19.001 COMBINATION OF BORTEZOMIB AND RUXOLITINIB AS A POTENTIAL
THERAPEUTIC ALTERNATIVE FOR HIGH RISK MULTIPLE MYELOMA
PATIENTS
Oliveira, M. B. , Eugenio, A. I. P. , Alves, V. L. F. , Kimura, E. , Yamamoto, M. , Han, S. W. ,
Colleoni, G. W. B. ,
Departamento de Oncologia Clínica e Experimental - UNIFESP
Departamento de Biofísica - UNIFESP
Introducao:
The constitutive activation of JAK proteins has been demonstrated in multiple myeloma (MM) and
other cancers, promoting the survival and proliferation of tumor cells. Despite the absence of JAK1
and JAK2 mutations, the constitutive activation of JAK/STAT pathway by IL-6 in MM highlights this
pathway as potential therapeutic target in this still incurable disease.
Objetivos:
This project aims to evaluate JAK/STAT pathway gene expression profile by quantitative real time
PCR array in MM cell lines after and before in vitro treatment with one pan-JAK inhibitors (ruxolitinib)
and a NFkB inhibitor (bortezomib).
Metodos:
MM cell lines were cultivated and their JAK1 and TYK2 genes expression were analyzed by real
time PCR. U266 and RPMI-8226 cell lines present expression of both genes and were chosen for
the in vitro experiments with ruxolitinib, bortezomib and drugs combination, using concentrations
determined after IC50 estimation. FISH studies for 17p/TP53 showed that U266 has only one P53
allele whereas RPMI-8226 has both alleles. PCR array was performed for the wild type U266 and
RPMI-8226 cell lines and for both cell lines treated with a combination of bortezomib (15 nM) and
ruxolitinib (15 µM), in duplicates. We considered the arbitrary cut off of 35 cycles as loss of gene
expression. The value of the fold change (2- ΔΔCt) was calculated for all the genes and
analyses were performed in ExpressionSuite software.
Resultados:
For RPMI-8226 cell line, there was no statistically significant difference between bortezomib alone
and treatment with bortezomib/ruxolitinib combination, although both drugs were superior to
ruxolitinib alone (p <0.001 - one-way ANOVA followed by Bonferroni test). However, for the U266
cell line, there was a statistically significant difference between treatment with bortezomib alone and
the bortezomib/ruxolitinib combination (p <0.001 - one-way ANOVA followed by Bonferroni test).
The expression profile of the JAK/STAT pathway in the cell lines treated with drug combination,
when compared with the wild type cells lines, showed that many JAK/STAT, Ras/Raf/MAP kinase
and PI3K/Akt/mTOR pathways genes lost their expression. The genes that have lost their
expression are correlated with angiogenesis, cell proliferation, cell differentiation, regulation of
transcription, cell cycle progression, cell transformation, cell migration and protein stability.
Conclusão:
Besides JAK/STAT pathway, ruxolitinib was able to operate in different signaling pathways, such as
Ras/Raf/MAP kinase and PI3K/Akt/mTOR, and seems appealing to be tested in association with the
drug of choice for the first line treatment, i.e., bortezomib, offering an alternative for those patients
who do not respond to standard treatment or high risk patient harboring P53 deletion.
Apoio Financeiro:
Besides JAK/STAT pathway, ruxolitinib was able to operate in different signaling pathways, such as
Ras/Raf/MAP kinase and PI3K/Akt/mTOR, and seems appealing to be tested in association with the
drug of choice for the first line treatment, i.e., bortezomib, offering an alternative for those patients
who do not respond to standard treatment or high risk patient harboring P53 deletion.
Comitê de Ética:
Multiple myeloma cell lines were used in this project. No animals nor patients are involved in this
project.
19.002 Avaliação de mediadores inflamatórios e de apoptose em células
mesoteliais e/ou células neoplásicas expostas a partículas de talco
Marchi, E. , Teixeira, L. R. , Silva, B. R. , Silva, J. S. , Silva, C. S. R. , Alvarenga, V. A. ,
Antonangelo, L. , Suso, F. V. , Acencio, M. M. P. ,
Laboratório de Pleura - Divisão de Pneumologia - InCor HCFMUSP
LIM 03 - Departamento de Patologia - HCFMUSP
Introducao:
Pleurodese com talco é o método mais utilizado para prevenir o derrame pleural maligno
recidivante. Discute-se o papel da resposta inflamatória produzido pelas células pleurais mesoteliais
(CMP) e neoplásicas e a relação destas células com a eficácia de pleurodese induzida por talco.
