Dade®
Dimertest®
Latex Test*
Para la determinación cualitativa y semicuantitativa de los derivados de
fibrina entrecruzados (conteniendo el dominio del dímero D) existentes en
plasma.
Campos de aplicación
El Dimertest® Látex Test sirve para la evaluación cualitativa o semicuantitativa rápida
de los derivados de fibrina entrecruzados (XDP) circulantes en el plasma humano.
Significado diagnóstico y principio del método
El coágulo de fibrina es formado mediante el rompimiento, catalizado por trombina,
del fibrinógeno soluble, para forma monómeros de fibrina. Los monómeros de fibrina
se van a reunir siguiendo un patrón de escalamiento y de superposición para formar
las bandas de fibrina, las cuales finalmente se gelifican para formar el coágulo de
fibrina. Durante esta fase de polimerización de la fibrina, la trombina activa el factor
XIII convirtiéndolo en una enzima activa, el factor XIIIa. El factor XIIIa transforma
luego la fibrina soluble en un coágulo de fibrina insoluble, mediante el entrecruzamiento de moléculas de fibrina adyacentes en la región de los dominios D.1
En los lugares donde ocurre coagulación sanguínea, se va a formar plasmina. La
plasmina es la enzima de lisis más importante, la cual puede romper tanto fibrinógeno como fibrina para producir diferentes productos de degradación. Al contrario de
los productos de degradación del fibrinógeno (FDP), la plasmólisis de la fibrina entrecruzada por el factor XIIIa, produce derivados (XDP), que contienen los dominios
D entrecruzados. Por esto, los derivados de fibrina en plasma conteniendo el dímero
D, son una señal específica para la fibrinólisis.
El Dade® Dimertest® Látex Test está previsto para la evaluación rápida, cualitativa o
semicuantitativa, de los derivados de fibrina entrecruzados (XDP), circulantes en
plasma humano. Un anticuerpo para dímero D, monoclonal y altamente específico
va unido a las partículas de látex. En presencia del dímero D ocurre una aglutinación
notoria de las partículas látex. Esto es una indicación positiva de la fibrinólisis. La
sensibilidad de la determinación del Dade® Dimertest® Látex Test se ajustó, usando
el mismo anticuerpo monoclonal en un test ELISA para fragmentos de dímero D
humanos purificados, de tal manera que se obtenga una aglutinación positiva a una
concentración de derivados de fibrina entrecruzados, conteniendo dímero D, de
aproximadamente 0,20 µg/ml.
Reactivos
Composición
1. Dimertest®- Látex Beads: Suspención de partículas de látex al 0,83%, recubierta con anticuerpo monoclonal de ratón, específico para derivados dímero D de
fibrina entrecruzados humana, conteniendo estabilizadores y 0,1% de azida sódica como medio de conservación.
2. Dimertest® Control positivo: La solución contiene fragmentos de dímero D humanos purificados, estabilizadores y 0,1% de azida sódica como medio de conservación. La solución da una reacción de aglutinación positiva con el Dimertest®- partículas de látex.
3. Dimertest® Control negativo: La solución contiene tampón, y 0,1% de azida
sódica como medio de conservación. La solución no aglutina con el Dimertest®partículas de látex.
4. Dimertest® Tampón: La solución contiene un tampón de fosfato 10 mM y 0,1%
de azida sodíca como medio de conservación.
Advertencias y medidas de seguridad
1. Sólo para ser utilizado en diagnósticos in-vitro.
2. En el manejo de diagnósticos in-vitro que contengan azida sódica debe observarse lo siguiente:
No ingerir y evitar contacto con la piel y mucosas. La azida sódica puede formar
azidas explosivas con metales pesados como cobre y plomo.
3. Este producto debe tratarse como potencialmente infeccioso.
El Dade® Dimertest® Látex Test contiene componentes de origen humano. Cada
donación individual de sangre destinada a la elaboración de estos componentes
fue sometida a pruebas para detectar HBsAg, anti-HCV, anti-HIV1 y anti-HIV2.
Para la elaboración sólo se utilizaron donaciones con resultados negativos.
Independientemente de esto, todas los materiales obtenidos a partir de sangre
humana deben ser manipulados con las precauciones necesarias, siguiendo las
medidas de seguridad recomendadas en caso de riesgo biológico, puesto que
nunca se puede excluir completamente la existencia de agentes patógenos2.
Indicaciones de deterioro: Ausencia de aglutinación de las partículas de látex con
el control positivo, aglutinación con el control negativo o una contaminación microbiológica evidente.
Estabilidad y almacenaje
Los componentes del Dimertest® Látex Test deben almacenarse entre +2 y +8 °C
después de usados. No congelar.
* U.S. Patente 4 758 524
B4233 G60 E1940 H
1
Edición Octubre 2003
Material a investigar y preparación
Plasma
Los plasmas apropiados para el Dimertest® Látex Test son plasmas frescos o congelados (no más de 2 semanas) recogidos en citrato, EDTA o heparina. Citrato es el
anticoagulante escogido. Al utilizar EDTA o heparina se pueden aumentar los niveles de resultados positivos falsos. Después de la separación del plasma por centrifugación, las muestras pueden ser directamente investigadas a la presencia de XDP.
