Proposta de Estágio 1: Purificação de minicírculos
Orientador: Professor Gabriel Monteiro e Miguel Prazeres
Número de alunos a receber: 1
Duração do estágio: A negociar (Entre 1 a 2 dois meses)
Breve descrição do estágio: Uma vacina de DNA permite a produção in vivo de um gene que
codifica um antigénio capaz de induzir imunidade num hospedeiro. O uso de plasmídeos como
vectores de transferência de genes é uma abordagem promissora para a administração segura
de DNA em vacinação preventiva e terapêutica. Os minicírculos são vectores derivados de
plasmídeos mais seguros e mais eficientes. A sua produção depende de sistemas E.
coli/plasmídeo capazes de permitir uma elevada produção e de recombinação do plasmídeo
parental em minicírculo e particularmente de sistemas de purificação eficazes.
O objectivo deste trabalho é a produção de minicírculos com rendimento e grau de pureza
elevados pela aprendizagem das técnicas de crescimento e indução de E. coli e de purificação
de plasmídeos baseadas na combinação de diferentes tipos de técnicas de cromatografia e
precipitação. Serão realizadas técnicas analíticas (p. ex. electroforese de DNA, PCR, HPLC) para
avaliar rendimento e pureza.
Localização: 7.º piso Torre Sul – Molecular Bioengineering group
Proposta de Estágio 1: Produção de proteínas recombinantes em estirpes de E. coli
Orientador: Professor Gabriel Monteiro e Miguel Prazeres
Número de alunos a receber: 1
Duração do estágio: A negociar (Entre 1 a 2 dois meses)
Breve descrição do estágio: As estirpes de E. coli actualmente usadas para a produção de
plasmídeos foram desenvolvidas para a produção de proteínas. No nosso laboratório
desenvolvemos várias estirpes com determinados genes mutados ou sobreexpressos
adaptadas à produção de plasmídeos.
A produção duma proteína recombinante dependente do número de cópias do
gene/plasmídeo existente na bactéria. Assim, neste projecto pretende-se determinar a
capacidade das estirpes optimizadas para a produção de plasmídeos, na produção de proteínas
recombinantes. Neste trabalho serão usadas técnicas de crescimento em bioreactor de E. coli,
purificação e quantificação de plasmídeo (p. ex. electroforese de DNA, PCR) e da proteína
repórter GFP (green fluorescente protein) que será quantificada por fluorimetria.
Localização: 7.º piso Torre Sul – Molecular Bioengineering group