Objetivos:
Determinar o papel das CMP e/ou células neoplásicas na fase inicial e regulação da resposta
inflamatória aguda após a instilação de talco.
Metodos:
Este estudo foi aprovado pelo comitê de ética (CAPPesq) sob o número 469.827. Foram utilizadas
culturas de CMP humana extraídas de líquidos pleurais transudativos e células de adenocarcinoma
adquiridas no banco de células ATCC (Lung Lewis Cancer - LLC). Culturas puras e mistas foram
divididos em 5 grupos: 100% de CMP, 100 % de LLC, 25 % de CMP + 75% de LLC, 50 % de cada
linhagem celular e 75% de CMP + 25% de LLC. Todos os grupos foram expostos a 48mg/cm2 de
talco durante 48 horas. Foram quantificadas as citocinas IL-6 e TNF-RI pela técnica de ELISA de
captura e os índices de apoptose pela técnica de imunofluorescência com Anexina V e Iodeto de
Propídeo avaliada por citometria de fluxo. Análise estatística: One Way Anova, p<0,05.
Resultados:
A produção de IL-6 e TNF-RI foi maior na cultura de 100% CMP diminuindo proporcionalmente com
a redução da percentagem deste tipo celular. As culturas que continha apenas LLC apresentaram
os menores níveis dessas citocinas. Por outro lado, a percentagem de apoptose foi mais evidente
nas culturas de 100 % LLC.
Conclusão:
O contato do talco com o mesotélio é fundamental para o início do processo inflamatório com
produção de mediadores que levam à inflamação e fibrose pleural. Além disso, o talco age
seletivamente com maiores taxas de apoptose em células neoplásicas. As células mesoteliais
desempenham um papel fundamental na iniciação e regulação da resposta inflamatória aguda no
espaço pleural após a instilação de talco. O talco induz a apoptose em células tumorais e inibe a
angiogênese, bem como promove ações menos agressivas nas células mesoteliais contribuindo
assim para um melhor controle do derrame pleural maligno.
Apoio Financeiro:
O contato do talco com o mesotélio é fundamental para o início do processo inflamatório com
produção de mediadores que levam à inflamação e fibrose pleural. Além disso, o talco age
seletivamente com maiores taxas de apoptose em células neoplásicas. As células mesoteliais
desempenham um papel fundamental na iniciação e regulação da resposta inflamatória aguda no
espaço pleural após a instilação de talco. O talco induz a apoptose em células tumorais e inibe a
angiogênese, bem como promove ações menos agressivas nas células mesoteliais contribuindo
assim para um melhor controle do derrame pleural maligno.
Comitê de Ética:
469.827
19.003 CARACTERIZAÇÃO DO PERFIL DE EXPRESSÃO GÊNICA DE CÉLULAS
ESTROMAIS DERIVADAS DE MEDULA ÓSSEA DE PACIENTES COM MIELOMA
MÚLTIPLO
Fernando, R. C. , Mazzotti, D. R. , Evangelista, A. F. , Carvalho, F. , Colleoni, G. W. B. ,
Oncologia Clínica e Experimental - UNIFESP
Molecular Core - AFIP
Centro de Pesquisa em Oncologia Molecular - HCBarretos
Introducao:
O mieloma múltiplo (MM) é uma neoplasia maligna de células B maduras, caracterizado pela
infiltração de plasmócitos clonais na medula óssea (MO), presença de paraproteína no soro e/ou na
urina, e danos teciduais relacionados à proliferação de plasmócitos, tais como, lesões osteolíticas.
Evidências crescentes apontam para o papel fundamental do microambiente tumoral (MAT) na
progressão de diversos tipos de câncer, incluindo o MM. Dentre as células do MAT, destacam-se as
células estromais (`bone marrow stromal cells`, BMSC), as quais, através de interações diretas e
indiretas, promovem a sobrevivência, proliferação, migração e resistência a drogas dos plasmócitos
clonais. Aparentemente, as BMSC de pacientes com MM (MM-BMSC) não compartilham as
mesmas alterações genéticas presentes nos plasmócitos tumorais, descartando a hipótese de um
progenitor comum. Desse modo, estudos visando à melhor compreensão da fisiopatologia do MM
se fazem necessários para a busca de novos biomarcadores e/ou alvos terapêuticos para essa
doença ainda incurável.