Una desfibrinación del plasma no es necesaria ni tampoco recomendable.
Procedimiento
Contenido del envase comercial
N°-Cat.
Producto
Presentación
B4233-60
B4233-61L
Dade® Dimertest® Látex Test
Dade® Dimertest® Látex Beads
60 determinaciones
2,0 ml
Testkit, N° de pedido B4233-60
1. Dimertest® Látex Suspención (Beads)
2. Dimertest® Control positivo
3. Dimertest® Tampón
4. Dimertest® Control negativo
5. Soporte con 8 campos de reacción
6. Agitadores de plástico para mezclar y agitar los plasmas
Materiales adicionales necesarios
1. Pipetas y puntas de pipeta con capacidad de 20 y 100µl
Nota: Para obtener resultados exactos del ensayo es indispensable un pipeteo
exacto.
2. Tubos de ensayo plásticos desechables (12 x 75 mm)
3. Soporte para tubos de ensayo
4. Rotor mecánico (opcional)
Control de calidad
Tanto el control positivo como el control negativo deben ser incluidos en cada serie
del ensayo para asegurar que el sistema trabaja apropiadamente. Siga las instrucciones del test de investigación cualitativo en la evaluación de los controles. Un resultado positivo (aglutinación) se logra, cuando en lugar de utilizar el plasma a investigar
se utiliza el Dimertest® Control positivo (etapas 4-6). En el caso contrario, un resultado negativo (no aglutinación) se logra, cuando en lugar del plasma a investigar, se
utiliza el Dimertest® Control negativo (etapas 4-6). Para el desarrollo del procedimiento semicuantitativo se recomienda chequear una serie de diluciones del control positivo. El control positivo del Dimertest® está compuesto por una solución de dímero D
humano, la cual tiene una concentración de aproximadamente 0,8 µg/ml.
Método
Nota: Los componentes del Dimertest® Látex Test deben ser llevados a temperatura
ambiente antes de ser usados (temperatura óptima +20 - +25 °C con una humedad
relativa > 20%), y las partículas de látex se deben mezclar invirtiendo rápidamente
el frasco, varias veces, inmediatamente antes del uso.
A. Ensayo cualitativo
1. Llevar los reactivos del Dimertest® Látex Test y las muestras a temperatura ambiente.
2. Marcar (o hacer una nota de) las posiciones de las muestras a investigar y, en caso
dado, de los plasmas de control positivo y negativo en la placa de pruebas.
3. Mantener el frasco goteador conteniendo las partículas de látex, en forma vertical y
agregar una gota a cada campo de reacción
4. Añadir 20 µl de plasma sin diluir o una gota de solución control cerca de la gota de
látex. Mezclar inmediatamente la suspención con la punta de uno de los agitadores
de plástico, hasta que el campo de reacción este completamente cubierto. Descarte
el agitador después de usado con cada muestra.
5. Rotar la placa de muestras durante 3 minutos, de forma manual o con la ayuda de un
rotor mecánico.
6. Probar la aglutinación exactamente 3 minutos después de la mezcla, bajo una fuente
de luz fuerte
Nota: El test, realizado en las condiciones anteriores, debe ser leído después de 3
minutos. Si la lectura se realiza más allá de 3 minutos la suspención de látex se
puede secar, dando un patrón de aglutinación falso. En caso de duda, se debe
repetir la investigación de la muestra.
B. Ensayo semicuantitativo
En casos normales, las muestran a investigar que tengan una concentración de
XDP en plasma mayor de 0,20 µg/ml, van a dar una aglutinación positiva. La estimación de una muestra con un contenido mayor de XDP se puede efectuar mediante
una serie de diluciones del plasma con el Dimertest® Tampón, las cuales se van a
medir como se describió arriba en el desarrollo del ensayo. La máxima dilución, para
la cual se presenta aglutinación visible, es el título.
Ejemplo: Si el material plasmático sin diluir aglutina, diluya una parte (por lo menos
100 µl) del material a investigar con el mismo volumen de tampón (elabore una
dilución 1:2). Mezclar un volumen adecuado de esta dilución con el mismo volumen
de tampón, lo que da una dilución 1:4. Para preparar una serie de diluciones repetir
este proceso, como se describió.
Valoración
A. Ensayo cualitativo
Para el ensayo cualitativo se deben obtener resultados que correspondan con la
siguientes patrones:
Plasma sin diluir
Concentración-XDP
Negativo
menos de 0,20 µg/ml
Positivo
más de 0,20 µg/ml
Nota: Todos los valores en µg/ml son aproximados
B. Ensayo semicuantitativo
La Tabla 1 da valores aproximados para XDP, conteniendo el dominio dímero D, en
muestras diluidas. Como para todos los ensayos semicuantitativos, se puede esperar aquí alguna variabilidad dosis-reacción
Tabla 1
Dilución de las muestras
Rango aproximado
Dímero D (XDP) (µg/ml)
< 0,20
0,20 - 0,40
0,40 - 0,80
0,80 - 1,60
1,60 - 3,20 *
sin diluir
+
+
+
+
1:2
+
+
+
1:4
+
+
1:8
+
(“+” = aglutinación, “-” = no aglutinación)
* Los valores de XDP mayores de 3,2 µg/ml, se pueden determinar usando más
diluciones por debajo de 1:8.
