UBA III – Biologia Molecular
Aula Laboratorial 1
2013/2014
Maria José Correia
[email protected]
Sumário L1

Apresentação sucinta do programa das aulas
laboratoriais;

Segurança no laboratório

Introdução às técnicas básicas para o estudo
dos ácidos nucleicos

Isolamento e purificação de DNA
UBA-III Biologia Molecular 2013/2014
Programa
Aula Data
Tema
1
10/10
Introdução às técnicas básicas para o
estudo dos ácidos nucleicos.
2
17/10
Separação dos fragmentos de DNA
em gel de agarose e análise dos
resultados.
Ficha de avaliação
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Segurança no laboratório
 Regras
gerais:
 Nunca
COMER, BEBER, FUMAR, aplicar lentes
de contato ou cosméticos!
 Nunca
cheirar soluções ou reagentes
 Nunca
pipetar com a boca
 Lavar
as mãos antes de iniciar o trabalho
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Segurança no laboratório

Atitudes:

Usar o senso comum (a maioria dos acidentes de
laboratório começa com algo simples);

Estar consciente – conhecer os reagentes antes
de os usar (ler os rótulos, etc.)

Estar protegido – conhecer as práticas e
equipamentos que podem aumentar a proteção
(máscaras, luvas, etc.)
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Segurança no laboratório

Bancada:




As bancadas de trabalho devem ser mantidas
organizadas e limpas
Identificar todo o material utilizando para isso
marcadores de vidro apropriados
Os lixos devem ser perfeitamente identificados
O material de vidro estalado ou partido deve ser
imediatamente rejeitado
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Segurança no laboratório

Protecção pessoal:



Usar bata e manter os cabelos compridos
apanhados;
Usar a hotte sempre que necessário;
Antes de abandonar o laboratório , limpar a
bancada, retirar a bata e lavar as mãos.
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Instruções gerais



Ler os protocolos antes de cada aula prática
Seguir atentamente as instruções fornecidas
pelo docente antes de executar o trabalho
proposto
Depois de terminar o trabalho de cada aula
arrumar a bancada.
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Introdução às técnicas para
estudar os ácidos nucleicos

Manipulação de moléculas de DNA



Isolamento e purificação de DNA genómico
Separação em gel de agarose
Aplicações biotecnológicas
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Técnicas de extração de DNA
genómico

DNA




lise celular
libertação de todo o material
intracelular
precipitação de proteínas e
detritos celulares
purificação do DNA
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Lise celular



Lise mecânica/física

Homogenizador

Ultra-sonicador

French pressure cell press

Fervura e pressão osmótica
Lise alcalina

soluções fortemente alcalinas (de hidróxido de sódio)

SDS (dodecil sulfato de sódio)
Lise enzimática

Proteases

Rnases
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Precipitação diferencial

Fenol/Clorofórmio/Álcool isoamílico



Fenol e clorofórmio desnaturam as proteínas
Fase fenólica (proteínas em solução) separa-se da fase
aquosa (DNA)
Precipitação com etanol absoluto (ou
isopropanol)

Insolubilidade do DNA em etanol

Presença de catiões monovalentes
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Extração de ácidos nucleicos
amostras diversas
lise celular
Precipitação de proteínas
Precipitação de DNA
Ressuspensão do DNA em TE
(pH8.0) ou em água estéril
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