Objetivos:
O objetivo desse trabalho foi caracterizar o perfil de expressão gênica de MM-BMSC e de BMSC de
doadores normais (`normal donors`, ND-BMSC), com foco na busca de genes diferencialmente
expressos nesse importante componente do MAT.
Metodos:
Foram avaliados quatro pacientes recém-diagnosticados com MM (62, 63, 70 e 80 anos), admitidos
no Hospital São Paulo, e que não haviam recebido tratamento prévio com quimioterápicos,
corticosteroides ou bisfosfonatos. O grupo controle consistiu em quatro doadores saudáveis de MO,
não pareados por idade ou gênero com os pacientes. Os aspirados de MO foram coletados e
submetidos à sorting magnético, para separação das BMSC (CD105+), utilizando a metodologia
MACS (Miltenyi Biotec). As BMSC de ambos os grupos foram expandidas em cultura até se obter a
quantidade necessária (entre 1ª e 5ª passagem) para a extração de RNA e realização do
microarray (GeneChip® Human Exon 1.0, Affymetrix). O pré-processamento dos dados e a
identificação dos genes diferencialmente expressos foram realizados através do software
Altanalyze, utilizando o fold-change, em módulo, de 1,5, e p<0,05. A análise de enriquecimento
funcional foi realizada com auxílio do software Enrichr. As funções dos genes presentes nas vias e
processos biológicos de interesse foram analisadas com auxílio dos bancos de dados Gene e
GeneCards.
Resultados:
Foram encontrados 485 genes diferencialmente expressos nas MM-BMSC em relação às
ND-BMSC, sendo 279 genes com expressão aumentada e 206 com expressão reduzida. Dentre os
genes com expressão aumentada de maior importância, podemos citar genes pro-angiogênicos
(ANGPTL4, NRXN3 e CHI3L1) e genes relacionados à adesão e migração celular (TGFB2, CD36,
SHC3 e S100A6). Em relação aos genes com expressão diminuída, podemos citar genes
envolvidos com a matriz óssea (NPR3, TNFRSF19 e LRIG3), assim como genes relacionados com
a modulação do sistema imune (CXCL16, RASD1, GCH1, CD74 e IFI30).
Conclusão:
Os dados preliminares demonstram que as MM-BSMC possuem perfil de expressão gênica
diferente das ND-BMSC. As principais vias e processos biológicos encontrados parecem estar
relacionados, diretamente ou indiretamente, com a progressão do MM. Os genes, aqui identificados
como diferencialmente expressos, serão melhores avaliados em estudos de análise proteica.
Apoio Financeiro:
Os dados preliminares demonstram que as MM-BSMC possuem perfil de expressão gênica
diferente das ND-BMSC. As principais vias e processos biológicos encontrados parecem estar
relacionados, diretamente ou indiretamente, com a progressão do MM. Os genes, aqui identificados
como diferencialmente expressos, serão melhores avaliados em estudos de análise proteica.
Comitê de Ética:
CEP 195.791
19.004 Xenotransplante de linhagens celulares bioluminescentes em
camundongos imunodeficientes: Modelo para testes in vivo em Mieloma
Múltiplo
EugÊnio, A. I. P. , Fook, V. L. , Oliveira, M. B. , Porcionatto, M. , Strauss, B. , Zanatta, D. , Souza, L.
E. B. , Dreyfuss, J. , Colleoni, G. W. B. ,
Departamento de Oncologia Clínica e Experimental - UNIFESP/EPM
Laboratório de Vetores Virais - ICESP/USP
Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto - USP
Introducao:
Modelos in vitro envolvendo testes com drogas que atuam em várias vias celulares vem sendo
realizados na tentativa de encontrar novos alvos para tratamento do mieloma múltiplo (MM), doença
ainda considerada incurável. Assim, um modelo in vivo de xenotransplante capaz de reproduzir
aspectos relevantes da biologia do MM é necessário para validar os resultados obtidos com
linhagens celulares in vitro. A técnica de imagem por bioluminescência (BLI) é uma ferramenta
interessante para ser associada aos estudos in vivo. Baseia-se na captura de bioluminescência de
células transduzidas com o gene repórter da luciferase, que após a administração de luciferina,
emitem luz, captada pelo equipamento. A bioluminescência pode ser quantificada, sendo
equivalente à massa tumoral. Essa técnica agrega tecnologia de imagem aplicada à pesquisa
molecular em camundongos, possibilitando acesso dinâmico ao tumor antes e após a
administração de drogas antitumorais.
