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ANAIS
3227
o
Encontro Sobre Temas de
Genética e Melhoramento
"Genética de Microrganismos:
Passado e Perspectivas"
14, 15 e 16 de outubro de 2015
ANAIS
32º ENCONTRO SOBRE
TEMAS DE GENÉTICA E MELHORAMENTO
II Workshop de Biossegurança e
Responsabilidade na Pesquisa
VOLUME 32
“GENÉTICA DE MICRORGANISMOS:
PASSADO E PERSPECTIVAS”
14,15 E 16 DE OUTUBRO DE 2015
Piracicaba - SP
UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO
ESCOLA SUPERIOR DE AGRICULTURA “LUIZ DE QUEIROZ”
DEPARTAMENTO DE GENÉTICA
2015
ANAIS
32º ENCONTRO SOBRE
TEMAS DE GENÉTICA E MELHORAMENTO
II Workshop de Biossegurança e
Responsabilidade na Pesquisa
VOLUME 32
“GENÉTICA DE MICRORGANISMOS:
PASSADO E PERSPECTIVAS”
14,15 E 16 DE OUTUBRO DE 2015
Piracicaba - SP
EDITORES
CLAUDIA BARROS MONTEIRO-VITORELLO (COORDENADORA)
MARIA CAROLINA QUECINE VERDI (COORDENADORA)
SILVIA MARIA GUERRA MOLINA
JOÃO LÚCIO DE AZEVEDO
GERHARD BANDEL
ASM STUDENT CHAPTER BRAZIL
Dados Internacionais de Catalogação na Publicação
DIVISÃO DE BIBLIOTECA - ESALQ/USP
Encontro sobre Temas de Genética e Melhoramento (32: 2015: Piracicaba, SP)
“Genética de Microrganismos: Passado e Perspectivas” ; anais ... / edição de Claudia
Barros Monteiro Vitorello... [et al.]. - - Piracicaba: ESALQ/LGN, 2015.
44 p.
Bibliografia.
1. Genética de populações 2. Melhoramento genético vegetal I. Monteiro-Vitorello,
C. B., ed. II. Quecine, M. C., ed. III. Molina, S. M. G., ed. IV. de Azevedo, J. L., ed. V.
Bandel, G., ed. VI Título
CDD 631.522
G335e
UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO
Reitor: Prof. Marco Antonio Zago
Vice Reitor: Prof. Vahan Agopyan
ESCOLA SUPERIOR DE AGRICULTURA “LUIZ DE QUEIROZ”
DIRETOR: Prof. Luiz Gustavo Nussio
VICE-DIRETOR: Prof. Durval Dourado Neto
PREFEITURA DO CAMPUS USP “LUIZ DE QUEIROZ”
PREFEITO: Prof. Fernando Seixas
DEPARTAMENTO DE GENÉTICA
ESALQ/USP
CHEFE: Silvia Maria Guerra Molina
SUPLENTE: Ricardo Antunes de Azevedo
2015
AGRADECIMENTOS
A Comissão organizadora do 32º Encontro Sobre Temas de Genética e
Melhoramento nesta ocasião agradece o apoio decisivo recebido das seguintes
instituições:
Departamento de Genética da ESALQ e a própria ESALQ, Programa de Pósgraduação em Genética e Melhoramento de Plantas (PPG-GMP-ESALQ/USP),
Programa de Pós-graduação em Microbiologia Agrícola (PPG-MA-ESALQ/USP)
Laboratório de Genética de Microrganismo “Prof Dr. João Lucio de Azevedo”,
Fundação de Estudos Agrários Luiz de Queiroz (FEALQ), ANALÍTICA, COLDLAB,
INTERPRISE, KASVI, MERSE, MSLABS, PENSABIO, ROCHE, SIGMA-ALDRICH.
Discentes e pós-doutores:
Andressa Peres Bini
Bruna Durante Batista
Jaqueline Raquel de Almeida
Jéssica Campos
Joelma Marcon
Leila Priscila Peters
Maria Beatriz Calderan Bonassi
Maria Leticia Bonatelli
Mariana Silva Lopes
Nathalia de Moraes
Patricia Schaker
Paula de Almeida Carvalho
Rafael Martins Aniceto
Renata de Assis Castro
Sarina Tsui
Servidores Não Docentes da ESALQ:
Antonio de Pádua Gorga
Carlos Roberto Macedonio
Fernando Leopoldino
José Antônio da Silva
Maídia Maria Thomaziello
Rogério Antonio Marim
Silvia Scudeller Zanatta
Valdir Próspero
ÍNDICE
Setores de Pesquisa e Corpo Docente ........................................................................... 10
Corpo Docente – 1935-2015 ........................................................................................... 11
Apresentação ................................................................................................................. 12
Programa do Evento ....................................................................................................... 13
RESUMOS PALESTRANTES ................................................................................................15
Papel relevante do Departamento de Genética da ESALQ na história da Genética de
Microrganismos brasileira. Edmar Chartone de Souza,
Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG) ............................................................. 16
O desafio da formação de recursos humanos em biotecnologia na Amazonia.
José Odair Pereira. Universidade Federal do Amazonas – UFAM, Manaus, Brasil ......... 17
How nutritional status signalling coordinates metabolism and lignocellulolytic enzyme
secretion in aspergillus nidulans. Gustavo H. Goldman, Faculdade de Ciências
Farmacêuticas de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, Laboratório Nacional de
Ciência e tecnologia do Bioetanol, Centro Nacional de energia e Materiais .................... 18
Recursos genéticos e melhoramento de microrganismos: aplicações em agroenergia e
biorrefinarias. Léia Cecilia de Lima Fávaro, Embrapa Agroenergia ................................. 19
Potencial biotecnológico e diversidade de bactérias de profundidade do Atlântico Sul.
Andréa Lima, Universidade do Vale do Itajaí, Santa Catarina, Brasil ............................. 20
Microbioma: conceito, inovações e importância para a produção vegetal.
Fernando Dini Andreote, Departamento de Ciência do Solo, ESALQ-USP ..................... 21
Genômica e Metagenômica viral: da descoberta de novos vírus à caracterização
funcional de genes virais. Fernando L. Melo, Departamento de Biologia Celular,
Instituto de Biologia, Universidade de Brasilia, Campus Universitário Darcy Ribeiro,
Brasília, Brasil ................................................................................................................. 22
Cross-kingdom similarities in microbiome functions. Rodrigo Mendes, EMBRAPA
Agroenergia, Jaguariúna, São Paulo, Brasil .................................................................... 23
As vias de biossíntese e assimilação de aminoácidos como alvos de novos
antifúngicos. Amanda Teixeira de Melo; Kevin Martho; Crislaine Lambiase Calvete;
Marcelo A. Vallim; Renata C. Pascon, Universidade Federal de São Paulo, Campus
Diadema, Laboratório de Interações Microbianas, Diadema, São Paulo. ........................ 24
Understanding endophytes-plant interaction: a genomic approach to study ecology
and functionality. Welington Luiz de Araújo, Depto de Microbiologia, ICB/USP............... 25
Cryptococcus neoformans: crescimento a 37°c e autofagia. Fabiano de Assis
Gontijo, Amanda M. Teixeira, Renata C. Pascon, Marcelo A Vallim, UNIFESP,
Campus Diadema, Depto de Ciências Biológicas ........................................................... 26
Genomics-guided discovery of traits contributing to biological control of
plant disease by pseudomonas fluorescens. Joyce E. Loper1, Virginia O. Stockwell2,
Brenda T. Shaffer1, Jennifer M. Clifford1, Ian T. Paulsen3, Benjamin J. Philmus2.
1
U.S.Department of Agriculture, Agricultura Research Service, Corvallis, OR,
USA. 2Oregon State University, Corvallis, OR, USA. 3Macquarie University,
Sydney, Australia ............................................................................................................ 27
RESUMOS PÔSTERS
................................................................................................28
Indução de resistência a alternaria alternata por trichoderma harzianum na planta
modelo lycopersicum esculentum cv. MICRO-TOM. Isabel Cristina Padula Paz1;
Marcia Eloisa da Silva1; Alexandre Martins Guimarães1; Aida Terezinha Santos
Matsumura1; Gustavo Borges Meirelles2; Marcelo Gravina de Moraes2. 1Departamento
Técnico, ICB BIOAGRITEC LTDA, 2Laboratório de Fitopatologia Molecular,
UFRGS/RS, Laboratório de Fitopatologia Molecular, UFRGS/RS ................................... 29
Orchid exudates recognition: the first step in Burkholderia seminalis – orchid
interaction. Manuella Nóbrega Dourado1, Emy Tiyo Mano1, Juliana M. Sciani2,
Welington L. Araújo. 1Universidade de São Paulo, 2Butantã. .......................................... 30
Sequenciamento e caracterização do gene mitocondrial citocromo B e análise da
sua variabilidade na região hotspot para resistência a fungicidas do tipo qoi em
patógenos do cultivo de uva niágara rosada. Nathália de Moraes; Lilian Amorim;
Claudia Barros Monteiro-Vitorello. Escola Superior de Agricultura “Luiz de Queiroz” –
ESALQ/USP ................................................................................................................... 31
Detecção e quantificação do fungo patogênico Sporisorium scitamineum em
cana-de-açúcar pela técnica de pcr quantitativo em tempo real. Patricia Dayane
Carvalho Schaker, Leila Priscila Peters, Claudia Barros Monteiro-Vitorello.
Escola Superior de Agricultura "Luiz de Queiroz", USP .................................................. 32
Bactérias endofíticas isoladas de soja cultivada em campo produzindo quitinase.
Daniele Cristina Ferreira1, Giuliano Degrassi2, Valeria Carpentieri-Pipolo3, Karla
Bianca de Almeida Lopes1. 1Programa de Pós-Graduação Universidade Estadual de
Londrina, 2ICGEB- International Centre for Genetic Engeneering and Biotechnology,
Trieste Italy- Industrial Biotechnology, 3Embrapa Trigo, Passo Fundo RS/ Programa de
Pós-Graduação Universidade Estadual de Londrina. ..................................................... 33
Polymorphic variant of a candidate effector potentially involved in the specific
interaction between Sporisorium scitamineum and sugarcane. Natália Oliveira de
Araujo1; Juliana Benevenuto1; Natalia Mielnichuk2; Claudia Barros Monteiro-Vitorello1.
1
Escola Superior de Agricultura "Luiz de Queiroz" (ESALQ/USP), 2Consejo
Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET/Argentina) ..................... 34
Avaliação quantitativa da produção de ácido-indol-acético (aia) por bactérias
associadas ao guaranazeiro (Paullinia cupana). Renata Hortêncio Ockner;
Bruna Durante Batista; João lúcio Azevedo; Maria Carolina Quecine. Escola
Superior de Agricultura "Luiz de Queiroz" - Universidade de São Paulo ......................... 35
Identificação de genes alvo no processo de colonização de Xanthomonas fuscans
subsp. Aurantifolii tipo C em citros – uma abordagem para o estudo do cancro cítrico.
Helen Alves Penha; Jéssica Alcimari Ferreira Mello; Iashilei Cassieli Pasquini;
Estevão Henrique Cangussu de Souza; Alessandro de Mello Varani; Jesus
Aparecido Ferro. Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho” Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias (UNESP/FCAV) Campus de Jaboticabal .................................................................................................. 36
Enzymatic hydrolysis of agro-industrial wastes: a screening of
holocellulose-degrading enzymes from Aspergillus oryzae. Antonielle Vieira
Monclaro; Guilherme Lima Recalde; Edivaldo Ximenes Ferreira Filho. Laboratory of
Enzimology, University of Brasília, Campus Universitário Darcy Ribeiro ......................... 37
Contaminant bacterial density in fed-batch and continuous fermentation process for
ethanol production. Maria Letícia Bonatelli; Andressa Peres Bini; Maria Carolina
Quecine; Carlos Alberto Labate. Department of Genetics, Luiz de Queiroz College of
Agriculture – University of São Paulo, Piracicaba, Brazil ................................................ 38
Produção, otimização por delineamento composto central rotacional e caracterização
de B-glucosidases de Malbranchea pulchella. Lummy Maria Oliveira Monteiro;
Ana Claudia Vici; Juliana Conceição Infante de Marco; Marita Gimenez Pereira;
João Atílio Jorge; Maria de Lourdes Teixeira de Moraes Polizeli. Universidade de
São Paulo (FMRP) .......................................................................................................... 39
Estudo do efeito da metilação do dna na atividade enzimática do fungo
Humicola grisea var. Thermoidea cultivado em diferentes substratos. João Heitor
Colombelli Manfrão Netto; Márcio José Poças Fonseca.
Universidade de Brasília- UnB ........................................................................................ 40
Construction of recombinant Pseudomonas sp. capable to transform xylose to
biodegradable polymer. Juan Camilo Roncallo Sarmiento, Linda Priscila Guamán
Bautista, Luiziana Ferreira da Silva. ICB-USP, Instituto de Ciências Biomédicas,
Universidade de São Paulo............................................................................................. 41
Avaliação do potencial biotecnológico de linhagens halotolerantes isoladas de
duas regiões salinas da caatinga. Maria Paula Parada Pinilla1, Maria Alejandra
Ferreira Torres1, Juan Camilo Roncallo Sarmiento1, Suikinai Nobre Santos2, Itamar
Soares de Melo2, Gabriel Padilla Maldonado1. 1Laboratório de Bioprodutos,
Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo. 2Laboratório de
Microbiologia Ambiental, Embrapa Meio Ambiente ......................................................... 42
Avaliação do papel de ATG8 e AMS1 sobre os fatores de virulência e autofagia do
patógeno cryptococcus neoformans. Ricardo F. Lima, Renata C. Pascon,
Marcelo A. Vallim. Universidade Federal de São Paulo – UNIFESP ............................... 43
Análise das permeases de metionina em Cryptococcus neoformans e sua
aplicabilidade como alvo de drogas antifúngicas. Kevin Felipe Cruz Martho,
Marcelo Afonso Vallim, Renata Castiglioni Pascon. Universidade Federal de
São Paulo, UNIFESP - campus Diadema, Diadema-SP, Brasil ...................................... 44
Permeases transportadoras de aminoácidos de Cryptococcus neoformans:
deleção gênica, análise fenotípica e virulência. Amanda Teixeira de Melo,
Renata C Pascon. Universidade Federal de São Paulo, Campus Diadema,
Laboratório de Interações Microbianas, Diadema, São Paulo ......................................... 45
Caracterização das enzimas antranilato sintase componente ii e triptofano
sintase de Cryptococcus neoformans. Crislaine Lambiase Calvete1, Martin
Wurtele2, Renata Castiglioni Pascon3. 1Universidade de São Paulo, 2Universidade
Federal de São Paulo – Campus São José dos Campos, 3Universidade
Federal de São Paulo – Campus Diadema. .................................................................... 46
Elementos genéticos móveis no microbioma de manguezais. Filipe Rafael
Salvetti Nunes; Simone Raposo Cotta; Fernando Dini Andreote. Escola Superior de
Agricultura "Luiz de Queiroz", USP - Departamento de Ciência do Solo ........................ 47
Caracterização genética da fixação biológica de nitrogênio em Nostoc sp.
CENA67. Bruno Costa Evangelista Souza1; Danillo Oliveira Alvarenga2; Alessandro
de Mello Varani3; Marli Fátima Fiore2. 1Escola Superior de Agricultura “Luiz de
Queiroz”- USP, 2Centro de Energia Nuclear na Agricultura, CENA, USP,
3
Universidade Estadual Paulista Julio de Mesquita Filho, UNESP Jaboticabal .............. 48
Construção de mutante de Methylobacterium mesophilicum SR1.6/6 defectivo na
biossíntese de hopanóides. Daiene Souza Santos; Aline Aparecida Camargo das
Neves; Manuella Nóbrega Dourado; Jennifer Katherine Salguero-Londoño;
Welington Luiz de Araújo. Universidade de São Paulo, USP, Dpto. de
Microbiologia, Instituto de Ciências Biomédicas - ICBII................................................... 49
Reconstituição e análise de um genoma da ordem Bacillales, proveniente de
uma biblioteca metagenômica originada de um consórcio bacteriano degradador
do bagaço de cana-de-açúcar. Joana Gabriela Desiderato; Milena Tavares de
Lima; Camila Cesário Fernandes; Lucia Maria Carareto Alves; Alessandro de Mello
Varani. Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho", Departamento de
Tecnologia, Campus Jaboticabal, São Paulo, Brasil ....................................................... 50
Caracterização de uma pectina liase produzida pelo fungo Neosartorya glabra
utilizando casca de maracujá como fonte de carbono. Vanessa Elisa Pinheiro; Carla
Cristina Villela Desagiacomo; João Atílio Jorge; Maria de Lourdes Teixeira de Moraes
Polizeli. Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, FMRP-USP ..................................... 51
Imobilização de uma glucoamilase de Aspergillus brasiliensis em deae sepharose
tratada com polietilenoglicol 4000. Paula Zaghetto de Almeida1, Marita Pereira
Gimenez2, Paulo Ricardo Heinen1, Josana Maria Messias1, João Atílio Jorge1,
Maria de Lourdes Teixeira de Moraes Polizeli1. 1Faculdade de Medicina de
Ribeirão Preto, FMRP-USP, 2Faculdade de Filosofia Ciências e Letras de
Ribeirão Preto, FFCLRP-USP. ....................................................................................... 52
Novel biosynthetic gene cluster of the protease inhibitor spumigin from
Sphaerospermopsis torques-reginae itep-024. Stella Thomaz de Lima1; Danillo
Oliveira Alvarenga1; Augusto Etchegaray Junior2; Alessandro de Mello Varani3;
Marli Fátima Fiore1. 1CENA/USP – Centro de Energia Nuclear na Agricultura Universidade de São Paulo, 2,3Universidade Estadual Paulista "Júlio de
Mesquita Filho", Campus Jaboticabal, São Paulo, Brasil ................................................ 53
Avaliação do desenvolvimento de feijão (Phaseolus vulgaris) a partir de sementes
tratadas com um complexo de micro-organismos. Matheus Silva Salomão1,
Jorge Luiz Piedade Gabriel2, Salvatore De Angelis2, Mateus Mondin1.
