[EXPLICAÇÃO DO TESTE]
A dengue é hoje a mais importante arbovirose que afeta o homem, constituindo um sério problema de
saúde pública no mundo, especialmente em países tropicais onde as condições do meio ambiente
favorecem a proliferação dos seus vetores, os mosquitos do gênero Aedes. Atualmente, quase metade da
população mundial vive em áreas de risco para a doença e, apesar de sua extensão e gravidade, vacinas
ou tratamentos específicos ainda não estão disponíveis. Existem quatro sorotipos distintos conhecidos de
dengue (vírus dengue 1, 2, 3 e 4). Em crianças, em geral a infecção é subclínica ou causa uma doença
febril autolimitada. No entanto, se o paciente é infectado duas vezes com um sorotipo diferente, é mais
provável que ocorra uma doença mais severa, dengue hemorrágica ou síndrome de choque da dengue.
Tendo conhecimento da urgência na melhoria da vigilância epidemiológica da dengue e das deficiências
do diagnostico laboratorial dessa doença no mundo é que a Orangelife desenvolveu um teste rápido que
detecta a proteína NS1 e os anticorpos IgG e IgM para os quatro sorotipos conhecidos (DEN­1, DEN­2,
DEN­3 e DEN­4).
[USO PRETENDIDO]
O NS1 é uma glicoproteína altamente conservada que está presente em altas concentrações no soro de
pacientes com dengue, infectados durante a fase clínica inicial da doença. O antígeno NS1 é encontrado a
partir do primeiro dia até 9 dias após o início da febre em amostras de pacientes infectados com dengue
primária ou secundária.
Na infecção primária normalmente o IgM se torna detectável a partir do 4º ­ 10º dia após o início dos
sintomas, atingindo os niveis mais elevados por volta do 7º ou 8º dia e declinando após alguns meses. O
IgG aparece por volta do 14 º dia e persiste por toda a vida.
Na infecção secundária os IgGs especificos aparecem dentro de 1 ~ 2 dias após o início dos sintomas e
induzem a resposta de IgM tardiamente, aproximadamente após 20 dias de infecção.
[PRINCÍPIO]
O OL Combo Dengue NS1/IgG/IgM é um teste rápido imunocromatográfico in vitro, desenvolvido para
detectar os antígenos NS1 do vírus da dengue e detectar, diferencialmente, a presença de anticorpos IgG /
IgM para o vírus da dengue no soro humano, plasma, sangue total por punção venosa ou por punção
digital. Este teste rápido OL Combo Dengue NS1/IgG/IgM contém dois dispositivos de teste (Teste Dengue
Ag NS1, Teste Dengue IgG / IgM).
A janela de resultado do dispositivo do teste Ag Dengue NS1 tem 2 linhas, linha Teste Ag NS1 “T” e linha
Controle “C”. Tanto a linha de teste quanto a linha de controle na janela de resultados não são visíveis
antes de aplicar qualquer amostra. A Linha Controle é utilizada para procedimentos de controle e deve
sempre aparecer se o procedimento de teste for realizado corretamente. A linha Teste NS1 pode identificar
o antígeno NS1 do vírus da dengue no soro, plasma ou amostras de sangue total por punção venosa ou
por punção digital com um alto grau de sensibilidade e especificidade.
O dispositivo do teste Dengue IgG / IgM tem 3 linhas: linha teste IgG, linha teste IgM e linha Controle no
adesivo do dispositivo. Todas as três linhas na janela de resultados não são visíveis antes de aplicar
qualquer amostra. A Linha Controle é usada para o controle do procedimento. A linha de controle deve
sempre aparecer se o procedimento de teste for realizado adequadamente e os reagentes da linha de
controle estiverem funcionando. As linhas "G" e "M" serão visíveis na janela de resultado se houver
anticorpos IgG e/ou IgM respectivamente suficientes para o vírus da dengue, na amostra. Se IgG e/ou IgM
para o vírus da dengue não estiverem presentes na amostra, não aparecerá nenhuma cor em "G" e/ou "M".
[MATERIAIS FORNECIDOS]
O kit do teste OL Combo Dengue NS1/IgG/IgM contém os seguintes itens para realizar o ensaio.
­ Dispositivos Dengue Ag NS1
­ Dispositivos Dengue IgG/IgM
­ Pipetas Pasteur Descartáveis
­ Cartões Base
­ Frasco Solução Tampão
­ Instruções de uso
Os seguintes acessórios podem ser fornecidos (opcional)
­ Lancetas automática estéreis
­ Pipeta capilar coletora de amostra
­ Curativo adesivo
[ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE DO KIT]
O kit OL Combo Dengue NS1/IgG/IgM pode ser estocado a temperatura ambiente até 30ºC. O teste é
sensível à umidade e também ao calor. Realizar o teste imediatamente após retirar o dispositivo do
envelope de alumínio. Não utilizar além do prazo de validade.