Objetivos:
Implantação de um modelo in vivo utilizando a técnica de BLI em camundongos imunodeficientes
como ferramenta para validar estudos in vitro envolvendo linhagens celulares de MM.
Metodos:
Linhagens celulares de MM (U266B1, SKO-007 e RPMI8226) foram transduzidas com o vetor
repórter da luciferase em plasmídeo pLenti PGK V5-LUC Puro, produzidos a partir das células 293T
(ou HEK) para criação de um banco de células bioluminescentes, e cultivadas com puromicina a
2µg/ml por aproximadamente três semanas. As linhagens transduzidas foram testadas, para avaliar
a expressão da luciferase, a partir do kit Luciferase Assay System no equipamento Victor Wallac.
Camundongos Balb/c nude, machos de 6 a 8 semanas, foram utilizados para o modelo de
xenotransplante subcutâneo. Os camundongos transplantados foram avaliados no equipamento
IVIS Kinetic para avaliar a pega do enxerto.
Resultados:
A análise da expressão da luciferase nas linhagens bioluminescentes RPMI8226-LUC,
U266B1-LUC e SKO-007-LUC foram 637.000 QuantLum, 11.510 QuantLum e 23.670 QuantLum,
valores muito superiores se comparados com as linhagens controle (não-transduzidas, 95
QuantLum, 25 QuantLum e 53 QuantLum), respectivamente. As linhagens também foram avaliadas
no equipamento IVIS Kinetic para captura da bioluminescência, sendo que novamente a
RPMI8226-LUC apresentou o melhor resultado de emissão de bioluminescência, sendo escolhida
para a próxima etapa do estudo. Inicialmente, seis camundongos nude foram injetados com 106
células tumorais humanas RPMI8226-LUC, com ou sem BME/matrigel, no flanco direito
subcutâneo. Não houve diferença estatisticamente significante na bioluminescência gerada pelos
animais injetados com ou sem BME/matrigel (Teste t, com p = 0.6923), durante 60 dias de
seguimento, sendo que, após 25 dias do xenotransplante, ambos os grupos apresentaram aumento
na quantidade de bioluminescência captada (Total flux > 1x108 fótons/s). Estabelecemos que esse
é o momento ideal para início de alguma intervenção terapêutica.
Conclusão:
Utilizando a metodologia descrita, obtivemos três linhagens geneticamente modificadas
bioluminescentes RPMI8226-LUC, U266B1-LUC e SKO-007-LUC, confirmadas por avaliação em
dois equipamentos diferentes. O xenotransplante em camundongos imunodeficientes foi
padronizado com a linhagem RPMI8226-LUC. O modelo será utilizado para avaliação de novas
drogas em combinação com o inibidor de NF-kappaB (bortezomibe) como opção para o tratamento
do mieloma.
Apoio Financeiro:
Utilizando a metodologia descrita, obtivemos três linhagens geneticamente modificadas
bioluminescentes RPMI8226-LUC, U266B1-LUC e SKO-007-LUC, confirmadas por avaliação em
dois equipamentos diferentes. O xenotransplante em camundongos imunodeficientes foi
padronizado com a linhagem RPMI8226-LUC. O modelo será utilizado para avaliação de novas
drogas em combinação com o inibidor de NF-kappaB (bortezomibe) como opção para o tratamento
do mieloma.
Comitê de Ética:
19.005 ATIVIDADE ANTIMUTAGÊNICA/MUTAGÊNICA DO NONI (Morinda
citrifolia L.) ATRAVÉS DO TESTE DO MICRONÚCLEO IN VIVO.
Torres, N. , Freitas, B. H. B. M. , Lisboa, E. M. J. , Albiero, L. R. , Ferreira, J. B. , Tominaga, W. M. ,
Sugui, M. M. ,
Curso de Graduação de Enfermagem - UFMT/SINOP
Introducao:
Atualmente o noni (Morinda citrifolia Linn) vem sendo empregado na medicina popular pelas suas
possíveis propriedades terapêuticas na prevenção de várias doenças, dentre elas o câncer. A fruta
apresenta em sua composição, constituintes com atividades biológicas, dentre elas compostos com
potencial quimiopreventivo. O uso indiscriminado deste produto natural é uma preocupação, tendo
em vista as lacunas encontradas na comprovação de sua segurança. Logo, estudos sobre a
antimutagenicidade e mutagenicidade do noni são extremamente relevantes para a saúde pública
em relação seu risco/benefício.
