PROBITI
TESTE DE TOXICIDADE EMBRIONÁRIA EM ZEBRAFISH
(DANIO RERIO) DE COMPOSTO ORGANOMETÁLICO
DERIVADO DO ÁCIDO VALPROICO [CU(VALP)2FEN]
Avaliar a toxicidade embrionária de [Cu(Valp)2Fen] e AV
em zebrafish com protocolo validado por uma agência
internacional.
METODOLOGIA
A avaliação da toxicidade embrionária para
[Cu(Valp)2Fen] e AV nas concentrações (0,37; 1,11; 3,33;
10 e 30 μMol) e (8; 40; 200; 1000 e 5000 μMol),
respectivamente, foram realizadas de acordo com a
orientação do protocolo 236 da Organização para a
Cooperação Econômica e Desenvolvimento em zebrafish
(Fig. 1). Os seguintes parâmetros foram avaliados:
coagulação de embriões fertilizados; ausência de
formação de somito; ausência de descolamento da
cauda, ausência de batimento cardíaco e determinação
da concentração letal (LC50).
[Cu(Valp)2Fen]
0,37; 1,11; 3,33; 10; 30 μMol
24; 48; 72 e 96h
AV
Seleção de ovos fertilizados e
determinação da taxa de fertilidade
8; 40; 200; 1000 e 5000 μMol
Fig. 1. Metodologia para determinação da toxicidade embrionária.
RESULTADOS
Os embriões expostos à faixa de concentração do [Cu(Valp)2Fen]
não apresentaram alterações morfológicas nas concentrações
testadas, e as mesmas não provocaram a coagulação dos
embriões durante o período de avaliação (96 horas pós
fertilização - hpf). O grupo tratado com AV com concentrações de
8 e 40 µMol não apresentou alterações morfológicas ao final de
96 h. Apesar de não causar alterações morfológicas, as
concentrações de 10 µMol ([Cu(Valp)2Fen]) e 1000 µMol (AV)
provocaram alterações na frequência cardíaca, sendo
estatisticamente significante (p <0,05). Entretanto, as demais
concentrações não apresentaram este mesmo perfil (Fig. 2) (Fig.
3).
S u r v iv a l
S u r v iv a l
30
30
D e a th
D e a th
n u m b e r o f a n im a ls
OBJETIVO
Tratamentos
Ovos fertilizados
O ácido valproico (AV) é um fármaco destinado ao
tratamento da epilepsia refratária e apresenta alguns
efeitos adversos importantes, como por exemplo,
teratogenicidade [1]. Estudos recentes sobre complexos
organometálicos com AV com íons de cobre divalentes
apresentaram efeito terapêutico muito superior ao AV
[2]. Neste estudo, estes íons metálicos foram
coordenados com ligantes orgânicos como a 1,10fenantrolina, além de duas moléculas de AV, resultando
em um complexo [Cu(Valp)2Fen]. A utilização dos
embriões de zebrafish para testes de toxicidade engloba
tanto a rapidez quanto o baixo custo, além da
possibilidade de serem testados mais de um candidato a
fármaco em um único experimento [3].
n u m b e r o f a n im a ls
INTRODUÇÃO
População reprodutora
Zebrafish
Camila Cervi Pires1; Lauren Dockhorn Grünspan1; Pablo Ricardo Bertelli2;
Miriana da Silva Machado2; Sidnei Moura e Silva1; Leandro Tasso1
1Universidade de Caxias do Sul, UCS; 2Universidade Federal do Rio Grande do Sul, UFRGS
L iv e
20
10
L iv e
20
10
[1] PERUCCA E. Pharmacological and therapeutic properties of
valproate: a summary after 35 years of clinical experience. CNS Drugs,
v.16, n. 10, p. 695-714, 2002. [2] DUMAS, F. et al. Synthesis, structural
analysis and anticonvulsant activity of ternary Cu II mononuclear
complex containing 1, 10-phenanthroline and the leading antiepileptic
drug valproico acid, Biochimie. v 91, p. 1286-1293, 2009. [3] OECD.
OECD guidelines for the testing of chemicals: fish embryo acute toxicity
(FET) test. OECD, 2013. 22 p. Disponível em: <http://www.oecdilibrary.org/environment/test-no-236-fish-embryo-acute-toxicity-fet
test_9789264203709-en;jsessionid=2eckxs1wiwdl9.x-oecd-live-03.
Acesso em: agosto 2015.
00
50
00
10
0
20
o
C
M
o
lv
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Fig. 2. Sobrevivência dos animais em
diferentes concentrações de
[Cu(Valp)2Fen] .
S
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3
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0
2
H
e
REFERÊNCIAS
tO
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tr
o
l
0
8
0
Fig. 3. Sobrevivência dos animais em
diferentes concentrações de AV.
CONSIDERAÇÕES FINAIS
A partir desses resultados foi possível avaliar que as doses testadas
do derivado organometálico não provocam efeito toxicológico neste
modelo animal, sendo possível avaliar a atividade anticonvulsivante
com segurança e acurácia.
AGRADECIMENTOS: UCS, FAPERGS