Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento – MAPA
Secretaria de Defesa Agropecuária – SDA
Coordenação Geral de Apoio Laboratorial - CGAL
Manual de Métodos de Análises de Bebidas e Vinagres
AÇÚCARES TOTAIS
Destilados
Método 08
1. MÉTODO
Titulométrico (Método Eynon Lane).
2. PRINCÍPIO
Os açúcares não redutores sofrem hidrólise prévia em meio ácido, dissociando os dissacarídeos
em seus monossacarídeos, os quais reagem com os íons cúpricos da solução de Fehling,
reduzindo-os a íons cuprosos, sob a ação do calor em meio alcalino. Ao reagir com os íons
cúpricos, os açúcares sofrem oxidação, enquanto o Cu(II) é reduzido a Cu(I), formando-se um
precipitado vermelho de óxido cuproso.
3. MATERIAL
3.1 EQUIPAMENTO
a)
Balança analítica.
b)
Chapa aquecedora ou bico de Bunsen.
c)
Banho-maria com termostato.
d)
Cronômetro.
3.2 REAGENTES E SOLUÇÕES
a)
Solução A de Fehling. Dissolver 34,639 g de sulfato de cobre pentaidratado
(CuSO4.5H2O) p.a. em água destilada e diluir a 500 mL em balão volumétrico.
b)
Solução B de Fehling. Dissolver 173 g de tartarato duplo de sódio e potássio tetraidratado
(C4H4KNaO6.4H2O) p.a. (sal de Rochelle) e 50 g de hidróxido de sódio em água destilada
e diluir a 500 mL em balão volumétrico.
c)
Solução padrão de glicose anidra p. a. 0,5% (recém preparada).
d)
Solução de acetato neutro de chumbo a 20%.
e)
Solução azul de metileno 1%.
f)
Carvão ativo.
g)
Fosfato monoácido de sódio Na H2PO4 ou oxalato de potássio ou sódio p.a.
h)
Ácido clorídrico p.a.
i)
Solução de hidróxido de sódio 5 N.
3.3 VIDRARIA E OUTROS MATERIAIS
a) Balão volumétrico de 100 mL.
b) Bureta de 25 mL.
c) Erlenmeyer de 250 mL.
d) Pérolas de vidro para ebulição ou talco neutro.
e) Pipetas volumétricas de 1, 5, 20 e 50 mL.
f) Termômetro (0-100 °C).
g) Funil.
h) Papel de filtro.
i) Pinça.
j) Papel de tornassol.
4. PROCEDIMENTO
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AÇÚCARES TOTAIS
Destilados
Método 08
4.1 PREPARAÇÃO DA AMOSTRA
Pipetar 50 mL da amostra (para amostras com alto teor de açúcares tomar alíquotas menores),
desalcoolizar reduzindo para 25 mL. Transferir para um balão volumétrico de 100 mL, e
completar o volume com água destilada.
Se necessário, efetuar clarificação pipetando 50 mL da amostra desalcoolizada em um balão de
100 mL , adicionar 2 mL da solução de acetato neutro de chumbo (volume maior para produtos
com alto teor de matérias corantes). Adicionar aproximadamente 0,5 g de carvão ativo (evitar
excesso, pois poderá adsorver parte dos açúcares). Agitar bem e deixar em repouso por 10
minutos. Completar o volume com água destilada. Filtrar o conteúdo do balão volumétrico sobre
0,4 g de fosfato monoácido de sódio (ou 0,4 g de oxalato de sódio) por mililitro de solução de
acetato neutro de chumbo utilizado, num erlenmeyer de 250 mL (a solução apresentará
sedimentos em poucos minutos, deixando o líquido sobrenadante claro). Adicionar um pouco
mais de fosfato (ou oxalato) para assegurar a completa precipitação do acetato de chumbo.
Filtrar novamente, se necessário.