Objetivos:
Essa pesquisa teve como objetivo avaliar o efeito protetor do noni em células de medula óssea de
camundongos machos Swiss, na inibição da mutagenicidade induzida pelo agente alquilante
ciclofosfamida (CPA).
Metodos:
O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa Animal (CEPA)-UFMT, protocolo
no.23108.780795/12-8. Foram utilizados camundongos Swiss machos, com seis semanas de idade,
peso médio de 25g. A polpa do noni foi obtida através da fricção da fruta em uma peneira,
retirando-se a casca e as sementes. Já a polpa com semente foi obtida pela liquidificação da polpa
com a semente. Em seguida a polpa com a semente foi diluída com água filtrada na proporção 2:1
para facilitar o processo de gavagem. Os extratos foram armazenados a -20ºC e, no momento do
uso, descongelados em banho-maria a 30ºC. A dose administrada foi de 0,2 mL animal/dia. O teste
do micronúcleo in vivo foi utilizado para a avaliação do efeito antimutagênico/mutagênico do extrato
aquoso in natura do noni. Os animais (seis animais/grupo) foram tratados por 15 dias consecutivos
com extrato aquoso do noni ou água filtrada (via gavagem) e no 15º dia receberam
intraperitonealmente ciclofosfamifa (CPA, 25 mg/Kg) ou NaCl 0,9%, sendo sacrificados 24 horas
após o tratamento para avaliação da freqüência de eritrócitos policromáticos micronucleados
(MNPCE) em medula óssea. A análise estatística foi realizada pelo Teste do Qui-quadrado.
Resultados:
Os resultados obtidos mostram que o pré-tratamento com o extrato aquoso do noni, sob as
condições testadas, reduziu significativamente a frequência de MNPCE (polpa = 76% e polpa +
semente = 60%) induzida pela CPA, quando comparado com o grupo controle positivo. O grupo
tratado somente com a polpa não revelou efeito mutagênico. Todavia o grupo tratado com a polpa e
semente mostraram um aumento da frequência de MNPCE, quando comparado com o controle
negativo, afirmando a natureza bifuncional deste produto.
Conclusão:
O presente estudo identificou que ao extrato aquoso do noni possui compostos antimutagênicos,
com provável potencial quimiopreventivo contra substâncias genotóxicas, podendo atuar na
prevenção de danos ao DNA. Para garantir a segurança do uso do noni, futuros estudos devem ser
realizados para verificar o mecanismo de ação dos compostos isolados do noni na prevenção de
doenças.
Apoio Financeiro:
O presente estudo identificou que ao extrato aquoso do noni possui compostos antimutagênicos,
com provável potencial quimiopreventivo contra substâncias genotóxicas, podendo atuar na
prevenção de danos ao DNA. Para garantir a segurança do uso do noni, futuros estudos devem ser
realizados para verificar o mecanismo de ação dos compostos isolados do noni na prevenção de
doenças.
Comitê de Ética:
23108.780795/12-8
19.006
THE IMPACT OF 18F-FDG PET/CT IN THE INITIAL STAGING OF NON-SMALL
CELL LUNG CANCER PATIENTS: THE KEY TO IMPROVE PATIENT TREATMENT
Bretas, G. O. , Guedes, J. B. , Carvalho, F. M. C. , Viana, M. , Martins, F. P. , Mamede, M. ,
Centro de Tecnologia em Medicina Molecular - UFMG
Introducao:
Lung cancer leads the cause of cancer-related deaths in men and women around the world. The
most common is non-small cell lung cancer (NSCLC). Fast and accurate staging is essential for
choosing treatment for NSCLC. The positron emission tomography (PET) with fluorodeoxyglucose
(18F-FDG) can provide molecular and metabolic information, which acquired simultaneously with
computed tomography (CT), has proved to be a very useful tool in the cancer diagnosis and staging.
Identifying the stage of lung cancer is important to avoid unnecessary surgeries, reducing morbidity
and treatment costs. Recently, the Brazilian government has approved the use of this technology for
staging NSCLC in the National Health Insurance system (SUS), which opens the possibility to
improve NSCLC treatment.
Objetivos:
This study aims to examine the impact of 18F-FDG PET/CT in the initial evaluation of patients with
NSCLC in the Brazilian reality.
