Universidade de São Paulo – Instituto de Física de São Carlos – Licenciatura em Ciências Exatas – Biologia 4 – 2015
Aula Prática 03: NORMAS DE SEGURANÇA E TÉCNICAS DE SEMEADURA DE CULTURAS BACTERIANAS
NORMAS DE SEGURANÇA EM MICROBIOLOGIA
A. Como manipular a placa de Petri
 As placas de Petri devem estar sempre fechadas quando não estiverem sendo manipuladas.
 Ao colocá-las sobre a bancada, mantenha a tampa voltada para baixo, para não abri-las ao pegá-las novamente.
 Escreva somente nas bordas do fundo da parte plástica da placa (e não no meio de cultura). Escrever no meio da
parte plástica da placa poderá dificultar a visualização das colônias após o crescimento.
 Sempre manipule as placas dentro da zona asséptica do bico de Bünsen, para evitar contaminações.
B. Procedimentos de manuseio de materiais microbiológicos que devem ser realizados em todas as aulas
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Lave as mãos com detergente, seque-as e desinfete-as com álcool 70%.
Desinfete a superfície da bancada com álcool 70%.
Evite tossir, espirrar e falar próximo às placas e tubos de cultivo para evitar contaminações.
Ao término, desinfete novamente a bancada com álcool 70%, lave as mãos e desinfete-as com álcool 70%.
C. Avaliação da lavagem das mãos
1) Anote o nome do grupo nas duas placas de Petri.
2) Nomeie uma placa de Petri como “Antes da lavagem” e a outra placa de Petri como “Depois da lavagem”.
3) No fundo de plástico de cada placa, anote os números de 1 a 5, referentes a cada dedo da mão, conforme a figura
a seguir:
1) Polegar
1
2
2) Indicador
3) Médio
3
4
4) Anular
5
5) Mínimo
2) Na placa “Antes da lavagem”, “carimbe” levemente os cinco dedos de uma mão sobre o ágar antes de lavá-la.
3) Lave as mãos conforme demonstrado no item “D” na página seguinte.
Atenção: Não fale durante o processo para não respingar gotículas de saliva nas mãos! Não seque as mãos com
papel ou no jaleco! Não encoste em nada após a lavagem! Peça ao colega para jogar um pouco de álcool 70% em
suas mãos para desinfetá-las após a lavagem. Espere-as secar ao ar. Sem falar sobre elas!
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Peça ao colega que abra a placa de Petri nomeada como “Depois da lavagem”.
“Carimbe” os mesmos dedos agora lavados na placa “Depois da lavagem”.
Incube as placas a 37 °C por 18 h. As placas serão guardadas a 4 °C até a aula seguinte.
Anote os resultados obtidos em termos de unidade formadora de colônia (UFC).
Compare o número de UFC entre as duas placas e justifique os resultados.
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D. Esquema da lavagem das mãos
E. Questões
1) Por que a lavagem das mãos é importante?
2) Por que é necessário limpar a bancada antes e depois das atividades com álcool 70%?
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TÉCNICAS DE SEMEADURA DE CULTURAS BACTERIANAS
A. Transferência de uma cultura bacteriana de um tubo (meio líquido) para outro tubo (meio líquido)
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Nomeie um tubo com meio de cultura estéril como tubo 1.
Esterilize a alça de transferência na chama do bico de Bunsen até que a alça fique vermelha (flambe a alça);
Pegue o tubo 1 com meio estéril e o tubo A com uma cultura bacteriana, e remova as tampas com os dedos da
mão que segura a alça;
4) Passe as extremidades abertas dos tubos através da chama (flambe os tubos) para evitar contaminações;
5) Espere alguns segundos para a alça esfriar;
6) Com a alça, retire uma pequena quantidade do inóculo do tubo A com a cultura bacteriana e, em seguida,
introduza a alça no tubo 1 com o meio de cultura estéril;
7) Flambe as bocas dos tubos novamente e tampe-os;
8) Esterilize a alça na chama;
9) Identifique o tubo inoculado e o grupo.
10) Incube o tubo a 37 °C e 150 rpm de agitação por 18 h.
B. Transferência de uma cultura bacteriana em tubo (meio líquido) para placa de Petri (meio sólido)
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Nomeie uma placa de Petri como Placa 1.
Ajuste uma micropipeta automática para o volume de 0,1 mL (100 µL).
Com a micropipeta automática, retire uma ponteira amarela do suporte de ponteiras, sem tocá-la.
Remova a tampa do tubo A com uma cultura bacteriana e flambe a extremidade aberta do tubo.
Incline o tubo e introduza somente a ponteira no tubo, colete 0,1 mL do inóculo e retire a ponteira do tubo.
Flambe a boca do tubo e recoloque sua tampa.
Na placa de Petri semi-aberta contendo meio de cultura esterilizado (Placa 1), despeje o conteúdo da ponteira
e dispense a ponteira no descarte contendo hipoclorito de sódio 3%.
8) Mergulhe a espátula de Drigalsky em álcool 70%, flambe-a e espere cerca de 1 min para esfriar. Confirme o
resfriamento encostando-a no meio de cultura.
9) Espalhe o inóculo líquido sobre a superfície do ágar com a espátula de Drigalsky, de modo a distribuir os
microrganismos uniformemente pelo meio sólido.
10) Feche a placa de Petri e deixe-a invertida sobre a bancada;
11) Mergulhe a espátula de Drigalsky em álcool 70% e flambe-a novamente;
12) Incube a placa 1 a 37 °C por 18 h.
C. Transferência de uma cultura bacteriana em placa de Petri (meio sólido) para tubo (meio líquido)
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Esterilize a alça de transferência e resfrie-a em um canto da placa onde não haja inóculo;
Remova uma colônia bacteriana ou uma porção do crescimento com a alça e recoloque a tampa da placa;
Remova a tampa de um tubo com meio estéril, flambe-o e introduza a alça no meio;
Chacoalhe a alça para que as células bacterianas se desprendam e fiquem em suspensão no meio líquido;
Flambe a boca do tubo novamente e tampe-o;
Esterilize a alça de transferência;
Identifique o tubo inoculado e o grupo, e incube o tubo a 37 °C e 150 rpm de agitação por 18 h.
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D. Transferência de uma cultura bacteriana em placa de Petri (meio sólido) para outra placa de Petri (meio sólido)
– Isolamento de colônias por semeadura em esgotamento em placa de Petri
1) Com a alça esterilizada e resfriada, toque levemente uma colônia bacteriana em
meio sólido;
2) Inocule a cultura em outra placa de Petri, estriando de acordo com a figura ao lado.
Lembre-se de esterilizar a alça entre cada procedimento esquematizado na figura:
ou seja, inocule a região 1, esterilize a alça e espere que a mesma esfrie, então a
partir da região 1, inocule a região 2. Repita o procedimento para as regiões 3 e 4.
3) Inverta a placa, identifique-a na borda da base, e incube-a a 37 °C por 18 h.
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E. Questões
1) Descreva o objetivo de cada método de semeadura.
2) Descreva os resultados obtidos para cada método após incubação a 37 °C.
3) Observe o meio de cultura líquido antes da inoculação e depois de 18 h de crescimento. O que aconteceu com o
meio? A que fenômeno está associado esta mudança?
4) Compare as placas obtidas nos itens B e D. Qual método apresenta maior eficiência em obter colônias isoladas?
Por quê? Qual é a importância de se obterem colônias bacterianas isoladas?
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