UNIVERSIDADE COMUNITÁRIA DA REGIÃO DE CHAPECÓ
ÁREA DE CIÊNCIAS DA SAÚDE
CURSO DE FARMÁCIA
TOXICOLOGIA II
PROF. GREICY MICHELLE M. CONTERATO
AVALIAÇÃO DO DANO OXIDATIVO À GLUTATIONA
 PREPARAR QUATRO TUBOS COM O MEIO DE INCUBAÇÃO, CONFORME A
TABELA ABAIXO IMPORTANTE: OBSERVAR A ORDEM DE PIPETAR NOS TUBOS!!!
TUBOS IDENTIFICAÇÃO
N°
1
2
3
4
GSH
H2O2
Acetato de chumbo
(AcPb)
Cloreto de cádmio
(CdCl2)
H2 O
(µl)
GSH
60 mM
(µl)
H2O2 75
Mm
(µl)
AcPb
0,5 mM
(µl)
CdCl2
0,5 mM
(µl)
760
560
360
TFK 1
M, pH
6,8
(µl)
240
240
240
200
200
200
----200
-----
-------400
------------
360
240
200
-----
-----
400
OBS: ORDEM PARA PIPETAR NOS TUBOS:
1°) TFK e H2O
2°) H2O2 OU AcPb OU CdCl2
3°) GSH
1.
2.
3.
4.
Após a adição de todos os reagentes, incubar os tubos à T ambiente por 15 minutos.
Durante a incubação, numerar mais 4 tubos: 1, 2, 3 e 4.
Pipetar nesses novos tubos 1 ml de DTNB diluído;
Em seguida, pipetar nesses novos tubos, 100 µL do meio que ficou incubado por 15
min. à T ambiente.
Depois disso, agitar e ler após 5 min.
Comprimento de onda: 412 nm
BRANCO (para zerar): DTNB