1
CYNGELA-Cytogenomics and Epigenetics Laboratory, Departamento de
Genética, Escola Superior de Agricultura "Luiz de Queiroz", Universidade de
São Paulo, 2Nell Agroquímica. ........................................................................................ 54
Otimização do meio de cultivo através de delineamentos experimentais para a
produção de mananase pelo fungo Malbranchea pulchella. Juliana da C. Infante
de Marco1, Ana Claudia Vici1, Lummy Maria O. Monteiro1, Edivaldo X. F. Filho2,
João Atílio Jorge3, Maria de Lourdes T. M. Polizeli3. 1Faculdade de Medicina de
Ribeirão Preto - FMRP/USP, 2Departamento de Biologia Celular - UnB, 3Faculdade
de Filosofia Ciências e Letras de Ribeirão Preto - FFCLRP/USP. .................................. 55
32º ENCONTRO SOBRE TEMAS DE GENÉTICA E MELHORAMENTO / II Workshop de Biossegurança e Responsabilidade na Pesquisa
"Genética de Microrganismos: Passado e Perspectivas"
DEPARTAMENTO DE GENÉTICA – ESALQ/USP
SETORES DE PESQUISA E CORPO DOCENTE
LABORATÓRIO DE BIOINFORMÁTICA APLICADA À BIOENERGIA
Prof. Dr. Gabriel Rodrigues Alves Margarido
LABORATÓRIO DE BIOLOGIA MOLECULAR DE PLANTAS
Prof. Dr. Márcio de Castro Silva Filho
LABORATÓRIO DE CITOGENÉTICA
Prof. Dr. Gerhard Bandel
LABORATÓRIO DE CITOGENÉTICA MOLECULAR DE PLANTAS
Prof. Dr. Mateus Mondin
Docente com Atividades em Conjunto:
Profa. Dra. Margarida Lopes Rodrigues de Aguiar-Perecin
LABORATÓRIO DE DIVERSIDADE GENÉTICA E MELHORAMENTO
Prof. Dr. José Baldin Pinheiro
LABORATÓRIO DE ECOGENÉTICA
Profa. Dra. Silvia Maria Guerra Molina
LABORATÓRIO DE EVOLUÇÃO
Prof. Dr. Giancarlo Conde Xavier de Oliveira
LABORATÓRIO DE GENÉTICA APLICADA À ESPÉCIES AUTÓGAMAS (SOJA)
Prof. Dr. Natal Antonio Vello
LABORATÓRIO DE GENÉTICA BIOQUÍMICA DE PLANTAS
Prof. Dr. Ricardo Antunes de Azevedo
LABORATÓRIO DE GENÉTICA ECOLÓGICA DE PLANTAS
Profa.Dra. Elisabeth Ann Veasey
LABORATÓRIO DE GENÉTICA ESTATÍSTICA
Prof. Dr. Antonio Augusto Franco Garcia
Docente com atividades em conjunto:
Prof. Dr. Roland Vencovsky
LABORATÓRIO DE GENÉTICA FISIOLÓGICA
Prof. Dr. Carlos Alberto Labate
LABORATÓRIO DE GENÉTICA DE MICRORGANISMOS “PROF. JOÃO LÚCIO DE AZEVEDO”
GRUPO DE GENÉTICA MOLECULAR
Profa. Dra. Maria Carolina Quecine
Docente com atividades em conjunto:
Prof. Dr. João Lúcio de Azevedo
GRUPO DE GENÔMICA
Profa. Dra. Cláudia Barros Monteiro Vitorello
LABORATÓRIO DE GENÉTICA MOLECULAR DE PLANTAS CULTIVADAS
Profa. Dra. Maria Lúcia Carneiro Vieira
LABORATÓRIO DE GENÉTICA QUANTITATIVA E MELHORAMENTO DE SOJA
Prof. Dr. Isaias Olívio Geraldi
LABORATÓRIO DE MELHORAMENTO DE AVES
Prof. Dr. Vicente José Maria Savino
Prof. Dr. Antonio Augusto Domingos Coelho
LABORATÓRIO de MELHORAMENTO DE MILHO
Prof. Dr. Cláudio Lopes de Souza Junior
LABORATÓRIO DE MELHORAMENTO DE PLANTAS ALÓGAMAS
Prof. Dr. Roberto Fritsche Neto
Docente com atividades em conjunto:
Prof. Dr. José Branco de Miranda Filho
Departamento de Genética, ESALQ/USP - http://www.genetica.esalq.usp.br/32temas/
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32º ENCONTRO SOBRE TEMAS DE GENÉTICA E MELHORAMENTO / II Workshop de Biossegurança e Responsabilidade na Pesquisa
"Genética de Microrganismos: Passado e Perspectivas"
DEPARTAMENTO DE GENÉTICA – ESALQ/USP
CORPO DOCENTE – 1935-2015
GRANER, EDGARD DO AMARAL – EAG ................................................................................1935-1945
BRIEGER, FRIEDRICH GUSTAV – FGB .................................................................................1936-1967
GURGEL, JOSÉ THEÓPHILO DO AMARAL – JTAG...............................................................1938-1971
CONAGIN. ARMANDO – AC ....................................................................................................1944-1950
ADDISON, GEORGE O’NEIL –GOA ........................................................................................1940-1961
DIAS, MARCILIO – MD .............................................................................................................1944-1974
KERR, WARWICK ESTEVAM – WEK ......................................................................................1946-1959
KOBAL, NELSON – NK ............................................................................................................1945-1951
SOUBIHE SOBRINHO, JOSÉ – JSS ........................................................................................1951-1975
MITIDIERI, JOSÉ – JM .............................................................................................................1950-1955
MEZZACAPPA, MÁRIO PONT – MPM .....................................................................................1947-1970
PATERNIANI, ERNESTO – EP ................................................................................................1952-1983
BLUMENSCHEIN, ALMIRO – AB .............................................................................................1956-1985
BICALHO, HAMILTON DIAS – HDB ........................................................................................1958-1988
ALLEONI, MARIA RUTH BUZZATO – MRBA...........................................................................1959-1986
IKUTA, HIROSHI –HI ................................................................................................................1959-1991
VENCOVSKY, ROLAND – RV ..................................................................................................1959-1995
AZEVEDO, JOÃO LÚCIO – JLA ...............................................................................................1960-1995
FLECHTMANN, CARLOS HOLGER WENZEL - CHWF ..........................................................1960-1961
CESNIK, ROBERTO – RC ........................................................................................................1961-1964
TOSELLO, GERALDO ANTONIO – GAT .................................................................................1961-1994
ANDO, AKIHIKO – AA ..............................................................................................................1962-2002
AGUIAR-PERECIN, MARGARIDA LOPES RODRIGUES (MLRAP) ........................................1962-2008
ZINSLY, JOÃO RUBENS – JRZ ...............................................................................................1963-2003
KLAR, EVALDO ANTONIO – EAK............................................................................................1962-1964
SILVA, MARIA NEYSA – MNS .................................................................................................1963-1965
REGITANO, ARLETE – AR ......................................................................................................1965-1968
CUSTÓDIO, RANDOLFO WILLIAM SILVESTRE - RWSC ......................................................1964-1999
MARTINS, PAULO SODERO – PSM .......................................................................................1965-1996
COSTA, CYRO PAULINO – CPC .............................................................................................1965-1996
BANDEL, GERHARD – GB ......................................................................................................1968-2013
MIRANDA FILHO, JOSÉ BRANCO – JBMF .............................................................................1971-2010
TAVARES, FLÁVIO CÉSAR ALMEIDA – FCAT .......................................................................1972-2014
VELLO, NATAL ANTONIO – NAV ............................................................................................1974PIZZIRANI-KLEINER, ALINE APARECIDA – AAPK.................................................................1979-2014
MACHADO, JOAQUIM APARECIDO – JAM ............................................................................1983-1985
GERALDI, ISAÍAS OLÍVIO – IOG .............................................................................................1985VIEIRA, MARIA LÚCIA CARNEIRO – MLCV............................................................................1986SOUZA JUNIOR, CLÁUDIO LOPES – CLSJ ............................................................................1986SAVINO, VICENTE JOSÉ MARIA – VJMS ...............................................................................1986COELHO, ANTONIO AUGUSTO DOMINGOS – AADC ...........................................................1986REGITANO NETO, AMADEU – ARN .......................................................................................1986-1987
LABATE, CARLOS ALBERTO – CAL .......................................................................................1987OLIVEIRA, GIANCARLO CONDE XAVIER – GCXO ................................................................1989AZEVEDO, RICARDO ANTUNES – RAA .................................................................................1993SILVA-FILHO, MÁRCIO DE CASTRO – MCSF ........................................................................1994VEASEY, ELISABETH ANN – EAV ..........................................................................................1999MOLINA, SILVIA MARIA GUERRA – SMGM ...........................................................................1999GARCIA, ANTONIO AUGUSTO FRANCO – AAFG ................................................................. 2002PINHEIRO, JOSÉ BALDIN – JBP ............................................................................................. 2003MONDIN, MATEUS – MM ........................................................................................................2009VITORELLO, CLÁUDIA BARROS MONTEIRO – CBMV .........................................................2009FRITSCHE NETO, ROBERTO – RFN ......................................................................................2013MARGARIDO, GABRIEL RODRIGUES ALVES – GRAM ........................................................2013QUECINE, MARIA CAROLINA – MCQ .....................................................................................2014-
Departamento de Genética, ESALQ/USP - http://www.genetica.esalq.usp.br/32temas/
11
32º ENCONTRO SOBRE TEMAS DE GENÉTICA E MELHORAMENTO / II Workshop de Biossegurança e Responsabilidade na Pesquisa
"Genética de Microrganismos: Passado e Perspectivas"
12
APRESENTAÇÃO
__________________________
O Encontro sobre Temas de Genética e Melhoramento realizado anualmente no
Departamento de Genética da ESALQ/USP em Piracicaba encontra-se na sua trigésima
segunda versão. É um Encontro bastante tradicional em nossa Unidade, atraindo
pesquisadores, estudantes e profissionais de todo o Brasil. O objetivo deste evento é
permitir uma discussão rápida e profunda de temas sempre muito atuais em Genética. Nos
últimos anos foram discutidos Técnicas e Vantagens da Seleção Genômica, Evolução e
Plasticidade Genômica e Bioinformática. O evento é organizado pelos professores do
Departamento de Genética juntamente a alunos do programa de Pós-Graduação Genética e
Melhoramento de Plantas, que este ano completa 51 anos. O Departamento de Genética da
ESALQ/USP iniciou suas atividades em 1936 com a vinda do Prof. Friedrich Gustav Brieger,
um dos fundadores da Genética no Brasil. Atualmente o Departamento atua no ensino de
graduação e pós-graduação, contribuindo para a formação de mestres e doutores com
conceito máximo na Avaliação CAPES ao longo de sua atuação. Este ano o tema “Genética
de Microrganismos: Passado e Perspectivas” será abordado e juntamente ao evento
ocorrerá a homenagem à Profa. Dra. Aline A. Pizzirani-Kleiner, por sua participação na
História e Desenvolvimento da Genética de Microrganismos no Brasil. A Profa. Aline iniciou
suas atividades como docente no Departamento de Genética da ESALQ/USP em 1979. Foi
responsável pela orientação de cerca de uma centena de alunos de iniciação científica,
mestrado e doutorado até seu falecimento em 2014. Participou de vários programas de pósgraduação no Brasil incluindo, entre outros, os de Genética e Melhoramento de Plantas e
Microbiologia Agrícola (ESALQ/USP), Biologia (UNESP, Rio Claro, SP) Biotecnologia (interunidades, USP) e Biotecnologia, Manaus, AM (UFAM). Foi também responsável pela
organização de muitas Reuniões Anuais de Genética de Microrganismos (REGEM)
realizadas em diferentes cidades brasileiras contribuindo para o estabelecimento de novos
núcleos de pesquisa em Genética de Microrganismos em todo o Brasil. Além da
homenagem, durante o evento serão abordados temas relacionados a Genética de
Microrganismos, com enfoque na manipulação genética dos mesmos visando otimização de
processos fermentativos e outros, as mais novas ferramentas utilizadas nos estudos de
diversidade microbiana dos mais distintos ambientes, estudos de viroma, sinalização
molecular, genômica, entre outros temas bem atuais.
APROVEITEM O EVENTO
________________________________________________________
Departamento de Genética, ESALQ/USP - http://www.genetica.esalq.usp.br/32temas/
32º ENCONTRO SOBRE TEMAS DE GENÉTICA E MELHORAMENTO / II Workshop de Biossegurança e Responsabilidade na Pesquisa
"Genética de Microrganismos: Passado e Perspectivas"
13
32º ENCONTRO SOBRE TEMAS DE GENÉTICA E
MELHORAMENTO
TEMA: "Genética de Microrganismos: Passado e Perspectivas"
II Workshop de Biossegurança e Responsabilidade na Pesquisa
 4a FEIRA – 14/10/2015 - TARDE
Workshop da Sociedade Americana de Microbiologia – ASM
“Biossegurança cultura da responsabilidade”
Palestrantes:
• Mariana Silva Lopes – ESALQ/USP
• Nathália Moraes – ESALQ/USP
 5a FEIRA – 15/10/2015 - MANHÃ
• 08:00 – 08:30 - INSCRIÇÕES
• 08:30 – 09:00 - SESSÃO DE ABERTURA
a
• 1 SESSÃO:
Presidente da Sessão: João Lúcio de Azevedo - ESALQ/USP
o
o
o
o
09:00 – 09:40 - “Papel Relevante do Departamento de Genética da ESALQ
na História da Genética de Microrganismos Brasileira”. Prof. Dr. Edmar
Chartone de Souza – Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)..
09:40 – 10:10 - Intervalo
10:10 – 10:50 - “O Desafio da Formação de Recursos Humanos em
Biotecnologia na Amazônia” – Prof. Dr. José Odair Pereira – Universidade
Federal do Amazonas (UFAM).
15:10 – 11:30 - “How nutritional status signalling coordinates
metabolism and lignocellulolytic enzyme secretion in Aspergillus
nidulans” – Prof. Dr. Gustavo Goldman – Universidade de São Paulo,
Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto, Departamento de
Ciências Farmacêuticas.
 5a FEIRA – 15/10/2015 - TARDE
a
• 2 SESSÃO:
Presidente da Sessão: Profa Dra Maria Carolina Quecine - ESALQ/USP
o
o
o
o
o
14:00 – 14:40 - “Recursos genéticos e melhoramento de
microrganismos: aplicações em agroenergia e biorrefinarias” – Dra Leia
Cecilia Fávaro - EMBRAPA AGROENERGIA.
14:40 – 15:20 - "Potencial biotecnológico e diversidade de bactérias de
profundidade do Atlântico Sul" - Prof. Dr. André Lima – Universidade do
Vale do Itajaí (UNIVALI).
15:20 – 15:40 - Intervalo
15:40 – 16:20 - ““Microbioma: conceito, inovações e importância para a
produção vegetal” – Departamento de Ciências dos Solos - ESALQ/USP.
16:20 – 17:00 - Genômica e metagenômica viral: da descoberta de novos
vírus à caracterização funcional de genes virais – Prof. Dr. Fernando
Lucas Melo – Universidade de Brasilia (UnB).
Departamento de Genética, ESALQ/USP - http://www.genetica.esalq.usp.br/32temas/
32º ENCONTRO SOBRE TEMAS DE GENÉTICA E MELHORAMENTO / II Workshop de Biossegurança e Responsabilidade na Pesquisa
"Genética de Microrganismos: Passado e Perspectivas"
o
14
18:00 – 19:00 - Seção de pôster
 6a FEIRA – 16/10/2015 - MANHÃ
a
• 3 SESSÃO:
Presidente da Sessão: Profa Dra Claudia de Barros Monteiro Vitorello - ESALQ/USP
o
o
o
o
o
08:20 – 09:00 - Cross-kingdom similarities in microbiome functions - Dr.
Rodrigo Mendes – EMBRAPA MEIO AMBIENTE.
09:00 – 09:40 - As vias de biossíntese e assimilação de aminoácidos
como alvo de novos antifúngicos. - Profa Dra Renata Castiglioni Pascon Universidade Federal de São Paulo - Campus Diadema.
09:40 – 10:10 - Intervalo
10:10 – 10:50 - UNDERSTANDING ENDOPHYTES-PLANT INTERACTION: A
GENOMIC APPROACH TO STUDY ECOLOGY AND FUNCTIONALITY - Prof. Dr.
Welington Luiz de Araújo - Universidade de São Paulo, Instituto de Ciências
Biomédicas (ICB/USP).
10:50 – 11:30 - “Cryptococcus neoformans: crescimento a 37ºC e
autofagia” – Prof. Dr. Marcelo Valim - Universidade Federal de São Paulo Campus Diadema.
 6a FEIRA – 16/10/2015 - TARDE
a
• 4 SESSÃO:
Presidente da Sessão:
Profa Dra Silvia Maria Molina Guerra, ESALQ/USP
o
o
o
o
14:20 – 15:00 - “Genomics-guided discovery of traits contributing to
biological control of plant disease by Pseudomonas fluorescens” - Dra.
Joyce E. Loper - U.S.Department of Agriculture, Agricultural Research
Service, USA.
15:00 – 15:30 - Intervalo
15:30 – 16:30 - “Homenagem à Profa. Dra. Aline Aparecida PizziraniKleiner”**
a
a
o Prof Dr Ana Clara Guerrini Shenberg - Universidade de São Paulo,
Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/USP)
a
a
o Prof Dr Eleonora Carmona - Universidade Estadual Paulista Júlio de
Mesquita Filho (UNESP-Campus Rio Claro)
a
a
o Prof Dr Claudia de Barros Monteiro Vitorello - ESALQ/USP
17:00 - Encerramento
Departamento de Genética, ESALQ/USP - http://www.genetica.esalq.usp.br/32temas/
32º ENCONTRO SOBRE TEMAS DE GENÉTICA E MELHORAMENTO / II Workshop de Biossegurança e Responsabilidade na Pesquisa
"Genética de Microrganismos: Passado e Perspectivas"
RESUMOS PALESTRANTES
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15
32º ENCONTRO SOBRE TEMAS DE GENÉTICA E MELHORAMENTO / II Workshop de Biossegurança e Responsabilidade na Pesquisa
"Genética de Microrganismos: Passado e Perspectivas"
16
PAPEL RELEVANTE DO DEPARTAMENTO DE GENÉTICA DA
ESALQ NA HISTÓRIA DA GENÉTICA DE
MICRORGANISMOS BRASILEIRA
Edmar Chartone de Souza - UFMG
Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)
Inicialmente, deve-se dar ênfase à beleza do campus da ESALQ, em Piracicaba. Esta é a
32ª edição deste “Encontro”. Estive presente, como palestrante, em vários deles. É
marcante o papel pioneiro do Departamento de Genética da ESALQ na formação de pessoal
e na criação de Departamentos de Genética de diversas universidades brasileiras, com
ênfase em Genética de Microrganismos. As reuniões Anuais de Genética de
Microrganismos (RAGM), criadas pelo professor João Lúcio, tiveram sua origem em 1973,
1974 e 1975, no próprio Laboratório de Genética de Microrganismos da ESALQ. O Curso de
Introdução à Biotecnologia, pioneiro na introdução de técnicas moleculares e
biotecnológicas, realizado em diversas Universidades Brasileiras, tem sido essencial para o
estabelecimento da Biotecnologia no Brasil. Em Minas Gerais, mineração e siderurgia são
consideradas como verdadeira vocação. O nome “Minas Gerais” foi usado pela primeira vez
por A.R. Arzão, em 1693, associado ao ouro e diamante. Atualmente, o minério de ferro e o
aço são considerados como essenciais para o desenvolvimento mundial. O grupo do
Laboratório de Genética de Microrganismos da UFMG, também criado pelo prof. João Lúcio,
usando a amplificação por PCR de genes de rRNA 16S de bactérias de rejeitos siderúrgicos
cultiváveis (1%) e não cultiváveis (99%), observou após análise filogenética, que diversas
bactérias não se afiliaram a nenhum taxo conhecido, predominando, entretanto, as
Protobactérias. Os dados contribuíram para o conhecimento das comunidades bacterianas
dos rejeitos de uma indústria de aço, abrindo perspectivas para aplicações biotecnológicas.