Metodos:
The study was approved by the Ethics Committee at the Federal University of Minas Gerais (COEP
&ndash; UFMG - 156.526). Twenty-six patients with histopathologic diagnosis of NSCLC were
included in our study. They underwent staging in two separated moments: first with morphological
images (x-ray and computed tomography scan) and after with 18F-FDG PET/CT. In patients with
suspected lymph node metastases, the confirmation was made by biopsy and histopatological
exam. The staging results were analyzed separately and then compared.
Resultados:
The performance of 18F-FDG PET/CT changed lymph node staging in around 30% of the patients
initially classified as potentially operable (stage N0, N1 and N2), with high sensitivity and negative
predictives values. Regarding the stage of metastasis, 18F-FDG PET/CT increased by 11.5% the
detection of metastasis not previously detected. About the clinical staging, using the 18F-FDG
PET/CT significantly reduced the number of patients classified as potentially operable in the early
stages, avoiding the use of unnecessary thoracotomies in 19.2% of patients.
Conclusão:
The metabolic-biochemical information obtained by 18F-FDG PET/CT demonstrated better accuracy
when comparated to anatomic methods in the detection of lymph node and distant metastases. By
changing the cancer stage, it has a direct impact on therapy strategy. In conclusion, we found that
adding a 18F-FDG PET/CT examination to the staging regimen for patients with NSCLC
improves sensitivity in pre-operative staging, avoiding unecessary thoracotomies, showing a
potential cost-effective technique in patients with NSCLC. The current findings came to corroborate
the inclusion of this technology in the Brazilian National Health Insurance system for patients with
NSCLC.
Apoio Financeiro:
The metabolic-biochemical information obtained by 18F-FDG PET/CT demonstrated better accuracy
when comparated to anatomic methods in the detection of lymph node and distant metastases. By
changing the cancer stage, it has a direct impact on therapy strategy. In conclusion, we found that
adding a 18F-FDG PET/CT examination to the staging regimen for patients with NSCLC
improves sensitivity in pre-operative staging, avoiding unecessary thoracotomies, showing a
potential cost-effective technique in patients with NSCLC. The current findings came to corroborate
the inclusion of this technology in the Brazilian National Health Insurance system for patients with
NSCLC.
Comitê de Ética:
COEP ? UFMG - 156.526
19.007
18F-FDG PET/CT IN EVALUATION THERAPEUTIC RESPONSE OF
NEOADJUVANT CHEMORADIATION IN PATIENTS WITH RECTAL CANCER: A
PROGNOSTIC MARKER
Fagundes, T. C. , Martins, F. P. , Silva, L. C. , Viana, M. , Bretas, G. O. , Júnior, E. P. , Mamede, M.
,
Centro de Tecnologia em Medicina Molecular - UFMG
Departamento Anatomia e Imagem - UFMG
Departamento Anatomia Patológica - UFMG
Introducao:
Rectal cancer is a neoplasm disease of global importance. Nowadays, the standard treatment for
locally advanced mid and low rectal cancer comprises combined modality with chemotherapy and
radiotherapy followed by radical surgery after six to eight weeks. The ability to predict responders
and non-responders from preoperative chemoradiation in rectal cancer by conventional imaging
(CT, ultrasound, MR) alone or in combination is a difficult task before the histopathological analysis
of the surgical specimen. The use of 18F-FDG PET/CT has been proposed in studies worldwide for
the purpose of assessing response noninvasively through anatomical and molecular analyses. The
prediction of a partial or complete pathological response prior to surgical treatment in clinical
practice would be interesting since it might be possible to individualize treatment regimens to a less
aggressive surgery, sphincter preservation or even delay the time of surgery based on an intensive
follow-up with images.
Objetivos:
This study aimed to analyze the use of this molecular imaging with 18F-FDG PET/CT to predict
treatment response of patients with rectal cancer undergoing neoadjuvant chemoradiation in the
Brazilian reality.
Metodos:
The study was approved by the Ethics Committee at the Federal University of Minas Gerais (COEP
&ndash; UFMG &ndash; 168.113). The sample consisted of patients with stage II and III rectal
cancer that underwent 18F-FDG PET/CT examinations from March 2012 to November 2013. All
patients underwent two 18F-FDG PET/CT examinations (pre- and post-treatment). Several predictor
factors were evaluated from the 18F-FDG PET/CT images and correlated with histopathological
analyses using Dworak classification.
Resultados:
Among 23 patients initially evaluated, 17 patients were included and analyzed in this study.
