REFERÊNCIA RÁPIDA
GlobalFiler™ Express PCR Amplification Kit –
PCR Setup – Swab Substrate
Pub. No. 4481764 Rev. A Translated from English Publication Number 4477601 Rev. A
Observação: Para obter orientações de segurança e sobre riscos biológicos, consulte a seção “Segurança” de GlobalFiler™ Express PCR
Amplification Kit User Guide (Pub. no. 4477672). Para todos os produtos químicos, leia as Folhas de dados de segurança (FDSs) e siga
as instruções de manuseio. Use trajes, óculos e luvas de proteção.
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Visão geral do produto . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
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Pré-requisitos. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
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Orientações sobre a preparação das amostras . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
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Prepare o lisado da amostra (protocolo à temperatura ambiente) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1
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Prepare o lisado da amostra (protocolo aquecido) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
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Prepare as reações. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2
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Armazene o lisado da amostra . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
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Realize PCR e eletroforese capilar . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
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Garantia limitada do produto . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3
Visão geral do produto
O GlobalFiler™ Express Kit (Part no. 4476609 de 200 reações ou Part no. 4474665 de 1000 reações) é um ensaio multiplex de repetição
curta em tandem (STR) que amplifica 21 loci autossômicos do tipo STR, Amelogenina, 1 locus STR Y e 1 locus inserção/deleção Y
(Y indel). Ele é otimizado para permitir a amplificação direta dos seguintes tipos de amostras de fonte única:
• Amostras de sangue ou bucais coletadas em substratos tratados de papel (descrição na Referência rápida Pub. no. 4481773)
• Amostras de sangue ou bucais coletadas em substratos não tratados de papel com Prep-n-Go™ Buffer (descrição na Referência
rápida Pub. no. 4481782)
• Amostras bucais coletadas em substratos de cotonete e tratadas com Prep-n-Go™ Buffer (descrição nesta Referência rápida)
Pré-requisitos
Antes de iniciar, coloque este guia na área do laboratório onde são realizados os procedimentos de configuração do PCR.
Orientações sobre a preparação das amostras
• Retire cada ponta de cotonete da haste bucal antes da lise.
• Se estiver utilizando protocolo aquecido de lise, faça a lise de uma das seguintes formas:
– Tubos de 1,5 ml com um bloco de aquecimento (bloco de aquecimento a seco Scientific Select VWR® ou similar)
– 96-Well Deep-Well Plate (Part no. 4392904) com forno e adaptador de placa de metal (Robbins Scientific® Modelo 400
Incubadora de hibridização ou similar, Suporte tipo “benchtop” Agilent® para tubos/placas inferiores V (metal) de 200 µl
Part no. 410094 ou similar)
IMPORTANTE! Não utilize adaptador de placa de plástico.
• Para um desempenho ideal, recomenda-se lise de uma haste inteira. Para preservar a amostra, avalie a lise de meia haste.
Prepare o lisado da amostra (protocolo à temperatura ambiente)
1. Adicione 400 µl de Prep-n-Go™ Buffer (Part. no. 4471406) em tubos de 1,5 ml ou em poços apropriados de uma 96-Well
Deep-Well Plate (Part no. 4392904).
2. Coloque toda a ponta de cada haste em cada tubo ou poço e deixe-a repousar por 20 minutos à
temperatura ambiente (20 a 25 °C) para fazer o lise da amostra.
3. Após 20 minutos, transfira o lisado da amostra da placa de amostra para os tubos ou placas para armazenamento, e descarte a
placa de poços profundos com as pontas das hastes.
Observação: para minimizar o risco de contaminação, não remova as pontas das hastes da placa do lisado da amostra antes de
transferir o lisado.
4. Proceda para “Prepare as reações” na página 2 ou leia “Armazene o lisado da amostra” na página 3.
Prepare o lisado da amostra (protocolo aquecido)
Este protocolo pode melhorar o desempenho de amostras exigentes ou antigas.
1. Pré-aqueça o bloco de aquecimento a 90 °C ou o forno com adaptador de placa de metal a 99 °C.
2. Adicione 400 µl de Prep-n-Go™ Buffer (para hastes bucais Part. no. 4471406) em tubos de 1,5 ml ou em poços apropriados de
uma 96-Well Deep-Well Plate (Part no. 43929040).
3. Coloque toda a ponta de cada haste em cada tubo ou poço. Se estiver utilizando tubos, tampe os tubos. Deixe os tubos ou a placa
repousarem no forno ou bloco de aquecimento pré-aquecido por 20 minutos para fazer a lise da amostra.
4. Após 20 minutos, remova os tubos ou a placa de poços profundos do forno ou bloco de aquecimento.
5. Deixe o lisado repousar à temperatura ambiente por, pelo menos, 15 minutos para resfriar o lisado (para obter uma pipetagem
adequada).
6. Transfira o lisado da amostra dos tubos de 1,5 ml ou da placa da amostra para os tubos ou placas para armazenamento, e
descarte os tubos de 1,5 ml ou placa de poços profundos contendo as pontas das hastes.
Observação: para minimizar o risco de contaminação, não remova as pontas das hastes da placa do lisado da amostra antes de
transferir o lisado.
7. Proceda para a próxima seção para preparar as reações ou leia “Armazene o lisado da amostra” na página 3.
Prepare as reações
1. Adicione Prep-n-Go™ Buffer (Part no. 4471406) aos poços de controle na placa de reação:
Para estes poço(s) de uma MicroAmp® Optical 96-Well Reaction
Plate...