Departamento de Genética, ESALQ/USP - http://www.genetica.esalq.usp.br/32temas/
32º ENCONTRO SOBRE TEMAS DE GENÉTICA E MELHORAMENTO / II Workshop de Biossegurança e Responsabilidade na Pesquisa
"Genética de Microrganismos: Passado e Perspectivas"
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O DESAFIO DA FORMAÇÃO DE RECURSOS HUMANOS EM
BIOTECNOLOGIA NA AMAZONIA
José Odair Pereira
Universidade Federal do Amazonas – UFAM, Manaus, Brasil
Em território brasileiro, o bioma Amazônia abriga aproximadamente um terço da
biodiversidade mundial, sem inserir nesse cômputo os microrganismos. Essa
megabiodiversidade, e o conhecimento tradicional a ela associado representam um imenso
potencial biotecnológico que desperta interesses de outros países. No Brasil, e em particular
no Amazonas, quase todas as pesquisas são realizadas nas Universidades e centros de
pesquisa e não em empresas de tecnologia. Biotecnologia é a utilização dos seres vivos ou
parte deles para o desenvolvimento de produtos ou processos de interesse econômico ou
social. Por natureza a biotecnologia é multidisciplinar e abrange conhecimentos gerados em
uma série de áreas. No amazonas a genética, foi o berço das atividades de formação de
recursos humanos em Biotecnologia. No estado existem três programas de pós-graduação
com abordagem biotecnológica. A UEA – Universidade Estadual oferece curso de mestrado
em biotecnologia e a Universidade Federal, UFAM oferece cursos de mestrado e doutorado
na área. O programa da UFAM consolidou-se por meio de parcerias com instituições de
pesquisa regionais, funciona como uma rede de pesquisa no estado e conta ainda com a
colaboração de pesquisadores, da Universidade de Brasília, da Universidade Federal do Rio
de Janeiro, da Universidade de Ribeirão Preto, da Universidade de São Paulo, em São
Paulo e em Piracicaba, com os quais estabeleceu fortes laços de cooperação principalmente
com pesquisadores do setor de Genética de Microrganismos. Um terceiro programa de
formação de recursos humanos em biotecnologia estabeleceu-se como proposta de
integração regional (inter-estadual), multi-institucional e interdisciplinar. Trata-se do PPGBIONORTE, um programa de doutorado dentro da Rede BIONORTE. No entanto, a região
ainda se caracteriza pelo pequeno numero de doutores e, grande parte das espécies
existentes na Amazônia ainda não foi estudada. Um panorama da performance desses
programas, seus projetos e resultados alcançados serão apresentados no evento, a
exemplo dos projetos em cooperação com a ESALQ no estudo do guaranazeiro, entre
outros. Finalmente será discutido o papel dos egressos dos referidos programas no mercado
de trabalho na Amazônia.
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32º ENCONTRO SOBRE TEMAS DE GENÉTICA E MELHORAMENTO / II Workshop de Biossegurança e Responsabilidade na Pesquisa
"Genética de Microrganismos: Passado e Perspectivas"
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HOW NUTRITIONAL STATUS SIGNALLING COORDINATES
METABOLISM AND LIGNOCELLULOLYTIC ENZYME SECRETION IN
ASPERGILLUS NIDULANS
Gustavo H. Goldman
Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, Laboratório
Nacional de Ciência e tecnologia do Bioetanol, Centro Nacional de energia e Materiais
The utilisation of lignocellulosic plant biomass as an abundant, renewable feedstock for
green chemistries and biofuel production is inhibited by its recalcitrant nature. In the
environment, lignocellulolytic fungi are naturally capable of breaking down plant biomass into
utilisable saccharides. Nonetheless, within the industrial context, inefficiencies in the
production of lignocellulolytic enzymes impede the implementation of green technologies.
One of the primary causes of such inefficiencies is the tight transcriptional control of
lignocellulolytic enzymes via carbon catabolite repression. Fungi coordinate metabolism,
protein biosynthesis and secretion with cellular energetic status through the detection of
intra- and extra-cellular nutritional signals. An enhanced understanding of the signals and
signalling pathways involved in regulating the transcription, translation and secretion of
lignocellulolytic enzymes is therefore of great biotechnological interest. We are going to show
some preliminary data about how nutrient sensing pathways regulate carbon catabolite
repression, metabolism and the utilisation of alternative carbon sources in the filamentous
fungus Aspergillus nidulans.
Financial support: FAPESP and CNPq, Brazil
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"Genética de Microrganismos: Passado e Perspectivas"
19
RECURSOS GENÉTICOS E MELHORAMENTO DE
MICRORGANISMOS: APLICAÇÕES EM AGROENERGIA E
BIORREFINARIAS
Léia Cecilia de Lima Fávaro
Embrapa Agroenergia, PqEB Avenida W3 Norte (final) s/n, Asa Norte, Brasília, Distrito Federal, Brasil
A produção de energia derivada de biomassa, tal como os biocombustíveis, é uma
alternativa para reduzir o uso de combustível fóssil e para diversificar e garantir o
suprimento de energia no futuro. A produção de etanol a partir da celulose e hemicelulose
presente na biomassa depende do desenvolvimento de tecnologias para exploração
eficiente dos componentes da parede celular vegetal, de modo a garantir a viabilidade
econômica deste processo. Do mesmo modo, rotas mais sustentáveis e economicamente
atrativas para a produção de biodiesel, bioquerosene, biobutanol e compostos químicos a
partir de biomassa têm sido investigadas. Entre as múltiplas tecnologias existentes para
conversão de açúcares, de óleos e de resíduos agroindustriais em biocombustíveis e
químicos renováveis, processos que fazem uso de microrganismos ou de seus produtos tem
papel de destaque. Por exemplo, como fornecedores de insumos (enzimas, genes, rotas
metabólicas) ou como fábricas celulares para produção de moléculas que podem ser usadas
como biocombustíveis e químicos. De fato, rotas que fazem uso de microrganismos devem
ser componentes essenciais de biorrefinarias que se configuram no Brasil e no mundo.
Neste contexto, esta palestra tem por objetivo fornecer uma visão geral sobre a aplicação de
microrganismos e seus insumos em diferentes cadeias de produção de agroenergia. Ênfase
será dada a importância da biodiversidade microbiana para programas de melhoramento
genético de linhagens visando aplicações em agroenergia e biorrefinarias e algumas
contribuições da Embrapa Agroenergia serão apresentadas.
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POTENCIAL BIOTECNOLÓGICO E DIVERSIDADE DE
BACTÉRIAS DE PROFUNDIDADE DO ATLÂNTICO SUL
Andréa Lima
Universidade do Vale do Itajaí, Santa Catarina, Brasil
O ambiente marinho de profundidade caracteriza-se por apresentar condições extremas de
pressão alta, baixa temperatura e carência de nutrientes. Apesar disto, podem ser
encontrados micro-organismos adaptados a estas condições, os quais têm se tornado um
excelente reservatório para a prospecção de novas moléculas com aplicação biotecnológica.
Entretanto, ainda são poucos os organismos conhecidos, devido à dificuldade ao
seu acesso. A fim de cobrir esta lacuna, o grupo de Genética Molecular Aplicada da
UNIVALI associou-se à iniciativa South Atlantic Mar-Eco e demais parceiros (USP/ESALQ,
USP/IO, UFRGS, UFSC, Jamstec) e, hoje, possui uma das maiores coleções de bactérias
marinhas de profundidade (cerca de 1.000 organismos). Estes organismos foram isolados a
partir de amostras de água, sedimento e associadas à animais marinhos (moluscos,
crustáceos, cnidários) coletadas entre 1.000 e 6.000m de profundidade. Para acessar este
material, pesquisadores do grupo integraram equipes em quatro expedições, as quais
percorreram juntas aproximadamente 15.000 milhas náuticas em três meses de navegação.
Na última expedição (2013) abordo no Navio Japonês Yokosuka, os pesquisadores
utilizaram o submersível tripulado Shinkai 6500 para a coleta das amostras a 4.200m de
profundidade. Uma vez isoladas as bactérias estão sendo identificadas por métodos
moleculares, bem como caracterizadas quanto ao seu potencial biotecnológico. Dentre
aproximadamente 200 organismos já identificados, sugere-se que alguns sejam
possivelmente novas espécies. Uma parcela destes também foi prospectada quanto a
produção de celulases, lipases e biopolímeros. Dentre os organismos mais promissores, três
foram selecionados e seus genomas sequenciados (Bacillus stratosphericus, Marinobacter
excellens e Erythrobacter citreus). Como exemplo do potencial destes organismos, a partir
dos dados genômicos da bactéria Bacillus stratosphericus, uma endoglucanase, uma lipase
e uma beta-galactosidade já foram clonadas e expressas ativamente em E. coli. Outros
genes também de relevância como xilanase, decarboxylase, dipeptidase, transglutaminase e
asparaginase foram clonadas e estão em fase de análise. A fim de ampliar o conhecimento
acerca da importância microbiana no ambiente marinho profundo, a equipe incorporou as
suas estratégias também análises metagenômicas. Neste contexto, as primeiras amostras
de sedimento e do trato digestivo de um gastrópode coletados a 4.200m estão sob análise.
Vislumbra-se que estes dados permitam acessar a estrutura microbiana no ambiente
profundo do Atlântico Sul, assim como, a clonagem de genes de relevância biotecnológica,
extremamente raros e distintos daqueles descritos para o ambiente terrestre. Por fim, para o
próximo período, o grupo objetiva avançar na caracterização do acervo quanto ao papel
ecológico e aplicação biotecnologia. Assim, contribuirá para o conhecimento da diversidade
bacteriana marinha no Atlântico Sul e o desenvolvimento de produtos e processos
biotecnológicos marinhos.
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MICROBIOMA: CONCEITO, INOVAÇÕES E
IMPORTÂNCIA PARA A PRODUÇÃO VEGETAL
Fernando Dini Andreote
Departamento de Ciência do Solo, ESALQ-USP
A microbiologia sempre foi contemplada de forma similar a realizada para animais e plantas.
Estudos recentes mostram, no entanto, que a atividade conjunta de componentes destas
comunidades é o fator selecionáveis nos mais diferentes ambientes e associados a
diferentes hospedeiros. Desta maneira, assume-se que o microbioma atua como um 'tecido
microbiano', que permeia o ambiente e responde a estímulos. Muitos pontos da
funcionalidade dos microbiomas estão ainda para serem descritos, e o manejo desta fração
onipresente nos mais diferentes ecossistemas é ainda bastante desafiador. No entanto,
sabe-se que neste ponto reside um enorme potencial para inovações científicas e
tecnológicas, o que pode levara a produção vegetal e animal a outros níveis de eficiência e
sustentabilidade. Conhecimentos importantes neste sentido se referem a ampla
contemplação da microbiologia ambiental, por exemplo, na compreensão de padrões de
biogeografia microbiana, ou na íntima troca de informação genética que ocorre na menor
fração do solo. Estes extremos, quando compreendidos em sua plenitude, nos auxiliarão a
utilizar de forma mais eficiente a microbiologia imersa em nosso planeta.
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GENÔMICA E METAGENÔMICA VIRAL: DA DESCOBERTA DE
NOVOS VÍRUS À CARACTERIZAÇÃO FUNCIONAL DE
GENES VIRAIS
Fernando L. Melo
Departamento de Biologia Celular, Instituto de Biologia, Universidade de Brasilia, Campus
Universitário Darcy Ribeiro, Brasília, Brasil
Os vírus são as entidades biológicas mais abundantes da biosfera (aproximadamente 1031
partículas), conhecidos e estudados há mais de 100 anos, no entanto, apenas 3186
espécies foram oficialmente reconhecidas pelo International Committee on Taxonomy of
Viruses (ICTV) em seu último relatório. Obviamente este número não representa a
diversidade global de espécies virais, e está enviesado para os vírus de importância médica
e/ou de grande impacto econômico. Embora existam muitos desafios técnicos no estudo dos
vírus, a descrição da biodiversidade viral tem despertado a atenção da comunidade
cientifica em todo o mundo. Na ultima década, estudos metagenômicos virais de diferentes
organismos e amostras ambientais, têm revelado uma enorme quantidade de sequências
sem relação com nenhuma espécie conhecida vírus, sugerindo que grande parte da
biodiversidade viral ainda permanece desconhecida e deve ser caracterizada no futuro.
Estas informações têm implicações importantes em diferentes áreas da biologia, uma vez
que os vírus têm papéis importantes em inúmeros processos ecológicos, como por exemplo,
ciclagem de nutrientes em ambientes aquáticos. Além disso, a maioria das doenças
emergentes em plantas e animais é causada por vírus, logo, a ausência de conhecimento
sobre a diversidade viral em diferentes hospedeiros/ecossistemas dificulta o entendimento
dos mecanismos envolvidos na emergência de patógenos virais. Portanto, é evidente que o
completo entendimento das relações ecológicas em ecossistemas naturais e agrícolas
depende do conhecimento dos impactos e/ou funções da biodiversidade viral em diferentes
processos biológicos. Neste contexto, os principais avanços da área serão discutidos e os
resultados preliminares da Rede Centro-Oeste de Pesquisa em Biodiversidade Viral
referentes à descoberta de novos vírus em diferentes espécies de insetos, plantas e
amostras ambientais serão apresentados. Além disso, resultados de estudos genômicos e
funcionais de representantes da família Baculoviridae serão apresentados.
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CROSS-KINGDOM SIMILARITIES IN MICROBIOME FUNCTIONS
Rodrigo Mendes
EMBRAPA Agroenergia, Jaguariúna, São Paulo, Brasil
Recent advances in medical research have revealed how humans rely on their microbiome
for diverse traits and functions. Similarly, microbiomes of other higher organisms play key
roles in disease, health, growth and development of their host. Exploring microbiome
functions across kingdoms holds enor- mous potential to understand common mechanisms
and concepts underlying microbiome assembly and microbial processes that sustain life of
Eukaryotes. The gut and plant rhizosphere are both open systems with large surface areas
overpopulated with microbes. Despite distinct differences in micro- biome composition, these
two ecosystems share striking similarities in microbiome functions related to nutrient
acquisition, immune system modulation and protection against infections. We also discuss
how humans and plants exchange microbes, for better or for worse. We propose that
adopting ecological theory, combined with modeling and synthetic microbial ecosystems,
provides a promis- ing strategy to identify host traits and cues involved in microbiome
assembly on and in Eukaryotes.
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AS VIAS DE BIOSSÍNTESE E ASSIMILAÇÃO DE AMINOÁCIDOS
COMO ALVOS DE NOVOS ANTIFÚNGICOS
Amanda Teixeira de Melo; Kevin Martho; Crislaine Lambiase Calvete; Marcelo A. Vallim;
Renata C. Pascon
Universidade Federal de São Paulo, Campus Diadema, Laboratório de Interações Microbianas,
Diadema, São Paulo.
Cryptococcus neoformans é uma levedura oportunista causadora da criptococose, uma infecção
fúngica invasiva de alta taxa de mortalidade e morbidade que acomete indivíduos
imunocomprometidos. Requisitos nutricionais como, carbono, nitrogênio, fósforo, ferro, nucleotídeos e
aminoácidos já foram estudados e considerados relevantes sob a perspectiva da virulência e da
sobrevivência in vivo, sendo considerados como ótimos alvos para desenvolvimento de antifúngicos.
No que tange às vias de biossíntese de aminoácidos, o bloqueio em várias delas, como por exemplo,
a metionina leva à atenuação da virulência no modelo animal. É importante salientar que as vias de
síntese da treonina e do triptofano são essenciais nesta levedura, sendo ótimos alvos. O grupo de
Cryptococcus do Laboratório de Interações Microbianas da UNIFESP demonstrou que uma das
razões da essencialidade destas duas vias pode ser a baixa ocorrência de permeases captadoras de
aminoácidos codificadas pelo genoma (oito genes para permeases globais e dois para permeases de
alta e baixa afinidade à metionina), o que parece ser uma peculiaridade dos Basidiomicetos. Ainda,
das dez permeases, somente oito são efetivamente expressas, cinco sofrem repressão catabólica
pela fonte preferencial de nitrogênio e sete tem indução de sua expressão na presença de
aminoácidos. Os trabalhos desenvolvidos nesta linha de pesquisa revelaram que a deleção de cinco
permeases e de dois duplos mutantes impacta profundamente na virulência e na sobrevivência em
modelo animal de invertebrados (Galleria mellonella). Ainda, as nossas pesquisas revelaram a
atividade biológica de vários inibidores, comerciais e extraídos de plantas nativas do Brasil que tem
como alvo a via de síntese do triptofano e as permeases estudadas.
Departamento de Genética, ESALQ/USP - http://www.genetica.esalq.usp.br/32temas/
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UNDERSTANDING ENDOPHYTES-PLANT INTERACTION: A
GENOMIC APPROACH TO STUDY ECOLOGY AND FUNCTIONALITY
Welington Luiz de Araújo
Depto de Microbiologia, ICB/USP
E-mail: [email protected]
Endophytic microorganism are able to colonize plants without causing any damage or external signs to
the host. This microbial community colonize plant from the phylosphere. In addition, some species are
able to colonize seeds, being transferred vertically from plant to plant. During establishment inside the
host plant, a recognition between the plant and microbial species should occur, allowing the
establishment of the microbes inside the host. These microorganisms may enhance abiotic and biotic
stress tolerance in a variety of plant species. Physiological studies have shown that hormones
biosynthesis, ACC deaminase, siderophore, bacteriocin and the composition of N-acyl homoserine
lactone signal molecules are involved in plant stimulation and pathogen control by endophytic strains.
