O xilol é INFLAMÁVEL e NOCIVO. Possibilidade de risco de comprometimento da
fertilidade. Pode ser prejudicial para o feto. Nocivo por inalação e em contacto com a pele.
Irritante para as vias respiratórias e pele. Risco de lesões oculares graves. Conservar longe
de qualquer fonte de ignição – não fumar. Em caso de contacto com os olhos, lavar imediata
e abundantemente com água e consultar um médico. Usar vestuário de protecção, luvas e
equipamento de protecção para os olhos/face adequados. Em caso de acidente ou de
indisposição, consultar imediatamente um médico (mostrar-lhe o rótulo se possível).
A solução de hematoxilina de Mayer é TÓXICA. Tóxica em caso de ingestão. Irritante
para os olhos, vias respiratórias e pele. Em caso de contacto com os olhos, lavar imediata
e abundantemente com água e consultar um médico. Em caso de acidente ou de
indisposição, consultar imediatamente um médico (mostrar-lhe o rótulo se possível). Usar
vestuário de protecção e luvas adequadas. Órgãos alvo: Nervos e fígado.
As soluções de hematoxilina de Gill são NOCIVAS. Nocivas em caso de ingestão.
Irritantes para os olhos, vias respiratórias e pele. Em caso de contacto com os olhos, lavar
imediata e abundantemente com água e consultar um médico. Usar vestuário de protecção
adequado. Órgãos alvo: Fígado e rins.
COLORAÇÃO AMILÓIDE,
VERMELHO CONGO
ACCUSTAIN®
(Procedimento N.º HT60)
UTILIZAÇÃO PREVISTA
O kit de coloração amilóide, vermelho Congo da Sigma-Aldrich destina-se a ser
utilizado na determinação de amilóide nas secções tecidulares. Ambos os procedimentos
padrão e para microondas estão descritos. Os reagentes de coloração amilóide destinamse à “utilização em diagnóstico in vitro.”
O amilóide, um grupo de proteínas anormal de uma perturbação imunológica,
acumula-se entre as células parenquimatosas do tecido conjuntivo resultando na
amiloidose. É possível detectar a existência de amilóide no tecido utilizando vermelho
congo, um corante aniónico metacromático. Os métodos iniciais utilizando o vermelho
congo implicavam o exame das secções coradas com um microscópio polarizante.1 A
modificação de Puchtler, na qual se baseia o procedimento da Sigma-Aldrich, intensifica a
coloração com vermelho congo, utilizando um pré-tratamento do tecido com uma solução
alcalina de cloreto de sódio.2 Em seguida, a secção é avaliada com um microscópio de luz
ou microscópio polarizante.
É incluída uma técnica de coloração amilóide para a coloração rápida em fornos
microondas.3-5
Declarações de riscos e segurança da UE (Atenção: Ainda não foram realizados
todos os testes para estas substâncias)
A solução de cloreto de sódio alcoólica é ALTAMENTE INFLAMÁVEL e NOCIVA.
Altamente inflamável. Nociva por inalação, em contacto com a pele e em caso de ingestão.
Nociva: perigo de provocar danos graves na saúde por exposição prolongada através de
inalação, em contacto com a pele e em caso de ingestão. Manter o recipiente
adequadamente fechado. Conservar longe de qualquer fonte de ignição – não fumar. Usar
vestuário de protecção e luvas adequadas.
A solução de hidróxido de sódio é IRRITANTE. Irritante para os olhos e pele. Em caso
de contacto com os olhos, lavar imediata e abundantemente com água e consultar um médico.
A solução de vermelho Congo é ALTAMENTE INFLAMÁVEL e TÓXICA. Altamente
inflamável. Pode causar cancro. Nociva por inalação, em contacto com a pele e em caso
de ingestão. Nociva: possibilidade de efeitos irreversíveis por inalação, em contacto com a
pele e em caso de ingestão. Irritante para os olhos, vias respiratórias e pele. Conservar
longe de qualquer fonte de ignição – não fumar. Em caso de acidente ou de indisposição,
consultar imediatamente um médico (mostrar-lhe o rótulo se possível). Usar vestuário de
protecção e luvas adequadas. Limitada aos utilizadores profissionais. Atenção: Evitar a
exposição – obter instruções especiais antes da utilização.