[COLETA E ARMAZENAMENTO DAS AMOSTRAS]
Dengue Ag NS1
Sangue total
Sangue total por punção venosa
Coletar o sangue total utilizando tubo de coleta (contendo EDTA, citrato ou heparina) por venipunção. Se
as amostras de sangue total não forem testadas imediatamente, devem ser refrigeradas entre 2°C e 8°C.
Quando estocado de 2°C e 8°C as amostras devem ser usadas no prazo de 3 dias. Para um período
superior a 3 dias, recomenda­se o congelamento da amostra. As amostras devem estar à temperatura
ambiente antes do uso. O uso do sangue após 3 dias pode causar reação não específica.(O sangue total
somente pode ser testado para NS1)
Sangue total por punção digital (opcional)
Pegue uma coleta ("alça"), coloque a extremidade "arredondada" da alça sobre a gota de sangue. Faça
com que a alça fique completamente preenchida com sangue.
Nota: se a alça cair ou entrar em contato com qualquer outra superfície, descarte­a em um recipiente para resíduos de risco biológico.
Pegue outra alça para coleta da amostra de sangue. Material necessário: lanceta estéril e alça coletora.
Plasma
Coletar o sangue total dentro do tubo de coleta (contendo anticoagulantes tais como heparina, EDTA e
citrato de sódio) por venipunção e a seguir centrifugar o sangue para retirar a amostra de plasma.
Soro
Coletar o sangue total no tubo de coleta (NÃO deve conter nenhum tipo de anticoagulantes como heparina,
EDTA e citrato de sódio) por venipunção, deixar em repouso durante 30 minutos para a coagulação do
sangue e a seguir centrifugar o sangue para obter a amostra de soro do sobrenadante.
Se as amostras de soro ou plasma não forem testadas imediatamente, devem ser refrigeradas entre 2°C e
8°C. Para períodos de estocagem acima de duas semanas, recomenda­se o congelamento. As amostras
devem estar à temperatura ambiente antes do uso.
As amostras de plasma ou soro contendo precipitados podem apresentar resultados inconsistentes. Tais
amostras devem ser clarificadas antes do ensaio.
Dengue IgG/IgM
Plasma
Coletar o sangue total dentro do tubo de coleta (contendo anticoagulantes tais como heparina, EDTA e
citrato de sódio) por venipunção e a seguir centrifugar bem o sangue para retirar a amostra de plasma.
Soro
Coletar o sangue total no tubo de coleta (NÃO deve conter nenhum tipo de anticoagulantes como heparina,
EDTA e citrato de sódio) por venipunção, deixar em repouso durante 30 minutos para a coagulação do
sangue e a seguir centrifugar bem o sangue para obter a amostra de soro do sobrenadante.
Se as amostras de soro ou plasma não forem testadas imediatamente, devem ser refrigeradas entre 2°C e
8°C. Para períodos de estocagem acima de duas semanas, recomenda­se o congelamento. As amostras
devem estar à temperatura ambiente (1°C – 30°C) antes do uso.
As amostras de plasma ou soro contendo precipitados podem apresentar resultados inconsistentes. Tais
amostras devem ser clarificadas antes do ensaio.
[PRECAUÇÕES]
­Anticoagulantes como heparina, EDTA, e citrato não afetam o resultado. Interferentes relevantes
conhecidos como amostras hemolíticas, fator reumatóide, amostras ictéricas e lipêmicas podem prejudicar
os resultados do teste.
­Use separadamente os dispositivos e conta­gotas para cada amostra ou poderá haver uma contaminação.
­Produto exclusivo para uso em diagnóstico in vitro.
­Não comer ou fumar ao manipular as amostras.
­Utilizar luvas protetoras ao manipular as amostras. Lavar muito bem as mãos após o teste.
­Evitar respingos ou formação de aerossóis.
­Limpar os respingos totalmente utilizando um desinfetante apropriado.
­Descontaminar e descartar todas as amostras, kits reagentes e materiais contaminados como resíduos
potencialmente contaminantes em recipiente apropriado para esta finalidade.
­Não utilizar o kit reagente se a embalagem estiver danificada ou o selo violado.
[PROCEDIMENTO DO TESTE]
Nota: caso for realizar os dois testes simultaneamente, retire o adesivo do cartão base e coloque em uma superfície plana e seca com
a parte adesiva para cima. Fixar os dois cassetes na área demarcada.
Dengue Ag NS1
Remova o dispositivo de teste do envelope de alumínio e coloque em uma superfície plana e seca.
Utilizando o conta­gotas descartável, adicione 3 gotas (cerca de 100µL da amostra no poço de amostra
“S”). Assim que o teste começar a funcionar, se observará uma coloração púrpura se movendo ao longo
da janela de resultado no centro do dispositivo do teste. Interprete os resultados dos testes em 15 ~ 20
minutos.
Dengue IgG/IgM
Remova o dispositivo de teste do envelope de alumínio e coloque em uma superfície plana e seca. Pipete
10µL da amostra na cavidade da amostra (S) e adicione 3~4 gotas da solução tampão na mesma cavidade.