However, a genome approach has revealed that additional traits, such as secretion systems, a high
amount of genes for oxidative stress and capsule biosynthesis could play a role in plant growth
promotion. The endophytic bacteria Methylobacterium mesophilicum and Burkholderia seminalis,
isolated from Citrus sinensis and sugarcane, are able to plant growth promotion (PGP), and control
plant disease, respectively. The genome of these bacteria have been identified and the gene
regulation during plant colonization has been evaluated. Although nitrogen fixation and antibiotic
production have been associated to PGP and pathogen control, respectively, we observed that for
these bacteria, other traits should be more important, allowing recognition and establishment inside
the plant.
Financial support: FAPESP and CNPq.
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CRYPTOCOCCUS NEOFORMANS: CRESCIMENTO A
37°C E AUTOFAGIA
Fabiano de Assis Gontijo, Amanda M. Teixeira, Renata C. Pascon, Marcelo A Vallim1
UNIFESP1, Campus Diadema, Departamento de Ciências Biológicas
Cryptococcus neoformans é um fungo patogênico oportunista que ataca principalmente
pacientes imunocomprometidos e, se não for tratada, a criptococcose pode levar a morte.
Devido as semelhanças inerentes as células fúngicas e animais, compostos antifúngicos
geralmente resultam em toxicidade para o hospedeiro, por isso, muitas micoses são difíceis
de tratar. Esta restrição leva investigadores a explorar novos alvos de drogas que interfiram
com fatores de virulência, tais como a capacidade de crescer à temperatura fisiológica dos
mamíferos (37°C). Portanto, é desejável expandir o conhecimento sobre a biologia do fungo
e, para colaborar com esta área de estudo, nós construímos uma biblioteca de mutantes
gerada pela inserção aleatória de um gene marcador de resistência a droga mediada por
Agrobacterium tumefaciens. Dentro desta biblioteca foram identificados vários mutantes
incapazes de crescer a 37°C, destes mutantes termo-sensíveis apresentou uma interrupção
no gene APE4, rendendo à esta linhagem mutante a incapacidade de sintetizar a proteína
aspartil aminopeptidase (Ape4), da família M18 das metaloproteases. Em Saccharomyce
cerevisiae Ape4 é ativado pela privação de nitrogênio, a atividade proteolítica se dá nós
aminoácidos aspartato e glutamato localizados na porção amino terminal das proteínas alvo
da ação proteolítica de Ape4. Ainda em S. cerevisiae, esta proteína está envolvida em
autofagia, em privação por nitrogênio e se localiza no vacúolo. Ela é um dos componetes da
da via Cvt (citoplasm to vacuole targeting) que funciona constitutivamente e é composto
pelas proteínas Ams1, Ape1, Ape4 e Atg19. A falta da proteína Ape4 em S. cerevisiae não
causa sensibilidade a alta temperatura. Por outro lado, nós demonstramos que o mutante
ape4 de Cryptococcus neoformans não cresce à 37°C e apresenta defeitos nos fatores de
virulência como, produção de cápsula, fosfolipase, foi incapaz de crescer dentro do
macrófago (J774A.1) e foi avirulento em modelo animal. A proteína de fusão GFP::Ape4 de
C. neoformans foi co-localizada dentro de vesículas durante o cultivo em privação por fonte
de nitrogênio, de forma semelhante ao que é observado para S. cerevisiae. A análise de
PCR quantitativo mostrou que a expressão do gene APE4 é modulado pela ausência da
fonte de nitrogêncio e quando C. neoformans está crescendo a 37°C.
Fapesp: 2007/50536-3, 2011/51298-4
Departamento de Genética, ESALQ/USP - http://www.genetica.esalq.usp.br/32temas/
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27
GENOMICS-GUIDED DISCOVERY OF TRAITS CONTRIBUTING TO
BIOLOGICAL CONTROL OF PLANT DISEASE BY
PSEUDOMONAS FLUORESCENS
Joyce E. Loper1, Virginia O. Stockwell2, Brenda T. Shaffer1, Jennifer M. Clifford1, Ian T.
Paulsen3, Benjamin J. Philmus2
1
U.S.Department of Agriculture, Agricultural Research Service, Corvallis, OR, USA
Oregon State University, Corvallis, OR, USA
3
Macquarie University, Sydney, Australia
2
The Pseudomonas fluorescens group, composed of more than 50 named species, is
ubiquitous in natural habitats and exhibits tremendous ecological, metabolic, and genomic
diversity. Certain strains live on plant surfaces, protecting them from infection by fungal plant
pathogens. Comparative genomics revealed that gene clusters for the biosynthesis of antifungal metabolites map to lineage-specific regions of the genome, commensurate with the
distinctive biocontrol properties of individual strains. Our studies focus on Pseudomonas
protegens Pf-5, which produces an array of secondary metabolites toxic to plant pathogenic
fungi and oomycetes, and P. fluorescens A506, a commercial agent for the biological control
of fire blight. We identified new anti-fungal metabolites from orphan gene clusters in the Pf-5
genome and pioneered global-regulator-based genome mining as an approach to decipher
the secondary metabolome of Pseudomonas spp. We are also gaining a holistic view of
genome expression profiles of Pf-5 living on seed surfaces, the environment where the
bacterium interacts with seed-infecting pathogens to affect biocontrol. Our studies highlight
the enormous heterogeneity of the P. fluorescens group and the importance of the variable
genome in determining the microbial interactions underpinning biological control.
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32º ENCONTRO SOBRE TEMAS DE GENÉTICA E MELHORAMENTO / II Workshop de Biossegurança e Responsabilidade na Pesquisa
"Genética de Microrganismos: Passado e Perspectivas"
RESUMOS PÔSTERS
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29
GM1
INDUÇÃO DE RESISTÊNCIA A Alternaria alternata POR
Trichoderma harzianum NA PLANTA MODELO Lycopersicum
esculentum cv. MICRO-TOM
Isabel Cristina Padula Paz1; Marcia Eloisa da Silva1; Alexandre Martins Guimarães1;
Aida Terezinha Santos Matsumura1; Gustavo Borges Meirelles2; Marcelo Gravina de
Moraes2
1
2
Departamento Técnico, ICB BIOAGRITEC LTDA, Laboratório de Fitopatologia Molecular,
UFRGS/RS, Laboratório de Fitopatologia Molecular, UFRGS/RS
Área de avaliação: Genética de Microrganismos aplicada à Agricultura
Espécies do gênero Trichoderma são conhecidas pela sua capacidade de micoparasitismo a
fungos fitopatogênicos, entretanto, tem se destacado o papel das mesmas na promoção de
crescimento e no controle de patógenos via indução de resistência em plantas. Neste
sentido, este trabalho objetivou avaliar o efeito indutor de resistência de isolados de
Trichoderma harzianum (ICB01TH, ICB02TH, ICB03TH, ICB04TH e ICB32TH), pertencentes
à coleção da empresa ICB BIOAGRITEC LTDA à Alternaria alternata, em plantas de tomate
cv. Micro-Tom. Uma suspensão de 100 µL na concentração de 2 x 107 esporos/mL de cada
um dos cinco isolados foram aplicados diretamente sobre as raízes das plantas de tomate
com 15 dias, ou, somente água quando no tratamento controle. O tratamento com A.
alternata foi realizado por aspersão de uma suspensão contendo 1 x 106 esporos/mL na
parte aérea das plantas, quinze dias após aplicação dos tratamentos com os cinco isolados
de T. harzianum e as mesmas mantidas em câmara úmida a 25 ± 2°C e fotoperíodo de 14
horas. Os resultados foram expressos pelo grau de severidade dos sintomas da doença
após 96 horas pós inoculação, assim como pela quantificação de DNA do fitopatógeno em
folhas via qPCR, usando oligonucleotídeos iniciadores específicos para o gene constitutivo
β- tubulina de A. alternata. Os isolados ICB01TH e ICB04TH apresentaram redução
significativa de 40,6 e 31% respectivamente na expressão da severidade sintomatológica da
doença quando comparado com as plantas controle. A quantificação do DNA de A. alternata
nos tecidos foliares foi 74 vezes menor em plantas de tomate tratadas com T. harzianum
ICB01TH, indicando que houve uma redução no sucesso de colonização dos tecidos pelo
fitopatógeno. Considerando que T. harzianum e o patógeno estavam espacialmente
separados na planta pode-se atribuir a redução de severidade à indução de resistência.
Genes relacionados a rotas de resistência na planta estão sendo avaliados pelo grupo de
pesquisa para elucidação dos mecanismos envolvidos neste processo (Projeto de Pesquisa
integrado ICB BIOAGRITEC LTDA e Laboratório de Fitopatologia Molecular, UFRGS/RS).
Palavras-chave: Trichoderma sp.; Alternaria alternata; Indução de resistência.
Apoio Financeiro: ICB BIOAGRITEC
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GM2
ORCHID EXUDATES RECOGNITION: THE FIRST STEP IN
Burkholderia Seminalis – ORCHID INTERACTION
Manuella Nóbrega Dourado1, Emy Tiyo Mano1, Juliana M. Sciani2, Welington L. Araújo1
1
2
Universidade de São Paulo, Butantã.
Área de avaliação: Genética de Micro-organismos aplicada à Agricultura
The genus Burkholderia presents several beneficial effects in agriculture; it is an antagonist
of phytopathogens and a plant growth promoter; contributes to nitrogen fixation, phosphorus
solubilization and xenobiotic catabolism. This genus is commonly found in soils and
rhizosphere, including species tolerant to heavy metal, tolerating until 2.5 mM of Cd.
Moreover, its huge metabolic diversity enable Burkholderia to use herbicides and
hydrocarbons as an energy source, showing its potential for bioremediation of contaminated
soils. For these reason, it is important to understand plant-bacterial interaction, and
antioxidant system can play an important role on bacteria-plant interaction, mainly on the first
stage of plant recognition and colonization. In this way, the present study aims to
characterize and understand antioxidant response of Burkholderia seminalis TC3.4.2R3
(isolated from sugarcane rhizosphere) to plant exudates comparing it to the response of a
well characterized inorganic (cadmium) and organic stress (paraquat herbicide) evaluating
sod and cat gene expression, as well as identify root exudates which are key compounds in
these interaction. Results shows that plant lipid peroxidation is decreased in the presence of
the symbiotic bacterium, confirming that the TC3.4.2R3 strain reduces plant stress. Orchid
root exudate varies in the presence of B. seminalis, decreasing sugar (carbon source) and
increasing urea (nitrogen source) in the presence of the bacteria. Analyzing bacterium
antioxidant response in the early stage of bacteria-plant interaction we show that plant
exudate does not induce stress in the bacteria as the characterized stress (paraquat and
Cd). After 20 h of bacteria inoculation, sod and cat genes are down-regulated in the
presence of plant exudates indicating that sugar and urea (present in the plant exudate) can
act as an energy and carbon and nitrogen source leading to increase in bacterial growth and
a decrease of bacterial stress and antioxidant gene expression, consequently improving
plant colonization by this benefic bacterium.
Palavras-chave: Antioxidant system, catalase, superoxide dismutase, Plant Growth
Promotion bacteria (PGPB)
Apoio financeiro: FAPESP
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GM3
SEQUENCIAMENTO E CARACTERIZAÇÃO DO GENE
MITOCONDRIAL CITOCROMO B E ANÁLISE DA SUA
VARIABILIDADE NA REGIÃO HOTSPOT PARA RESISTÊNCIA A
FUNGICIDAS DO TIPO QoI EM PATÓGENOS DO CULTIVO DE
UVA NIÁGARA ROSADA
Nathália de Moraes1; Lilian Amorim1; Claudia Barros Monteiro-Vitorello1
1
Escola Superior de Agricultura “Luiz de Queiroz” – ESALQ/USP
Área de avaliação: Genética de Microrganismos aplicada à Agricultura
Os fungicidas do tipo QoI (inibidores da quinona oxidase) agem interrompendo o transporte
de elétrons do citocromo b ao citocromo c1 na cadeia respiratória, pois se ligam ao sítio Qo
do complexo citocromo bc1 bloqueando a formação de ATP. Logo após a introdução deste
fungicida no controle de doenças da videira foi relatado o aparecimento de patógenos
resistentes em países como a França. Na maioria dos casos a resistência ocorre devido a
uma mutação na sequência do gene mitocondrial citocromo b (cytB) que provoca a
substituição do aminoácido glicina por alanina na posição 143 e de fenilalanina por leucina
na posição 129; estas regiões são chamadas hotspot. Além disto, nas espécies onde o
gene cytB tem um intron seguidamente após o códon 143 a mutação G143A não se
estabelece, pois levaria a um erro no sinal do splicing. No estado de São Paulo o cultivo de
uva Niágara rosada é uma atividade importante que gera renda aos pequenos produtores;
porém o aparecimento de doenças é um fator limitante à produção. Dentre estas estão a
ferrugem (causada por Phakopsora euvitis), o míldio (causada por Plasmopara viticola) e a
antracnose (causada por Sphaceloma ampelinum) que são controladas pela aplicação
excessiva dos fungicidas, inclusive do tipo QoI. Não existem relatos na literatura da
ocorrência de isolados de algum destes patógenos que seja resistente aos fungicidas QoI no
Brasil. Diante disto, o objetivo deste trabalho é o sequenciamento completo e a
caracterização de cytB e regiões genômicas adjacentes nos três patógenos citados e a
avaliação da variabilidade das regiões hotspot para resistência aos fungicidas QoI em
isolados do estado de SP. Os Isolados coletados de videiras infectadas em diferentes
municípios de SP são mantidos in vivo ou in vitro e depois é feita extração de DNA e RNA a
partir dos quais parte de cytB é amplificada utilizando-se primers desenhados com base em
sequências de espécies próximas. Com os resultados da PCR é feita a abordagem Genome
Walking para o sequenciamento completo de cytB e dos genes próximos. Por fim, utilizandose primers específicos é possível sequenciar as regiões hotspot e comparar os resultados
aos testes de resistência dos isolados. Foram selecionados até o momento 22 isolados de
municípios diferentes e o sequenciamento parcial de 2 isolados de P. viticola mostra a
presença da mutação que provoca a substituição de glicina para alanina no hotspot 143, o
que indica que estes são possivelmente isolados resistentes.
Palavras-chave: Vitis labrusca; mutação cytB; ferrugem da videira; antracnose, míldio
Apoio Financeiro: FAPESP, CAPES
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GM4
DETECÇÃO E QUANTIFICAÇÃO DO FUNGO PATOGÊNICO
Sporisorium scitamineum EM CANA-DE-AÇÚCAR PELA
TÉCNICA DE PCR QUANTITATIVO EM TEMPO REAL
Patricia Dayane Carvalho Schaker1, Leila Priscila Peters1, Claudia Barros MonteiroVitorello1
1
Escola Superior de Agricultura "Luiz de Queiroz", USP.
Área de avaliação: Genética de Micro-organismos aplicada à Agricultura
A doença do carvão da cana-de-açúcar é causada pelo fungo Sporisorium scitamineum, e
tem como principal característica a formação de uma estrutura na forma de chicote no
meristema apical ou laterais da planta, além de ocasionar redução do diâmetro dos colmos e
do conteúdo de sacarose. Os programas de melhoramento de cana-de-açúcar classificam
novas variedades quanto à resistência ou susceptibilidade à esta doença pela avaliação do
aparecimento do chicote em até 1 ano após inoculação. No entanto, o fungo pode
permanecer latente na planta sem causar sintomas aparentes por longos períodos de
tempo. Nesse sentido, o uso de métodos moleculares para determinar a resistência à
doença pode ser promissor. O objetivo deste trabalho foi desenvolver primers para detecção
e quantificação de S. scitamineum utilizando a técnica de PCR quantitativo em tempo real
(qPCR). Foram desenhados 6 pares de primers, sendo 3 com alvo em singlets do genoma
de S. scitamineum (SSC-1, SSC-2, SSC-3) e 3 para a região IGS (SSC-A, SSC-B, SSC-C).
Para construção da curva padrão, DNA extraído de células da linhagem S. scitamineum
SSC39B foi diluído em série (10-1 a 10-8) a partir de uma amostra contendo 20 ng/µL. As
reações de qPCR foram realizadas em triplicata (7500 FAST, Applied Biosystems) utilizando
o kit LuminoCt SYBR® Green qPCR ReadyMix™ (Sigma-Aldrich). Os valores de Ct obtidos
para cada ponto da curva foram utilizados para obtenção da equação de regressão linear e
cálculo da eficiência de cada primer. O primer que apresentou maior eficiência foi utilizado
para quantificação de S. scitamineum em plantas assintomáticas da variedade susceptível
RB925345. O DNA foi extraído da região meristemática aos 5, 65 e 100 dias após infecção.
Plantas não-inoculadas de mesma idade foram usadas como controle. O primer SSC-C foi o
que apresentou maior eficiência de amplificação (99%) considerando a análise de regressão
linear (y = -3,3159x + 28,299), com um R2=0,9993 e limite de detecção de 1 pg de DNA. A
especificidade do primer foi confirmada pela obtenção de uma única curva de melting e pela
ausência de curva de amplificação em plantas não-inoculadas. A quantificação in planta
mostrou um aumento gradual na quantidade de patógeno, sendo de 0,15±0,03 ng,
1,87±0,44 ng e 2,11±0,69 ng aos 5, 65 e 100 dias após inoculação, respectivamente.
Futuramente pretende-se incluir o uso desta metodologia nos programas de melhoramento
de cana-de-açúcar.
Palavras-chave: qPCR, cana-de-açúcar, doença do carvão
Apoio financeiro: FAPESP, CNPq
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GM5
BACTÉRIAS ENDOFÍTICAS ISOLADAS DE SOJA CULTIVADA EM
CAMPO PRODUZINDO QUITINASE
Daniele Cristina Ferreira1, Giuliano Degrassi2, Valeria Carpentieri-Pipolo3, Karla Bianca
de Almeida Lopes1
1
2
Programa de Pós-Graduação Universidade Estadual de Londrina, ICGEB- International Centre for
Genetic Engeneering and Biotechnology, Trieste Italy- Industrial Biotechnology, Trieste, Italia,
3
Embrapa Trigo Rod. BR 285 Km 294 Box 3081, 99050-970, Passo Fundo RS/ Programa de PósGraduação Universidade Estadual de Londrina.
Área de avaliação: Genética de Micro-organismos aplicada à Agricultura
Bactérias endofíticas têm sido apontadas como grande potencial de utilização como controle
biológico. Esses organismos produzem uma grande quantidade de enzimas líticas que
podem atuar sobre os agentes patogênicos, caracterizando à planta um mecanismo de
proteção. A enzima quitinase têm recebido uma crescente atenção devido suas aplicações
biotecnológicas, especialmente na agricultura como biocontrole de fungos fitopatogênicos e
insetos. O objetivo do trabalho foi avaliar a atividade e caracterizar a enzima quitinase
produzida pela bactéria endofítica pertencente ao gênero Curtobacterium isolada de soja.
