NITROSILAÇÃO : UM NOVO MECANISMO
DE RESISTÊNCIA A INSULINA.
Aluno : Marco Antonio de Carvalho Filho
Orientador : Mário José Abdalla Saad
Departamento de Clinica Médica
FCM - UNICAMP
SÍNDROME METABÓLICA
PRESENÇA DE 3 OU MAIS
DOS CRITÉRIOS ABAIXO
• Obesidade abdominal: CA > 102 cm-homem
mulher
• Hipertrigliceridemia: > 150 mg/dL
• HDL < 40 mg/dL-homem e < 50 mg/dL-mulher
• PA > 130 / 85 mm Hg
• Glicose plasmática de jejum > 110 mg/dL
e
> 88
Captação de glicose (músculo e adipócitos)
Glicose
Captação de aminoácidos (todas as célula
Lipogênese
Insulina
S
-
Síntese de glicogênio (músculo e fígado)
S
Efeito anti-lipólise
S-S S-S
Lys
P
P
P
+
Diferenciação pré-adipócito
adipóc
Apoptose
Síntese protéica (todas as células)
Expressão gênica (todas as células)
Síntese de DNA (todas as células)
MECANISMO MOLECULAR DE AÇÃO DA INSULINA
insulina
subunidade a S
-
S-S
S
Glicose
S-S
GLUT 4
ATP
PO4
PO4
PO4
P
P
P
PO4
Glicose
subunidade b
TRANSPORTE
GLICOSE
IRS-1/2
PO4
PI 3
quinase
PO4
GLUT 4
AKT
SINT. DE GLICOGÊNIO
LIPOGÊNESE
ERA PRÉ-AGRICULTURA
Escassez de alimentos
Doenças infecciosas
Evolução da População Indígena na América
nos Séculos XVI e XVII
 México – 1519: 22.000.000 de nativos
1600: 1.000.000 de nativos
 Peru
– 1520: 9.000.000 de nativos
1620:
600.000 de nativos
Índios Pima - México
Índios Pima: EUA-Arizona
NITROSILAÇÃO
L - ARGININA
NIROSOTIOIS
GSNO
NO
NO - SINTASE
L - CITRULINA
MODULAÇÃO +
SNO
PROTEÍNA
PROTEÍNA
NITROSILAÇÃO SNO
( CISTEÍNA )
MODULAÇÃO –
OBJETIVOS
Investigar os efeitos de drogas doadoras de NO
(GSNO) no metabolismo de glicose, e Snitrosilação de proteínas da via de sinalização da
insulina em músculo isolado e tecido muscular
de ratos intactos.
Investigar se a iNOS , induzida em diversas
situações de resistência a insulina, está envolvida
com S-nitrosilação de proteínas da via de
sinalização de insulina e com resistência a ação
celular deste hormônio.
MATERIAIS E MÉTODOS
-Imunoblotting
-Biotinilação de nitrosocisteínas
RESULTADOS – MÚSCULO ISOLADO
S-NITROSILAÇÃO - IR
CAPTAÇÃO DE GLICOSE
C
GSNO
ATIVIDADE TIROSINA-QUINASE - IR
CONTROLE
INSULINA
-
+
-
+
-
+
-
+
-
-
+
GSNO
-
A
I
GSNO
I/A
-
SINALIZAÇÃO
SÍNTESE DE GLICOGÊNIO
CONTROLE
INSULINA
IR
IRS-1
INSULINA
-
+
-
+
-
+
-
+
-
+
GSNO
A
-
pAkt
-
+
GSNO
-
+
I
I/A
RESULTADOS – TECIDO MUSCULAR
kITT
S-NITROSILAÇÃO
C
GSNO
ATIVIDADE TIROSINA-QUINASE - IR
CONTROLE
-
I
A
GSNO
I/A
-
A
I
I/A
IR
QUANTIDADE DE PROTEÍNA – IRS-1
CONTROLE GSNO
C
GSNO
C
GSNO
SINALIZAÇÃO
IRS-1
CONTROLE
INSULINA
-
+
GSNO
-
+
IR
ATIVIDADE QUINASE - Akt
CONTROLE
IRS-1
C
Akt
pAkt
GSNO
INSULINA
-
+
GSNO
-
+
RESULTADOS – DIETA HIPERLIPÍDICA
kITT
S-NITROSILAÇÃO
C
DH
IR
CONTROLE
SINALIZAÇÃO
INSULINA
DH
DH
INSULINA
iNOS
DH
IRS-1
C
DH
Akt
+
+
C
DH
+
+
C
DH
+
+
IRS-1
IRS-1
C
DH
IR
C
C
C
DH
INSULINA
pAkt
RESULTADOS – ob/ob
kITT
S-NITROSILAÇÃO
C
ob/ob
SINALIZAÇÃO
ob/ob
ASO
INSULINA
ob/ob
ob/ob
ob/ob
ASO
+
+
+
C
ob/ob
ob/ob
ASO
+
+
+
C
ob/ob
ob/ob
ASO
+
+
+
IR
IR
C
C
C
ob/ob
ob/ob
ASO
ob/ob
ASO
INSULINA
iNOS
C
ob/ob
ob/ob
ASO
IRS-1
IRS-1
C
IRS-1
C
ob/ob
ob/ob
ob/ob
ASO
INSULINA
ob/ob
ASO
Akt
pAkt
RESULTADOS – iNOS-/- X LPS
kITT
S-NITROSILAÇÃO
C
LPS
SINALIZAÇÃO
iNOS-/- iNOS-/LPS
INSULINA
LPS
iNOS-/-
C
iNOS-/LPS
LPS
iNOS-/-
iNOS-/LPS
+
+
+
+
C
LPS
iNOS-/-
iNOS-/LPS
+
+
+
+
C
LPS
iNOS-/-
iNOS-/LPS
+
+
+
+
IR
IR
C
C
LPS
iNOS-/- iNOS-/LPS
INSULINA
iNOS
C
LPS
iNOS-/-
iNOS-/LPS
IRS-1
C
IRS-1
C
LPS
iNOS-/-
IRS-1
iNOS-/LPS
Akt
LPS
iNOS-/- iNOS-/LPS
INSULINA
pAkt
RESULTADOS – DIETA HIPERLIPÍDICA /
ROSIGLITAZONA
kITT
S-NITROSILAÇÃO
C
DH
SINALIZAÇÃO
ROSI
INSULINA
DH
ROSI
DH
+
+
C
DH
+
+
C
DH
+
+
ROSI
+
IR
IR
C
C
C
DH
ROSI
INSULINA
ROSI
+
iNOS
C
DH
ROSI
IRS-1
IRS-1
C
IRS-1
C
DH
DH
ROSI
INSULINA
ROSI
Akt
pAkt
ROSI
+
CONCLUSÃO
insulina
a S-
S
S-S S-S
RESISTÊNCIA A INSULINA
b
SNO
L - ARGININA
NO
NO - SINTASE
YMXM
IRS-1/2
SNO
Akt
SNO
L - CITRULINA