XXV CONGRESSO BRASILEIRO DE ZOOTECNIA
ZOOTEC 2015
Dimensões Tecnológicas e Sociais da Zootecnia
Fortaleza – CE, 27 a 29 de maio de 2015
Efeito do detergente a base de dodecil sulfato de sódio (Equex® STM) na criopreservação de
sêmen de catetos (Pecari tajacu Linnaeus, 1758)1
The effects of sodium dodecyl sulfate (Equex®STM) on peccary (Pecari tajacu Linnaeus,
1758) sperm cryopreservation
Ana Liza Paz Souza2, Arthur Emannuel de Araújo Lago2, Luana Grasiele Pereira Bezerra2, Lívia
Batista Campos2, Alexandre Rodrigues Silva2
1
Parte da tese de doutorado do primeiro autor, financiada pela CAPES
Laboratório de Conservação de Germoplasma Animal (LCGA-UFERSA), Mossoró/RN, Brasil. e-mail:
[email protected]@hotmail.com
2
Resumo: Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos do Equex® STM, em diferentes concentrações,
sobre a viabilidade e longevidade espermática pós-descongelação do sêmen de catetos (Pecari tajacu). O
ejaculado de 12 animais foi coletado, avaliado e diluído em meio a base de Tris, contendo 10% do gel de
Aloe vera e 10% de gema de ovo, e 3% de glicerol, dividido em três alíquotas, sendo um grupo controle
(sem adição do aditivo), um com 0,5% e outro com 1% deste detergente. As amostras foram
criopreservadas, descongeladas após uma semana, e avaliadas para os mesmo testes do sêmen fresco além
do teste de termorresistência para avaliar a longevidade espermática pós-descongelação. O uso do Equex
não aumentou a longevidade da célula espermática de cateto, ocorrendo decréscimo gradual de sua
motilidade a partir dos 15 minutos pós-descongelação (P < 0,05), mantendo-as com valores aceitáveis
durante este período (26±5,5%, 30,2±5,6% e 21,7±6,4% nos grupos controle e com Equex a 0,5% e 1,0%,
respectivamente), não havendo diferença entre os tratamentos (P < 0,05). A ausência de efeito deste
detergente foi possivelmente devido ao uso do gel de Aloe vera com a gema de ovo tenha impossibilitado
a ação do Equex em solubilizar as proteínas da gema.
Palavras-chave: SDS, teste de termorresistência, criopreservação de sêmen
Abstract: This study aims to evaluate the Equex® STM effects, in different concentrations, on the post
thawing sperm viability and longevity of collared peccaries (Pecari tajacu) semen. The ejaculate of 12
animals collected, evaluated and diluted into an extender media based on TRIS, with egg-yolk and Aloe
vera gel at 10% each, and glycerol at 3%, divided in three aliquots, containing Equex® STM at 0.5%,
1%, and the control group (without Equex). Samples were cryopreserved, thawed after a week, and
evaluated for the same parameters of the fresh semen, as well as a thermal resistance test to evaluate
spermatic longevity post-thawing. The use of Equex did not increase sperm cell longevity of peccaries
post-thawing, keeping them within the acceptable percentage range during this period (26±5.5%,
30.2±5.6% e 21.7±6.4% in the control group, Equex 0.5% and 1.0%, respectively), with no difference
between treatments (P < 0.05). The absence of the effects of this detergent was possibly due to the
combination of Aloe vera gel with egg-yolk have unabled the Equex to have action on egg-yolk proteins
solubilisation, therefore more studies using different cryoprotectants is needed, since the cryoprotectant
effects of Equex is only seen in the presence of egg-yolk.
Keywords: SDS, thermal resistance test, sperm cryopreservation
Introdução
Devido ao alto valor comercial da carne e pele dos catetos no mercado nacional e internacional
(Gongora et al., 2014), tem crescido o interesse pela sua produção em cativeiro dada a adaptabilidade da
espécie a essa condição. Visando a melhoria da capacidade reprodutiva desta espécie, protocolos de
criopreservação de seus gametas vêm sendo estabelecidos. Para isso, com o intuito de evitar danos
causados pela formação de cristais de gelo durante este processo, substâncias são adicionadas ao meio
diluente para promover aumento da viabilidade espermática pós-descongelação. Em outras espécies, além
dos crioprotetores, vem sendo testado o uso de aditivos, como detergentes a base de dodecil sulfato de
sódio (SDS). O SDS protege a membrana plasmática do espermatozoide contra o choque térmico pelo
frio e as demais alterações promovidas pelo processo de criopreservação (Bittencourt et al., 2008)
melhorando os índices qualitativos, a sobrevivência, longevidade e fertilidade dos espermatozoides pós
Página - 1 - de 3
XXV CONGRESSO BRASILEIRO DE ZOOTECNIA
ZOOTEC 2015
Dimensões Tecnológicas e Sociais da Zootecnia
Fortaleza – CE, 27 a 29 de maio de 2015
descongelação (Maia et al., 2005). Dentre os detergentes comerciais utilizados, destaca-se o Equex® STM,
bastante utilizado em algumas espécies domésticas (Maia et al., 2005). Desta forma, este estudo teve
como objetivo avaliar os efeitos do Equex® STM, em diferentes concentrações, sobre a viabilidade e
longevidade espermática pós-descongelação do sêmen de catetos (Pecari tajacu).