Para isso, a bactéria foi cultivada em meios NB líquido, um contendo 5g/L de quitina coloidal
(meio indutor) e o outro com quitina coloidal ausente. Após o crescimento, os cultivos foram
centrifugados e os sobrenadantes obtidos passaram por dois diferentes métodos de
precipitação de proteínas (TCA - ácido tricloroacético e por filtração). As amostras foram
aplicadas em gel SDS-PAGE 12% para a visualização e determinação de peso molecular
das bandas e, posteriormente, submetidas ao teste MALDI-TOF para a caracterização da
proteína. Os resultados demonstraram que a bactéria do gênero Curtobacterium produz e
secreta a enzima quitinase, na qual é induzida pela presença do substrato (quitina coloidal).
Os resultados do gel indicaram a presença de bandas que variavam no tamanho de
aproximadamente 37 kDa nas amostras com presença de quitina coloidal (indutoras). Os
dados obtidos do teste MALDI-TOF demonstraram a presença de vários peptídeos
identificados que correspondem a proteínas que se ligam a carboidratos, pertencentes à
família das quitinases, dentre os quais, quando comparados com dados depositados no
BLAST, foram identificados com 100% de similaridade com a quitinase.
Palavras-chave: Bactérias endofíticas, quitinase, soja, biocontrole
Apoio financeiro: CAPES (Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior)
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GM6
POLYMORPHIC VARIANT OF A CANDIDATE EFFECTOR
POTENTIALLY INVOLVED IN THE SPECIFIC INTERACTION
BETWEEN Sporisorium scitamineum AND SUGARCANE
Natália Oliveira de Araujo1; Juliana Benevenuto1; Natalia Mielnichuk2; Claudia Barros
Monteiro-Vitorello1
1
Escola Superior de Agricultura "Luiz de Queiroz" (ESALQ/USP),
Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET/Argentina)
2
Consejo Nacional de
Área de avaliação: Genética de Microrganismos aplicada à Agricultura
Sporisorium scitamineum is a biotrophic pathogen establishing a specific interaction with
sugarcane. Secreted effector proteins play a central role in biotrophic interactions,
suppressing the plant immune system and altering the host metabolism to support the fungal
growth and development. Effectors are emerging as tools in resistance breeding programs to
accelerate the identification of pathogen races and host resistance genes. Through
computational predictions and transcriptomic analysis, a S. scitamineum putative secreted
effector, unique to this fungus with regard to three close-related species, and exclusively
expressed during sugarcane interaction in relation to culture medium growth, was identified.
This gene, automatically named as g1052 in the genome annotation, was used in the present
study to perform a screening into 24 haploid strains of S. scitamineum derived from 12
diseased plants naturally found in different regions of Brazil and Argentina. After gene
amplification and further sequencing, two polymorphisms were found; one at position 25 and
another at position 472 from a total of 513 base pairs alignment (comprising from the putative
start to the stop codons). Each polymorphism affected the first base of the respective codon,
leading to non-synonymous substitutions. It is noteworthy that only two haplotypes were
obtained with high haplotype diversity (Hd=0,514) considering all isolates. Maximum
Likelihood tree based on the protein sequences showed that there is no variation among
strains derived from the same infected plant. Moreover, the two haplotypes are
characteristically distributed between isolates from Brazil and Argentina, except for isolated
39 (collected in Ribeirão Preto-SP) that shares the same haplotype with Argentine isolates.
Additional experiments are needed to characterize the function of this gene and to associate
the haplotypes found here with differences in aggressiveness that could indicate the
presence of races.
Palavras-chave: sugarcane smut; diversity; effector.
Apoio Financeiro: Programa Institucional de Bolsas de Iniciação Científica - PIBIC (CNPq),
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo - FAPESP
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GM7
AVALIAÇÃO QUANTITATIVA DA PRODUÇÃO DE ÁCIDO-INDOLACÉTICO (AIA) POR BACTÉRIAS ASSOCIADAS AO
GUARANAZEIRO (Paullinia cupana)
Renata Hortêncio Ockner1; Bruna Durante Batista1; João lúcio Azevedo1; Maria
Carolina Quecine1
1
Escola Superior de Agricultura "Luiz de Queiroz" - Universidade de São Paulo
Área de avaliação: Genética de Microrganismos aplicada à Agricultura
Bactérias endofíticas, epifíticas e rizobactérias são organismos associados às plantas que
apresentam potencial para reduzir a utilização de fertilizantes e reguladores de crescimento
artificiais, visando uma agricultura sustentável. Esses organismos podem promover o
crescimento vegetal através de mecanismos como fixação biológica de nitrogênio,
solubilização de fosfatos, produção de sideróforos, com destaque para a produção de ÁcidoIndol-Acético (AIA). O AIA é uma auxina (fito-hormônio) capaz de afetar o crescimento
vegetal por alongamento de células jovens, principalmente nas raízes e caules. A habilidade
de sintetizar auxinas é amplamente distribuída entre bactérias associadas às plantas e sua
produção é, em muitos casos, dependente do aminoácido triptofano. Nesse âmbito, a
prospecção de micro-organismos produtores de AIA em plantas tropicais nativas do Brasil é
uma importante ferramenta no desenvolvimento de insumos biotecnológicos para uso
comercial. No presente estudo, 7 bactérias previamente isoladas do guaranazeiro (2
rizobactérias e 5 epifíticas) foram avaliadas in vitro quanto à produção de AIA pela via
dependente do triptofano. Para a quantificação da produção de AIA, as bactérias foram
cultivadas em meio TSB 10% contendo L-triptofano (5mM) e incubadas no escuro a 28ºC,
sob agitação, por 72 horas. 900 μL do sobrenadante foram c oletados e adicionados de 400
μL do Reagente de Salkowski. O controle negativo constou apenas do meio de cultura com
L-triptofano acrescido do Reagente de Salkowski. A leitura foi realizada a 520nm em
espectrofotômetro, 30 minutos após a adição do reagente. A concentração de AIA detectada
no sobrenadante foi determinada utilizando-se curva padrão, calculada com base em doses
conhecidas do hormônio sintetizado, nas seguintes concentrações: 5,10, 25, 50, 100 μg/mL.
A coloração rosa-avermelhada das amostras indicou a produção de auxinas. Os valores de
produção entre todas as linhagens variaram 54 a 110 µg/mL. É interessante notar que 3 dos
micro-organismos epifíticos apresentaram as maiores produções entre os isolados testados
(Enterobacter sp. EPD1-1: 72,1µg/mL; Pantoea sp. EPD1-2: 90,8 µg/mL e Agrobacterium
sp.EPD4-13: 110,6µg/mL). Em uma etapa posterior do projeto, serão selecionadas
linhagens
bacterianas com alta e baixa produção de AIA para avaliação de seus efeitos em planta
modelo, cv Micro-Tom de tomateiro, além de cv Micro-Tom mutantes (dgt, epi, Nr) defectivos
na resposta para AIA.
Palavras-chave: Promoção de crescimento vegetal; Ácido Indol Acético; Bactérias epifíticas;
Rizobactérias.
Apoio Financeiro: CNPq.
Departamento de Genética, ESALQ/USP - http://www.genetica.esalq.usp.br/32temas/
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GM8
IDENTIFICAÇÃO DE GENES ALVO NO PROCESSO DE
COLONIZAÇÃO DE Xanthomonas fuscans subsp. Aurantifolii
TIPO C EM CITROS – UMA ABORDAGEM PARA O ESTUDO DO
CANCRO CÍTRICO.
Helen Alves Penha1; Jéssica Alcimari Ferreira Mello1; Iashilei Cassieli Pasquini1;
Estevão Henrique Cangussu de Souza1; Alessandro de Mello Varani1; Jesus Aparecido
Ferro1
1
Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho” Veterinárias (UNESP/FCAV) - Câmpus de Jaboticabal
Faculdade de Ciências Agrárias e
Área de avaliação: Genética de Microrganismos aplicada à Agricultura
O cancro cítrico, doença que acomete a citricultura mundial, é causada, entre outras, pela
bactéria Xanthomonas fuscans subsp. aurantifolii tipo C (XauC), e restringe sua patogênese
à plantas de Citrus aurantifolia (Lima Ácida Galego) causando a denominada cancrose tipo
“C”. Quando inoculada em folhas de Laranja Pêra-Rio (Citrus sinensis), ela causa uma
Resposta de Hipersensibilidade (HR). A HR é responsável pela contenção da XauC no sítio
inicial de infecção, conferindo resistência ao patógeno. A identificação dos genes alvos
responsáveis por estes processos é um passo essencial para o entendimento dos
mecanismos moleculares que a bactéria utiliza para sobrepujar as barreiras de defesa do
hospedeiro para se instalar e causar a doença. Uma das abordagens utilizadas para a
identificação dos mesmos é a inoculação de mutantes, obtidos através de uma biblioteca de
mutação aleatória, em plantas resistentes e susceptíveis à XauC. Os mutantes que
apresentarem a sintomatologia alterada provavelmente apresentam genes relacionados à
patogenicidade e/ou virulência mutados. Para a identificação destes genes foi desenvolvida
uma biblioteca de mutantes aleatórios de XauC, e inoculação dos mesmos, in vivo, em
plantas susceptíveis - lima Ácida Galego e em plantas resistentes – laranja Pêra-Rio. A
biblioteca de mutantes (3000 clones) foi construída utilizando o isolado de XauC ICPB
10535 e o Kit EZ-TN5 <KAN-2> Tnp Transposome (EPICENTRE), segundo instruções do
fabricante. Os mutantes foram inoculados na concentração de 108 UFC/mL na região
abaxial das folhas, juntamente com clones de XauC selvagens (controle). A sintomatologia
foi registrada por fotografias das folhas aos 3, 6, 9, 14 e 34 dias após a inoculação (DAI).
Foram constatadas alterações em dois mutantes dos 80 testados até o momento. O mutante
P1B2 mostrou uma redução significativa nos sintomas de hiperplasia em ambas as
espécies, e o mutante P1G1 não apresentou nenhum sintoma em laranja Pêra-Rio, e
sintomatologia reduzida em lima Ácida Galego. Essas alterações sugerem uma possível
mutação nos genes relacionados ao processo de colonização do hospedeiro e instalação da
doença. Esses dados, juntamente com os do sequenciamento dos genes mutados, curvas
de crescimento e testes de biofilme (em andamento), são de grande significância na
elucidação dos fatores envolvidos no estabelecimento do patógeno na planta, representando
um avanço inédito e essencial para as pesquisas sobre formas de controle do cancro cítrico.
Palavras-chave: Patogenicidade; virulência; mutação aleatória; cancro cítrico; XauC.
Apoio Financeiro: CAPES, PROPe
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GM9
ENZYMATIC HYDROLYSIS OF AGRO-INDUSTRIAL WASTES:
A SCREENING OF HOLOCELLULOSE-DEGRADING ENZYMES
FROM ASPERGILLUS ORYZAE
Antonielle Vieira Monclaro1; Guilherme Lima Recalde1; Edivaldo Ximenes Ferreira
Filho1
1
Laboratory of Enzimology, University of Brasília, Campus Universitário Darcy Ribeiro, Brasília - DF,
70910-900
Área de avaliação: Genética de Microrganismos aplicada à Industria
Plant cell walls of agro-industrial wastes are complex structures formed mainly by three
components: cellulose, hemicellulose and lignin. Aspergillus oryzae is a filamentous fungi
recognized for their great potential in enzyme production and as an effective decomposer of
lignocellulosic biomass. This work will discuss some results of screenings using A. oryzae
Blu37, a new strain isolated from natural composting of textile residues. The first screening
evaluated the fungus ability to produce lignocellulolytic enzymes using different agroindustrial wastes as a carbon source: sugarcane bagasse, delignified pulp, bleached pulp,
dirty cotton residue, filter powder and clean cotton residue. It was noted that xylanase was
the most active enzyme in all residues. It is known that the induction effect of the biomass
will cause microorganism to produce enzymes according to the substrate present, in order to
hydrolyze efficiently the cellulose and hemicellulose contents of plant cell wall. Based on this,
a second screening was conducted, varying the medium composition. The medium used as
control was composed of (w/v) 0.7% KH2PO4, 0.2% K2HPO4, 0.05% MgSO4.7H2O, 0.1%
(NH4)2SO4 and 0.06% yeast extract; the second medium used tryptone as nitrogen source
in place of (NH4)2SO4; the third medium was supplemented with 5 mM CuSO4. It was noted
that the presence of tryptone and CuSO4 increased cellulolytic activity of medium containing
bleached pulp (175% and 170%, respectively), durty cotton residue (183% and 233%,
respectively) and clean cotton residue (134% and 173%, respectively). For sugarcane
bagasse and filter powder there was a strong inhibition of cellulolytic activity (21% and 0% for
sugarcane bagasse/50% and 0% for filter powder, respectively). It is known that tryptone is a
rich source of amino acids nitrogen, especially tryptophan, and this amino acid residue is
important for its localization near by the catalytic domain, especially in cellobiohydrolases.
Probably this source of nitrogen favored the cellulases to initiate cellulose degradation. And
the supplementation with CuSO4 may have activated the copper-dependent lytic
polysaccharide monooxygenases presents and boosted the cellulases through synergism.
These data suggest that modifications in minimal mediums are essential to optimize the
production of lignocellulolytic enzymes for the conversion of biomass.
Palavras-chave: Cellulose pulp; textile waste; sugarcane bagasse; celulase; xylanase
Apoio financeiro: CNPq; Foundation for Research Support of Federal District, National
Institute of Science and Technology of Bioethanol
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GM10
CONTAMINANT BACTERIAL DENSITY IN FED-BATCH AND
CONTINUOUS FERMENTATION PROCESS FOR ETHANOL
PRODUCTION.
Maria Letícia Bonatelli1; Andressa Peres Bini1; Maria Carolina Quecine1; Carlos Alberto
Labate1
1
Department of Genetics, Luiz de Queiroz College of Agriculture – University of São Paulo, Padua
Dias Avenue, 11, 13418-900 Piracicaba, Brazil
Área de avaliação: Genética de Microrganismos aplicada à Industria
Brazil is the largest sugarcane ethanol producer in the world and ethanol demand has
increased for being considered a sustainable alternative to fossil fuel. Fermentation process
operates in fed-batch or in continuous mode, whereas the first comprises around 85% of the
distilleries. Sugarcane fermentation tanks creates an environment that enable the growth of
contaminant bacteria for being high in organic and inorganic substances, and the bacterial
growth often generates significant economy losses. Considering this aspect, batch
fermentation is believed to be superior because process parameters are more easier to
measure, therefore facilitating control and manage. However, continuous system have higher
volumetric productivity, can reduce labor costs and vessel cleaning and filling time. In this
context, we compared the bacterial density from two distilleries in São Paulo, each one that
operates in different fermentation processes – batch and continuous mode – in three
different sampling time during the harvest 2012/2013. qPCR was used to quantify total
bacteria with 16S rDNA universal primer. Interestingly, no significant difference was reported
along time within distilleries and bacterial density was not statistically different when
comparing the distilleries. Bacterial density ranged from 104 to 106 gene copies per µL
template, but mainly fermentation tanks presented around 105 gene copies per µL template.
Neither time or fermentation processes seemed to affect bacterial density significantly,
proving to be equivocate the idea that continuous process will present higher bacterial
density and therefore more economical loss. Future works will focus on describing the
bacterial communities’ diversity from the distilleries through Illumina 16S sequencing to
better understand if and how they are affected by different fermentation processes.
Palavras-chave: Fermentation; ethanol; bacterial density; 16S rDNA; qPCR
Apoio financeiro: FAPESP; CNPq
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32º ENCONTRO SOBRE TEMAS DE GENÉTICA E MELHORAMENTO / II Workshop de Biossegurança e Responsabilidade na Pesquisa
"Genética de Microrganismos: Passado e Perspectivas"
39
GM11
PRODUÇÃO, OTIMIZAÇÃO POR DELINEAMENTO COMPOSTO
CENTRAL ROTACIONAL E CARACTERIZAÇÃO DE Β GLUCOSIDASES DE MALBRANCHEA PULCHELLA.
Lummy Maria Oliveira Monteiro1; Ana Claudia Vici1; Juliana Conceição Infante de
Marco1; Marita Gimenez Pereira1; João Atílio Jorge1; Maria de Lourdes Teixeira de
Moraes Polizeli1
1
Universidade de São Paulo (FMRP)
Área de avaliação: Genética de Microrganismos aplicada à Industria
Um dos grandes desafios na bioconversão da biomassa lignocelulósica em biocombustíveis
inclui a produção deβ -glucosidases. A β-glucosidase é uma enzima chave do complexo
celululítico que completa o passo final durante a hidrólise da celulose, convertendo a
celobiose em monômeros de glicose. Neste contexto, este trabalho teve como objetivo a
produção e a caracterização βde -glucosidases pelo fungo termofílico Malbranchea
pulchella. Inicialmente o fungo foi cultivado em meio Lummy e Emerson, adicionado de
celobiose 1%, por 72 h, a 40°C e 180 rpm. Posteriormente, foi realizado um delineamento
composto central rotacional (DCCR) e análise de superfície de resposta, avaliando o efeito
da concentração de celobiose e bagaço de cana-de-açúcar (BC). O extrato bruto foi
precipitado com 70% de (NH4)2SO4 e eluído em Bio-GelP-100. As frações que
apresentaram atividade enzimática foram recuperadas. Essa amostra foi caracterizada
quanto a temperatura e pH de atividade, efeito da adição de íons e estabilidade térmica e ao
pH. A atividade de β-glucosidase foi determinada através da hidrólise de p-nitrofenil-β-Dglucopiranosídeo 4mM. Um gel de atividade utilizando esculina 0,1%, e cloreto de ferro
0,03% como substrato foi realizado. O meio Lummy foi mais promissor para a produção de
β-glucosidase. Celobiose e BC são importantes para a produção βde -glucosidase, pois
ambos tiveram efeito linear e celobiose teve efeito quadrático no DCCR, com p de 0,05 e R²
de 0,92; o que deu origem a uma equação de segunda ordem. O Fcalc foi 7,8 vezes maior
que o Ftab, o que torna o modelo preditivo e estatisticamente válido. No melhor ensaio do
DCCR, onde foi utilizado celobiose 0,6% e BC 1,16%, a atividade enzimatica foi de
0,41U/mL. O extrato apresentou atividade ótima a 55 °C e pH 6.0; foi estável a 40°C e nos
pHs de 5 a 8, por 24 horas. Todos os sais testados demostraram efeito indutor sobre o
extrato, porém, MnCl2.4H2O e NaCl, foram os que tiveram maior significância, com 148,9%
e 143,9% de ativação, respectivamente. O HgCl2 inibiu completamente a atividade. O gel de
atividade revelou quatro bandas, correspondentes à atividade deβ -glucosidases, indicando
a presença de isoformas no extrato enzimático. Portanto, M. pulchella se apresentou como
um fungo promissor para a produção de diferentes isoformas de β-glucosidases, com
atividade em altas temperaturas e estáveis em uma ampla faixa de pH, caracterísitcas
importantes para a aplicação biotecnológica.