Significant differences were observed between responders (Dworak 3 and 4) and non-responders
for SUVmed2 (p = 0.012) and SUVmax2 (p = 0.009). Considering only patients with complete
pathologic response, the ROC analyses showed significant results for the following variables:
%?SUVmed (AUC = 0.896, p=0.0001, with the benchmark in 68.8% with 83.3% sensitivity and
100% specificity); %?SUVmax (AUC = 0.923, p=0.0001, with the benchmark in 68.8% with 84.6%
sensitivity and 100% specificity) and %?TLG (AUC = 0.788, p=0,03, with reference point at 85.1%
with 61.5% sensitivity and 100% specificity).
Conclusão:
The 18F-FDG PET/CT seems to be a great tool to predict the therapeutic response in rectal cancer
patients undergone neoadjuvant therapy. Regardless the reliability of these results, prospective
studies with larger number should be performed to answer the question of surgical needs in those
patients with complete response by the 18F-FDG PET/CT images.
Apoio Financeiro:
The 18F-FDG PET/CT seems to be a great tool to predict the therapeutic response in rectal cancer
patients undergone neoadjuvant therapy. Regardless the reliability of these results, prospective
studies with larger number should be performed to answer the question of surgical needs in those
patients with complete response by the 18F-FDG PET/CT images.
Comitê de Ética:
COEP ? UFMG ? 168.113
19.008 AÇÃO DA SALIVA BRUTA DO CARRAPATO AMBLYOMMA
CAJENNENSE SOBRE CÉLULAS DE LINHAGENS TUMORAIS HUMANAS.
Vieira, P. S. , Cogo, S. , Simons, S. M. , Elifio-Esposito, S. ,
Laboratório Experimental Multiusuário (LEM) - PUCPR
Laboratório de Parasitologia - IB/SP
Introducao:
A saliva bruta (SB) de Amblyomma cajennense (Fabricus) é rica em moléculas bioativas, incluindo
inibidores
da
coagulação
e
da
agregação
plaquetária,
compostos
antinflamatórios
e
imunossupressores. Além disto se sobressai como um candidato a indução de morte específica de
células de linhagem tumoral humana, mas sua validação ainda depende de um estudo mais
aprofundado de sua ação. Pesquisadores do Instituto Butantan (IB/SP), que investigam a atividade
biológica de componentes da SB deste carrapato verificaram sua eficácia sobre células de
melanoma humano e adenocarcinoma de pâncreas.
Objetivos:
Avaliar a ação antitumoral da saliva bruta do carrapato A. cajennense sobre células de linhagens
tumorais humanas.
Metodos:
A saliva bruta do carrapato foi cedida pelo IB/SP e mantida a -80ºC até o uso. A investigação da
ação antitumoral foi feita sobre células de linhagem de neuroblastoma humano (CHLA20 e IMR32),
monocítica (U937) e coloretal (HT29 e HCT116). A viabilidade celular foi verificada pelo uso de
corantes vitais (brometo de etídeo/diacetato de fluoreisceína) e método do MTT após incubação por
72h. Os resultados foram submetidos ao método de Tuckey para análise estatística. Para verificar
alterações morfológicas as células foram fixadas em lâminas por citospin e coradas com solução de
May-Grunwald Giemsa. Análise por citometria de fluxo (AnexinaV/7-AAD) foi realizada para
confirmação do efeito citotóxico
Resultados:
A partir do ensaio de viabilidade por fluorescência pode-se adotar a diluição de 1:100 da saliva
bruta sobre as células com o tempo de incubação de 72 horas, pois demonstrou diferença
significativa de viabilidade celular das amostras controle para tratadas. Para todas as linhagens
analisadas houve redução significativa na viabilidade após tratamento com a SB em comparação
aos controles não tratados, considerado como 100%. Para U937 a viabilidade foi de 37,33% ± 5,60;
IMR32, 59,23% ± 21,89; CHLA20 50,63% ± 34,01; HT29 76,03 ± 10,71 e HCT116 68,51 ± 11,73.
Por microscopia de luz pode-se observar alterações morfológicas em todas as linhagens celulares
com perda da integridade e formação de bolhas na membrana celular, descolamento celular,
alterações na morfologia nuclear (condensação), alterações típicas de morte por apoptose. Análise
por citometria de fluxo mostrou aumento do número de células duplo-marcadas, que poderia indicar
necrose ou apoptose tardia, para a linhagem U937 (438%), HCT116 (111%), CHLA (1.330%) e
IMR32 (2.229%). Por outro lado a análise de células HT29 indica pouca marcação tanto para
7-AAD quanto para Anexina-V, concordando com os testes de viabilidade que mostraram ser essa
linhagem pouco sensível à SB.
