua ligação energética da creatina fosfato para ADP, formando a ATP. A reação é catalisada pela enzima creatina quinase. A ATP é clivada em ADP + Pi no início do exercício, é ressintetizada pela reação da creatina fosfato (POWERS; HOWLEY, 2000). CP + ADP ATP + C Creatina cinase A combinação do ATP e da creatina fosfato armazenadas é denominada sistema ATPCP, ou “sistema fosfagênico”, e provê a energia para a contração muscular no começo do exercício e em exercícios de curta duração e de alta intensidade (POWERS; HOWLEY, 2000). Cinco isoformas são conhecidas, sendo três isoformas citoplasmáticas: CKMM, CKBB e CK-MB; e duas isoformas mitocondriais: sarcomérica e não-sarcomérica (BRANCACCIO; MAFFULI; LIMONGELLI, 2007; DIAS et al., 2007). As isoenzimas (CK-BB, CK-MB e CK-MM) compõem a chamada CK-total e cada uma fornece informações do tecido lesionado (percentual da predominância das concentrações de CK de cada tecido), assim: 21 1- A CK-MB é especifica do músculo cardíaco e encontra-se elevada no sangue quando ocorre infarto agudo do miocárdio (BRANCACCIO; MAFFULI; LIMONGELLI, 2007; KATIRIJI; MOHAMED, 2001). 2- A CK-BB é específica do tecido cerebral e apresenta-se elevada no sangue em caso de lesão cerebral e durante a vida fetal (BRANCACCIO; MAFFULI; LIMONGELLI, 2007; KATIRIJI; MOHAMED, 2001). 3- A CK-MM é encontrada especificamente ligada as miofibrilas localizadas na estrutura da linha-M no músculo esquelético. Em adultos, a CK total é formada predominantemente pela CK-MM oriunda do músculo esquelético e se apresenta elevada no sangue no caso de danos no músculo esquelético (BRANCACCIO; MAFFULI; LIMONGELLI, 2007; KATIRIJI; MOHAMED, 2001). Segundo Plebani (2010), as concentrações séricas de CK têm sido utilizadas como um indicador de estresse imposto à musculatura esquelética, decorrente da atividade e também do monitoramento da carga do esforço. Quanto mais intenso e duradouro for o treinamento, maior é a quantidade de microtraumas musculares que permitem o extravasamento desta enzima para o meio extracelular (BRANCACCIO; MAFFULI; LIMONGELLI, 2007). 2.6 Lactato Há algumas limitações sobre o mecanismo que explica o aumento súbito de ácido lático na corrente sanguínea durante o exercício progressivo. Existem algumas formas que possam explicar o aumento de lactato: (1) oxigênio muscular baixo, (2) glicólise acelerada, (3) recrutamento de fibras rápidas e (4) a taxa de remoção de lactato reduzida (POWERS; HOWLEY, 2000). A ressíntese dos fosfatos de alta energia terá que continuar com um ritmo rápido para que o exercício extenuante possa dar continuidade sem que haja uma acidose lática. A energia para fosforilar o ADP durante uma atividade física intensa deriva do glicogênio muscular através da glicólise anaeróbica com a formação de lactato. É possível a formação rápida de ATP pela fosforilação ao nível do substrato, mesmo até quando o fornecimento de O2 continua sendo insuficiente e/ou as demandas energéticas ultrapassam a capacidade do músculo para ressíntese aeróbia do ATP. A capacidade de produzir altos níveis de lactato sanguíneo durante o exercício máximo aumenta com o treinamento anaeróbico específico de velocidade e potência e consequentemente, diminui com o destreinamento (MCARDLE; KATCH, 2003). 22 Quando ocorre o esforço de explosão máxima (all-out sprint) de 1 a 2 minutos, o sistema glicolítico é altamente solicitado promovendo um aumento nas concentrações de ácido láctico de 1mMol/kg em repouso para valores superiores a 25mMol/kg. Concomitante a isso ocorre à acidificação das fibras musculares que inibe a degradação do glicogênio por comprometimento da função da enzima glicolítica, e dificultando a capacidade de ligação com o cálcio das fibras impedindo a contração muscular normal (ROBERGS; GHIASVAND; PARKER, 2004). A concentração de lactato nas células musculares e na corrente sanguínea aumenta durante o exercício físico, mas lactato não é um ácido. Ele não pode doar um próton, portanto, o aumento de prótons (acidose) precisa ter outra fonte. A acidose observada após exercícios extenuantes deve-se, principalmente, à liberação de prótons durante a hidrólise de ATP associada à contração muscular. O lactato pode contribuir, indiretamente, para a acidose porque, como ânion potente, ele é capaz de afetar a capacidade de tamponamento do meio (MORAN et al., 2013). Ácido lático e lactato não são o mesmo componente, pois o lactato é qualquer sal proveniente do ácido lático (C3H6O3), quando esse último libera H+. A glicólise anaeróbia produz ácido lático, mas ele dissocia rapidamente e o sal formado chama-se lactato (DOBGENSKI, 2007). O mecanismo de recrutamento nas fibras rápidas ocorre no exercício rápido e intenso, já nas fibras lentas ocorre durante a atividade de baixa intensidade. A LDH encontrada nas fibras rápidas possui maior afinidade para a fixação ao ácido pirúvico, ocorrendo à formação de ácido lático. Por essa razão, a formação do ácido lático durante o exercício, pode ocorrer nas fibras rápidas devido à presença da enzima LDH (HOLLOSKY, 1982; SKINNER; MCLLEAN, 1980). 2.7 Biocerâmica A palavra cerâmica é de origem grega, sendo derivada de “Keramos”, que corresponde a “coisa queimada”. Materiais cerâmicos podem ser definidos como compostos sólidos formados pela aplicação de calor, algumas vezes pressão, formados por ao menos um metal (M) e um sólido elementar não-metálico (SENM) ou um não-metal (NM), dois SENM, ou um SENM e um não-metal (NM) (PATARO, 2005). Existem três categorias da biocerâmica: (1) bioinertes, como alumina e zircônia; (2) com superfície bioativa, como hidroxiapatita sintetizada, Bioglass®; e (3) bioreabsorvíveis, 23 como hidroxiapatita não calcinada e não sintetizada, α- e β- tricálcio fosfato (α-TCP e βTCP), tetracálcio fosfato, octacálcio fosfato, entre outros (SHIKINAMI; OKUNO, 1999). As biocerâmicas destacam-se por serem materiais bioativos com capacidade de interagir com tecidos vivos de tal modo a estimular processos físico-químicos. As cerâmicas bioativas têm capacidade de absorver e refletir infravermelho longo emitido pelo próprio corpo humano aumentando a microcirculação local da região de contato por mecanismos de bioestimulação fotoquímica. Cerâmicas com base em alumina e sílica têm efeito estimulador sobre a produção de óxido nítrico endotelial (YU et al., 2006). Segundo Niwa et al. (1993), em estudos realizados, foi comprovado que as propriedades de algumas cerâmicas possuem efeitos fototérmicos, ou seja mediante o aquecimento apresentam a propriedade de emitir radiação de infravermelho. Postula-se que esse tipo de material produz efeitos biomoduladores similares aos dos raios laser de baixa potência não-invasivo. Porém, com menos potência que estes, pode ser utilizada em áreas maiores, podendo manter-se em contato com a pele durante muito mais tempo, sem riscos, nem efeitos colaterais (BRIOSCHI et al., 2007). 2.8 Bioestimulação Segundo Rigau (1996), o termo bioestimulação significa promover vibrações moleculares fazendo com que haja um aumento do metabolismo celular devido aos efeitos da radiação luminosa sobre os tecidos. Na área da saúde já é bastante conhecido como o laser de baixa intensidade da luz visível (vermelha) e invisível (infravermelho próximo). Quando essas radiações interagem com a pele, algumas serão refletidas e outras irão penetrar. Com isso, as radiações podem ser refletidas, absorvidas, transmitidas, refratadas e difratadas, mas para as radiações no IV apenas a refração, a absorção e a transmissão são biologicamente significantes (KITCHEN; PARTRIDGE, 1991). A radiação IVL usada terapeuticamente é absorvida na superfície em grande parte pela água que está na pele. Em torno de 3µm, a profundidade de penetração é de cerca de 0,1 mm. De acordo com a disponibilidade de potência, o efeito será um aquecimento acentuado da pele. Parte deste calor será conduzida mais profundamente nos tecidos subcutâneos. Os maiores efeitos observados do IVL são: melhorar a circulação, reparar e regenerar tecidos e regular os líquidos do corpo (sistema humoral). Também, o IVL aumenta a temperatura corporal e eleva a mobilidade dos fluidos corporais (INOUÉ; KABAYA, 1989). 