Adicione:
Controle negativo
3 µl de Prep-n-Go™ Buffer
Controle positivo
• Para 25 e 26 ciclos
0 µl de Prep-n-Go™ Buffer
• Para 27 ciclos
1 µl de Prep-n-Go™ Buffer
• Para 28 ciclos
2 µl de Prep-n-Go™ Buffer
2. Calcule o volume de cada componente necessário para preparar as reações, utilizando a tabela abaixo.
Componente da reação
Volume por reação
Master Mix
6,0 µl
Primer Set
6,0 µl
Observação: inclua reações adicionais aos seus cálculos para fornecer o volume excedente da perda que ocorre durante as
transferências de reagentes.
IMPORTANTE! Este kit foi otimizado para um volume de reação de 15-µl de PCR para superar a inibição da PCR esperada ao
amplificar amostras não purificadas. Utilizando um menor volume de reação de PCR pode reduzir a capacidade da química do
kit de gerar perfis completos de STR.
3. Prepare os reagentes. Descongele o Master Mix e o Primer Set, em seguida, submeta a vortex por 3 segundos e centrifugue
brevemente antes de abrir os tubos ou frascos.
IMPORTANTE! O descongelamento é necessário apenas durante a primeira utilização do kit. Após a primeira utilização, os reagentes
devem ser armazenados de 2 a 8 °C e, portanto, não necessitam descongelamento subsequente. Não recongele os reagentes.
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GlobalFiler™ Express PCR Amplification Kit – PCR Setup Swab Substrate Referência Rápida
4. Pipete os volumes necessários dos componentes em um tubo de polipropileno de tamanho adequado.
5. Submeta a mistura da reação a vortex por 3 segundos e, em seguida, centrifugue brevemente.
6. Acrescente 12 µl da mistura da reação em cada poço de reação de uma MicroAmp® Optical 96-Well Reaction Plate. O volume
final em cada poço deve ser de 15 µl (mistura da reação mais Prep-n-Go™ Buffer e lisado da amostra ou controle positivo).
7. Acrescente as amostras à placa de reação:
Para estes poço(s) de uma MicroAmp® Optical 96-Well Reaction
Plate...
Adicione:
Amostras de teste
3 µl de lisado da amostra
Controle positivo
• Para 25 e 26 ciclos
3 µl de Control DNA 007
• Para 27 ciclos
2 µl de Control DNA 007
• Para 28 ciclos
1 µl de Control DNA 007
Observação: os volumes de controle positivo são valores sugeridos e podem ser ajustados se as alturas de pico forem altas demais ou
baixas demais para o seu número otimizado de ciclo.
8. Vede a placa com MicroAmp® Clear Adhesive Film (Part no. 4306311) ou MicroAmp® Optical Adhesive Film (Part no. 4311971).
IMPORTANTE! Recomendamos filmes adesivos para a vedação da placa de forma a oferecer uma vedação consistente em todos
os poços e prevenir evaporação. Não utilize tampas que possam não oferecer uma vedação consistente em todos os poços.
IMPORTANTE! Se utilizar o termociclador 9700 com bloco de prata ou prata dourada, coloque um MicroAmp® Compression Pad
(Part no. 4312639) sobre a placa para oferecer prevenção adicional contra evaporação durante a termociclagem. O Veriti®
Thermal Cycler não requer plataforma de compressão.
9. Centrifugue a placa a 3000 rpm por, aproximadamente, 20 segundos em uma centrífuga de mesa com suporte para placas.
Armazene o lisado da amostra
Tampe os tubos de armazenamento do lisado da amostra ou vede a placa de armazenamento do lisado da amostra com MicroAmp®
Clear Adhesive Film.
Armazene o lisado da amostra conforme necessário:
Se estiver armazenando o lisado da
amostra por...
Coloque a...
<2 semanas
2 a 8 °C
>2 semanas
–15 a –25 °C
Estas recomendações de armazenamento estão preliminarmente pendentes dos resultados de estudos contínuos de estabilidade. Os
efeitos dos múltiplos ciclos de congelamento-descongelamento do lisado não foram avaliados por inteiro. Portanto, não são
recomendados múltiplos ciclos de congelamento-descongelamento.
Realize PCR e eletroforese capilar
Para realizar amplificação de PCR e eletroforese capilar (EC), leia GlobalFiler™ Express PCR Amplification Kit-PCR Amplification and CE
Quick Reference Card (Pub. no. 4481791) e GlobalFiler™ Express PCR Amplification Kit User Guide (Pub. no. 4477672).
Garantia limitada do produto
Life Technologies Corporation e ou sua(s) afiliada(s) garantem seus produtos conforme estabelecido nos Termos e Condições Gerais
de Venda da Life Technologies que se encontram no website da Life Technologies, no endereço www.lifetechnologies.com/
termsandconditions. Em caso de dúvidas, entre em contato com a Life Technologies em www.lifetechnologies.com/support.
GlobalFiler™ Express PCR Amplification Kit – PCR Setup Swab Substrate Referência Rápida
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Para uso forense e em testes de paternidade.
As informações deste guia estão sujeitas a alteração sem aviso.
RENÚNCIA: A LIFE TECHNOLOGIES CORPORATION E/OU SUA(S) AFILIADA(S) RENUNCIAM TODAS AS GARANTIAS RELATIVAS A ESTE DOCUMENTO, EXPRESSAS OU IMPLÍCITAS,
INCLUINDO, MAS NÃO SE LIMITANDO ÀS DE COMERCIALIZAÇÃO, ADEQUAÇÃO PARA UM DETERMINADO OBJETIVO OU NÃO VIOLAÇÃO. NA MEDIDA DO PERMITIDO PELA LEI, A LIFE
TECHNOLOGIES E/OU SUA(S) AFILIADA(S) NÃO DEVEM, EM NENHUMA HIPÓTESE, SER RESPONSABILIZADAS, SEJA POR CONTRATO, RESPONSABILIDADE CIVIL, GARANTIA OU SOB
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October 2012