Microfibrilas e Trombose
Cláudio C. Werneck
Departamento de Bioquímica-IB
UNICAMP
Fibras Elásticas em Tecidos em Desenvolvimento
Davis E.C.
Proteínas Componentes das
Microfibrilas Associadas à Elastina
•Fibrilina 1
•Fibrilina 2
•LTBP 2
•MP70/78 (big-H3)
•MAGP-1
•MAGP-2
Gibson et al. J. Biol. Chem. 1989, 264:4590
Artéria carótida
A região carboxi-terminal da MAGP-2
interage com diferentes proteínas
Clone
8
1
3
5
30
9
7
15
6
21
10
4
29
Identity of isolated clones
Fibrillin-1
Fibrillin-2
Fibrillin-2
Fibrillin-2
Fibrillin-2
Fibulin-1
Jagged-1
MEGF-6
Von Willebrand factor
Glycogenin
HMG14
Unknown
Penner et al. J. Biol. Chem. 2002,
Unknown
277:35044.
Função do Fator de von Willebrand na
Agregação Plaquetária
Modelo de Lesão da Artéria Carótida
1
Isolamento do vaso
3
Aplicação do laser 540 nm
4
Injeção do corante
2
5
Medida do tempo de oclusão
Posicionamento da ultra-sonda
Modelo de Trombose da Artéria Carótida
Laser on
1.0
Rose Bengal IV
Occlusion Time
Blood flow 0.5
(ml/min)
0.0
-10
0
10
20
30
Time (min)
40
50
60
Occlusion time- min
Camundongos Deficientes em MAGP1
Apresentam Tempo de Oclusão Prolongado
140
120
100
80
60
40
20
0
+/+
+/genotype
-/-
A Injeção de MAGP1 Recombinante
Resgata o Tempo de Oclusão Normal
Werneck et al., BLOOD, 2008, 111: 4137.
Pull down com Proteínas Plasmáticas
FN
Fbg
vWF
Werneck et al., BLOOD, 2008, 111: 4137.
Werneck et al., BLOOD, 2008, 111: 4137.
Possíveis Funções da MAGP-1 na
Agregação de Plaquetas
MAGP-1
MAGP-1
MAGP-1
MRAASLFLLF LPAFLLAQGQ
YDLDPLPPYP DHVQYTHYSE
QIENPDYYDY PEMTPRPPEE
QFQFQSQQQV QQEVIPAPTL
EPGTVETEPT EPGPLDCREE
QYPCTRLYSI HKPCKQCLNE
VCFYSLRRVY VVNKEICVRT
VCAQEELLRA
DLCRDKFSKC
GVLASSGLCQ SVAAACARSC GGC
A região carboxi-terminal da MAGP1
apresenta
atividade pró-trombótica
120
Tempo de oclusão- min
100
80
60
40
20
0
MAGP-1
DCREE QYPCTRLYSI HKPCKQCLNE
VCFYSLRRVY VVNKEICVRT
VCAQEELLRA
DLCRDKFSKC
GVLASSGLCQ SVAAACARSC GGC
Tempo de oclusão após injeção de
MAGP1 CG9
140
120
100
min
80
60
40
20
0
Magp1-/-
MuMAGP
CG9
Magp1+/+
MuMAGP
CG9
TSP-1 Peptide
• Thrombospondin-1: KRFYVVMWKK
• MAGP-1:
RRVYVVNK
Tempo de oclusão após injeção dos
peptídeos
140
120
100
min
80
60
40
20
0
Magp1-/-
MTSPL
MTSPLGG
TSP
TSPGG
Model for TSP1 in platelet-platelet
interactions
Bonnefoy et al., Cell. Mol. Life Sci. 2008
Bone phenotypes in MAGP1 -/- mice
WEINBAUM et al., J. B. C., 2008.
Bone phenotypes in MAGP1 -/- mice
WEINBAUM et al., J. B. C., 2008.
Active Forms of BMP-7 and TGF-β1
Bind to MAGP1
WEINBAUM et al., J. B. C., 2008.
Estrutura dos Domínios nas Famílias
das Fibrilinas e LTBPs.
RGD
Fibrilina-1
Pro
Fibrilina-2
RGD
RGD
RGD
RGD
Gly
Fibrilina-3
G/P
RGD
LTBP-1
RGD
LTBP-2
LTBP-3
RGD
LTBP-4
EGF
EGF--Ca2+ Binding
8-Cys (CCC)
Hybrid (CC)
Unique
Unknown
Glycosylation (potential)
Síndrome de Marfan
Nature Genetics 33:406 (2003)
Fbn1mgΔ (inframe hypomorphic deletion)
Losartan, an AT1 Antagonist, Prevents
Aortic Aneurysm in a Mouse Model of
Marfan Syndrome
Jennifer P. Habashi,1* Daniel P. Judge,2* Tammy M. Holm,1
Ronald D. Cohn,1 Bart L. Loeys,1
Timothy K. Cooper,1,3 Loretha Myers,1 Erin C. Klein,1 Guosheng
Liu,3 Carla Calvi,2
Megan Podowski,2 Enid R. Neptune,2 Marc K. Halushka,4 Djahida
Bedja,3
Kathleen Gabrielson,3 Daniel B. Rifkin,5 Luca Carta,6 Francesco
Ramirez,6
David L. Huso,3 Harry C. Dietz1,2†
Science 312, 117 (2006)
Tempo de oclusão x Losartan
140
Tempo de oclusão- min
120
100
80
60
40
20
0
Tratamento com Atenolol e
Captopril
140
Tempo de oclusão-min
120
100
80
60
40
20
0
Agradecimentos
UNICAMP
Cristina P. Vicente
Paulo P. Joazeiro
Denise Machado
Tallita Vassequi
Ana Claudia C. N. Diez
João Batista Fabrin Neto
Catherine Pereira
Silvio Consonni
Talita Dellariva
Guilherme Braga
Fabiana Uno de Souza
Danielle Sousa
Washington University in Saint Louis-MO
Bob Mecham
Tom Broekelmann
Doug Tollefsen
São Paulo
J. E. Krieger
Leonardo dos Santos
Lygia V. Pereira