24 Em decorrência de temperaturas mais elevadas, há um aumento dos níveis de alguns metabólitos circulantes no sangue, resultante do aumento da atividade metabólica, promovendo efeito direto sobre as paredes vasculares estimulando a vasodilatação (KUBOTA; OHSHIRO, 1989). 2.9 Teste de Cooper Os testes de esforços são comumente utilizados na prática clínica, desde a década de 60 (ENRIGHT, 2003). Kenneth H. Cooper foi o que elaborou o teste de esforço, chamado de teste de Cooper, onde tinha como quesito avaliar o condicionamento físico das forças armadas. O objetivo do teste consiste em correr ou caminhar a máxima distância possível em um tempo de 12 minutos. Com base na distância percorrida em Km, o teste estima-se o VO2max utilizando a seguinte equação, onde D representa a distância total, em metros, percorrida pelos indivíduos (COOPER, 1968). VO2max (mL/kg/min) = (D - 504,9) / 44,73 A duração de dez a vinte minutos representa um comprometimento que tenta aumentar a chance de a pessoa estar correndo a uma velocidade exigindo 90-95% do VO2max e diminuir a contribuição de energia oriunda de fontes anaeróbicas. Cooper fornece categorias de VO2max para a idade e sexo. As estimativas de VO2max baseadas nas corridas de distâncias são mais úteis quando comparadas com o tempo do mesmo indivíduo, em vez de comparadas entre os indivíduos (POWERS; HOWLEY, 2000). 25 Tabela 1: Adaptação da tabela referente à distância (m) no teste de Cooper através da capacidade aeróbica em homens. Categoria de Capacidade Aeróbica em Homens Distância (m) no teste 13-19 (anos) 20-29 (anos) 30-39 (anos) 40-49 (anos) 50-59 (anos) 60 ou mais (anos) I- Muito Fraca < 2090 II- Fraca 2090-2200 1960-2110 1900-2090 1830-1990 1660-1870 1400-1640 III- Média 2210-2510 2120-2400 2100-2400 2000-2240 1880-2090 1650-1930 IV- Boa 2520-2770 2410-2640 2410-2510 2250-2460 2100-2320 1940-2120 V- Excelente 2780-3000 2650-2830 2520-2720 2470-2660 2330-2540 2130-2490 VI- Superior > 3000 Fonte: Cooper (1968) < 1960 > 2830 < 1900 > 2720 < 1830 > 2660 < 1660 > 2540 < 1400 > 2490 26 3. MATERIAL E MÉTODOS 3.1 Data e local da pesquisa A coleta sanguínea foi realizada no Laboratório de Análises Clínicas da Fundação Educacional de Fernandópolis, onde apresentou duas etapas: primeira etapa ocorreu no dia 1/09/2012 e a segunda etapa no dia 22/09/2012. O teste de esforço foi realizado no Estádio Municipal Beira Rio de Fernandópolis, nas referidas datas acima. Tanto a coleta e a corrida ocorreram no período matutino. 3.2 Aspectos éticos O presente estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Universidade Camilo Castelo Branco sob o número de protocolo 18996. A participação no estudo foi condicionada à assinatura de um termo de consentimento informado. 3.3 População e amostra A amostra foi composta por 12 indivíduos irregularmente ativos, do gênero masculino com idade entre 18-29 anos. Primeiramente, antes de incluir os indivíduos candidatos a participarem da pesquisa, foi realizada uma avaliação médica, junto a um médico cardiologista, professor da Unicastelo, para confirmar ausência de patologias que possam impossibilitar a realização do teste de Cooper e, ao mesmo tempo, atestar a sua realização. As medidas antropométricas foram realizados nas Clínicas Integradas da FEF. A massa corporal foi aferida por meio de balança mecânica com a acuidade de 50g; a estatura foi mensurada pelo estadiômetro da Sanny com escala em centímetros. O Índice de Massa Corporal (IMC) foi utilizado como forma de caracterizar a relação massa corporal e estatura (kg/m2). Para a classificação dos indivíduos como irregularmente ativos foi aplicado um questionário do IPAC. 27 3.4 Classificação IPAQ Os indivíduos irregularmente ativos realizam algum tipo de atividade física, porém, não o suficiente para serem classificados como ativos por não cumprirem as recomendações quanto a frequência ou a duração. Para somar essa classificação somam-se a frequência e a duração dos diferentes tipos de atividades (caminhada, moderada e vigorosa). Esses indivíduos podem ser classificados em dois grupos: Tipo A: os que atingem pelo menos um dos critérios da recomendação: (a) frequência: cinco dias na semana ou (b) duração: 150 minutos por semana. Tipo B: aqueles que não atingiram nenhum dos critérios da recomendação (frequência ou duração) (BRASIL, 2004). 3.5 Critérios de inclusão a) Jovens hígidos do sexo masculino com idade entre 18 e 29 anos. b) Não realizar atividade física extenuante 24 horas antes dos testes. c) IMC entre 19 e 25 de acordo com a CDC (Center for Disease Control): idade entre 18 e 29 anos e sexo masculino (KUCZMARSK et al., 2000). d) Abstinência de bebidas alcoólicas e cafeína no período de 03 horas precedentes aos testes. 3.6 Critérios de exclusão a) Uso de qualquer tipo de medicamentos. b) Restrições à realização do teste de Cooper pelo cardiologista. c) Fumantes. d) Problemas respiratórios, alérgicos ou outras doenças que possam impedir a realização do teste. 3.7 Roupas utilizadas no estudo O pó de Biocerâmica, composto basicamente de alumina, óxido de magnésio, óxido de titânio e silício, foi incorporado ao polímero (90% de poliamida e 10% elastano) do qual o tecido foi fabricado. No processo de fabricação, um montante de nanopartículas biocerâmicas foi 28 adicionado ao polímero fundido de modo que as nanopartículas se embutissem no tecido durante a extrusão dos fios. A peça de roupa foi então fabricada, sem emenda, a partir dos fios poliméricos. A grande vantagem deste método de fabricação, em comparação com a técnica de colagem de partículas na superfície das fibras do tecido, é que os acessórios terapêuticos podem ser lavados de forma convencional ou serem colocados em uma autoclave, sem risco de perderem a sua propriedade. Também é possível criar diferentes fatores de compressão mecânica em diferentes regiões da mesma peça de roupa com cerâmica impregnada para evitar a distensão da pele e produzir um efeito de drenagem progressiva. Utilizou-se no presente estudo as seguintes peças de roupas: camisetas, bermudas e meias, confeccionadas de modo que não haja diferença perceptível entre as peças contendo a nano-cerâmica e as que não contêm. As roupas utilizadas estão mostradas na Figura 2. (a) (b) Figura 2: Roupa sem marcação= BC+ (a). Roupa com marcação= placebo (b). 29 3.8 Divisão dos grupos Foi realizado um estudo duplo-cego, de maneira cross-over, ou teste pareado, assim todos os indivíduos da presente pesquisa realizaram o mesmo teste em duas situações: traje com a biocerâmica incorporada e também; o traje placebo, ou seja, sem a biocerâmica. Os conjuntos de trajes, camisetas, bermudas e meias, foram embalados em envelopes numerados de 1 a 12 para serem sorteados pelo observador externo. Somente este observador saberia sobre a divisão dos grupos. Deste modo, formaram-se 2 grupos: os trajes nos envelopes de número 1 a 6 e ou outro de 7 a 12. Ao fim de cada teste, os trajes utilizados pelos indivíduos foram recolhidos e manuseados de maneira idêntica: lavados com sabão em barra neutro, secados a luz do sol, novamente embalados nos envelopes e distribuídos aos indivíduos. Assim, a distribuição dos trajes foi feita de maneira aleatória, pois desta forma somente o distribuidor dos trajes, o observador externo, teve o controle sobre quais indivíduos estariam utilizando o traje impregnado com a biocerâmica emissora de infravermelho longo e quais estariam utilizando o traje placebo. Ainda, nem os indivíduos e nem a equipe que aplicaria os testes saberiam quais vestimentas conteriam biocerâmica e quais não conteriam. Os 12 indivíduos da pesquisa foram divididos aleatoriamente em 2 grupos: Grupo A (6 indivíduos) e Grupo B (6 indivíduos). 30 As roupas foram usadas pelos indivíduos de acordo com o seu tamanho: pequeno, médio ou grande. As meias foram colocadas até a altura dos joelhos. Os indivíduos deveriam colocar as roupas 1 hora antes da realização do teste. 