Transferir 50 mL da amostra assim preparada para um balão volumétrico de 100 mL, adicionar 1
mL de ácido clorídrico concentrado e levar ao banho-maria, de modo que a solução mantenha
uma temperatura entre 67 e 70 oC por 15 minutos. Esfriar à temperatura ambiente, neutralizar
com hidróxido de sódio 5 N, usando papel de tornassol como indicador, e completar o volume
com água destilada.
4.2 TITULAÇÃO DO BRANCO
Em erlenmeyer de 250 mL, adicionar 20 mL de solução de Soxhlet (10 mL de Felhing A + 10
mL de Felhing B), 50 mL de água destilada e 19 mL da solução padrão de glicose e algumas
pérolas de vidro. Levar o frasco ao aquecimento, de modo que entre em ebulição dentro de 4
minutos. Iniciada a ebulição, adicionar 3 gotas de azul metileno. Decorrido um minuto do inicio
da fervura, proceder a titulação até o desaparecimento da coloração azul. Repetir a operação até
que os resultados em duplicata sejam iguais. Seja b o volume final de glicose gasto na titulação
do branco.
4.3 TITULAÇÃO DA AMOSTRA
4.3.1 PRÉVIA
Em erlenmeyer de 250 mL, adicionar 20 mL da solução de Soxhlet (10 mL de Felhing A + 10
mL de Felhing B), 40 mL de água destilada e 10 mL da amostra preparada (4.1). Levar o frasco
ao aquecimento, de modo que entre em ebulição dentro de 4 minutos. Iniciada a ebulição, titular
com a solução de glicose até o desaparecimento da coloração azul do sulfato de cobre. Adicionar
2 gotas de azul de metileno, após 1 minuto, continuar a titulação até o desaparecimento da
coloração azul. Seja K o volume final de glicose gasto na titulação prévia da amostra.
Nota: O valor de K será utilizado para nortear o volume final de glicose na titulação da amostra.
4.3.2 AMOSTRA
Em erlenmeyer de 250 mL, adicionar 20 mL da solução de Soxhlet, 40 mL de água destilada e
10 mL da amostra preparada. Levar o frasco ao aquecimento, de modo que entre em ebulição
dentro de 4 minutos, e imediatamente transferir (K-1) ml de glicose. Iniciada a fervura, adicionar
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AÇÚCARES TOTAIS
Destilados
Método 08
2 gotas de azul de metileno. Após 1 minuto, continuar a titulação até o desaparecimento do azul
da solução, gastando no final da titulação aproximadamente o mesmo tempo gasto na
determinação do branco. Repetir a operação até que os resultados em duplicata sejam iguais.
Seja a o volume final de glicose gasto na titulação da amostra.
5. CÁLCULOS E EXPRESSÃO DO RESULTADO
O teor de açúcares totais em gramas de sacarose por litro da amostra é dado pela fórmula abaixo:
At =
(b − a ) × 5 × f 1 × f 2
V
Onde
= Teor de açúcar total em sacarose (g/L).
At
= Volume da solução de glicose gasto na titulação do branco, em mL.
b
a
= Volume da solução de glicose gasto na titulação da amostra, em mL.
Fator que envolve todas as diluições e as grandezas de massa ou volume usadas na
f1
=
tomada da amostra.
= Fator de conversão para expressão dos resultados em sacarose (0,96).
f2
= Volume da amostra preparada usado na titulação, em mL.
V
Notas:
a) Tempo de titulação não deverá ultrapassar 2 minutos, marcados a partir da adição
da solução indicadora de azul de metileno.
b) Solução de Soxhlet é a mistura das soluções A e B de Fehling em partes iguais.
REFERENCIA
BRASIL. Ministério da Agricultura. Portaria nº 76 de 26 de novembro de 1986. Dispõe sobre os
métodos analíticos de bebidas e vinagre. Diário Oficial da República Federativa do Brasil,
Brasília, 28 nov. 1986. Seção 1, pt. 2.
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