TÍTULO: EFEITO ANTITUMORAL DA ASSOCIAÇÃO DE PACLITAXEL A UMA NANOEMULSÃO
LIPÍDICA QUE SE LIGA Á RECEPTORES DA LIPOPROTEÍNA DE BAIXA DENSIDADE (LDL), EM
LINHAGENS DERIVADAS DE ADENOCARCINOMA PANCREÁTICO HUMANO.
CATEGORIA: EM ANDAMENTO
ÁREA: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E SAÚDE
SUBÁREA: BIOMEDICINA
INSTITUIÇÃO: CENTRO UNIVERSITÁRIO DAS FACULDADES METROPOLITANAS UNIDAS
AUTOR(ES): CAROLINE GRILLETTE NEGRI
ORIENTADOR(ES): CARMEN GUILHERME CHRISTIANO DE MATOS
COLABORADOR(ES): LABORATÓRIO LÍPIDES INCOR-FMUSP, LABORATÓRIO METABOLISMO
FMUSP, RICARDO RODRIGUES GIORGI
RESUMO
O adenocarcinoma pancreático é um dos tipos de câncer humano, mais letais e
continua sendo a quarta causa de morte por câncer e a segunda entre as doenças
malignas do trato gastrointestinal nos Estados Unidos. Sua natureza altamente
agressiva e os sintomas pouco específicos levam ao diagnóstico tardio e à
resistência à quimioterapia e radioterapia disponíveis. Partindo da constatação de
que algumas linhagens de células neoplásicas expressam um maior número de
receptores de lipoproteína de baixa densidade (LDL), vários estudos mostraram que
nanopartículas lipídicas artificiais que se ligam aos receptores de LDL podem ser
utilizadas como transportadores de quimioterápicos em vários tipos de neoplasias.
Com isso, o tratamento poderia ser mais direcionado poupando o tecido normal. O
objetivo do presente estudo é avaliar o efeito antitumoral da associação
nanoemulsão-paclitaxel em linhagens celulares derivadas de adenocarcinoma
pancreático humano. Para isso, serão utilizados ensaios de proliferação celular e de
apoptose: concentração inibitória (IC50) e capacidade inibitória da proliferação
celular, teste de viabilidade e proliferação celular e determinação da viabilidade
celular pelo ensaio do MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-difenil brometo de
tetrazolina).
INTRODUÇÃO
As taxas de incidência do adenocarcinoma pancreático ductal são praticamente
idênticas às taxas de mortalidade, o que justifica a natureza altamente agressiva do
tumor (GHANEH et al., 2007). A observação de que células neoplásicas apresentam
superexpressão de receptores de LDL (HO et al., 1978) levou à hipótese de que
uma nanoemulsão lipídica rica em colesterol, com metabolismo semelhante ao da
LDL natural (MARANHÃO et al., 1992, 1993, 1997) poderia ser utilizada como
transportadora de quimioterápicos, concentrando-os nos tecidos neoplásicos por
meio de endocitose pelos receptores de LDL (MARANHÃO et al., 1992).
Nanoemulsão lipídica artificial
A lipoproteína de baixa densidade (LDL) é uma nanopartícula lipídica que é
internalizada nas células por meio da ligação de sua proteína, a apolipoproteína B100 (apo B100), a receptores celulares específicos (BROWN; GOLDSTEIN, 1986).
A LDL pode ser produzida artificialmente em laboratório sem a apo B100 que
apresentam comportamento metabólico semelhante ao da LDL (GINSBURG et al,
1982). A nanoemulsão lipídica foi testada como transportadora do quimioterápico
paclitaxel,sendo que a sua associação preservou a atividade citotóxica do fármaco
(RODRIGUES, et al., 2002).
OBJETIVO
Avaliar o efeito antitumoral da associação nanoemulsão-paclitaxel em
linhagens celulares derivadas de adenocarcinoma pancreático humano, utilizando
ensaios de proliferação celular e de apoptose
METODOLOGIA
Preparo da nanoemulsão lipídica rica em colesterol
A nanoemulsão lipídica será preparada segundo a técnica descrita por
Ginsburg et al. (1982), modificada por Maranhão et al. (1993).