Palavras-chave: β-glucosidases; delineamento composto central rotacional; otimização;
isoformas; Malbranchea Pulchella
Apoio Financeiro: CAPES; FAPESP
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"Genética de Microrganismos: Passado e Perspectivas"
40
GM12
ESTUDO DO EFEITO DA METILAÇÃO DO DNA NA ATIVIDADE
ENZIMÁTICA DO FUNGO HUMICOLA GRISEA VAR. THERMOIDEA
CULTIVADO EM DIFERENTES SUBSTRATOS
João Heitor Colombelli Manfrão Netto1; Márcio José Poças Fonseca1
1
Universidade de Brasília- UnB
Área de avaliação: Genética de microrganismos aplicada à Industria
Humicola grisea var. thermoidea é um ascomiceto termofílico com boa capacidade de
produzir enzimas lignocelulolíticas, principalmente celulases e xilanases. Esta característica
faz deste fungo um excelente candidato para utilização na bioconversão de resíduos
agrícolas. Estas enzimas têm a capacidade de degradar a biomassa, liberando os
monômeros de glicose e xilose que podem posteriormente ser utilizados em processos
fermentativos por outros microrganismos para produção de etanol de 2º geração. A
metilação de DNA é um mecanismo epigenético de regulação gênica que tem sido
amplamente estudado, sendo geralmente associado à repressão transcricional. A enzima
DNA metiltransferase (DNMT) é responsável por realizar a metilação do DNA, devido a isso
se torna um possível alvo para avaliar o efeito deste mecanismo em um determinado
organismo. Drogas que afetam as DNMTs são frequentemente utilizadas em estudos com
células de mamíferos e fungos patogênicos, porém pouco se sabe sobre seu efeito na
produção de enzimas lignocelulolíticas por fungos filamentosos. No presente trabalho nós
utilizamos a droga 5-aza-2’-deoxicitidina (5-aza), um inibidor da ação da DNMT, para avaliar
seu efeito na atividade enzimática do fungo H.grisea cultivado em diferentes substratos. 106
esporos/mL do fungo foram pré-inoculados em 250 mL de meio completo de Pontecorvo
suplementado com 1% de glicose e cultivados por 24h. Os micélios crescidos foram
filtrados, lavados com água estéril para remoção completa da glicose. 3 gramas do micélio
foram inoculados em 50 mL de meio mínimo suplementado com 1% (m/v) de
carboximetilcelulose, farelo de trigo (FT), feno, xilana beechwood e xilose; e em 0,1% de
bagaço de cana de açúcar explodido a vapor (BCA). Todos meios foram cultivados por 6
horas. As atividades das celulases e xilanases do sobrenadante foram determinadas por
ensaio colorimétrico utilizando o reagente DNS. Foi verificado um aumento da atividade de
CMCase nos resíduos do BCA e xilana e da atividade de xilanase nos resíduos de BCA,
CMC e feno. Nossos resultados indicam que a ação da DNMT está influenciando a atividade
destas enzimas, porém mais estudos são necessários para determinar se este efeito é via
metilação do DNA e desta forma impedindo a expressão dos genes destas enzimas, ou se a
DNMT está agindo nas próprias enzimas e dessa forma alterando sua atividade. Este
resultado preliminar sugere que a 5-aza pode ser para otimização da atividade enzimática
na conversão da biomassa.
Palavras-chave: Epigenética,metilação do DNA; fungos filamentosos; celulases; xilanases
Apoio Financeiro: Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAPDF); Conselho
Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)
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41
GM13
CONSTRUCTION OF RECOMBINANT Pseudomonas sp. CAPABLE
TO TRANSFORM XYLOSE TO BIODEGRADABLE POLYMER
Juan Camilo Roncallo Sarmiento1, Linda Priscila Guamán Bautista1, Luiziana Ferreira
da Silva1
1
ICB-USP, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo (Av. Prof. Lineu Prestes,
1374 – São Paulo – SP).
Área de avaliação: Genética de Microrganismos aplicada à Industria.
Polyhydroxyalkanoates (PHA) are biodegradable, biocompatible polymers and may be
produced from renewable raw materials. The high impact of the cost of the carbon source in
the polymer price has been one of the main limiting factors for the production of PHA and
agricultural waste, especially lignocellulosic materials, have been placed as an alternative.
Biomass hemicellulose hydrolysates generate high xylose content that can be used as raw
material for various bioproducts, especially considering that its fermentation to ethanol by
yeasts is not yet established efficiently. Pseudomonas sp. is capable of producing PHA with
varying monomer composition and controllable content, which confers wide variety of
applications. However, it has no natural ability to metabolize xylose thus, intended to express
xylose utilization genes encoding Weimberg pathway of Caulobacter crescentus. The
Pseudomonas strain of present study (LFM046) was isolated and used by the group as
platform in many others works. Flux Balance Analysis (FBA) was used to evaluate the
integration of the new catabolism pathway in the known core metabolism of the bacterium.
The regulation sequences, tac promoter and ribosome binding site (RBS) derivate from T7
bacteriophage (g10-L) with an Epsilon (Enhancer of Protein Synthesis Initiation), were
synthetized to be cloned in the pSEVA241 plasmid. The genes were inserted in cloning
vector pJET© (Thermo Scientific); subsequently were cloned under the control of regulation
sequences mentioned above. Also, constructions with the xylose genes of Burkholderia
sacchari, previously made by the group, were used to successfully transform Pseudomonas
sp. LFM046. The specific growth rate and PHA production of all the transformants will be
evaluated through rotary shaker cultures, comparing all data with assays using glycose as
sole carbon source to select the best strains. We expect, even with the yield decay
compared to the results obtained using glycose as sole carbon source, to obtain strains
capable of using xylose to support the entire metabolism, which in this case are the biomass
production and PHA accumulation.
Palavras-chave: PHA, xylose, transformation, cloning
Apoio financeiro: CNPq
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42
GM14
AVALIAÇÃO DO POTENCIAL BIOTECNOLÓGICO DE
LINHAGENS HALOTOLERANTES ISOLADAS DE
DUAS REGIÕES SALINAS DA CAATINGA
Maria Paula Parada Pinilla1, Maria Alejandra Ferreira Torres1, Juan Camilo Roncallo
Sarmiento1, Suikinai Nobre Santos2, Itamar Soares de Melo2, Gabriel Padilla
Maldonado1
1
Laboratório de Bioprodutos, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo.
Laboratório de Microbiologia Ambiental, Embrapa Meio Ambiente.
2
Área de avaliação: Genética de Microrganismos aplicada à Industria.
Os organismos extremófilos são considerados reservatórios de novas biomoléculas de
interesse biotecnológico, pelas características adaptativas que estes desenvolveram para
proliferar nos ambientes extremos. Dentro deste grupo encontram-se os microrganismos
halófilos que são aqueles que requerem altas concentrações de sal para crescer. Porém,
também existe outra classificação para aqueles microrganismos que não precisam de sal,
mas toleram altas concentrações de NaCl, estes são chamados de halotolerantes. Os
ambientes salinos provaram ser uma fonte rica de microrganismos produtores de novos
compostos naturais e portanto, a pesquisa nestes ambientes torna-se de grande
importância. No Brasil, em duas regiões salinas do bioma da caatinga foram isoladas de
locais semiáridos, bactérias halotolerantes com o objetivo de avaliar o potencial
biotecnológico delas na produção de novos metabolitos e polímeros naturais. Estes tipos de
moléculas podem ter aplicações inovadoras ou características diferentes às tradicionais. No
estudo foram realizados ensaios de atividade biológica e produção de metabolitos nos vinte
e seis isolados avaliados; o primeiro destes foi o teste de atividade antimicrobiana
observando que nove dos isolados apresentaram atividade contra E. coli, B. subtilis e S.
aureus. Por outra parte, sete dos isolados foram positivos no screening para produção de
polihidroxialcanoatos (PHA), a partir de meios com glicose e xilose como única fonte de
carbono, mostrando resultados promissores para utilização de carboidratos complexos de
difícil assimilação. Adicionalmente, será realizada a detecção da produção de
exopolissacarídeos como os solutos compatíveis, de grande interesse na indústria, e a
detecção dos genes responsáveis da síntese destes. Os vinte e seis isolados avaliados
foram parcialmente identificados no nível de gênero com base na análise da sequência do
gene 16s rRNA, sendo que 35 % pertencem ao gênero Bacillus, mostrando alta similaridade
com as espécies B. liqueniformis e B. endophyticus, espécies referidas como promotoras de
crescimento vegetal e produtoras de diversas enzimas, mas pouco descritas para produção
de metabolitos secundários, exopolissacarídeos e PHAs. Este é um dos primeiros estudos
que descrevem bactérias halotolerantes isoladas de solos semiáridos da caatinga,
produtoras potencias de metabolitos de interesse biotecnológico.
Palavras-chave: Ambientes extremos, bactérias halotolerantes, caatinga, bioprospecção de
moléculas
Apoio financeiro: CAPES
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43
GM15
AVALIAÇÃO DO PAPEL DE ATG8 E AMS1 SOBRE OS FATORES DE
VIRULÊNCIA E AUTOFAGIA DO PATÓGENO Cryptococcus
neoformans
Ricardo F. Lima1, Renata C. Pascon1, Marcelo A. Vallim1
1
Universidade Federal de São Paulo – UNIFESP
Área de avaliação: Genética de Microrganismos aplicada à Saúde
Cryptococcus neoformas é uma levedura ambiental oportunista encontrada principalmente
em madeira em decomposição e fezes de pombos. Essa levedura pode causar infecções
assintomáticas e em indivíduos imuno-suprimidos, portadores de AIDS ou sob tratamento
com quimioterápicos, pode evoluir para um quadro de pneumonia fúngica com posterior
comprometimento da meningite. Atualmente essa levedura é responsável por pelo menos
600 mil mortes por ano. Foi verificado em nosso laboratório que mutantes APE4 são
incapazes de crescer a 37°C e são avirulentos em modelo animal. Em S. cerevisiae este
gene está envolvido na via de Cvt (cytoplasm to vacuole). Esta via contém além de APE4 as
proteínas ATG19, ATG11, ATG8 e AMS1, das quais somente as últimas duas são
codificadas pelo genoma de C. neoformans. Em S. cerevisiae a proteína ATG8 (ubiquitinlike) é responsável pela formação das vesículas de pré-vacuolares e Cvt, AMS1 é uma
hidrolase que cliva resíduos de α1 -3 de manoproteínas no vacúolo. Assim, para aprofundar
os estudos da autofagia e via Cvt - e suas relações com os fatores de virulência de C.
neoformans esses dois genes foram deletados do genoma desta levedura. Após a
confirmação da obtenção dos mutantes atg8Δ e ams1Δ verificou-se o impacto da ausência
destas proteínas sobre os fatores de virulência: crescimento a 37°C, produção de capsula
polissacarídica, produção de fosfolipase B, produção de urease e produção de melanina. Foi
observado que os mutantes atg8∆ e ams1∆ apresentam apresentaram redução na produção
de capsula polissacarídica a 37°C. Ainda, foi acessado o padrão de expressão desses
genes por PCR em tempo real. Será testado o sinergismo da mutação com drogas
canônicas sobre o crescimento dos mutantes atg8Δ e ams1Δ empregando o E-TEST®.
Palavras chave: Cryptococcus neoformas; APE4, AMS1, ATG8, autofagia; Cvt.
Financiamento: FAPESP, CAPES
Departamento de Genética, ESALQ/USP - http://www.genetica.esalq.usp.br/32temas/
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GM16
ANÁLISE DAS PERMEASES DE METIONINA EM Cryptococcus
neoformans E SUA APLICABILIDADE COMO ALVO DE DROGAS
ANTIFÚNGICAS
Kevin Felipe Cruz Martho1, Marcelo Afonso Vallim1, Renata Castiglioni Pascon1
1
Universidade Federal de São Paulo, UNIFESP - campus Diadema, Diadema-SP, Brasil
Área de avaliação: Genética de Microrganismos aplicada à Saúde
O aumento da população imunocomprometida devido aos procedimentos médicos invasivos
e a alta incidência da AIDS se correlaciona ao aumento de infecções, dentre as quais se
destacam àquelas causadas por fungos oportunistas. As micoses profundas, que
predominam nestes quadros de imunossupressão, são difíceis de tratar devido ao pequeno
número de antifúngicos. Este fato está associado ao reduzido número de alvos moleculares
para o desenvolvimento de novos antifúngicos, pois o patógeno e o hospedeiro são
eucariotos. Cryptococcus neoformans é uma levedura oportunista que causa meningite, uma
doença com alta taxa de mortalidade. Além disso, é considerado um modelo para estudos
de virulência e patogênese, graças às características biológicas e os avanços tecnológicos
alcançados. A aquisição, síntese e reciclagem de nutrientes pela célula têm sido apontadas
como divergentes entre os eucariotos superiores e inferiores. O grupo de Cryptococcus do
LIMic-UNIFESP usa técnicas de manipulação genética para avaliar as vias de biossíntese e
assimilação de aminoácidos em C. neoformans, procurando entender as diferenças nestes
processos entre os organismos e avaliar a potencialidade das mesmas como alvo para o
desenvolvimento de antifúngicos. O grupo demonstrou que as vias de biossíntese de
metionina e triptofano são ótimos alvos. Neste trabalho foram estudadas duas permeases de
C. neoformans que tem similaridade de sequência às permeases de alta e baixa afinidade à
metionina de Saccharomyces cerevisiae (MUP1 e MUP3) com o objetivo de avaliar sua
utilidade como alvos de novos antifúngicos. A metodologia empregada é a deleção destes
genes separadamente e em conjunto (duplo mutante), avaliação fenotípica, sobrevivência in
vitro e in vivo, expressão de fatores de virulência e sinergismo aos antifúngicos usados na
clínica. Os resultados indicam que as mutações, tanto em separado, como o duplo mutante,
não causam grandes impactos na virulência, mas afetam a assimilação de alguns
aminoácidos como fonte única de nitrogênio, principalmente a 37 ºC.
Palavras-chave: Cryptococcus neoformans; permeases; antifúngicos; fatores de virulência.
Apoio Financeiro: FAPESP, CAPES
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GM17
PERMEASES TRANSPORTADORAS DE AMINOÁCIDOS DE
Cryptococcus neoformans: DELEÇÃO GÊNICA,
ANÁLISE FENOTÍPICA E VIRULÊNCIA
Amanda Teixeira de Melo1, Renata C Pascon1
1
Universidade Federal de São Paulo, Campus Diadema, Laboratório de Interações Microbianas,
Diadema, São Paulo
Área de avaliação: Genética de Microrganismos aplicada à Saúde
C. neoformans é uma levedura oportunista causadora da criptococose, uma infecção fúngica
invasiva de alta taxa de mortalidade e morbidade que acomete imunocomprometidos.
Requisitos nutricionais como, carbono, nitrogênio, fósforo, ferro, nucleotídeos e aminoácidos
já foram estudados e considerados relevantes sob a perspectiva da virulência e da
sobrevivência in vivo, sendo considerados como ótimos alvos para desenvolvimento de
antifúngicos. No que tange às vias de biossíntese de aminoácidos, o bloqueio em várias
delas leva à atenuação da virulência no modelo animal, sendo importante salientar que as
vias de síntese da treonina e do triptofano são essenciais nesta levedura. O grupo de
Cryptococcus do Laboratório de Interações Microbianas da UNIFESP demonstrou que uma
das razões para isso pode ser a baixa ocorrência de permeases captadoras de aminoácidos
codificadas pelo genoma (8 genes), bem como a baixa afinidade das mesmas pelo substrato
na temperatura de 30 ºC, o que parece ser uma peculiaridade dos Basidiomicetos, o que é
bastante diferente dos Ascomicetos. Ainda, destas 8 permeases, somente 6 são
efetivamente expressas, 3 sofrem repressão catabólica pela fonte preferencial de nitrogênio
e 4 tem indução de sua expressão na presença de aminoácidos. A hipótese a ser testada
neste trabalho é que os elementos genéticos que compõe o sistema de transporte de
aminoácidos podem ser bons alvos de drogas antifúngicas. Portanto, o objetivo deste estudo
é avaliar o papel das permeases AAP2, AAP4 e AAP5 na sobrevivência e na virulência de
C. neoformans. As três permeases foram individualmente deletadas do genoma de C.
neoformans sorotipo A (H99); os dados preliminares apontam que as deleções não alteram
a capacidade de expressar os fatores de virulência clássicos de C. neoformans
(termotolerância, melanina, fosfolipase B e cápsula), no entanto, o mutante aap2∆: Neo é
incapaz de usar L-Arginina como única fonte de nitrogênio. Os mutantes aap4D e aap5D
não apresentaram alteração fenotípica no crescimento ou na virulência, no entanto, o duplo
mutante (aap4D, aap5D) tem deficiências tanto no crescimento, quanto na virulência e na
capacidade de causar doença no modelo animal de invertebrado. Ainda, as permeases de
aminoácidos são o alvo molecular de um potente inibidor extraído de plantas da flora
brasileira, o eugenol, demonstrando o potencial de aplicação desta pesquisa.
Palavras-chave: Cryptococcus neoformans; permeases; aminoácidos.
Apoio Financeiro: Capes, CNPq
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GM18
CARACTERIZAÇÃO DAS ENZIMAS ANTRANILATO SINTASE
COMPONENTE II E TRIPTOFANO SINTASE DE
Cryptococcus neoformans
Crislaine Lambiase Calvete1, Martin Wurtele2, Renata Castiglioni Pascon3
1
2
Universidade de São Paulo, Universidade Federal de São Paulo – Campus São José dos Campos,
Universidade Federal de São Paulo – Campus Diadema.
