Estimativa do número de células de uma colónia
Autores
Objectivo: estimar o número de células que constitui uma colónia, através do espalhamento à superfície e contagem de UFC
Metodologia: Para estimar o número de células que constituem uma colónia, foi efectuada a suspensão de uma colónia em 9mL de soluto de
Ringer. A partir dessa suspensão foram efectuadas seis diluições decimais sucessivas. Procedeu-se depois à inoculação por espalhamento de 0.1
mL de cada uma das três útlimas diluições (10-4, 10-5, 10-6) em meio Agar Nutritivo, uma caixa por diluição. As caixas inoculadas foram incubadas a
25ºC durante dois dias, após o que se procedeu à contagem de UFC nas caixas inoculadas. Com essas contagens, fez-se o cálculo do nº de UFC se
não existisse diluição e calculou-se a média desses valores (nº de UFC/0.1 mL da suspensão). Seguidamente, multiplicou-se este valor por 10 para
obter o nº de UFC/mL da suspensão. Finalmente, multiplicou-se o valor obtido por 9 para obter o número total de UFC na suspensão, ou seja, na
colónia que se utilizou para fazer a suspensão.
Resultados: Os resultados obtidos após contagem e os vários cálculos encontram-se na Tabela 1.
Tabela 1. Nº de UFC contadas em cada uma das três diluições inoculadas e resultados dos cálculos tendo em consideração a diluição e o volume inoculado.
nª UFC/0.1 mL nº UFC sem nª UFC/0.1 mL nº UFC sem nª UFC/0.1 mL nº UFC sem Média
nº UFC/mL da nº
-4
-5
-6
da diluição 10 diluição
da diluição 10 diluição
UFC/0.1 mL suspensão
UFC/colónia
Grupo da diluição 10 diluição
1
2
3
4
5
6
37
164
384
15
372
220
370000
1640000
3840000
150000
3720000
2200000
7
5
55
3
68
48
700000 ----500000
5500000
300000
6800000
4800000 -----
----4
16
1
28
4000000
16000000
1000000
28000000
-----
535000
2046667
8446667
483333
12840000
3500000
5350000
48150000 4.82
20466667 184200000 1.85
84466667 760200000 7.60
4833333
43500000 4.35
128400000 1155600000 1.16
35000000 315000000 3.15
×
×
×
×
×
×
Conclusão: De acordo com os resultados obtidos (Tabela 1) pode concluir-se que as colónias são constituídas por um enorme número de células,
que pode variar entre 43 milhões e cinquenta mil (grupo 4) a mais de mil milhões (grupo 5). Nos grupos 1 e 6, os resultados da diluição 10-6 não
foram considerados válidos por serem muito diferentes dos obtidos nas restantes diluições. De forma geral, e apesar da falta de experiência, dos
diferentes executantes e dos possíveis erros associados a estes dois factos, os resultados obtidos em diferentes diluições da mesma suspensão são
razoavelmente coerentes.
10
10
10
10
10
10
7
8
8
7
9
8