3.9 Protocolo da punção sanguínea e do teste de Cooper Os indivíduos foram submetidos à três punções venosas realizadas em fossa antecubital de ambos os braços, denominadas: estado basal, pré teste (indivíduos colocaram a roupa por uma hora antes do teste de esforço) e pós teste (coleta realizada dez minutos após o teste de esforço a fim de adquirir material para análises bioquímicas. As amostras foram colhidas em tubo seco e com anticoagulante Fluoreto de Sódio, no Laboratório de Análises Clínicas da Fundação Educacional de Fernandópolis, onde foram centrifugadas a 1500 rpm por 15 minutos. Os soros e plasmas obtidos foram armazenados em Eppendorf para as análises bioquímicas em laboratório terceirizado. As análises bioquímicas foram realizadas pelo Laboratório de Análises Clínicas Diagnósticos do Brasil, São José dos Pinhais-PR, utilizando o equipamento ADVIA 1200 automatizado. Todos os testes foram realizados através do equipamento ADVIA 1200, aparelho automatizado com kits da Siemens pela metodologia enzimática com valores de referência CK: Homens- 32-294 U/L e Lactato: 0,5-2,2mmol/L. O teste de Cooper de 12 minutos foi realizado na pista de corrida do Estádio Municipal Beira Rio de Fernandópolis. Os voluntários correram e/ou andaram ao redor da mesma a máxima distância possível no tempo pré-estabelecido. A pista apresentou cones de sinalização a cada 50m para facilitar a mensuração da distância máxima alcançada no teste. Depois foi aplicada a fórmula de Cooper para mensuração da distância percorrida. Este teste foi acompanhado por um fisiologista do exercício. A Figura 3 mostra o fluxograma dos procedimentos experimentais. 31 Figura 3: Fluxograma dos procedimentos experimentais. 3.10 Análise estatística No presente estudo foi realizada uma análise descritiva e quantitativa. Para a escolha do teste estatístico, inicialmente foi utilizado o teste de Kolmogorov Smirnov para verificar a normalidade da distribuição dos dados. Todos os dados apresentaram distribuição normal e dessa forma foi utilizada uma análise paramétrica, utilizando o test “t” pareado no programa InStat versão 3.00 (GraphPad Software Inc, San Diego, CA, EUA), com variâncias diferentes considerando-se nível de significância de 5% (p<0,05). 32 4. RESULTADOS 4.1 Análise da CK total A Tabela 2 mostra os dados experimentais resultantes das análises bioquímicas para a primeira tomada de dados para a CK total, juntamente com a idade e o índice de massa corpórea dos indivíduos desta pesquisa. O parâmetro ∆CK listado na tabela corresponde à variação absoluta dos valores de CK, definido como: ΔCK = CKpós - CKpré Tabela 2: Valores medidos para CK referente à primeira tomada de dados em 1/09/2012. 1/09/2012 BC+ Placebo Indivíduos CK BASAL (U/L) CK PRÉ (U/L) CK PÓS (U/L) ∆CK (U/L) Idade (anos) IMC (kg/m2) FT MA FF LCH RS VP 161 57 68 140 79 129 176 69 70 156 85 140 219 91 77 162 104 176 43 22 7 6 19 36 21 21 29 21 24 25 19,02 20,9 23,8 22,6 19 24,5 IL PC LC MtA RA RL 50 137 453 1052 175 56 59 147 455 1129 188 61 69 188 517 1353 230 77 10 41 62 224 42 16 19 22 21 21 22 22 19,1 21,4 19,3 23,8 22.1 22,1 Nota: CK= Creatina Cinase; ∆CK= Variação Absoluta; IMC= Índice de Massa Corpórea A Figura 4 mostra os níveis de CK basal em função do CK pré-teste. Foi excluído um ponto extremo, considerado atípico, referente ao indivíduo MtA. Os pontos experimentais são quase coincidentes com a linha de identidade, a qual é definida como a reta com coeficiente angular um, e está representada no gráfico pela linha pontilhada. Observa-se apenas uma pequena elevação tanto na roupa placebo quanto na roupa contendo particulado cerâmico, em relação à linha de identidade mostrando que CK pré-teste ≈ CK basal. Estes resultados apontam que o período de 1 hora previamente ao exercício físico, no qual os indivíduos 33 fizeram uso das roupas, não produziu qualquer efeito nos níveis séricos de CK total. Desta forma, os dados podem ser analisados de forma comparativa tomando-se como referência tanto o CK pré-teste quanto o CK basal, indistintamente. Figura 4: CK (U/L) pré-teste em função de CK (U/L) basal, para a primeira tomada de dados. A linha cheia corresponde ao ajuste linear aos pontos experimentais. A linha de identidade está representada em pontilhado. A Figura 5 mostra a dependência observada entre o parâmetro ∆CK e os níveis de CK medidos previamente ao teste de Cooper. O gráfico não mostra diferenças aparentes entre os grupos estudados. Verificou-se não haver correlações entre os níveis de CK com a idade e com o IMC dos indivíduos participantes da pesquisa. Figura 5: Dependência entre o parâmetro ∆CK (U/L) e os níveis de CK Pré (U/L) medidos previamente ao teste de Cooper. A linha tracejada é para visualização de tendência. 34 A Tabela 3 mostra os dados experimentais para a CK total, obtidos na segunda tomada de dados, ocorrida em 22/09/2012, juntamente com a idade e o índice de massa corpórea dos indivíduos desta pesquisa. Tabela 3: Valores medidos para CK referente à segunda tomada de dados no dia 22/09/2012. 22/09/2012 Placebo BC+ Indivíduos CK BASAL (U/L) CK PRÉ (U/L) CK PÓS (U/L) ∆CK (U/L) Idade (anos) IMC (kg/m2) FT 124 132 152 20 21 19,02 MA 42 77 62 -15 21 20,9 FF 109 110 117 7 29 23,8 LCH 101 107 97 -10 21 22,6 RS 57 62 77 15 24 19 VP 162 108 142 34 25 24,5 IL 88 97 120 23 19 19,1 PC 61 65 83 18 22 21,4 LC 582 662 737 75 21 19,3 MtA 448 469 557 88 21 23,8 RA 897 938 1038 100 22 22.1 RL 42 43 53 10 22 22,1 Nota: CK= Creatina Cinase; ∆CK= Variação Absoluta; IMC= Índice de Massa Corpórea A Figura 6 mostra os níveis de CK basal em função do CK pré-teste para a segunda tomada de medidas. Os pontos experimentais são quase coincidentes com a linha de identidade. Observa-se apenas uma pequena elevação tanto na roupa placebo quanto na roupa contendo particulado cerâmico, em relação à linha de identidade mostrando que CK pré-teste ≈ CK basal. Como já discutido anteriormente, estes resultados apontam que o período de 1 hora previamente ao exercício físico, no qual os indivíduos da pesquisa fizeram uso das roupas, não produziu qualquer efeito nos níveis séricos de CK total. Assim, os dados podem ser analisados de forma comparativa tomando-se como referência tanto o CK pré-teste quanto o CK basal, indistintamente. 35 Figura 6: CK (U/L) pré-teste em função de CK (U/L) basal para a segunda tomada de dados. A linha cheia (azul) corresponde ao ajuste linear aos pontos experimentais. A linha de identidade está representada em preto. A Figura 7 mostra a dependência observada entre o parâmetro ∆CK e os níveis de CK medidos previamente ao teste de Cooper. O gráfico não mostra diferenças aparentes entre os grupos estudados. Figura 7: Dependência entre o parâmetro ∆CK (U/L) e os níveis de CK (U/L) medidos previamente ao teste de Cooper. A linha tracejada é para visualização de tendência. A Tabela 4 apresenta o sumário de dados para os dois dias de medida para a variação percentual de CK, removendo-se os casos patológicos: MtA e RA (índices elevados de CK), 36 bem como MA e LCh (variações negativas de CK mediante exercício) através de ∆CK % para BC+ e placebo. Tabela 4: Análise da ∆CK % para os dois dias de medidas. ∆CK % Indivíduos BC+ Placebo FT 24,4 15,2 FF 10 6,36 RS 22,4 24,2 VP 25,7 31,5 IL 23,7 16,9 PC 27,7 27,9 LC 11,3 13,6 RL 23,3 26,2 Média 21,06 20,23 Desvio Padrão 6,63 8,53 Nota: ∆CK%= Variação relativa de CK Tendo em vista que o experimento do presente trabalho foi conduzido na forma crossover, assume-se para efeitos de teste estatístico que os dados são pareados. Com a eliminação dos pontos atípicos, o coeficiente de correlação obtido para as duas colunas de dados da Tabela 4 foi de r = 0.7932 e o valor de p unicaudal foi de 0,0094, o que é considerado muito significante. Com estes valores, o pareamento parece ser efetivo. Desta forma, a aplicação do teste “t” pareado, retorna um valor de p bicaudal de 0,6653 indicando que a média das diferenças entre os grupos não difere significantemente de zero, ou seja, a utilização de roupas contendo particulado cerâmico não promoveu alterações nos níveis séricos de CK. 37 4.2 Análise do lactato A Tabela 5 mostra os dados experimentais obtidos na primeira tomada de dados para Lactato, referente a três coletas sanguíneas: basal, pré-teste e pós-teste de Cooper. A idade e o índice de massa corpórea dos indivíduos da pesquisa também estão apresentados Tabela 5: Dados para Lactato referente à primeira tomada de dados em 1/09/2012. 