3
Área de avaliação: Genética de Micro-organismos aplicada à Saúde
As infecções causadas por fungos, principalmente os gêneros Candida, Aspergilus e
Cryptococcus, estão em constante crescimento na população imunocomprometida devido à
incidência da AIDS, aumento de pacientes submetidos à quimioterapia tumoral e
transplantados. A espécie Cryptococcus neoformans é um patógeno oportunista humano
que causa meningite fúngica. Estima-se que existam mais de um milhão de casos de
criptococose em pacientes com AIDS no mundo e que esta doença é responsável por mais
de 600.000 óbitos/ano, o que é justificado pelas falhas terapêuticas devido ao surgimento de
resistência, inconstância no tratamento, etc. O aumento na incidência da doença estimulou
as pesquisas sobre a criptococose e seu agente causal, proporcionando o desenvolvimento
de ferramentas de biologia molecular para análise de genes relacionados a patogênese e à
virulência. As vias de biossíntese de aminoácidos representam ótimos alvos de novas
drogas antifúngicas para C. neoformans e como estas vias são inexistentes em mamíferos,
a expectativa é que fármacos dirigido a elas tenham boa toxicidade seletiva. Esta proposta
de trabalho tem foco sobre a via biossintética do triptofano. O grupo de Cryptoccocus do
Laboratório de Interações Microbianas da UNIFESP (LIMic-UNIFESP) comprovou que a
mesma é essencial em C. neoformans, dessa forma, inibidores que atuem sobre as enzimas
dessa via tem grande chance de sucesso terapêutico. Portanto, este projeto de mestrado
tem como objetivo expressar, purificar duas enzimas da via de biossíntese do triptofano
(TRP3 e TRP5), padronizar ensaios bioquímicos para testar inibidores das respectivas
enzimas, os quais já foram identificados; testar o sinergismo destes inibidores e a toxicidade
em macrófagos. Os resultados demonstram que ambas as proteínas foram expressas em E.
coli com sucesso e estão em fase de purificação. Espera-se que o desenvolvimento deste
projeto contribua de forma significativa para a identificação de novos tratamentos.
Palavras-chave: Biotecnologia; expressão gênica; Cryptococcus neoformans
Apoio financeiro: CAPES, FAPESP
Departamento de Genética, ESALQ/USP - http://www.genetica.esalq.usp.br/32temas/
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GM19
ELEMENTOS GENÉTICOS MÓVEIS NO
MICROBIOMA DE MANGUEZAIS
Filipe Rafael Salvetti Nunes1; Simone Raposo Cotta1; Fernando Dini Andreote1
1
Escola Superior de Agricultura "Luiz de Queiroz", USP - Departamento de Ciência do Solo
Área de avaliação: Genética de Microrganismos aplicada ao Meio Ambiente
Manguezais são ecossistemas de transição entre o ambiente marinho e terrestre de zonas
tropicais e intertropicais, sujeitos ao regime de marés. O Brasil é o segundo país com maior
área de manguezais do mundo, apresentando aproximadamente 1,2 mi ha. Trabalhos
recentes têm caracterizado a comunidade microbiana de sedimentos de manguezais, mas
pouco se conhece ainda da participação dos elementos genéticos móveis (EGMs) no
microbioma de tais comunidades. Os EGMs são fatores genéticos diretamente relacionados
com a transferência horizontal de genes (THG) e também desempenham papel na
modulação de genomas. Neste trabalho foram estudados os EGMs dos sedimentos de três
áreas de manguezais do estado de São Paulo, duas localizadas no município de Bertioga e
uma na reserva ambiental da Ilha do Cardoso, no município de Cananeia. Foram avaliadas
a presença e abundância de fagos, plasmídeos e transposons no microbioma dos
sedimentos dos manguezais a partir das sequências de metagenômica obtidas em trabalho
anterior e explorado o sequenciamento de uma biblioteca de fosmídeos, montada a partir de
DNA do sedimento de uma das áreas de Bertioga. As sequências de DNA totais dos
sedimentos foram extraídas em replicata por área e sequenciadas em equipamento Illumina
HiSeq2000. Foi realizado o controle de qualidade das sequências, que foram então
submetidas
à
anotação
automática
na
plataforma
do
MG-RAST
(http://metagenomics.anl.gov/). Para a biblioteca de fosmídeos, foi sequenciado um pool de
todos os clones em equipamento Illumina HiSeq 2000, as sequências da biblioteca
passaram por controle de qualidade e as sequências dos vetores foram removidas. Por fim
foram montados contigs na plataforma do CLC Genomics Workbench v.5.1 e anotados os
fagos e profagos utilizando o pipeline PHAST (http://phast.wishartlab.com/). A partir da
análise das sequências de metagenômica foi possível verificar que a participação dos EGMs
no metabolismo total do microbioma dos manguezais corresponde entre 5 - 16 % dos genes
preditos, sendo que fagos e profagos correspondem de 80 a 95 % dos genes associados a
EGMs em todas as amostras. Uma das áreas apresenta aumento na quantidade de ilhas
genômicas, provavelmente associada a um derramamento de petróleo ocorrido nessa área
do manguezal de Bertioga. A partir de contigs das sequências da biblioteca de fosmídeos,
foram anotados 5 profagos, inéditos na literatura. Outro trabalho em andamento deve
explorar os plasmídeos presentes nessas áreas.
Palavras-chave: Transferência horizontal de genes; petróleo; bacteriófago.
Apoio Financeiro: CNPq
Departamento de Genética, ESALQ/USP - http://www.genetica.esalq.usp.br/32temas/
32º ENCONTRO SOBRE TEMAS DE GENÉTICA E MELHORAMENTO / II Workshop de Biossegurança e Responsabilidade na Pesquisa
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GM20
CARACTERIZAÇÃO GENÉTICA DA FIXAÇÃO BIOLÓGICA DE
NITROGÊNIO EM Nostoc sp. CENA67
Bruno Costa Evangelista Souza1; Danillo Oliveira Alvarenga2; Alessandro de Mello
Varani3; Marli Fátima Fiore2
1
2
Escola Superior de Agricultura “Luiz de Queiroz”- USP, Centro de Energia Nuclear na Agricultura,
3
CENA, USP, Universidade Estadual Paulista Julio de Mesquita Filho, UNESP Jaboticabal
Área de avaliação: Genética de Microrganismos aplicada ao Meio Ambiente
As cianobactérias pertencentes à ordem Nostocales são capazes de realizar a fixação de
carbono e de nitrogênio simultaneamente. Além das células vegetativas onde ocorre a
fotossíntese aeróbica, estas cianobactérias possuem células especializadas, os heterócitos,
onde acontece a fixação de nitrogênio, o que cria uma separação espacial destes dois
importantes processos. O gênero Nostoc, pertencente à ordem Nostocales, família
Nostocaceae, apresenta ampla distribuição geográfica e já foi encontrado nos mais diversos
ambientes. Embora possua importância na formação de associações simbióticas e na sua
grande versatilidade metabólica, poucos genomas do gênero foram sequenciados.
Consequentemente, a genética de sua contribuição para a dinâmica de nitrogênio é pouco
compreendida. Neste estudo, tivemos como objetivo caracterizar os genes envolvidos com a
fixação biológica de nitrogênio no genoma da linhagem Nostoc sp. CENA67, isolada de terra
preta antropogênica do sítio arqueológico Hatahara, localizado 30 km a sudeste de ManausAM. Para tanto, a linhagem foi cultivada em meio AA/4, sob exposição à luz fluorescente
(40-50 µmol fótons•μm-2•s-1), com ciclo claro/escuro de 14/10h, a 25°C ± 1°C. O DNA
genômico foi extraído e foi construída uma biblioteca pareada para o sequenciamento do
genoma em aparelho MiSeq (Illumina). As leituras obtidas foram pré-processadas e triadas
com os programas PEAR 0.9.6 e Seqyclean 1.3.12 e foi feita a montagem do genoma com o
conjunto de dados processados com o programa SPAdes 3.1.1. A busca dos genes
relacionados à fixação de nitrogênio foi realizada usando a anotação automática com o
programa Prokka 1.8, anotação manual com o programa Artemis e a ferramenta BLAST
para realizar o alinhamento contra sequências gênicas depositadas no banco de dados do
National Center for Biotechnology Information. Por fim, análises filogenéticas foram
realizadas com o programa MrBayes. As análises realizadas identificaram 22 genes nif,
distribuídos em dois agrupamentos gênicos, separados por 7,3 Kpb. Também foram
encontrados os genes necessários à diferenciação de heterócitos. Os genes encontrados
apresentaram organização semelhante ao agrupamento da Nostoc punctiforme PCC 73102,
seguindo padrões filogenéticos semelhantes aos observados em avaliações taxonômicas.
Palavras-chave: Cianobactéria, genômica, heterócito, nitrogenases
Apoio Financeiro: FAPESP, Universidade Estadual de Feira de Santana
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"Genética de Microrganismos: Passado e Perspectivas"
49
GM21
CONSTRUÇÃO DE MUTANTE DE Methylobacterium Mesophilicum
SR1.6/6 DEFECTIVO NA
BIOSSÍNTESE DE HOPANÓIDES
Daiene Souza Santos1; Aline Aparecida Camargo das Neves1; Manuella Nóbrega
Dourado1; Jennifer Katherine Salguero-Londoño1; Welington Luiz de Araújo1
1
Universidade de São Paulo, USP, Dpto. de Microbiologia, Instituto de Ciências Biomédicas - ICBII
Área de avaliação: Genética de Microrganismos aplicada ao Meio Ambiente
Espécies de Methylobacterium apresentam inúmeros potenciais agrícolas e biotecnológicos
incluindo a indução do crescimento de plantas, a inibição de patógenos, redução do
estresse em plantas e degradação de compostos tóxicos. No entanto, os mecanismos
bioquímicos e moleculares envolvidos na interação entre Methylobacterium mesophilicum
SR1.6/6 e os seus hospedeiros não estão totalmente elucidados. Estudos anteriores
sugeriram que as moléculas de hopanóide estão envolvidas no processo de interação entre
bactérias e diferentes ambientes. Além disso, análises genômicas revelaram que a linhagem
SR1.6/6 apresenta no seu genoma a via biossintética completa destas moléculas. O gene
hpnI (que codifica uma glicosil-transferase) está provavelmente envolvido na fase final de
produção hopanóides, encontrados em diversos taxa bacterianos. Assim, este projeto se
propôs a obter mutantes defeituosos na síntese de hopanóides, a fim de identificar o papel
destas moléculas durante a interação de M. mesophilicum SR1.6/6 e a planta hospedeira. A
estratégia utilizada foi a combinação de produtos de PCR, um upstream "Up" (1148 bp) e
outro downstream "Down" (1164 pb) ao gene hpnI, por meio da técnica de Gibson Assembly.
As construções foram transformadas em E. coli S17-1 e transferidas para células de M.
mesophilicum SR1.6/6 por conjugação. Os clones foram selecionados em meio sólido
contendo canamicina. As colônias resistentes foram então cultivadas em meio sem
antibiótico, a fim de garantir a dupla recombinação, isto é, a mutação do gene alvo e a perda
de resistência à canamicina conferida pelo vetor. Por fim, as células bacterianas foram
semeadas em meio contendo sacarose, para resolver possíveis merodiplóides. Colônias
resistentes à sacarose também sensíveis à canamicina foram consideradas os mutantes
desejados. Os mutantes resultantes foram confirmados por PCR e sequenciamento. Foram
obtidos três mutantes do gene hpnI por tal método, o qual revelou uma excelente eficiência.
Uma vez que o papel dos hopanóides na interação entre bactérias e plantas pode estar
relacionado com a resistência de membrana bacteriana aos estresses ambientais, alguns
testes fisiológicos in vitro estão sendo conduzidos de modo a identificar os efeitos da
mutação sobre a membrana celular bacteriana. Subsequentemente, a capacidade de
colonização da superfície das raízes das plantas por M. mesophilicum SR1.6/6 defectivo na
biossíntese de hopanóide também será comparada à das células de tipo selvagem.
Palavras-chave: Methylobacterium mesophilicum; interação; Gibson Assembly; hopanóides.
Apoio Financeiro: CNPq, FAPESP.
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50
GM22
RECONSTITUIÇÃO E ANÁLISE DE UM GENOMA DA ORDEM
Bacillales, PROVENIENTE DE UMA BIBLIOTECA METAGENÔMICA
ORIGINADA DE UM CONSÓRCIO BACTERIANO DEGRADADOR DO
BAGAÇO DE CANA-DE-AÇÚCAR
Joana Gabriela Desiderato1; Milena Tavares de Lima1; Camila Cesário Fernandes1;
Lucia Maria Carareto Alves1; Alessandro de Mello Varani1
1
Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho", Departamento de Tecnologia, Campus
Jaboticabal, São Paulo, Brasil
Área de avaliação: Genética de Microrganismos aplicada ao Meio Ambiente
A desconstrução da lignocelulose e do amido pela ação dos microrganismos é um processo
essencial para o ciclo do carbono e para a conversão da biomassa em combustíveis ou
outros produtos químicos. A extensa variedade de carboidratos encontrados na parede
celular das plantas requer diferentes enzimas para sua degradação. A utilização de enzimas
relacionadas à degradação da lignocelulose é considerado um processo de alto custo,
inviabilizando sua utilização em larga escala. Neste sentido, os consórcios bacterianos
surgem com uma alternativa valiosa pela sua capacidade de desconstruir a lignocelulose.
Com o objetivo de identificar enzimas e microrganismos relacionados com a desconstrução
da biomassa, selecionamos um consórcio bacteriano eficiente na desconstrução da
lignocelulose, oriundo de solo contendo bagaço de cana-de-açúcar em decomposição. O
consórcio está sendo mantido no Laboratório de Bioquímica de Microrganismos e Plantas da
FCAV/UNESP desde 2011, em meio de cultivo contendo apenas bagaço de cana-de-açúcar
como fonte de carbono. Uma amostra do consórcio após 16 semanas de cultivo foi usada
para sequenciamento metagenômico. O DNA metagenômico foi sequenciado na plataforma
Illumina MiSeq, utilizando bibliotecas paired-end de 2x300pb em um total de 20 milhões de
reads. Os dados foram montados (de novo assembly) pela ferramenta SPAdes v3.5.0,
anotados e analisados pela ferramenta RAST (Rapid Annotation using Subsystem
Technology). Um total de 1.332 scaffolds representando 3.454.434 pb foram gerados e
anotados. Análises comparativas indicaram que 8 scaffolds (Tamanho total de 2,543,105 pb;
N50 1.325.331 pb e GC de 32.59%) correspondem a um genoma completo de um
microrganismo da ordem Bacillales. Este genoma reconstituído contém 2.455 genes, 59
tRNAs e duas cópias do operon ribosomal (5S, 16S e 23S). Análises comparativas da região
rDNA 16S e de genes housekeeping (dnaA, atpA, gyrA) indicam que este microrganismo
pertence ao gênero Staphylococcus. Genes relacionados a degradação da biomassa, como
por exemplo, alfa-glucosidase (EC 3.2.1.20) e beta-glucosidase (EC 3.2.1.86) foram
identificados e anotados. Com a finalidade de estudar os processos bioquímicos
relacionados com a degradação da biomassa realizados por este microrganismo, análises
in-silico utilizando as bases de dados Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) e
Clusters of Orthologous Groups (COG) foram realizadas.
Palavras-chave: bioenergia, lignocelulose, Staphylococcus, montagem e anotação genômica
Financiamento: CNPq (Projeto Universal N# 445994/2014-2)
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51
GM23
CARACTERIZAÇÃO DE UMA PECTINA LIASE PRODUZIDA PELO
FUNGO NEOSARTORYA GLABRA UTILIZANDO CASCA DE
MARACUJÁ COMO FONTE DE CARBONO.
Vanessa Elisa Pinheiro1; Carla Cristina Villela Desagiacomo1; João Atílio Jorge1; Maria
de Lourdes Teixeira de Moraes Polizeli1
1
Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, FMRP-USP
Área de avaliação: Outros
Pectinases são enzimas com considerável potencial de aplicação industrial. A pectina liase
(PL) catalisa a degradação da pectina na medida em que a quebra por clivagem transeliminativa. O objetivo deste trabalho foi caracterizar, quanto a temperatura, pH e efeito de
íons, uma PL em extrato bruto produzida pela fungo filamentoso Neosartorya glabra, o qual
foi recentemente descrito e com poucos estudos acerca dele. A incubação do microorganismo ocorreu nas condições padronizadas, FES utilizando casca de maracujá Azedo
(Passiflora edulis) como fonte de carbono, condição estática, 30°C, por 48 horas, 2 g de
fonte de carbono a cada 3 mL de água destilada. Para inóculo foi utilizado 1,0 mL de
solução de esporos de N. glabra em água destilada (aproximadamente 107/mL). A atividade
da PL foi determinada pela reação entre os produtos insaturados finais da degradação da
pectina e o ácido tiobarbitúrico. Obtido o extrato bruto, foram testados o efeito da
temperatura e pH ótimos da PL, os quais em extrato bruto foram 60°C e 5,5,
respectivamente. Foram feitos testes quanto a estabilidade, sendo que a enzima bruta
apresentou estabilidade térmica a 40°C por até 24 horas e mostrou–se mais estável em pH
3,5; 4,0 e 8,0 por até 180 minutos. Quanto ao efeito de íons, foram testados K+, Ba2+,
Co2+, Ca2+, Al3+, Mg2+, Na+, Zn2+, Cu2+, assim como os compostos β-mercaptoetanol e
EDTA. Foi visto que Ba2+ e K+ mostraram-se inibidores da atividade da PL, enquanto os
melhores íons para sua atividade foram Co2+, Ca2+, Na+, sendo o Co2+ aquele que mais
se destacou. A melhor concentração do Co2+ para a atividade da PL em extrato bruto não
dialisado foi 4 mM e para a enzima em extrato dialisado foi na faixa de 1,5 e 3 mM. A PL
bruta não dialisada, mostrou–se estável por até 24 horas a 60°C, e por até 240 minutos a
50°C com uma atividade residual maior que 500% a partir dos 180 minutos em ambas as
temperaturas. A enzima bruta dialisada, mostrou-se também mais estável a partir dos 180
minutos, sendo estável por até 24 horas a 60°C, com atividade residual de até 390%, ao
mesmo tempo em que mostrou-se estável a 40 e 50°C por até 240 minutos. Os resultados
indicam uma PL que necessita de co-fator, Co2+, para melhor desenvolver sua atividade, e
com promissora aplicação em processos industriais ácidos e levemente alcalinos, como por
exemplo, clarificação e redução de viscosidade em sucos de frutas cítricas, tratamento do
suco de uva para indústrias vinícolas, extração de polpa de tomate.
Palavras-chave: Pectina liase; Neosartorya glabra; maracujá; pectina; cobalto
Apoio financeiro: FAPESP; CNPq; CAPES
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52
GM24
IMOBILIZAÇÃO DE UMA GLUCOAMILASE DE
Aspergillus brasiliensis EM DEAE SEPHAROSE TRATADA COM
POLIETILENOGLICOL 4000
Paula Zaghetto de Almeida1, Marita Pereira Gimenez2, Paulo Ricardo Heinen1, Josana
Maria Messias1, João Atílio Jorge1, Maria de Lourdes Teixeira de Moraes Polizeli1
1
2
Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, FMRP-USP, Faculdade de Filosofia Ciências e Letras de
Ribeirão Preto, FFCLRP-USP.
