Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento – MAPA
Secretaria de Defesa Agropecuária – SDA
Coordenação Geral de Apoio Laboratorial - CGAL
Manual de Métodos de Análises de Bebidas e Vinagres
Não alcoólicos
HIDROXIMETILFURFURAL
Método 23
1. MÉTODO
Espectrofotométrico
2. PRINCÍPIO
Fundamenta-se na reação de Hidroximetilfurfural com ácido barbitúrico e p-toluidina, formando
compostos de cor vermelha e determinado quantitativamente por colorimetria.
Hidroximetilfurfural é um aldeído cíclico formado por desidratação quando hexoses são
aquecidas.
3. MATERIAL
3.1. EQUIPAMENTOS
a) Espectrofotômetro
b) Banho-maria
c) Balança analítica.
3.2. REAGENTES E SOLUÇÕES
a) Hidroximetilfurfural p.a. (HMF).
b) Solução de ácido barbitúrico:
500 mg são adicionados em 70 mL de água destilada em balão volumétrico de 100 mL e
dissolvidos em banho de água quente. Após resfriar, completar o volume para 100 mL
com água destilada. Manter a solução em refrigerador
c) Solução de p-toluidina:
10 g de p-toluidina pura são transferidas com cerca de 50 mL de isopropanol para um
balão volumétrico de 100 mL, adicionar 10 mL de ácido acético glacial e completar o
volume para 100 mL com isopropanol. Manter a solução em refrigerador em frasco
âmbar. (validade 1 mês).
d) Solução padrão de hidroximetilfurfural (HMF):
Pesar 1 g de HMF p.a. e dissolver em 1000 ml de água destilada
e) Solução de acetaldeido 1%
f) Ácido acético glacial p.a.
g) Isopropanol p.a.
3.3. VIDRARIA E OUTROS MATERIAIS
a) Erlenmeyer de 25 mL
b) Tubo de ensaio graduado de 10 mL com tampa
c) Pipetas volumétricas de 1, 2, 5,10 e 15 mL.
d) Balão volumétrico de 25 e 100 mL
e) Cubeta de 1 cm de percurso ótico
f) Papel de filtro
4. PROCEDIMENTO
4.1. CURVA ANALÍTICA
Edição: 1
Revisão: 0
Página 1 de 3
Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento – MAPA
Secretaria de Defesa Agropecuária – SDA
Coordenação Geral de Apoio Laboratorial - CGAL
Manual de Métodos de Análises de Bebidas e Vinagres
Não alcoólicos
HIDROXIMETILFURFURAL
Método 23
Preparar soluções de HMF contendo 5; 10; 15; 20 e 30mg/L tomando respectivamente 1,0; 2,0
3,0, 4,0 e 6,0 mL da solução padrão de HMF em balão de 200 mL e completar com água
destilada.
Tomar 2 mL de cada uma destas soluções em tubos de ensaio de 10 mL. Para o branco pipetar 2
mL de água destilada. Adicionar 5 mL da solução de p-toluidina em cada tubo. Agitar. Para o
branco pipetar mais 1,0 mL de água e para os demais tubos adicionar 1,0 mL da solução de ácido
barbitúrico. Agitar e medir absorvância em 550 nm.
Construir a curva analítica colocando na abscissa as concentrações de HMF em mg/L e na
ordenada as absorvâncias obtidas.
4.2. NA AUSÊNCIA DE ÁCIDO SULFUROSO LIVRE
Pipetar 2 mL ou pesar 2 g da amostra, filtrá-la se necessário. Transferir para tubo de ensaio
graduado de 10 mL com tampa, completar o volume com água destilada recém fervida e
homogeneizar. Desta preparação, tomar 2 mL e passar para 2 tubos de ensaio de 10 mL, com
tampa, acrescentando 5 mL da solução de p-toluidina em cada um dos tubos. Agitar, colocar no
1º tubo (branco) 1 mL de água e, no 2º tubo, 1 mL da solução de ácido barbitúrico. Tampar e
agitar por inversão. A adição dos reagentes deve ser feita sucessivamente de 1-2 minutos. Fazer
a leitura em espectrofotômetro como na curva analítica. A absorvância atinge seu máximo de 3-4
minutos após a adição do ácido barbitúrico e depois cai rapidamente.O valor máximo é
considerado no cálculo.
4.3. NA PRESENÇA DE ÁCIDO SULFUROSO LIVRE
Caso a amostra contenha mais de 10 mg/L de ácido sulfuroso livre, pipetar 15 mL em
erlenmeyer de 25 mL e adicionar 2 mL da solução de acetaldeido 1%. Completar o volume com
água, filtrar se necessário. Pipetar 2 mL do suco diluído em dois tubos de ensaio de 10 mL com
tampa. Adicionar 5 mL da solução de p-toluidina em cada um dos tubos. Agitar, colocar no 1º
tubo (branco) 1 mL de água e, no 2º tubo, 1 mL da solução de ácido barbitúrico. Tampar e agitar
por inversão. Proceder como em 4.2.
Obs: Amostras concentradas deverão ser reconstituídas até a sua concentração original.
5. CÁLCULO E EXPRESSÃO DO RESULTADO:
A concentração de hidroximetilfurfural é expressa em mg/L para sucos e néctares e em mg/Kg
para sucos concentrados, sem decimais, pela fórmula:
C=
p ×V × f
v× E
Onde:
C = Concentração de HMF em mg/L.
p = Quantidade de hidroximetilfurfural obtida no gráfico padrão em mg.
V = Volume para o qual a solução original foi diluída.
v = Volume da solução diluída usada na determinação espectrofotométrica.
Edição: 1
Revisão: 0
Página 2 de 3
Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento – MAPA
Secretaria de Defesa Agropecuária – SDA
Coordenação Geral de Apoio Laboratorial - CGAL
Manual de Métodos de Análises de Bebidas e Vinagres
Não alcoólicos
HIDROXIMETILFURFURAL
Método 23
E = Volume da amostra originalmente tomado.
f = Fator de diluição.
Nota:
a) As soluções devem ser recém preparadas.
b) Amostras com mais de 30 mg/L de HMF devem ser diluídas convenientemente antes da
determinação.
REFERÊNCIA
International Federation of Fruit Juice Producers - IFU. 1974.
Edição: 1
Revisão: 0
Página 3 de 3