1/09/2012 BC+ Placebo (mmol/L) LACTATO PÓS (mmol/L) Idade (anos) (kg/m2) 1,1 0,8 10,4 21 19,02 MA 0,9 1,6 9,7 21 20,9 FF 1,1 0,9 10,9 29 23,8 LCH 1,2 1,2 7,2 21 22,6 RS 0,6 0,7 10,6 24 19 VP 0,8 1,3 11,8 25 24,5 IL 1,3 1,0 8,6 19 19,1 PC 0,5 1,1 14,8 22 21,4 LC 1,7 1,6 9,7 21 19,3 MtA 1,6 1,0 6,6 21 23,8 RA 1,5 1,6 10,3 22 22.1 RL 1,3 1,6 12,4 22 22,1 LACTATO BASAL (mmol/L) LACTATO PRÉ FT Indivíduos IMC Nota: mmol/L= Milimoles por litro; IMC= Índice de Massa Corpórea Conforme pode ser observado na Figura 8, os resultados de Lactato Basal e Pré-teste estão relativamente dispersos em relação à linha de identidade (reta com coeficiente angular 1), o que indica uma baixa correlação entre as duas variáveis. Os pontos experimentais estão dispersos aleatoriamente para os dois grupos de estudo, indistintamente. Desta forma, estes resultados apontam que o período de 1 h previamente ao exercício físico, no qual os indivíduos da pesquisa fizeram uso das roupas, não produziu qualquer efeito nos níveis plasmáticos de lactato. Assim, os dados podem ser analisados de forma comparativa tomandose como referência tanto o lactato pré quanto o lactato basal, indistintamente. 38 Figura 8: Lactato Pré (mmol/L) em função do Lactato Basal (mmol/L) para as medidas do dia 1/09/2012. A linha pontilhada corresponde à linha de identidade (coeficiente angular 1). A Tabela 6 mostra os dados experimentais obtidos para o Lactato na segunda tomada de dados, ocorrida no dia 22/09/12, juntamente com idade e o índice de massa corpórea dos indivíduos da pesquisa referente a três coletas sanguíneas: basal, pré - teste, pós-teste de Cooper. Tabela 6: Dados para o Lactato referente a segunda tomada de dados em 22/09/2012. 22/09/2012 Placebo BC+ Indivíduos LACTATO BASAL (mmol/L) LACTATO PRÉ (mmol/L) LACTATO PÓS (mmol/L) FT MA FF LCH RS VP IL PC LC MtA RA RL 1,7 1,4 1,1 1,6 0,6 0,6 1,7 0,5 1,4 1,6 1,1 0,7 1,4 1,3 2,5 1,0 0,7 0,7 1,2 1,4 0,9 1,7 1,7 0,8 10,6 7,1 8,8 11,5 14,0 13,5 11,4 11,4 11,4 14,6 16,3 8,6 Nota: mmol/L= Milimoles por litro; IMC= Índice de Massa Corpórea Idade (anos) 21 21 29 21 24 25 19 22 21 21 22 22 IMC (kg/m2) 19,02 20,9 23,8 22,6 19 24,5 19,1 21,4 19,3 23,8 22.1 22,1 39 A Figura 9 mostra os níveis plasmáticos de lactato no momento prévio ao teste de Cooper em função da concentração plasmática basal. Os resultados apresentam-se dispersos aleatoriamente em relação à linha de identidade. Desta forma, estes resultados apontam que o período de 1 hora previamente ao exercício físico, no qual os indivíduos da pesquisa fizeram uso das roupas, não produziu qualquer efeito nos níveis plasmáticos de lactato. Assim, os dados podem ser analisados de forma comparativa tomando-se como referência tanto o lactato pré quanto o lactato basal, indistintamente. Figura 9: Lactato Pré (mmol/L) em função do Lactato Basal (mmol/L) para as medidas do dia 22/09/2012. A Tabela 7 mostra os resultados experimentais de forma agrupada para os dois dias de coleta para lactato basal, pré e pós-teste de Cooper, comparando a roupa placebo com a roupa impregnada, juntamente com a média e desvio padrão dos grupos. O parâmetro ∆LCTb% corresponde à variação relativa dos valores de Lactato, definido como: 40 Tabela 7: Análise integral nos dois de coleta para lactato basal, pré e pós teste de Cooper, comparando a roupa placebo com a roupa impregnada, juntamente com a média e desvio padrão dos grupos. Indivíduos LCT BASAL BC+ Placebo LCT PÓS BC+ Placebo ∆LCTb% Placebo BC+ FT 1,1 1,7 10,4 10,6 523,5 845,5 MA 0,9 1,4 9,7 7,1 407,1 977,8 FF 1,1 1,1 10,9 8,8 700 890,9 LCH 1,2 1,6 7,2 11,5 618,8 500 RS 0,6 0,6 10,6 14,0 2233,3 1666,7 VP 0,8 0,6 11,8 13,5 2150 1375 IL 1,7 1,3 11,4 8,6 561,5 570,6 PC 0,5 0,5 11,4 14,8 2860 2180 LC 1,4 1,7 11,4 9,7 470,6 714,3 MtA 1,6 1,6 14,6 6,6 312,5 812,5 RA 1,1 1,5 16,3 10,3 586,7 1381,8 RL 0,7 1,3 8,6 12,4 853,8 1128,6 Média 1,058 1,242 11,2 10,66 1023 1087 Desvio Padrão 0,380 0,444 2,41 2,66 865,9 489,6 Nota: ∆LCTb%= Variação relativa de lactato basal Tendo em vista que o experimento do presente trabalho foi conduzido na forma crossover, assume-se para efeitos de teste estatístico que os dados são pareados. Para a variável ∆LCTb%, o coeficiente de correlação entre os grupos Placebo e BC+ foi de r= 0,8634 e o valor de p unicaudal foi de 0,0001 o que é considerado muito significante. Com estes valores, o pareamento parece ser efetivo. Desta forma, a aplicação do teste “t” pareado retorna um valor de p bicaudal de 0,6716, indicando que a média das diferenças entre os grupos não difere significantemente de zero, ou seja, a utilização de roupas contendo particulado cerâmico não promoveu alterações nos níveis plasmáticos de Lactato. A Figura 10 a, b, e c, apresenta os gráficos estatísticos dos dados integrados nas coletas: basal, pré e pós teste de Cooper. Nota-se que a dispersão para os níveis de Lactato após o teste de Cooper dos indivíduos que usaram roupa impregnada é menor do que os que usaram roupa placebo. 41 (a) (b) (c) Figura 10: a, b, c: Análise com os dados integrados na (a) coleta basal, (b) pré e (c) pós-teste de Cooper. A redução na dispersão das medidas obtidas para o período experimental pós-esforço físico é confirmada quando foram analisadas as variações percentuais expressas pelo 42 parâmetro ∆LCTb%. A Figura 11 mostra o gráfico estatístico para o parâmetro ∆LCTb%. Não foi observada diferença estatisticamente significante quando se compara as médias dos dois grupos experimentais. Entretanto, observa-se que para o grupo BC+, a distribuição dos valores obtidos é bem mais estreita, comparativamente aos valores obtidos para o grupo placebo, os quais se encontram mais dispersos. O desvio padrão para os valores de ∆LCTb% do grupo BC+ é de 489,6, quase metade do desvio padrão obtido para o grupo placebo, que foi de 865,9. Figura 11: Comparação da roupa placebo e BC+ por meio da variação basal e pós-teste. A aplicação do teste F aos dados da Figura 11 para testar a pressuposição de homocedasticidade (isto é, homogeneidade de variância) retornou um valor de F=3.128, com P=0.0357, o que indica que a diferença entre os desvios padrão dos dois grupos de estudo é estatisticamente significativa. A Figura 12 corrobora a observação de que o uso de roupas contendo particulado cerâmico reduziu a variância nos valores plasmáticos de lactato nos voluntários submetidos ao teste de esforço. Quando é realizado o gráfico do parâmetro ∆LCTb% em função dos níveis plasmáticos basais, observam duas linhas de tendência bem definidas que não são paralelas, mas se cruzam em um ponto intermediário. 43 Figura 12: Variação de ∆LCTb% (mmol/L) em função do Lactato Basal (mmol/L) comparado nos dois dias de coleta com a utilização de roupas placebo e BC+. As linhas cheias correspondem aos ajustes dos pontos experimentais a modelos exponenciais decrescentes simples. Nota-se que para níveis plasmáticos basais de lactato inferiores a ~0,95 mmol/L, as variações percentuais resultantes do esforço físico foram sistematicamente inferiores quando a roupa com particulado cerâmico foi utilizada, comparativamente ao uso da roupa placebo. Para os níveis plasmáticos basais superiores a ~0,95 mmol/L, as variações percentuais resultantes do esforço físico foram sistematicamente superiores quando a roupa com particulado cerâmico foi utilizada, comparativamente ao uso da roupa placebo. Este comportamento bem definido indica que o estreitamento na distribuição das concentrações plasmáticas no período pós-esforço, para os indivíduos desta pesquisa que fizeram uso de roupas contendo particulado cerâmico, não se deve ao acaso, mas é decorrente de algum efeito biomodulador na cadeia de produção e metabolização do lactato, efeito este que necessitará de estudos posteriores para ser identificado. 