The novel SAR-binding domain of
scaffold attachment factor A (SAF-A) is a
target in apoptotic nuclear breakdown
The EMBO Journal Vol. 16 No. 24 pp.7361-7371, 1997
Frank Göhring, Birgit L. Schwab,
Pierluigi Nicotera, Marcel Leist and
Frank O. Fackelmayer
Introdução





A arquitetura do núcleo é organizada por uma
proteína chamada “scaffold”.
A SAF-A interage especificamente com o DNA nas
regiões ricas em AT, SARs ou MARs.
Participa do empacotamento e processamento do
RNA, interagindo com ele.
A proteína possui um domínio de ligação para SAR e
um domínio de ligação para RNA, a RGG box.
A clivagem da SAF-A por caspases é um importante
passo na apoptose celular.
Resultados
Figura 1. Curso do tempo da
apoptose e da clivagem da
SAF-A.

Análise de células Jurkat em
diferentes tempos de incubação
com anticorpo anti-CD95.
Figura 2. Detecção da clivagem
de
SAF-A
apartir
de
visualização nuclear in vivo


O DNA celular foi marcado com
Hoechst 33258 e a SAF-A pode
ser visualizada por imunofluorescência.
Notar que o produto da clivagem
é solúvel (SAF-A*).
Figura 3. A clivagem de SAF-A
não altera sua associação
com particulas hnRNP.

O extrto total de células
apoptóticas e normais foi
analizado
em
gel
de
poliacrilamida e em Western
para verificar a evolução da
SAF-A na apoptose
Figura 4. A porção aminoterminal da SAF-A possui
um domínio de ligação
para SAR DNA.

Vários fragmentos derivados
da SAF-A foram construidos
afim de localizar o região
com o domínio de ligação ao
SAR DNA.
Figura 5. Mapeamento do
domínio de ligação ao
SAR DNA da SAF-A.

Construções
da
região
amino-terminal
foram
expressas em bacterias e
marcadas com ZZ ou 6X His.
Figura 7. A sequencia
espaçada de leucina é
essencial para atividade
de ligação ao DNA.

Fragmento N247 e versões
mutantes foram analizadas
quanto a atividade de
ligação ao DNA.
Discussão





A SAF-A parece ser a proteína ligante ao SAR mais
abundante no núcleo.
A clivagem da SAF-A por caspases ocasiona o colapso
na cromatina e a fragmentação nuclear.
A SAF-A não é a única proteína que se liga ao SAR no
DNA, não sendo a única responsável pela morfologia
apoptótica da célula.
Existem dois sítios de ligação para ácidos nucléicos
na SAF-A (RGG box e a porção amino terminal).
A porção amino terminal possui dois domínios para
SAR( aa 1-45 e aa 158-247).
Micrografia eletrônica da interação SAF-A
com SARs do DNA