Material e Métodos
Foram selecionados 12 catetos machos em idade fértil provenientes do Centro de Multiplicação de
Animais Silvestres (CEMAS-UFERSA), os quais foram submetidos a contenção física por puçá e
química por administração intravenosa de propofol (5 mg/Kg), mantidos no plano anestésico para
realização da eletroejaculação de acordo com o protocolo estabelecido por Castelo et al. (2010). O
ejaculado foi avaliado quanto a motilidade total pela análise computadorizada de sêmen (CASA),
viabilidade em esfregaço corado com azul de bromofenol, e integridade de membrana por fluorescência
utilizando iodeto de propídio e diacetato de carboxifluorosceína. Em seguida, os ejaculados foram
separadamente diluídos em meio a base de Tris, contendo 10% de gema de ovo e 10% do gel de Aloe vera
acrescido de 3% de glicerol e divididos em três alíquotas, onde uma foi destinada ao grupo controle sem a
adição do detergente e outras duas com as concentrações testadas do detergente Equex® STM (0,5 e
1,0%). As amostras foram submetidas a um protocolo de criopreservação estabelecido para a espécie
(Castelo et al. (2010). Após uma semana, as amostras foram descongeladas em banho-maria a 37°, e
mantidas a essa temperatura para a realização do teste de termorresistência no decorrer de 2 horas (0, 15,
30, 60, 90 e 120 minutos) onde foram realizadas as mesmas avaliações já descritas para o sêmen fresco.
Resultados e Discussão
As amostras de sêmen fresco apresentaram seus parâmetros dentro dos padrões normais para a
espécie (Castelo et al. 2010). Nas Tabelas 1 e 2, estão representados os resultados do teste de
termorresistência quanto à análise de motilidade total, viabilidade e integridade de membrana plasmática
no sêmen descongelado.
Tabela 1. Valores (média±E.P) de motilidade espermática total no sêmen descongelado de catetos (Pecari
tajacu) avaliado pela análise computadorizada (CASA), diluído em Tris Gema/Aloe vera, acrescido ou
não de Equex® STM, submetido ao teste de termorresistência por 120 minutos, (n=12).
Motilidade Total (%)*
Tempo de avaliação
Controle
Equex 0,5%
Equex 1,0%
0 min.
31,7±5,7a
26,9±5,7a
31,4±6,3a
a
a
15 min.
26±5,5
30,2±5,6
21,7±6,4b
b
b
30 min.
16,4±4,7
19,7±6,2
20,4±8,1c
c
c
60 min.
12,5±4,1
12,4±4,5
11,2±3,9d
d
d
90 min.
6,9±2,3
3,7±1,6
4,6±3,1e
e
e
120 min.
2,2±1,1
2,7±0,7
5,2±4,2f
a,b,c
Letras minúsculas indicam comparação entre linhas (P < 0,05);
* Não foram verificadas diferenças entre os tratamentos em nenhum dos tempos avaliados (P < 0,05).
De forma geral, o uso do detergente não aumentou a longevidade da célula espermática de cateto,
uma vez que a motilidade total começou a declinar a partir dos 15 minutos após a descongelação. Campos
et al. (2014) quando avaliaram a longevidade da célula espermática da mesma espécie sem o uso de
aditivos também descreveu que o tempo máximo para a utilização do sêmen da referida espécie seria de
15 minutos, sugerindo que os espermatozoides de catetos são sensíveis ao processo de criopreservação.
Conforme foi verificado neste trabalho, não houve diferença estatística entre os tratamentos
quanto aos parâmetros espermáticos em nenhum dos tempos avaliados, demonstrando que a adição do
Equex em qualquer concentração (0,5 ou 1,0%) não melhorou a qualidade da célula espermática. Estes
dados são diferentes daqueles relatados por Maia et al. (2005) que ao avaliarem o efeito de duas
concentrações de Equex (0,5 e 1,0%) no sêmen de carneiro, obtiveram efeito benéfico sobre a integridade
da membrana e a motilidade espermática após a descongelação em ambas concentrações.