44 5. DISCUSSÃO O objetivo do presente estudo foi analisar a variabilidade de marcadores bioquímicos indicadores de lesão muscular e a utilização de roupas impregnadas com biocerâmica em indivíduos irregularmente ativos. Para tanto, foram realizadas três coletas: basal, pré e pósteste nos dias 01/09/2012 e 22/09/2012 no período matutino, através de um estudo duplo-cego onde os mesmos foram submetidos ao teste do esforço utilizando a roupa placebo e a impregnada em momentos diferentes. Os aumentos progressivos na enzima CK estão relacionados à falta de adaptação física, representada pelo treinamento de alta intensidade, do esforço e confirmando o risco de lesão muscular (MILIAS et al.; 2005). Esse aumento pode ser visualizado de acordo com a Tabela 2 no presente estudo. Segundo Brancaccio, Maffuli e Limongelli, (2007) as concentrações de CK variam de acordo com fatores ambientais e biológicos: gênero, etnia, massa muscular, adaptações ao treinamento, temperatura, genética e idade. Mashiko et al. (2004), verificou que creatina cinase significamente aumentada pós treino, sugere um acúmulo de exercícios físicos diários. Um dos fatores estudados nessa pesquisa foi o gênero e a idade, a opção foi o sexo masculino, visto que o sexo feminino apresenta valores reduzidos de CK pós-exercício, provavelmente derivadas da proteção que o estrogênio pode fornecer estabilidade da membrana celular no miócito (BRANCACCIO; MAFFULI; LIMONGELLI, 2007). Já a idade, a opção foi entre 18-29 anos onde estudos indicaram que a enzima CK comparado com a idade de 9 e 17 anos (período que ocorre a maturação sexual) mostrou-se maior quando está mais próximo dos 17 anos (SILVA et al.; 2007). A opção pelo período matutino foi para facilitar a corrida, pois Fernandópolis apresenta o clima quente e seco, com isso poderia prejudicar a corrida dos sujeitos. Porém a temperatura não influencia nos níveis séricos de CK. A Tabela 3 mostra os aumentos progressivos de CK, mas existem alguns indivíduos com valores negativos ou extremamente aumentados mesmo estando no estado basal. A pesquisa foi creditada nas informações que os indivíduos passaram e assinaram, porém não sabe ao certo se cumpriram os critérios de inclusão. Com isso foram retirados da pesquisa para a fidelidade dos resultados. 45 Os testes realizados em campo nos fornecem dados mais úteis para guiarmos o treinamento, evitando diversos problemas, como por exemplo: dificuldades de coordenação na corrida em esteira rolante em laboratório (SZOGY, 1987). Silva et al. (2005) realizaram um estudo onde utilizaram o Teste de Cooper para comparar o limiar de lactato em futebolistas profissionais onde mostrou que o teste de esforço é um método de fácil aplicabilidade e de baixo custo operacional. Com isso a aplicabilidade do teste de Cooper no trabalho foi pensando no grupo em estudo onde os mesmos eram indivíduos irregularmente ativos, o (n) grupo grande onde consegue colocar os indivíduos para corrida ao mesmo tempo e os mesmos conseguiam controlar o próprio desempenho visto que em esteira rolante a velocidade vai aumentando na medida em que vai correndo e pode ser realizado um por vez em cada indivíduo. A metodologia utilizada nesse estudo comparada a outras: Coelho et al. (2011), realizou a coleta em tempos diferentes pós treino em um período de quatro dias em jogadores de futebol profissional em uma temporada competitiva. Os resultados por eles obtidos mostraram um aumento da enzima CK sendo que o pico foi entre 12-20 horas pós-jogo. César et al. (2005), realizaram um estudo para analisar as modificações na CK em adultos jovens submetidos ao trabalho de flexionamento estático e de forma máxima onde mostrou que a coleta pós treino de 24 horas apresentou-se aumentada no treinamento de força máxima comparada a coleta basal. Pereira et al. (2007), investigaram o efeito do alongamento pós exercício na concentração de CK em homens e mulheres tendo observado aumento na CK 24 horas pós alongamento nos homens. Esses estudos mostram o que outros autores citaram que a concentração da CK, atinge o pico em 1-4 dias após o treino (PETERSEN et al., 2001; ANTUNES NETO et al., 2007; BRANCACCIO; MAFFULI; LIMONGELLI, 2007; FOSCHINI; PRESTES; CHARRO, 2007; MOUGIOS, 2007). A metodologia empregada no presente trabalho (coleta após 10 minutos do término do treino) foi realizada em tempos diferentes ao dos autores citados a fim de comparar através de análises bioquímicas em momentos menores o efeito da roupa impregnada com material particulado, creditando uma possível metodologia nova em tempos parcialmente menores. Devido aos efeitos biomoduladores já relatados na literatura, os tecidos contendo biocerâmica são promissores para uso em roupas de alta tecnologia em práticas esportivas de alto desempenho, buscando-se possíveis incrementos de performance durante a competição e benefícios na recuperação física no período de recuperação. Dentro dos protocolos do presente experimento, o uso, durante o esforço físico, de roupas contendo biocerâmica não modificou as concentrações séricas médias de CK e Lactato plasmático comparativamente ao 46 uso de roupa placebo. Desta forma, em primeira análise, e do ponto de vista dos parâmetros bioquímicos analisados, o uso de roupas contendo particulado cerâmico durante o exercício físico não produziu efeitos colaterais imediatos. Estudos adicionais com analises bioquímicas em tempos tardios serão necessários para avaliar possíveis benefícios ao restabelecimento do indivíduo no período tardio pós-exercício físico. Segundo Wasserman et al. (1986), o acúmulo do lactato pode ser causado por um desequilíbrio entre suprimento e requerimento de O2 no músculo que foi exercitado. A diminuição do fornecimento de O2 à mitocôndria diminui o estado de redox do citoplasma, proporcionando o acúmulo de NADH+H+. O aumento da concentração de NADH+H+ no citoplasma estimula a LDH a formar lactato (KATZ; SAHLIN, 1988). Vários autores vêm utilizando análise de lactato para descobrir o seu limiar para posteriormente estabelecer níveis adequados de intensidade de treinamento físico tanto em indivíduos atletas como em sedentários. Drigo et al. (1996), realizou um estudo sobre a demanda metabólica em lutas de projeção e de solo no judô através do lactato sanguíneo em que foi observado aumento durante os treinamentos fazendo com que ocorresse alterações metabólicas prejudiciais ao desempenho dos atletas. No presente estudo observou-se a ocorrência de um aumento do lactato plasmático pós-treino em ambos os grupos de estudo, com um pico máximo de 16,3 mmol/L ressaltandose que a corrida de 12 minutos (Teste de Cooper) foi de grande intensidade. A análise estatística mostrou que a utilização de roupas contendo particulado cerâmico não promoveu alterações nos níveis plasmáticos de lactato. Porém, mostrou que a dispersão dos valores medidos foi bem menor quando os indivíduos utilizaram roupa contendo particulado cerâmico, comparativamente ao uso da roupa placebo. Esses resultados podem ser mostrados na Figura 10, onde observamos um estreitamento nos voluntários que utilizaram a roupa contendo particulado cerâmico, onde apresentaram um desvio padrão menor de 489,6, comparado ao placebo que foi de 865,9. A Figura 11 enfatiza melhor esses resultados onde ocorre o cruzamento das linhas de tendência (placebo e BC+), indicando que os valores inferiores à 0,95mmol/L resultantes do esforço físico foram menores quando utilizados roupas contendo biocerâmica comparativamente à roupa placebo, já os resultados superiores à 0,95mmol/L resultantes do esforço físico foram maiores nos indivíduos que utilizaram roupa contendo biocerâmica comparado à roupa placebo. Uma das hipóteses é que a roupa de biocerâmica emita radiação no IVL ocasionando um efeito biomodulator na cadeia e depuração do lactato. Os maiores efeitos observados do IVL são: melhorar a circulação, reparar e regenerar tecidos e regular os líquidos do corpo 47 (sistema humoral). Também, o IVL aumenta a temperatura corporal e eleva a mobilidade dos fluidos corporais (INOUÉ; KABAYA, 1989). Apesar de ainda pouco estudada, a biocerâmica foi descrita em diversas aplicações, como no tratamento e reabilitação de doenças relacionadas a distúrbios vasomotores; Ko e Berbrayer, (2002) realizaram uma pesquisa em pacientes com Síndrome de Raynaud e relataram uma melhora na dor, no desconforto e aumento da temperatura da ponta dos dedos das mãos comparada a roupa placebo. Yoo et al. (2002), relataram que o tratamento utilizando o creme contendo pó de turmalina e jade aplicado no rosto, eleva a temperatura da pele incrementando a circulação sanguínea, mostrando que a biocerâmica tem um grande potencial como matéria prima em cosméticos. Conrado e Munin, (2013) mostraram através de uma pesquisa realizada em 30 dias com mulheres, que a utilização de roupas impregnadas com biocerâmica