Área de avaliação: Outros
As amilases apresentam grande potencial biotecnológico e são amplamente utilizadas nas
indústrias têxteis, de papel e celulose, detergentes, panificação, farmacêutica e de bebidas,
constituindo cerca de 30% do total de enzimas comercializadas. Glucoamilases (EC 3.2.1.3
glucan 1,4-alpha-glucosidase) são
exo-amilases que liberam monômeros de β-D-glucose
da extremidade não redutora do amido. Enzimas imobilizadas, em geral, possuem potencial
industrial por terem maior estabilidade, pH e temperatura ótimos mais favoráveis. Permitem
ainda o reuso em mais de um processo e apresentam fácil separação do produto final. O
objetivo deste trabalho foi à imobilização de uma glucoamilase de Aspergillus brasiliensis em
DEAE sepharose e em agarose ativada com brometo de cianogênio - BrCN. Para a
imobilização, o extrato bruto foi obtido em fermentação submersa em meio SR, com
posterior clarificação em carvão ativado e imobilização em DEAE sepharose (1g de resina:
100 mL de extrato clarificado), com tratamento com polietilenoglicol 4000 (PEG 4000) 30%.
O derivado em BrCN foi considerado como controle, pois representa uma ligação covalente
unipontual que não altera as características nativas da enzima. A dosagem da amilase
ocorreu em tampão citrato de sódio 50 mM, pH 4,5, com amido 1%, a 65°C. Os açúcares
redutores formados foram quantificados por ácido dinitrosalicílico. Uma unidade de
atividade enzimática (U) foi definida como a quantidade de enzima necessária para liberar 1
μmol de açúcar redutor, por minuto, nas condições d e ensaio. Os resultados obtidos com o
derivado DEAE sepharose mostraram que 86% das proteínas foram adsorvidas e houve
superativação de 12 vezes na atividade enzimática. No derivado BrCN houve 56% de
adsorção das proteínas e a atividade diminuiu para 15% do extrato bruto. Com relação à
estabilidade térmica a 50°C, o derivado DEAE sepharose mostrou maior estabilidade, e o
derivado BrCN foi comparável à enzima livre. Já a 55°C o derivado BrCN foi 20% mais
estável que a enzima livre por 6h e o derivado DEAE sepharose em 4 h apresentou menos
40% da atividade inicial que a enzima livre. Após 10 ciclos de hidrólise a 50°C, por 5 min, o
derivado DEAE sepharose ainda manteve 69% da atividade inicial. Desta forma, o derivado
DEAE sepharose pode ser utilizado em processos industriais que exijam a recuperação e
reutilização da enzima.
Palavras-chave: Aspergillus brasiliensis, glucoamilase, imobilização.
Apoio financeiro: FAPESP, CNPq, CAPES
Departamento de Genética, ESALQ/USP - http://www.genetica.esalq.usp.br/32temas/
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53
GM25
NOVEL BIOSYNTHETIC GENE CLUSTER OF THE
PROTEASE INHIBITOR SPUMIGIN FROM
Sphaerospermopsis torques-reginae ITEP-024
Stella Thomaz de Lima1; Danillo Oliveira Alvarenga1; Augusto Etchegaray Junior2;
Alessandro de Mello Varani3; Marli Fátima Fiore1
1
CENA/USP – Centro de Energia Nuclear na Agricultura - Universidade de São Paulo,
Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho", Campus Jaboticabal, São Paulo, Brasil
2,3
Universidade
Área de avaliação: Outros
Cyanobacteria produce numerous and structurally diverse small peptides with remarkable
biological activity and potentially useful for the development of novel drugs, such as protease
inhibitors. Proteases are involved in a wide variety of physiological processes in the human
body, therefore the discovery of new protease inhibitors became an issue of great scientific
interest. Spumigins are tetrapeptides acting as protease inhibitors and they are the endproduct of a non-ribosomal pathway, a very diverse biosynthetic route of natural products
with a broad range of biological activities and pharmacological properties. In this work, the
gene cluster of new variants of the protease inhibitor spumigin is described from the genome
of the Brazilian cyanobacterial strain Sphaerospermopsis torques-reginae ITEP-024. Total
genomic DNA was extracted from ITEP-024 cells grown in flasks containing ASM-1 liquid
medium. A genomic library was constructed for sequencing in the MiSeq platform (Illumina)
at the Center of Functional Genomics Applied to Agriculture and Agroenergy, University of
São Paulo, Piracicaba-SP. The genome was assembled using the softwares SPAdes 3.5.0
and Platanus 1.2.1. Gene prediction and annotation was performed using Prokka 1.9,
Artemis Release 16.0.0 and antiSMASH 3.0.4. The final assembly contains 96 contigs in 85
scaffolds with a total size of 5,211,795 bp and an N50 value of 242,150. A total of 4,821
unique genes were predicted. Nine gene clusters related to the biosynthesis of secondary
metabolites were detected, of which a gene cluster containing an unusual mix of nonribosomal peptide synthetase and polyketide synthase matches spumigin. In comparison
with a previously reported spumigin gene cluster, the S. torques-reginae ITEP-024 spumigin
gene cluster has an extra gene that could be involved in the production of new variants. This
is the first genome from a cyanobacterium of the genus Sphaeropermopsis. This study of
spumigin gene cluster provides new insights into the biosynthesis of this molecule.
Palavras-chave: secondary metabolites, cyanobacteria, protease inhibitors.
Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq.
Departamento de Genética, ESALQ/USP - http://www.genetica.esalq.usp.br/32temas/
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54
GM26
AVALIAÇÃO DO DESENVOLVIMENTO DE FEIJÃO (Phaseolus
vulgaris) A PARTIR DE SEMENTES TRATADAS COM UM
COMPLEXO DE MICRO-ORGANISMOS
Matheus Silva Salomão1, Jorge Luiz Piedade Gabriel2, Salvatore De Angelis2, Mateus
Mondin1
1
CYNGELA-Cytogenomics and Epigenetics Laboratory, Departamento de Genética, Escola Superior
2
de Agricultura "Luiz de Queiroz", Universidade de São Paulo, Nell Agroquímica.
Área de avaliação: Outros
Os micro-organismos desempenham um papel central no desenvolvimento das plantas.
Alguns destes organismos são capazes de fixar nitrogênio atmosférico, enquanto outros
podem ter uma ação protetiva e ainda há aqueles que formam associações com as raízes
aumentando sua eficiência na captação de água e de nutrientes. Muitos destes organismos
já foram isolados, identificados e melhorados, sendo usados durante diferentes fases do
desenvolvimento da cultura para estimular o desenvolvimento das plantas. Entretanto, o uso
de micro-organismos isoladamente, embora produzam resultados positivos, não refletem o
ambiente real da interação micro-organismos plantas. Sendo assim, o desenvolvimento de
complexos de micro-organismos é interessante pois representa uma tentativa de simular o
complexo microambiente de interação entre os organismos e as plantas. Dentro deste
contexto, foi concebido um complexo de micro-organismos, contendo Bradyrhizobium elkanii
[SEMIA587 e SEMIA5019], Azospirillum brasilense [stripe BR11005], Bacillus subtilis,
Trichoderma harzianum [ESALQ-USP1306]. Este complexo foi aderido à semente de feijão
[Phaseolus vulgaris] através do uso de grafite. O material controle foram sementes não
tratadas. As sementes foram semeadas em vasos de 400 ml contendo vermiculita. A
germinação foi mais veloz nas sementes não-tratadas. Não houve diferença significativa
para os parâmetros peso de massa seca de raiz e parte aérea, comprimento e peso fresco
de raiz. O peso fresco da parte aérea foi maior nas sementes sem tratamento e não pode
ser tirado conclusões estatísticas para comprimento da parte aérea. Estes resultados
indicam que possivelmente houve interferência do tratamento das sementes sobre o
desenvolvimento das plantas. O menor desenvolvimento das plantas a partir de sementes
tratadas pode ser devido ao uso do grafite como aderente, que gerou uma capa rígida
restringindo o crescimento da plântula. Novos experimentos devem ser conduzidos para se
testar outros mecanismos de aderência do complexo às sementes, pois sabidamente estes
micro-organismos contribuem positivamente para o desenvolvimento das plantas.
Palavras-chave: Feijão, complexo microbiano, tratamento de semente, desenvolvimento,
produção
Apoio financeiro: Bolsa PET-Biotecnologia Agrícola
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GM27
OTIMIZAÇÃO DO MEIO DE CULTIVO ATRAVÉS DE
DELINEAMENTOS EXPERIMENTAIS PARA A PRODUÇÃO DE
MANANASE PELO FUNGO Malbranchea pulchella
Juliana da C. Infante de Marco1, Ana Claudia Vici1, Lummy Maria O. Monteiro1,
Edivaldo X. F. Filho2, João Atílio Jorge3, Maria de Lourdes T. M. Polizeli3
1
2
Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto - FMRP/USP, Departamento de Biologia Celular - UnB,
Faculdade de Filosofia Ciências e Letras de Ribeirão Preto - FFCLRP/USP.
3
Área de avaliação: Outros
A lignocelulose, principal componente da biomassa vegetal, representa uma importante
fonte de matéria orgânica renovável. Para que ocorra a completa degradação da biomassa
lignocelulósica são necessárias enzimas atuando sinergicamente. A busca por enzimas,
especialmente de origem microbiana, é cada vez maior devido às suas aplicações em uma
grande variedade de processos industriais. Desta maneira, o trabalho teve por objetivo
otimizar a produção de mananase por Malbranchea pulchella em diferentes fontes de
carbono. O cultivo do fungo foi realizado em meio mínimo líquido: KH2PO4 7,0 g/L; K2HPO4
2,0 g/L; MgSO4.7H2O 0,1 g/L; (NH4)2SO4 1,0 g/L; extrato de levedura 0,6 g/L, pH 7,0, com
1% de bagaço de cevada, bagaço de cana-de-açúcar ou cascas do grão da soja, durante 7
dias, 30ºC, 120 rpm. Em seguida, foi estudada a produção de mananase nos meios
Emerson e Lummy com cascas do grão da soja não tratada e pré-tratada, 40ºC, 180 rpm,
durante 7 dias. O melhor meio de cultivo foi otimizado utilizando a metodologia de PlackettBurman (PB 12) seguido de um planejamento fatorial completo 22 e análise de superfície de
resposta. O ensaio enzimático foi realizado com manana Locust Beam Gum 0,5% e os
açúcares redutores liberados foram determinados segundo Miller (1959), com ácido 3,5dinitro-salicílico. O melhor resultado para a produção enzimática foi utilizando cascas do
grão da soja (0,076 UI/mL), comparado aos resíduos de cana de açúcar e cevada. O cultivo
em meio Emerson apresentou melhor produção de mananase no 4° dia (0,173 UI/mL), com
cascas do grão da soja pré-tratada. A análise do PB 12 mostrou que, dentre os fatores
analisados, KH2PO4 e casca do grão da soja pré-tratada tiveram influência na secreção
enzimática, aumentando em 28% a atividade de mananase. O planejamento 22 revelou que
ambos os fatores tem efeito linear na produção de mananase, com nível de significância de
0,05 e R2 igual a 0,98. Na análise ANOVA o Fcalculado (44) foi maior que o Ftabelado (19),
o que demonstra que o experimento é estatisticamente válido e preditivo. O extrato bruto
teve maior atividade em pH 5,5 a 70ºC, com 0,271 UI/mL, porém quando a reação foi
incubada a 70 ºC na ausência de tampão foi possível obter um aumento 28% do máximo de
atividade. Dessa forma, através de delineamentos experimentais, foi possível otimizar a
produção enzimática por M. pulchella, um promissor produtor de mananases.
Palavras-chave: Malbranchea pulchella, casca do grão da soja, mananase.
Apoio financeiro: FAPESP, CNPq, CAPES
Departamento de Genética, ESALQ/USP - http://www.genetica.esalq.usp.br/32temas/
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56
Índice Remissivo
A
G
Aida Terezinha Santos Matsumura ......................... 29
Alessandro de Mello Varani .....................36, 48, 50, 53
Alexandre Martins Guimarães .................................. 29
Aline Aparecida Camargo das Neves ..................... 49
Amanda M. Teixeira ................................................... 26
Amanda Teixeira de Melo ................................... 24, 45
Ana Claudia Vici ................................................... 39, 55
Andréa Lima ................................................................ 20
Andressa Peres Bini .................................................. 38
Antonielle Vieira Monclaro ........................................ 37
Augusto Etchegaray Junior ....................................... 53
Gabriel Padilla Maldonado.........................................42
Giuliano Degrassi........................................................ 33
Guilherme Lima Recalde ...........................................37
Gustavo Borges Meirelles..........................................29
Gustavo H. Goldman .................................................. 18
H
Helen Alves Penha ..................................................... 36
I
B
Benjamin J. Philmus .................................................. 27
Brenda T. Shaffer ....................................................... 27
Bruna Durante Batista ............................................... 35
Bruno Costa Evangelista Souza .............................. 48
Ian T. Paulsen ............................................................. 27
Iashilei Cassieli Pasquini ...........................................36
Isabel Cristina Padula Paz.........................................29
Itamar Soares de Melo ............................................... 42
J
C
Camila Cesário Fernandes ....................................... 50
Carla Cristina Villela Desagiacomo ......................... 51
Carlos Alberto Labate ................................................ 38
Claudia Barros Monteiro-Vitorello ................ 31, 32, 34
Crislaine Lambiase Calvete ................................ 24, 46
D
Daiene Souza Santos ................................................ 49
Daniele Cristina Ferreira ........................................... 33
Danillo Oliveira Alvarenga ................................... 48, 53
E
Edivaldo Ximenes Ferreira Filho ........................ 37, 55
Edmar Chartone de Souza ....................................... 16
Emy Tiyo Mano ........................................................... 30
Estevão Henrique Cangussu de Souza .................. 36
F
Fabiano de Assis Gontijo .......................................... 26
Fernando Dini Andreote ...................................... 21, 47
Fernando L. Melo ....................................................... 22
Filipe Rafael Salvetti Nunes ...................................... 47
Jennifer Katherine Salguero-Londoño .....................49
Jennifer M. Clifford ...................................................... 27
Jéssica Alcimari Ferreira Mello .................................36
Jesus Aparecido Ferro ............................................... 36
Joana Gabriela Desiderato ........................................50
João Atílio Jorge ....................................... 39, 51, 52, 55
João Heitor Colombelli Manfrão Netto .....................40
João lúcio Azevedo..................................................... 35
Jorge Luiz Piedade Gabriel .......................................54
Josana Maria Messias................................................ 52
José Odair Pereira ...................................................... 17
Joyce E. Loper............................................................. 27
Juan Camilo Roncallo Sarmiento ....................... 41, 42
Juliana Benevenuto .................................................... 34
Juliana Conceição Infante de Marco ........................39
Juliana da C. Infante de Marco .................................55
Juliana M. Sciani ......................................................... 30
K
Karla Bianca de Almeida Lopes ................................33
Kevin Felipe Cruz Martho ..........................................44
Kevin Martho................................................................ 24
L
Léia Cecilia de Lima Fávaro ......................................19
Leila Priscila Peters .................................................... 32
Lilian Amorim ............................................................... 31
Linda Priscila Guamán Bautista ................................41
Lucia Maria Carareto Alves .......................................50
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32º ENCONTRO SOBRE TEMAS DE GENÉTICA E MELHORAMENTO / II Workshop de Biossegurança e Responsabilidade na Pesquisa
"Genética de Microrganismos: Passado e Perspectivas"
57
Luiziana Ferreira da Silva ......................................... 41
Lummy Maria O. Monteiro................................... 39, 55
P
M
Patricia Dayane Carvalho Schaker ..........................32
Paula Zaghetto de Almeida .......................................52
Paulo Ricardo Heinen ................................................ 52
Manuella Nóbrega Dourado ................................ 30, 49
Marcelo A. Vallim ......................................24, 26, 43, 44
Marcelo Gravina de Moraes...................................... 29
Marcia Eloisa da Silva ............................................... 29
Márcio José Poças Fonseca..................................... 40
Maria Alejandra Ferreira Torres ............................... 42
Maria Carolina Quecine ....................................... 35, 38
Maria de Lourdes T. M. Polizeli ...............39, 51, 52, 55
Maria Letícia Bonatelli ............................................... 38
Maria Paula Parada Pinilla ........................................ 42
Marita Gimenez Pereira............................................. 39
Marita Pereira Gimenez............................................. 52
Marli Fátima Fiore ................................................ 48, 53
Martin Wurtele............................................................. 46
Mateus Mondin ........................................................... 54
Matheus Silva Salomão ............................................. 54
Milena Tavares de Lima ............................................ 50
R
Renata C. Pascon ......................... 24, 26, 43, 44, 45, 46
Renata Hortêncio Ockner ..........................................35
Ricardo F. Lima ........................................................... 43
Rodrigo Mendes .......................................................... 23
S
Salvatore De Angelis .................................................. 54
Simone Raposo Cotta ................................................ 47
Stella Thomaz de Lima .............................................. 53
Suikinai Nobre Santos ................................................ 42
V
N
Natalia Mielnichuk ...................................................... 34
Natália Oliveira de Araujo ......................................... 34
Nathália de Moraes .................................................... 31
Valeria Carpentieri-Pipolo ..........................................33
Vanessa Elisa Pinheiro .............................................. 51
Virginia O. Stockwell................................................... 27
W
Welington L. Araújo ........................................ 25, 30, 49
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Homenagem à
Profª. Drª. Aline Aparecida Pizzirani-Kleiner
A Profª. Aline iniciou suas atividades como docente no Departamento de Genética da
ESALQ/USP em 1979. Foi responsável pela orientação de cerca de uma centena de
alunos de iniciação científica, mestrado e doutorado até seu falecimento em 2014.
Participou de vários programas de pós-graduação no Brasil incluindo, entre outros, os de
Genética e Melhoramento de Plantas e Microbiologia Agrícola (ESALQ/USP), Biologia
(UNESP, Rio Claro, SP) Biotecnologia (inter-unidades, USP) e Biotecnologia, Manaus,
AM (UFAM). Foi também responsável pela organização de muitas Reuniões Anuais de
Genética de Microrganismos (REGEM) realizadas em diferentes cidades brasileiras
contribuindo para o estabelecimento de novos núcleos de pesquisa em Genética de
Microrganismos em todo o Brasil.
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