O álcool reagente é ALTAMENTE INFLAMÁVEL e IRRITANTE. Altamente inflamável.
Irritante para os olhos, vias respiratórias e pele. Manter o recipiente adequadamente
fechado. Conservar longe de qualquer fonte de ignição – não fumar. Em caso de contacto
com os olhos, lavar imediata e abundantemente com água e consultar um médico. Usar
vestuário de protecção adequado.
O xilol é NOCIVO. Inflamável. Nocivo por inalação e em contacto com a pele. Irritante
para a pele. Evitar o contacto com os olhos.
A solução de hematoxilina de Mayer é NOCIVA. Nociva em caso de ingestão.
As soluções de hematoxilina de Gill são NOCIVAS. Nocivas em caso de ingestão.
Irritantes para os olhos, vias respiratórias e pele. Em caso de contacto com os olhos, lavar
imediata e abundantemente com água e consultar um médico. Usar vestuário de protecção
adequado.
REAGENTES
SOLUÇÃO DE CLORETO DE SÓDIO, ALCOÓLICO, N.º de Catálogo HT60-1
Álcool SD 3A, 80%, saturado com cloreto de sódio.
SOLUÇÃO DE HIDRÓXIDO DE SÓDIO, N.º de Catálogo HT60-2
Hidróxido de sódio, 1% (0,25 mol/L).
SOLUÇÃO DE VERMELHO CONGO, N.º de Catálogo HT60-3
Vermelho Congo (certificado), 0,2% em álcool SD 3A, 80% saturado com cloreto de sódio.
ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE:
Armazenar os reagentes de amilóide à temperatura ambiente (18–26°C). A solução de
vermelho Congo e a solução de cloreto de sódio, alcoólica, permanecem estáveis até ao
final do prazo de validade indicado nos rótulos.
A molaridade da solução de hidróxido de sódio poderá ser verificada através de um
procedimento de titulação.
A presença de um precipitado na solução de hidróxido de sódio, alcoólica ou na
solução de vermelho Congo não afecta a utilização.
PREPARAÇÃO:
A solução de hidróxido de sódio é fornecida pronta para ser utilizada.
A solução alcalina de cloreto de sódio é preparada adicionando 0,4 mL de solução de
hidróxido de sódio, N.º de Catálogo HT60-2 a 40 mL de solução de cloreto de sódio,
alcoólica, N.º de Catálogo HT60-1. Misturar imediatamente antes de se utilizar. Utilizar uma
vez e eliminar.
A solução alcalina de vermelho Congo é preparada adicionando 0,4 mL de solução de
hidróxido de sódio, N.º de Catálogo HT60-2 a 40 mL de solução de vermelho Congo, N.º
de Catálogo HT60-3. Filtrar a solução e utilizar no espaço de 15 minutos.
PROCEDIMENTO
COLHEITA DE AMOSTRAS:
Recomenda-se que a colheita de amostras seja realizada de acordo com o
documento M29-A2 da NCCLS. Nenhum método de teste conhecido poderá garantir
totalmente que as amostras sanguíneas ou de tecido não irão transmitir infecções. Por
essa razão, todos os derivados sanguíneos ou amostras de tecido deverão ser
considerados potencialmente infecciosos.
É possível utilizar lâminas de tecido embebidas em parafina fixadas em fluido de
Carnoy, álcool absoluto, solução de formalina, tamponada neutra a 10% ou solução de
Bouin.2 Cortar em secçõe de 6–12 microns. As secções mais finas poderão não revelar as
pequenas quantidades de depósitos amilóides e não apresentarão birrefringência.