promove um efeito biomodulador, resultando em redução de medidas corporais. A função da roupa contendo biocerâmica no organismo é promover a emissão de raios infravermelhos, e a hipótese nesse caso (concentração do lactato) é que pode ter ocorrido um aumento da temperatura da cutânea nos indivíduos por mecanismos de vasodilatação com isso aumentando a depuração hepática do lactato, melhorando a circulação no local fazendo com que o organismo não tenha tantas alterações musculares no pós-exercício. No presente estudo, é possível que a vasodilatação produzida pela roupa com biocerâmica, com melhoria na microcirculação próxima à musculatura, leve a um incremento na depuração via hepática do lactato. Como limitação do presente estudo, podemos citar o curto período de tempo transcorrido entre o exercício físico e a coleta sanguínea. Para a análise de CK a metodologia mais indicada seria a coleta 24 horas pós-treino comumente utilizada nas pesquisas e analisar os efeitos da roupa durante o período de corrida, e período tardio pós-corrida, pois a mesma mostrou em estudos segundo (CONRADO; MUNIN, 2013; KO; BERBRAUER, 2002; YOO, et al., 2002) que melhora a dor, inflamação, edema podendo ter um melhor desempenho nos indivíduos irregularmente ativos. Neste trabalho, o curto tempo pós-esforço escolhido para a coleta sanguínea foi determinado pela dificuldade em subtrair os indivíduos de seus afazeres rotineiros por um longo período. Para se avaliar os efeitos em tempos tardios, seria necessário manter os indivíduos da pesquisa em condições controladas no período pós-exercício, evitando-se assim a inserção de fatores que possam interferir nos resultados finais. 48 6. CONCLUSÕES Através dos resultados obtidos por meio de análises bioquímicas o presente estudo mostrou que a utilização de roupas contendo particulado cerâmico não promoveu alterações significativas nos níveis séricos de CK. A análise de dados mostrou uma menor dispersão nas concentrações plasmáticas de lactato, no período pós-esforço para indivíduos que utilizaram a roupa contendo particulado cerâmico, comparativamente aos indivíduos que utilizaram a roupa placebo. Os resultados indicaram, portanto, que a oclusão corporal com roupas contendo particulado cerâmico poderia ter produzido ação modulatória na cadeia de produção e depuração do lactato, inferindo consequentemente nos níveis plasmáticos deste composto, por mecanismos ainda não elucidados. 49 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ANTUNES NETO, J.M.F.; FERREIRA, D.C.B.G.; REIS, I.C. et al. Manutenção de microlesões celulares e respostas adaptativas a longo prazo no treinamento de força. Braz. J. Biomotricity 4(1): 87-102, 2007. BAYNES, J.; DOMINICZAK, M. H. Bioquímica Médica. São Paulo: Manole, 2000, 566 p. BRANCACCIO, P.; MAFFULI, N.; LIMONGELLI, F.M. Creatine kinase monitoring in sport medicine. Brit. Med. Bull. 81-82(1): 209-30, 2007. BRASIL. Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Inquérito Domiciliar sobre Comportamentos de Riscos e Morbidade Referida de Doenças e Agravos Não Transmissíveis. Rio de Janeiro, Instituto Nacional do Câncer, 2004, 185 p. BRIOSCHI, M. L.; KASIVAMA, H. H. S.; YENG, L. T. et al. Efeito térmico da eletroestimulação funcional e do tecido de biocerâmica na síndrome complexa de dor regional tipo 1. Rev. Dor 8(4): 1139-1149, 2007. CESAR, E. P.; BARA FILHO, M. G.; LIMA, J. R. P. et al. Modificações agudas dos níveis séricos de creatina quinase em adultos jovens submetidos ao trabalho de flexionamento estático e de força máxima. Rev. Desp. Saúde 4(3): 49-55, 2005. CHARGÉ S.B.P.; RUDNICK, M.A. Cellular and Molecular Regulation of Muscle Regenetion. Physiol. Rev. 84(1): 209-238, 2004. COELHO, D. B.; MORANDI, R. F.; MELO, M. A.A.; et al. Creatine kinase kinetics in professional soccer players during a competitive season. Rev. Bras. Cineantrop. Desemp. Hum. 13(3): 189-194, 2011. CONRADO, L.A.L.; MUNIN, E. Reduction in body measurements after use of a garment made with synthetic fibers embedded with ceramic nanoparticles. J. Cosm. Dermat. 10(1): 30-35, 2011. CONRADO, L.A.L.; MUNIN, E. Reductions in body measurements promoted by a garment containing ceramic nanoparticles: a 4-month follow-up study. J. Cosm. Dermat. 12(1):18-24, 2013. COOPER, K.H. A means of assessing maximal oxygen intake: Correlation between field and treadmill testing. J. Am. Med. Assoc. 203(3): 201-204, 1968. CURI, R.; LAGRANHA, C. J.; GARCIA JUNIOR, J. R. et al. Ciclo de Krebs como fator limitante na utilização de ácidos graxos durante o exercício aeróbico. Arq. Bras. Endocr. Met. 47(2): 135-143, 2003. DIAS, R.G.; PEREIRA, A. C.; NEGRAO, C. E. et al. Genetic polymorphisms determining of the physical performance in elite athletes. Rev. Bras. Med. Esporte 13(3): 209-216, 2007. DOBGENSKI, V. Efeito da suplementação de creatina na performance e em algumas variáveis bioquímicas e metabólicas em nadadores do sexo masculino. 2007. 75 p. Dissertação (Mestrado em Educação Física) - Universidade Federal do Paraná, Curitiba, Paraná. DRIGO, A. J.; AMORIM, A. R.; MARTINS, C. J. et al. Demanda metabólica em lutas de projeção e de solo no judô: estudo pelo lactato sanguíneo. Rev. Motriz. 2(2): 80-86, 1996. ENRIGHT, P.L. The six-minute walk test. Resp. Care 48(8): 783-785, 2003. FOSCHINI, D.; PRESTES, J.; CHARRO, M.A. Relação entre exercício físico, dano muscular e dor muscular de início tardio. Rev. Bras. Cineantrop. Desemp. Hum. 9(1): 101-106, 2007. 50 FOX, E. L.; FOSS, M. L.; KETEYIAN, S. J. F. Bases Fisiológicas do Exercício e do Esporte. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2000, 560 p. GRANJA FILHO, P. C. N.; POMPEU, F. A.M.S.; SILVA, A. P. R. S. Accuracy of VO2max and anaerobic threshold determination. Rev. Bras. Med. Esporte 11(4): 162-165, 2005. GUYTON, A. C.; HALL, J. E. Tratado de Fisiologia Médica. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2002, 973 p. HOLLOSKY, J. Muscle metabolism during exercise. Arch. Phys. Med. Rehab. 63(5): 231-34, 1982. HOPKINS, W.G. Quantification of training in competitive sports. Methods and Applications. Sports Med. 12(3):161-183, 1991. HUG, F.; GRELOT, L.; LE FUR, Y. et al. Recovery kinetics throughout successive bouts of various exercises in elite cyclists. Med. Sci. Sports Exerc. 38(12): 2151-2158, 2006. INOUÉ, S.; KABAYA, M. Biological activities caused by far-infrared radiation. Int. J. Biometeorol. 33(3): 145-150, 1989. ISPIRLIDIS, I.; FATOURO,S I. G.; JAMURTAS, A. Z. et al. Time-course of changes in inflammatory and performance responses following a soccer game. Clin. J. Sport Med. 18(5): 423431, 2008. JÄRVIVEN, T.A.; JÄRVINEN, T. L.; KÄÄRIÄINEN, M. et al. Muscle injuries: biology and treatment. Am. J. Sports Med. 33(5): 745-64, 2005. KARU, T. I. Photobiological Fundamental of Low Power Laser Terapy. IEEE J. Quantum Electron. 23(10): 1703-1720, 1987. KATIRIJI, B.; MOHAMED, M, A. Creatine kinase revisited. J. Clin. Neuromusc. Dis. 2(3): 158-164, 2001. KATZ, A.; SAHLIN, K. Regulation of latic acid production during exercise. J. Appl. Physiol. 65(2): 509-518, 1988. KITCHEN, S. S.; PARTRIDGE, C. J. A review of low level laser therapy: Part I: Background, Physiological Effects and Hazards. Physiother. 77(3): 161-168, 1991. KO, G.D.; BERBRAYER, D. Effect of Ceramic- Impregnated “Thermoflow” Gloves on Patients with Raynaud´s Syndrome: Randomized, Placebo-Controlled Study. Altern. Med. Rev. 7(4): 327-334, 2002. KUBOTA, J.; OHSHIRO, T. The effects of diode laser low reactive level laser therapy (LLLT) on flap survival in a rat model. Laser Ther. 1(3): 127, 1989. KUCZMARSK, R. J.; OGDEN, C. L.; GRUMMER, S. L. M. et al. CDC Growth Charts: United States. Adv. Data 8(314): 1-27, 2000. MARZZOCO, A.; TORRES B. B. Bioquímica Básica. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2007, 388 p. MASHIKO, T.; UMEDA, T.; NAKAJI, S. et al. Effects of exercise on the physical condition of college rugby players during summer training camp. Braz. J. Sports Med. 38(2): 186-190, 2004. MCARDLE, W. D.; KATCH, F. I. Fisiologia do Exercício: Energia, Nutrição e Desempenho Humano. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2003, 1175 p. MIDDLETON, S. W. F.; SMITH, J .E. Muscle injuries. Rev. Trauma 9(1): 5-11, 2007. 