Possivelmente, o uso do extrato de Aloe vera com a gema de ovo tenha impossibilitado a ação do
Equex em solubilizar as proteínas da gema fazendo-se necessário estudos com outros crioprotetores, visto
que o efeito crioprotetor do Equex só é visto na presença da gema do ovo e acredita-se ser exercida por
modificações das lipoproteínas da gema (Peña & Linde-Forsberg, 2000) e como a ação do extrato de
Página - 2 - de 3
XXV CONGRESSO BRASILEIRO DE ZOOTECNIA
ZOOTEC 2015
Dimensões Tecnológicas e Sociais da Zootecnia
Fortaleza – CE, 27 a 29 de maio de 2015
Aloe vera sobre a célula espermática ainda não é conhecido a sua presença pode ter interferido direta ou
indiretamente na ação do Equex.
Tabela 2. Valores (média±E.P) de viabilidade e integridade de membrana verificados no sêmen
descongelado de catetos (Pecari tajacu) diluído em Tris gema/Aloe vera, acrescida de diferentes
concentrações (0, 0,5 ou 1,0%) de detergente a base de dodecil sulfato de sódio (Equex® STM Paste),
submetido ao teste de termorresistência por 120 minutos, (n=12)
Viabilidade espermática (%)
Integridade de membrana (%)
E 0%
E 0,5%
E 1,0%
E 0%
E 0,5%
E 1,0%
0 min.
31,4±5,9aA
29,9±3,9aA
33,9±4,5aA
31,4±5,9aA
29,9±3,9aA
33,9±4,5aA
15 min.
24,7±4,7abA
21,9±3,3bA
25,3±5,1bA
33,8±7,2bA
26,6±3,7bAB
37,4±5,3bB
bA
bA
bA
bA
bA
30 min.
17,9±4,7
18,6±2,6
23±6,0
24,7±4,7
21,9±3,3
25,3±5,1bA
bcA
bA
cA
cA
cA
60 min.
16,3±5,4
17±2,6
13,7±3,4
17,9±4,7
18,6±2,6
23±6,0cA
bA
cA
cdA
cA
dA
90 min.
9,6±1,6
9±1,5
15,6±5,7
16,3±5,4
17±2,6
13,7±3,4cA
cA
cA
dA
cA
dB
120 min.
7,2±2,2
6,8±1,4
10,2±3,6
9,6±1,6
9±1,5
15,6±5,7dAB
a,b,c
Letras minúsculas indicam comparações entre linhas (P < 0,05); A,B Letras maiúsculas indicam
diferenças entre colunas (P < 0,05).
Conclusões
Diante dos dados observados conclui-se que, nas concentrações testadas, a adição do detergente
Equex® STM ao diluente Tris - Gema/Aloe vera no sêmen de catetos (Pecari tajacu) não promove
benefícios relativos ao aumento da longevidade da célula espermática.
Literatura citada
Bittencourt, R.F.; Ribeiro Filho, A.L.; Lima, M.C.C.; Alves, S.G.G.; Vasconcelos, M.F.; Biscarde, C.E.;
Leal, L.S.; Oba, E. Efeito de um quelante de cálcio, um detergente e da lecitina de soja sobre a
qualidade do sêmen caprino congelado-descongelado. Braz. J. vet. Res. anim. Sci., São Paulo, v. 45, n.
4, p. 305-312, 2008.
Campos, L.B.; Silva, M.A.; Bezerra, J.A.B.; Castelo, T.S.; Peixoto, G.C.X.; Silva, A.R. Survival of
collared peccaries (pecari tajacu) sperm after freezingthawing using different extenders. Acta
Scientiae Veterinariae, 42: 1217, 2014.
Castelo, T.S.; Bezerra, F.S.B.; Souza, A.L.P.; Moreira, M.A.P.; Paula, V.V.; Oliveira, M.F.; Silva, A.R.
Influence of the thawing rate on the cryopreservation of semen from collared peccaries (Tayassu
tajacu) using Tris-based extenders. Theriogenology, V. 74 1060-1065, 2010a.
Gongora, J.; Biondo, C.; Cooper, J.D.; Taber, A.; Keuroghlian, A.; Altrichter, M.; Nascimento, F.F.;
Chong, A.Y.; Miyaki, C.Y.; Bodmer, R.; Mayor, P.; González, S. Revisiting the species status of
Pecari maximus van Roosmalen et al., 2007 (Mammalia) from the Brazilian Amazon. Bonn
zoological Bulletin, 60:95-101, 2011.
Peña, A.; Linde-forsberg, C. Effects of Equex, one- or two-step dilution, and two freezing and
thawing rates on post-thaw survival of dog spermatozoa. Theriogenology, v.54, p.859-875, 2000.
Maia, M. S.; Azevedo, H.C.; Bicudo, S.D.; Sousa, D.B.; Rodello, L. Efeito da adição do Equex-STM ao
diluente Tris-gema na motilidade do espermatozoide criopreservado de carneiro. Acta Scientiae
Veterinariae, v. 33, p. 311, Suplemento 1, 2005.
Página - 3 - de 3