Associação do oleato de paclitaxel à nanoemulsão lipídica
O oleato de paclitaxel, modificado (RODRIGUES al., 2005), será dissolvido para
posterior adição da nanoemulsão lipídica à solução de oleato de paclitaxel.
Cultura celular
A linhagens celulares utilizadas serão MIA PaCa-2 (ATCC® Number: CRL1420™), BxPC-3 (ATCC® Number: CRL-1687™), PANC-1 (ATCC® Number: CRL1469™) e Capan-1 (ATCC® Number: HTB-79™). Uma vez em cultura, as quatro
linhagens serão mantidas a 37°C em atmosfera úmida com 5% de CO2 sobre
agitação.
Concentração inibitória (IC50) e capacidade inibitória da proliferação celular
Concentração inibitória 50% (IC50) será determinada como a concentração
requerida da nanoemulsão associada a droga para inibir o crescimento em 50%.
Teste de viabilidade e proliferação celular
A viabilidade será determinada pelo teste de exclusão do corante azul de trypan.
Determinação da viabilidade celular pelo ensaio do MTT (3-(4,5-dimetiltiazol2yl)-2,5-difenil brometo de tetrazolina)
A viabilidade será avaliada através da atividade da enzima desidrogenase
mitocondrial que converte o sal de tetrazólio (MTT) para um composto colorido
(formazan).
RESULTADOS PRELIMINARES
Os experimentos foram realizados com células da linhagem BxPC3, e foi
avaliado os resultados de viabilidade celular por meio do teste MTT. As células da
linhagem BxPC3, quando tratadas apenas com a nanoemulsão não demonstrou
diferença em relação ao controle. Quando as linhagens celulares foram tratadas com
a LDL associado ao quimioterápico, foi abservado redução da viabilidade celular
avaliado pelo ensaio de MTT (Figuras 1 e 2).
120
100
80
60
40
20
0
CO
20μl
40μl
65μl
80μ
Figura 1- Células tratadas apenas com a nanoemulsão.
120
100
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60
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0
CO
20μl
40μl
65μl
80μ
Figura 2- Desvio padrão dos resultados de células tratadas com o quimioterápico.
REFERÊNCIAS
1. BROWN, M.S.; GOLDSTEIN, J.L. A receptor-mediated pathway for cholesterol
homeostasis. Science, v.232, p.34-47, 1986.
2. GHANEH P, COSTELLO E, NEOPTOLEMOS JP. Biology and management of
pancreatic cancer. Gut. 2007; 56:1134-52.
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F.J.;CHAMONE, D.A. Increased plasma removal of microemulsions
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6. MARANHÃO, R.C.; CESAR, T.B.; PEDROSO-MARIANI, S.R.; HIRATA,
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1993.
7. MARANHÃO, R.C.; ROLAND, I.A.; TOFFOLETTO, O.; RAMIRES, J.A.;
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in hiperlipidemic subjects of a lipid microemulsion that binds to low density
lipoprotein receptors. Lipids, v.32(6), p.627-633, 1997.
8. RODRIGUES, D.G.; COVOLAN, C.C.; CORADI, S.T.; BARBOZA, R.;
MARANHÃO, R.C. Use of a cholesterol-rich emulsion that binds to low-density
lipoprotein receptors as a vehicle for paclitaxel. J. Pharm and Pharmacol.,
v.54, p.765, 2002.
9. RODRIGUES, D.G., MARIA, D.A., FERNANDES, D.C., VALDUGA, C.J.,
COUTO, R.D., IBAÑEZ, O.C. M., MARANHÃO, R.C. Improvement of
paclitaxel therapeutic index by derivatization and association to a cholesterolrich microemulsion: in vitro and in vivo studies. Cancer Chemother
Pharmacol., v.55, p.565, 2005.