51 MILIAS, G. A.; TZORTZIS N.; FRAGOPOULOU, E. et al. Effects of eccentric exercise-induced muscle injury on blood levels of platelet activating factor (PAF) and other inflammatory markers. Eur. J Appl. Physiol. 95(5-6): 504-513, 2005. MORAN, A. L.; HORTON, H. R.; SCRIMGEOUR, K. G. et al. Bioquímica. São Paulo: Pearson Education do Brasil, 2013, 798 p. MOUGIOS, V. Reference intervals for serum creatine kinase in athletes. Braz. J. Sports Med. 41(10): 674-678, 2007. NICHOLLS, D. G.; FERGUSON, S. J. Bioenergetics 3. San Diego: Academic Press, 2002. p. 90-129. NIWA, Y.; IIWA, O.; ISHIMOTO, K.et al. Electromagnetic wave emitting products and "Kikoh" potentiate human leukocyte functions. Int. J. Biometeorol. 37(3): 133-138, 1993. PATARO, L. A. Avaliação biológica de compósitos de polímeros biodegradáveis em uma matriz de biocerâmica com adição de tetraciclina. 2005. 183 p. Dissertação (Mestrado em Odontologia) Universidade Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte. PEREIRA, R.; BRUST, A.; BARRETO, J. et al. Efeito do alongamento pós exercício na concentração sérica de creatina kinase (ck) de homens e mulheres. Motricidade 3(2): 88-93, 2007. PETERSEN, E.W.; OSTROWSKI, K.; IBFELT, T. et al. Effect of vitamin supplementation on cytokine response and on muscle damage after strenuous exercise. Am. J. Physiol. Cell Physiol. 280(6): 1570-1575, 2001. PLEBANI, M. Skeletal muscle biomarkers: not new but still interesting diagnostics tools. Clin. Chem. Lab. Med. 48(6): 745-746, 2010. POWERS S.K.; HOWLEY E. T. Fisiologia do Exercício: Teoria e Aplicação ao Condicionamento e ao Desempenho. Barueri: Manole, 2000. p. 268-269. PROSKE, U.; MORGAN, D. L .Muscle damage from eccentric exercise: mechanism, mechanical signs, adaptation and clinical applications. J. Physiol. 537(Pt 2): 333-345, 2001. RIGAU, J. Accion de la luz laser a baja intensidade em la modulacion de la funcion celular. Réus. 1996. 106 p. Tese (Doutorado em Histologia) - Facultat de Medicina i Ciência de la Salute Univ. Rovira i Virgili, Espanha. ROBERGS, R. A., GHIASVAND, F.; PARKER, D. Biochemistry of exercise induced metabolic acidosis. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 287(3): 502-516, 2004. SHIKINAMI, Y.; OKUNO, M. Bioresorbable devices made of forged composites of hydroxyapatite (HA) particles and poly-L-lactide (PLLA): Part I. Basic characteristics. Biomater. 20(9): 859-877, 1999. SILVA, A. C.; TORRES, F. C. Ergoespirometria em atletas paraolímpicos brasileiros. Rev. Bras. Med. Esporte 8(3): 107-116, 2002. SILVA, A.S.R.; SANTOS, F.N.C.; SANTHIAGO, V. et al. Comparação entre métodos invasivos e não invasivo de determinação da capacidade aeróbia em futebolistas profissionais. Rev. Bras. Med. Esporte 11(4): 233-237, 2005. SILVA, C. C.; GOLDBERG, T. B. L.; CAPELA, R. C. et al. Respostas agudas pós-exercício dos níveis de lactato sanguíneo e creatinofosfoquinase de atletas adolescentes. Rev. Bras. Med. Esporte 13(6): 381-386, 2007. SKINNER, J.; MCLELLAN, T. The transition from aerobic to anaerobic exercise. Res. Q. Exerc. Sport 51(1): 234-48, 1980. 52 SMITH, L. L. Acute Inflammation: the underlying mechanism in delayed onset muscle soreness? Med. Sci. Sports Exerc. 23(5): 542-551, 1991. SZOGY, A. Sports-medical training counseling using aerobic and anaerobic field tests. Int. J. Sports Med. 9(2): 133-140, 1987. TIDBALL, J. G. Inflammatory Cell Response to Acute Muscle Injury. Med. Sci. Sports Exerc. 27(7): 1022-1032, 1995. TRICOLI V. Mecanismos envolvidos na etiologia da dor muscular tardia. Rev. Bras. Cineantrop. Movim. 9(2): 39-43, 2001. WASSERMAN, K., HANSEN, J. E., SUE, D. Y. et al. Principles of Exercise Testing and Interpretation. Philadelphia: Lea & Febiger, 1986, 556 p. WHITING, W. C.; ZERNICKE, R. F. Biomecânica da Lesão Musculoesquelética. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2001, 272 p. YOO, B. H., PARK, C. M.; OH, T. J. et al. Chang Investigation of jewelry powders radiating farinfrared rays and the biological effects on human skin. J. Cosmet. Sci. 53(3): 175-184, 2002. YU, S.; CHIU, J. H.; YANG, S. D. et al. Biological effect of far-infrared therapy on increasing skin microcirculation in rats. Photodermatol. Photoimmunol. Photomed. 22(2): 78-86, 2006. 53 ANEXO A - TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO Consentimento Livre e Esclarecido em Pesquisa Cientifica conforme a Resolução 196/96 do Conselho Nacional de Saúde. Eu, ................................................................................., RG n..................................Residente à..................................................................n............Bairro........................................., na cidade de..................................................., consinto em participar da pesquisa cientifica da Universidade Camilo Castelo Branco-UNICASTELO- intitulada: “ANÁLISES DE PARÂMETROS BIOQUÍMICOS EM INDIVÍDUOS SUBMETIDOS AO TESTE DE ESFORÇO E UTILIZAÇÃO DE ROUPAS IMPREGNADAS COM BIOCERÂMICA” A ser realizada pelo Profa. Esp. NAYARA GOMES FELIX DA SILVA RG n. 42.360.050-3 e CPF: 345.896.708-79, Biomédica- CRBM 12550, residente à Avenida Pedro Ferrari, 58, Fernandópolis – SP, telefone para contato: 17 34625983/ 17 981370694, endereço profissional: Avenida Teotônio Vilela s/n- Campus UniversitárioFernandópolis-SP telefone para contato: 17 34650000 -. ciente e de acordo com os itens abaixo: a) - A justificativa, os objetivos, e aos procedimentos a serem realizados na pesquisa; Serão realizadas três punções venosas a fim de adquirir material para análises sanguíneas, basal, antes e após o teste de esforço, sob supervisão, do autor. Salientamos que este teste não implica risco à saúde, sendo realizado corriqueiramente na prática médica. A punção será realizada com antissepsia prévia da fossa antecubital dos indivíduos, antes de colocar as roupas, 10 minutos antes e 10 minutos após seu término. As amostras colhidas serão armazenadas em tubos secos e com anticoagulante fluoreto e centrifugadas a 1500 rpm por 15 minutos. Os soros e plasmas obtidos serão armazenados em Eppendorf para as análises bioquímicas. O objetivo desse trabalho é analisar: 1- Os parâmetros bioquímicos de lesão muscular, ou seja, se a roupa utilizada durante o teste de esforço poderá melhorar o seu desempenho físico. 54 2- Esta roupa possui uma nano-cerâmica (cerâmica muito pequena). Quando o corpo se aquece, durante a caminhada ou corrida, esta nano-cerâmica absorve o calor do corpo e devolve para o nosso corpo uma radiação de tamanho muito pequeno. Esta radiação, por fim, estimula o funcionamento das células do corpo, melhorando as reações químicas, sem causar efeitos maléficos à nossa saúde. b) Os desconfortos e riscos possíveis e os benefícios esperados; Em caso de desconforto, em que você possa estar sentindo dor durante a realização do teste, o indivíduo pode parar a corrida. No caso da punção sanguínea, a coleta será prontamente interrompida. Durante toda a realização do teste de Cooper e punção sanguínea haverá profissional treinado para atender qualquer efeito adverso que puder vir acontecer. c) - Os métodos alternativos existentes; Os métodos e técnicas que serão utilizados neste trabalho são considerados procedimentos simples na área da saúde, ficando a seu critério a realização ou não deles, sem a necessidade de métodos alternativos. d) - A forma de acompanhamento e assistência, assim como seus responsáveis; A Profa. Nayara Gomes Felix da Silva e o médico cardiologista, professor de fisiologia do exercício, serão os responsáveis por orientar toda a realização dos testes de acordo com as condições estabelecidas no item “a”. e) - A garantia de esclarecimento, antes e durante o curso da pesquisa, sobre a metodologia, informando a possibilidade de inclusão em grupo controle ou placebo; Esta pesquisa será composta por 2 grupos: Realizaremos um estudo duplo-cego, da seguinte forma: Os 12 indivíduos serão divididos aleatoriamente em 2 grupos: Grupo A (6 indivíduos) e Grupo B (6 indivíduos). Na primeira semana de aplicação do teste de Cooper e coleta sanguínea, o Grupo A utilizará as roupas com nano-cerâmica e o Grupo B será o placebo; Na segunda semana de teste, inverte-se os grupos: o Grupo A realizará o teste de Cooper com as roupas placebo e o Grupo B usará as roupas com a nano-cerâmica; realizando a punção sanguínea nos dois grupos; As roupas serão usadas pelos indivíduos de acordo com o seu tamanho: pequeno, médio ou grande. As meias serão colocadas até a altura dos joelhos. Os indivíduos deverão colocar as roupas uma hora antes da realização do teste. A punção sanguínea deverá ser coletada 10 minutos antes e após o teste de Cooper. 