Interprete os resultados dos testes em 15 ~ 20 minutos. Atenção: Não leia os resultados após 20 minutos.
Leituras feitas após os 20 minutos podem dar resultados falsos.
[INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS]
Dengue Ag NS1
Resultado negativo – A presença de apenas uma linha colorida dentro da Banda
“C” (Linha Controle) indica um resultado negativo.
Resultado positivo ­ A presença de duas linhas coloridas (“T” e “C”) dentro da
janela de resultados, não importando qual se apresenta primeiro, indica um resultado
positivo.
Dengue IgG/IgM
Resultado inválido ­ Se nenhuma linha colorida for visível na Banda “C” após a
realização do teste, o resultado é considerado inválido. As instruções de uso podem
não ter sido seguidas corretamente ou o teste pode ter se deteriorado. Recomenda­se
que a amostra seja testada novamente.
IgM Positivo ­ A presença de duas linhas coloridas (“M” e “C”) dentro da janela
de resultados, não importando qual se apresenta primeiro, indica um resultado
positivo para anticorpos IgM e isso indica uma infecção primária pelo vírus da
Dengue.
IgG Positivo ­ A presença de duas linhas coloridas (“G” e “C”) dentro da janela de
resultados, não importando qual se apresenta primeiro, indica um resultado
positivo para anticorpos IgG. Isso é indicativo de infecção secundária por dengue
ou dengue passada.
IgG e IgM Positivos ­ A presença de três linhas coloridas (“G”, “M” e “C”) dentro
da janela de resultados, não importando qual se apresenta primeiro, indica um
resultado positivo para ambos os anticorpos IgG e IgM. Isso é indicativo de uma
infecção primária e secundária por dengue.
Negativo ­ A presença de apenas uma linha colorida dentro da Banda “C” (Linha
Controle) indica um resultado negativo. Os anticorpos IgG e IgM não foram
detectados. Recomenda­se retestar em 3­5 dias, se ainda houver suspeita de
infecção pelo vírus da dengue.
Inválido ­ Se nenhuma linha colorida for visível na Banda “C” após a realização do
teste, o resultado é considerado inválido. As instruções de uso podem não ter sido
seguidas corretamente ou o teste pode ter se deteriorado. Recomenda­se que a
amostra seja testada novamente.
[CONTROLE DA QUALIDADE]
A linha controle é um controle interno dos reagentes e procedimentos. Ela será exibida se o teste for
realizado corretamente e os reagentes forem reativos. A ausência da linha controle pode indicar que o
volume da amostra foi insuficiente ou o dispositivo de teste está fora da validade ou fora do padrão de
qualidade.
[LIMITAÇÕES DO TESTE]
1)Um resultado negativo pode ocorrer se a quantidade de antígeno NS1 presente na amostra estiver abaixo
do limite de detecção do teste ou os antígenos detectados não estão presentes durante o estágio da
doença quando a amostra for coletada.
2)Um resultado negativo não pode excluir uma infecção recente.
3)A presença do antígeno NS1do vírus da dengue detectável pode significar positivo para infecção precoce
da dengue. Como em todos os testes diagnósticos, todos os resultados devem ser analisados em conjunto
com outras informações clínicas disponíveis para o médico.
4)Em infecções precoces e algumas infecções secundárias, os níveis detectáveis de anticorpos IgM podem
ser baixos. Alguns pacientes podem não produzir níveis detectáveis de anticorpos nos primeiros sete a
dez dias após a infecção. Se os sintomas persistirem, os doentes devem ser retestados 3­4 dias após a
primeira amostra.
[VALORES ESPERADOS]
O antígeno NS1 é esperado para ser detectado 1 dia após o início da febre e persiste por até 9 dias em
ambas as infecções por dengue; primárias e secundária.
A dengue primária é caracterizada pela presença de IgM detectável de 4 a 10 dias após o início da
infecção, atingindo os niveis mais elevados por volta do 7º ou 8º dia e declinando após alguns meses. O
IgG é detectável por volta do 14 º dia e persiste por toda a vida.
A dengue secundária é caracterizada pela elevação de IgG específica de 1 a 2 dias após o início da
infecção e induzem a resposta de IgM tardiamente, aproximadamente após 20 dias de infecção.
[CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO]
O teste rápido OL Combo Dengue NS1/IgG/IgM apresentou sensibilidade de 92.8% e especificidade de
98.4% para NS1.
Para IgG/IgM, a sensibilidade foi de 99.5% e a especificidade foi de 98.5%.
O teste rápido OL Combo Dengue NS1/IgG/IgM é altamente sensível já nas primeiras 24 horas após o
surgimento dos sinais clínicos tanto para infecção primária quanto secundária.
O teste rápido OL Combo Dengue NS1/IgG/IgM não apresenta reatividade cruzada com outras doenças
mediadas por outros flavivirus como a febre amarela, também não apresenta reatividade cruzada com o P.
falciparum, P. vivax.
[REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS]
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Uso exclusivo para diagnóstico “in vitro”.
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Revisão: março de 2015