Comparação entre sistemas automatizado e geladeira/vapor de nitrogênio
líquido na criopreservação do sêmen equino fresco e resfriado por 24h no
Brasil Central
Oliveira, R.A1.; Lima, S.F.L1.; Salvagni, C.A.2; Gambarini, M.L.1
1Laboratório
de Reprodução/Universidade Federal de Goiás, Bolsista do CNPq. e-mail: [email protected]; 2 M.V. autônomo
Os dados são apresentados como M±EPM, analisados com o programa
Biostat 2009, kruskall Wallis
INTRODUÇÃO
Na eqüinocultura mundial é cada vez mais crescente a utilização do
sêmen congelado nos criatórios, fato este que tem impulsionado pesquisas
voltadas a solucionar os problemas relativos ao seu uso, pois a viabilidade
e fertilidade dos espermatozóides são reduzidas em consequência de
lesões durante o processo de congelamento. A maior parte do sêmen
criopreservado fora de laboratórios de pesquisa e de centrais é processada
em sistema geladeira/vapor de nitrogênio líquido (NL). Esta técnica é
viável, porém, de difícil padronização das curvas de refrigeração e de
congelamento, uma vez que diversos fatores contribuem para induzir a
variações como: marca e modelo da geladeira, tipo de caixa de isotérmica,
número de doses a serem congeladas e nível de NL. Objetivou-se com
esse trabalho avaliar a qualidade do sêmen de diferentes garanhões
congelados a fresco (FM) com a utilização da máquina TK3000 e após
resfriamento a 16°C por 24h em caixa isotérmica específica para transporte
de sêmen equino, comparando o método manual (RG) e automático (RM).
MATERIAL E MÉTODOS
5 garanhões (Quarto de milha, Árabe e Cruza Árabe)
(4-15 anos de idade; Goiânia/GO)
RESULTADOS
Os valores médios de motilidade total foram FM (54±2,3), RM (47±3,9)
(p>0,05) e RG (16±4,2), (p<0,05). Para vigor verificou-se 4 (FM), 3 (RM) e 3
(RG), (p>0,05). A coloração supravital (500 espermatozóides) mostrou 365±34
(FM), 318±55 (RM) e 189±38 (RG) de espermatozóides vivos, (p<0,05). Para
integridade de membrana plasmática verificou-se 31,3±4,9 (FM), 25,6±9,4 (RM)
(p>0,05) e 4,8±1,8 (RG) (p<0,05). Ao avaliar a integridade do acrossoma pela
coloração TBG foram encontrados 66,8±3,6% (FM), 71,2±2% (RM) e 68,8±3,1%
(RG) de espermatozóides com membrana íntegra, (p>0,05), inclusive para vivos
e mortos com acrossoma reagido e mortos com acrossoma íntegro.
Tabela 1 – Avaliações in vitro do sêmen criopreservado em diferentes protocolos,
com e sem resfriamento
TTM
Mot total
Vigor
Supravital
Hiposmótico
FM
RM
RG
54a
47a
16b
4a
3a
3ª
365a
318b
189c
31a
25a
4b
Int
acrossomal
66a
71a
68a
TTM = Tratamento;
3 colheitas em dias alternados após esgotamento das
reservas extragonadais
Letras diferentes na mesma coluna indicam diferença estatística
CONCLUSÃO
Congelamento (FM)
1:1 Botu-sêmen
O sistema automatizado de refrigeração e congelamento, de fabricação
nacional TK 3000, fisicamente atendeu às condições inerentes à
criopreservação do sêmen equino.
 600g/10min
Botucrio/0,5mL
TK 3000
O congelamento posterior a refrigeração por 24h a 16ºC com controle
automatizado mostrou resultados semelhantes à refrigeração em geladeira e
congelação em vapor de nitrogênio líqüido.
Resfriamento (RG e RM)
AGRADECIMENTOS
2:1 Botu-sêmen
TK congelação; Biotech Botucatu; Haras TGS, Haras Luar e Tree Ranch
RG – 5ºC/1h geladeira
6cm vapor NL/20min
RM – TK 3000
Descongelamento 37ºC/30s
Motilidade total
Vigor
Supravital
Integridade de Membrana plasmática (Hiposmótico)
Integridade de membrana acrossomal (Trypan
blue/giemsa)