55 Será garantida a resposta a qualquer pergunta ou esclarecimento sobre dúvidas a respeito dos procedimentos, riscos, benefícios e outros assuntos relacionados com a pesquisa, através da Profa. Nayara Gomes Felix da Silva ou médico cardiologista. f) - A liberdade do indivíduo recusar-se a participar ou retirar seu consentimento, em qualquer fase da pesquisa, sem penalização alguma e sem prejuízo ao seu cuidado; Fica assegurado o seu direito de se retirar desta pesquisa em qualquer etapa sem prejuízo algum para a sua pessoa. g) A garantia do sigilo que assegure a privacidade dos indivíduos quanto aos dados confidenciais envolvidos na pesquisa; Todos os dados, relatos e materiais desta pesquisa serão considerados confidenciais, garantindo a você toda a privacidade das informações. À inexistência de qualquer espécie de benefício, a não ser informativo, tanto por parte da Universidade quanto dos pesquisadores; h) As formas de ressarcimento das despesas decorrentes da participação na pesquisa; Todas as despesas necessárias à execução deste trabalho, desde a preparação e execução dos testes, assim como as roupas, serão patrocinadas pelo Profa. Nayara Gomes, sem despesa alguma para você. i) As formas de indenização diante de eventuais danos decorrentes da pesquisa. Em caso de eventuais danos durante a realização dos procedimentos, fica assegurado ao paciente toda e qualquer indenização prevista por lei. j) Após a execução das análises, permito o uso dos resultados dos mesmos para estudos científicos e análises comparativas. Fernandópolis, ..........de...........................de 2012 ............................................. Assinatura do Voluntário ..................................................... Assinatura do Pesquisador 56 ANEXO B-QUESTIONARIO Nome:_______________________________________________________ Data: ______/ _______ / ______ Idade: ______ Sexo: F ( )M( ) Nós estamos interessados em saber que tipos de atividade física as pessoas fazem como parte do seu dia a dia. Este projeto faz parte de um grande estudo que está sendo feito em diferentes países ao redor do mundo. Suas respostas nos ajudarão a entender que tão ativos nós somos em relação à pessoas de outros países. As perguntas estão relacionadas ao tempo que você gasta fazendo atividade física na ÚLTIMA semana. As perguntas incluem as atividades que você faz no trabalho, para ir de um lugar a outro, por lazer, por esporte, por exercício ou como parte das suas atividades em casa ou no jardim. Suas respostas são MUITO importantes. Por favor, responda cada questão mesmo que considere que não seja ativo. Obrigado pela sua participação! Para responder as questões lembre-se que: • Atividades físicas VIGOROSAS são aquelas que precisam de um grande esforço físico e que fazem respirar MUITO mais forte que o normal • Atividades físicas MODERADAS são aquelas que precisam de algum esforço físico e que fazem respirar UM POUCO mais forte que o normal Para responder as perguntas pense somente nas atividades que você realiza por pelo menos 10 minutos contínuos de cada vez. 1a Em quantos dias da última semana você CAMINHOU por pelo menos 10 minutos contínuos em casa ou no trabalho, como forma de transporte para ir de um lugar para outro, por lazer, por prazer ou como forma de exercício? dias _____ por SEMANA ( ) Nenhum 57 1b. Nos dias em que você caminhou por pelo menos 10 minutos contínuos quanto tempo no total você gastou caminhando por dia? horas: ______ Minutos: _____ 2a. Em quantos dias da última semana, você realizou atividades MODERADAS por pelo menos 10 minutos contínuos, como por exemplo pedalar leve na bicicleta, nadar, dançar, fazer ginástica aeróbica leve, jogar vôlei recreativo, carregar pesos leves, fazer serviços domésticos na casa, no quintal ou no jardim como varrer, aspirar, cuidar do jardim, ou qualquer atividade que fez aumentar moderadamente sua respiração ou batimentos do coração (POR FAVOR NÃO INCLUA CAMINHADA) dias _____ por SEMANA ( ) Nenhum 2b. Nos dias em que você fez essas atividades moderadas por pelo menos 10 minutos contínuos, quanto tempo no total você gastou fazendo essas atividades por dia? horas: ______ Minutos: _____ 3a. Em quantos dias da última semana, você realizou atividades VIGOROSAS por pelo menos 10 minutos contínuos, como por exemplo correr, fazer ginástica aeróbica, jogar futebol, pedalar rápido na bicicleta, jogar basquete, fazer serviços domésticos pesados em casa, no quintal ou cavoucar no jardim, carregar pesos elevados ou qualquer atividade que fez aumentar MUITO sua respiração ou batimentos do coração. dias _____ por SEMANA ( ) Nenhum 3b. Nos dias em que você fez essas atividades vigorosas por pelo menos 10 minutos contínuos quanto tempo no total você gastou fazendo essas atividades por dia? horas: ______ Minutos: _____ Estas últimas questões são sobre o tempo que você permanece sentado todo dia, no trabalho, na escola ou faculdade, em casa e durante seu tempo livre. Isto inclui o tempo sentado estudando, sentado enquanto descansa, fazendo lição de casa visitando um amigo, lendo, sentado ou deitado assistindo TV. Não inclua o tempo gasto sentando durante o transporte em ônibus, trem, metrô ou carro. 58 4a. Quanto tempo no total você gasta sentado durante um dia de semana? ______horas ____minutos 4b. Quanto tempo no total você gasta sentado durante em um dia de final de semana? ______horas ____minutos PERGUNTA SOMENTE PARA O ESTADO DE SÃO PAULO Você já ouviu falar do Programa Agita São Paulo? ( Você sabe o objetivo do Programa? ( ) Sim ( ) Sim ( ) Não ) Não 59 ANEXO C - BULAS DOS KITS 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 ANEXO C - PARECER CONSUBSTANCIADO DO CEP PARECER CONSUBSTANCIADO DO CEP UNIVERSIDADE CAMILO CASTELO BRANCO UNICASTELO DADOS DO PROJETO DE PESQUISA Título da Pesquisa: ANÁLISES DE PARÂMETROS BIOQUÍMICOS EM INDIVÍDUOS SUBMETIDOS À ERGOMETRIA E UTILIZAÇÃO DE ROUPAS IMPREGNADAS COM BIOCERÂMICA Pesquisador: Nayara Gomes Felix da Silva Área Temática: Novos procedimentos terapêuticos invasivos; Versão: 2 CAAE: 01542412.5.0000.5494 Instituição Proponente: Universidade Camilo Castelo Branco Patrocinador Principal: Financiamento Próprio DADOS DA NOTIFICAÇÃO Tipo de Notificação: Outros Detalhe: Alteração do teste de esforço Justificativa: Alteração do teste de ergometria devido ao equipamento estar em manutenção e Data do Envio: 03/11/2013 Situação da Notificação: Parecer Consubstanciado Emitido DADOS DO PARECER Número do Parecer: 470.115 Data da Relatoria: 12/11/2013 Apresentação da Notificação: Foi encaminhada uma carta justificando mudança no teste aplicado. Objetivo da Notificação: Comunicar a alteração do teste utilizado no estudo (Ergométrico) para Teste de Cooper devido a problemas no equipamento e com o profissional médico que aplicaria o teste. 79 UNIVERSIDADE CAMILO CASTELO BRANCO UNICASTELO Continuação do Parecer: 470.115 Avaliação dos Riscos e Benefícios: de acordo com os previamente citados. Comentários e Considerações sobre a Notificação: Notificaçao deixa claro e justificado o motivo da alteração. Endereço: RUA CAROLINA FONSECA, 584 Bairro: ITAQUERA UF: SP Município: Telefone: SAO PAULO CEP: (11)2070-0092 08.230-030 [email protected] E-mail: Página 01 de 02 Considerações sobre os Termos de apresentação obrigatória: de acordo Recomendações: sem recomendações Conclusões ou Pendências e Lista de Inadequações: Aprovado Situação do Parecer: Aprovado Necessita Apreciação da CONEP: Não Considerações Finais a critério do CEP: O parecer foi aprovado ou seja foi aceita a solicitaçao do pesquisador. SAO PAULO, 27 de Novembro de 2013 Assinador por: Geraldina Porto Witter ( Coordenador ) Endereço: RUA CAROLINA FONSECA, 584 Bairro: ITAQUERA UF: SP Município: Telefone: CEP: 08.230-030 SAO PAULO (11)2070-0092 E-mail: [email protected] Página 02 de 02