PRECAUÇÕES:
Deverão ser aplicadas as precauções normais relativamente ao manuseamento de
reagentes laboratoriais. Eliminar os resíduos de acordo com todos os regulamentos locais,
estaduais, regionais ou nacionais. Consultar a ficha de dados de segurança dos materiais
para obter informações mais actualizadas sobre os riscos, perigos ou segurança.
As lâminas de controlo Amyloid TISSUE-TROL são lâminas de tecido humano
embebidas em parafina que contêm amilóide, pelo que devem ser consideradas como
potencialmente infecciosas.
MATERIAIS ESPECIAIS NECESSÁRIOS MAS NÃO FORNECIDOS:
As lâminas de controlo positivo, como as Sigma Amyloid TISSUE-TROL, N.º de Catálogo
A 2424, devem ser incluídas em cada execução
Solução de hematoxilina de Mayer ou
solução de hematoxilina N.º 3 de Gill
Xilol
Etanol, absoluto
Declarações de riscos e segurança dos EUA
A solução de cloreto de sódio alcoólica é INFLAMÁVEL e NOCIVA. Nociva por
inalação, em contacto com a pele e em caso de ingestão. Nociva: perigo de provocar danos
graves na saúde por exposição prolongada através de inalação, em contacto com a pele e
em caso de ingestão. Irritante para os olhos, vias respiratórias e pele. Manter o recipiente
adequadamente fechado. Conservar longe de qualquer fonte de ignição – não fumar. Em
caso de contacto com os olhos, lavar imediata e abundantemente com água e consultar
um médico. Usar vestuário de protecção e luvas adequadas.
A solução de hidróxido de sódio é CORROSIVA. Provoca queimaduras. Em caso de
contacto com os olhos, lavar imediata e abundantemente com água e consultar um médico.
Despir imediatamente todo o vestuário contaminado. Usar vestuário de protecção, luvas e
equipamento de protecção para os olhos/face adequados. Em caso de acidente ou de
indisposição, consultar imediatamente um médico (mostrar-lhe o rótulo se possível).
A solução de vermelho Congo é INFLAMÁVEL e TÓXICA. Altamente inflamável. Pode
causar cancro. Nociva por inalação, em contacto com a pele e em caso de ingestão.
Nociva: possibilidade de efeitos irreversíveis por inalação, em contacto com a pele e em
caso de ingestão. Irritante para os olhos, vias respiratórias e pele. Conservar longe de
qualquer fonte de ignição – não fumar. Em caso de acidente ou de indisposição, consultar
imediatamente um médico (mostrar-lhe o rótulo se possível). Usar vestuário de protecção,
luvas e equipamento de protecção para os olhos/face adequados. Limitada aos utilizadores
profissionais. Atenção: Evitar a exposição – obter instruções especiais antes da utilização.
O álcool reagente é INFLAMÁVEL e IRRITANTE. Irritante para os olhos, vias
respiratórias e pele. Manter o recipiente adequadamente fechado. Conservar longe de
qualquer fonte de ignição – não fumar. Em caso de contacto com os olhos, lavar imediata
e abundantemente com água e consultar um médico. Usar vestuário de protecção
adequado. Órgãos alvo: Nervos e fígado.
APENAS APLICÁVEL AO PROCEDIMENTO PARA MICROONDAS:
Forno microondas H2100 ACCUMATE™, N.º de Catálogo A 9084 (110 v), ou A 9209 (220 v)
Jarras de coloração, N.º de Catálogo S 5641
REAGENTES/EQUIPAMENTO OPCIONAIS:
Microscópio ou microscópio polarizante
NOTAS:
Se for utilizado o forno microondas H2100 da Sigma-Aldrich, consultar o Manual do
Utilizador para obter as instruções.
Recomenda-se vivamente a utilização de luz polarizada para a avaliação de depósitos
amilóides. A birrefringência verde maçã é considerada como uma característica específica
de amilóide.
