56º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 56º Congresso Brasileiro de Genética • 14 a 17 de setembro de 2010
Casa Grande Hotel Resort • Guarujá • SP • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
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Monitoramento da população de leveduras presente
nos processos de fermentação alcoólica industrial por
meio de marcadores moleculares
Soares, ML1; Barbosa Neto, AG1,4; Silva, PKN1; Souza, RB4; Menezes, JAS4; Morais Jr., MA3,4; Brasileiro, BTRV2,4
Estudante do Curso de Licenciatura Plena em Ciências Biológicas, do Centro de Ciências Biológicas e Saúde - Universidade Católica de
Pernambuco
2
Professora do Centro de Ciências Biológicas e Saúde – Universidade Católica de Pernambuco
3
Professor do Departamento de Genética, Universidade Federal de Pernambuco – Recife/PE
4
Genetech Bioprodutividade - Desenvolvimento, Pesquisa e Consultoria em Biotecnologia
[email protected]
1
Palavras-chave: Tipagem genética, PCR-fingerprinting, (GTG)5, Acompanhamento microbiológico, Leveduras industriais
A demanda do etanol, como importante combustível renovável, vem aumentando ao longo dos anos, e o
aperfeiçoamento e o monitoramento da fermentação se tornam essenciais para a otimização do processo. Nosso
grupo aperfeiçou o uso de uma série de marcadores moleculares baseados em análise de DNA e o objetivo do
presente trabalho foi o de comprovar a eficiência dos mesmos a partir da análise das leveduras presentes em
processos industriais de diferentes destilarias nas safras 2008/2009 e 2009/2010. Os resultados de identificação
molecular foram relacionados com a análise da capacidade fermentativa da biomassa industrial com vistas a
comprovação da eficiência desses marcadores no monitoramento industrial. As coletas do mosto fermentado
foram realizadas em diferentes destilarias e as amostras transportadas para o laboratório da empresa Genetech,
Recife-PE. Após a diluição, as amostras foram semeadas em placas de Petri contendo o meio WLN com verde
de bromocresol e antibióticos, e incubadas a 33ºC por cinco dias. As colônias de levedura foram classificadas
quanto à morfologia e fotografadas, cultivadas em meio YPD e submetidas à extração de DNA total pelo método
do fenol-clorofórmio. As análises moleculares foram realizadas pelos métodos de DNA-fingerprinting utilizando
o iniciador (GTG)5 e ribotipagem por PCR. Em paralelo, a biomassa daquelas amostras foi coletada, lavada e
submetida a ensaios fermentativos conduzidos em mosto sintético a 33ºC sem agitação por seis horas, sendo
avaliadas quanto aos parâmetros industriais e a capacidade de conversão sacarose-etanol. Os resultados de
tipagem molecular revelaram a presença de diferentes perfis de Saccharomyces cerevisiae e de diferentes espécies
de levedura contaminante que foram distintos nas diferentes destilarias utilizadas. Não houve relação entre as
populações de destilarias que utilizaram apenas caldo de cana, assim como a especificidade para as destilarias
que utilizaram melaço. Dentre as espécies contaminantes do processo destacou-se a Dekkera bruxellensis que
apresentou episódios de contaminação com contagem celular superior a de S. cerevisiae em várias amostras.
Entretanto, os ensaios fermentativos indicaram que a presença de leveduras contaminantes selvagens nem sempre
foi relacionada com a queda da eficiência da fermentação da biomassa. Os resultados possibilitaram concluir que
a tipagem genética constitui excelente ferramenta na identificação e acompanhamento das leveduras residentes,
auxiliando na otimização do processo industrial com a indicação das leveduras que realmente causam problemas
de queda de rendimento e auxiliando na separação dos fatores bióticos e abióticos que podem levar a quedas no
rendimento fermentativo industrial.