Conclusão:
A saliva bruta possui potencial antitumoral sobre as linhagens testadas, além disto, se comporta de
maneira diferenciada com relação à sensibilidade à indução de morte celular em cada linhagem.
Apoio Financeiro:
A saliva bruta possui potencial antitumoral sobre as linhagens testadas, além disto, se comporta de
maneira diferenciada com relação à sensibilidade à indução de morte celular em cada linhagem.
Comitê de Ética:
Os ensaios foram realizados com c&eacute;lulas de linhagem tumoral, n&atilde;o sendo feito
qualquer teste com animais experimentais ou amostras de pacientes.
19.009 IMPACTO NA GERAÇÃO DE NO&bull; NA VIABILIDADE DO TUMOR DE
CÓLON HUMANO SOB RESTRIÇÃO DE NUTRIENTES
Oliveira, G. A. , Leite, T. Y. , Monteiro, H. P. ,
Centro de Terapia Celular e Molecular - Unifesp
Introducao:
O óxido nítrico (NO&bull;) é um radical livre permeável às membranas celulares, que funciona como
um mensageiro na comunicação intercelular e sinalização intracelular. Em células de mamíferos, as
três isoformas do óxido nítrico sintase (NOS) são as principais responsáveis pela biossíntese de
NO&bull;. Estudos recentes mostram que protocolos associados com aumentos da viabilidade
celular e longevidade, como a restrição calórica, estão envolvidos com elevações nos níveis de
expressão destas enzimas. 1,2. 1 Nisoli et al. 2005 Science. 310:314-7. 2 Cerqueira et al. , 2011
PLoS One. 6:18433.
Objetivos:
Esse trabalho teve como objetivo investigar como o NO&bull; está associado com a proliferação e
viabilidade celular de células de câncer de colón.
Metodos:
Foram utilizadas as linhagens humanas de tumores de cólon (SW480 &ndash; célula primária),
(SW620 - célula metastática) e uma sublinhagem (SW620-I12) produzida no Laboratório de
Sinalização Celular &ndash; CTCMol, onde a expressão da iNOS foi silenciada por meio da
transfecção permanente das células com shRNA, na ausência e na presença de soro fetal bovino
(SFB) e/ou inibidor da iNOS &ndash; Aminoguanidina. Nessas condições nos avaliamos: i)
Geração de NO por meio de citometria de fluxo e uso de DAF-AM; ii) Viabilidade celular por meio
de dois métodos: fluorescência da calceína, por citometria de fluxo; e XTT, pela absorbância de seu
produto metabolizado, formazana; iii) proliferação celular por meio de contagem celular em Câmara
de Neubauer e MTT.
Resultados:
As células SW480 e SW620 expressam apenas a isoforma induzível da proteína NOS (iNOS).
Essas células quando cultivadas em meio na ausência de SFB tem aumentos na geração de
NO&bull; intracelular. Apesar da baixa proliferação, essas células apresentam uma alta viabilidade
metabólica quando comparada com as células cultivadas em 10% de SFB. Essa viabilidade é
diminuída pela presença de inibidor da NOS e não é recuperada pela restrição de SFB. Com a
finalidade de se estudar a participação da iNOS na sobrevivência das células SW620, nós
utilizamos as células SW620 &ndash;I12, onde a expressão de iNOS foi silenciada. Ao contrário do
encontrado na linhagem parental (SW620), as células SW620-I12 não apresentam diferenças na
geração de NO&bull; ou a viabilidade quando cultivadas na ausência ou na presença de SBF.
Conclusão:
Em conjunto os nossos resultados sugerem que a iNOS e o NO&bull; desempenham um papel
importante na viabilidade de células tumorais de cólon.
Apoio Financeiro:
Em conjunto os nossos resultados sugerem que a iNOS e o NO&bull; desempenham um papel
importante na viabilidade de células tumorais de cólon.
Comitê de Ética:
O projeto desenvolvido utiliza c&eacute;lulas&nbsp;imortalizadas e foi aprovado pelo comit&ecirc;
de &eacute;tica da Univesidade Federal de S&atilde;o Paulo.