A fixação prolongada em formalina poderá reduzir a intensidade da coloração do
vermelho Congo.7
O tecido fixado em álcool poderá produzir uma coloração mais intensa do amilóide em
relação ao tecido fixado em formalina.8
Os dados obtidos com este procedimento servem apenas para auxiliar o diagnóstico e
deverão ser analisados em conjunto com outros testes de diagnóstico ou informações clínicas.
1-PT
PROCEDIMENTO:
1. Desparafinar e hidratar em água desionizada.
2. Corar na Solução de Hematoxilina de Mayer durante 10 minutos.
OU
Solução de hematoxilina N.º 3 de Gill durante 3 minutos.
3. Lavar em água da torneira durante 5 minutos.
4. Colocar em solução alcalina de cloreto de sódio durante 20 minutos.
5. Realizar uma coloração em solução alcalina de vermelho Congo durante
20 minutos.6
6. Lavar em 3 banhos de etanol absoluto.
7. Limpar em xilol e montar. Examinar microscopicamente.
PROCEDIMENTO NO FORNO MICROONDAS H2100 ACCUMATE™:
1. Desparafinar e hidratar em água desionizada.
2. Colocar as lâminas em 40 mL de solução de hematoxilina N.º 3 de Gill, contida numa
jarra de Coplin plástica. Cobrir folgadamente a jarra com a tampa ou utilizar tampas
com orifícios perfurados.
3. Colocar no microondas a 800 watts durante 5 segundos.
4. Lavar bem em água corrente durante 1–2 minutos.
5. Colocar as lâminas em 40 mL de solução alcalina de cloreto de sódio, contida numa
jarra de Coplin plástica.
6. Colocar no microondas a 400 watts durante 20 segundos.
7. Colocar as lâminas directamente em 40 mL de solução alcalina de vermelho Congo,
contida numa jarra de Coplin plástica.
8. Colocar no microondas a 400 watts durante 30 segundos. Deixar incubar durante
5 minutos.
9. Lavar em três banhos de etanol absoluto.
10. Limpar em xilol e montar. Examinar microscopicamente.
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO
Amilóide – Vermelho a rosa-vermelho
Núcleos – Azuis
Fibras elásticas – Vermelho mais claro
Quando examinado com um microscópio polarizante, o amilóide apresenta uma
birrefringência verde maçã.
Se os resultados observados forem diferentes dos esperados, contactar a Assistência
Técnica da Sigma-Aldrich para mais informações.
BIBLIOGRAFIA
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Selected Histochemical and Histopathological Methods. Edited by SW Thompson,
Charles C. Thomas, Springfield (IL), 1966, pp 402–405
Theory and Practice of Histotechnology. Edited by DC Sheehan and BB Hrapchak, 2nd
ed. Mosby, St. Louis (MO), 1980, pp 177–178
Leong AS-Y, Milios J: Rapid immunoperoxidase staining of lymphocyte antigens using
microwave irradiation. J Pathol 148:183, 1986
Brinn NT: Rapid metallic histologic staining using the microwave oven. J Histotechnol
6:125, 1983
Valle S: Special stains in microwave oven. J Histotechnol 9:237, 1986
Theory and Practice of Histological Techniques. Edited by J D Bancroft and A Stevens,
Churchill Livingstone, New York (NY), 1977, p 129
Theory and Practice of Histological Techniques, 5th Edition, Bancroft JD, Gamble M,
Editors Churchill Livingstone, New York (NY), 2002, p 311
Humanson’s Animal Tissue Techniques, 5th Edition, Presnell JK and Schreibman MP,
Editors The John Hopkins University Press, Baltimore (MD), 1997, p 270
A Sigma-Aldrich, Inc. garante que os seus produtos estão em conformidade com as
informações contidas nesta e em outras publicações da Sigma-Aldrich. O comprador
deverá determinar a adequação do(s) produto(s) ao fim particular a que se destinam.
Poderão aplicar-se termos e condições adicionais. Consultar o verso da factura ou carta de
porte para mais informações sobre os termos e condições de venda adicionais.
Procedimento N.º HT60
Revisão Anterior: 2003-03
Revisto: 2003-09
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