Interpretación de los resultados
La concentración en plasma de los productos de degradación de la fibrina entrecruzados (XDP, que contienen el dominio D) en personas normales es de manera típica
mucho menor de 0,20 µg/ml, razón por la cual en el material de investigación proveniente de pacientes normales se espera que con el método antes descrito se obtengan resultados negativos. Concentraciones de aproximadamente 0,20 µg/ml de
XDP o más, dan con el Dimertest® Látex Test una aglutinación.
La investigación del plasma a XDP, es de valor diagnóstico para la coagulación intravascular diseminada (CID) y en enfermedades agudas de los vasos sanguíneos
incluyendo embolia pulmonar (EP) y trombosis venosa profunda (TVP). Es decir
para casos, que son muy difíciles de detectar en una investigación clínica.
La concentración de XDP en plasma (expresada en µg/ml) puede ser determinada
de manera semicuantitativa, determinando el título más alto de dilución, para el cual
un determinado material de investigación presenta aún un resultado positivo (Tabla
1). Además de esto, la cantidad medible de XDP en una muestra depende de una
serie de factores in vivo, como por ej., la gravedad del episodio trombótico, la velocidad de formación de los derivados de fibrina entrecruzados y el tiempo entre el
episodio trombótico y la toma de sangre del paciente. Así como para cada cualquier
test de laboratorio, la detección de niveles elevados de los derivados de fibrina entrecruzados, en el material de investigación, debe ser valorado en conjunto con las
otras informaciones clínicas, para poder emitir un diagnóstico.
Utilizando una combinación de técnicas de inmunopresipitación y electroforesis en
gel, se encontraron valores elevados de productos de degradación de la fibrina entrecruzados, conteniendo el dominio del damero D.3-7 Los anticuerpos monoclonales
(MAb)8 permiten ahora, la determinación exacta del dominio dímero-D y han sido
usados para el diagnóstico de embolia pulmonar, trombosis venosa profunda, trombosis arterial y coagulación intravascular diseminada.9 El Dimertest® Látex Test no
presenta reacciones cruzadas con fibrinógeno, fibrinógeno entrecruzado por el factor XIIIa10 o con los productos de degradación del fibrinógeno9.
Limitaciones del Procedimiento
Factores reumatoideos: En un estudio con muestras de pacientes que sufrían de
artritis reumatoidea, se pudo observar, para 17 muestras, una aglutinación con el
Dimertest® Látex Test. Para todas las 17 muestras se pudo inhibir la aglutinación al
agregar el anticuerpo monoclonal específico para el dímero D, DD3B6/22. Al agregar el anticuerpo monoclonal no específico, IgG3K del mismo subgrupo, no se presentó este efecto. Esto quiere decir que el Dimertest® Látex Test es insensible a
alteraciones por medio de los factores reumatoideos.
Las influencias de otros factores pueden ser posibles pero no han sido descritas
hasta ahora. Sin embargo, en pacientes con anemia depranocítica, con una crisis
vasoclusiva, se ha encontrado una aglutinación positiva con el Dimertest® Látex
Test.
Características del test
Muestras de plasmas de ciento setenta (170) donadores de sangre, voluntarios y
aparentemente sanos fueron chequeados usando el Dimertest® Látex Test. Ciento
sesenta y dos muestras (162) dieron resultados negativos. Esto equivale a una especificidad del 95,3% (162/170).
Ciento cuarenta y cinco (145) muestras de plasma de pacientes que padecían de un
episodio trombótico o para los cuales existía un alto riesgo de trombosis fueron
chequeados con el Dimertest® Látex Test, así como también, por otro método de
aglutinación de referencia. La correlación fue r = 0,94; la ecuación de regresión fue y
= 1,19x .
La reproducibilidad intra-assay (esto es, dentro de la misma marcha de muestras)
se determinó en 10 replicaciones de tres muestras de plasma, con diferentes niveles
de XDP. Los resultados de todas las replicaciones fueron equivalentes.
La reproducibilidad inter-assay (esto es dentro de diferentes marchas de muestras),
se determinó en 10 muestras de plasmas con títulos de XDP entre 1 y 16. Para 10
marchas diferentes, los valor de la repetición de estas muestras no variaron en más
de un título.
La presencia de bilirrubina (0,2 mg/ml), lipemia (30 mg/ml de triglicérido), hemoglobina (5,0 mg/ml) y proteína (0,06 g/ml) no tienen ninguna influencia sobre el Dimertest® Látex Test. El ensayo se realizó a concentraciones elevadas.
En un estudio de aglutinación, en el cual se midieron de forma paralela 50 muestras
de plasma en citrato, EDTA y heparina, las correlaciones obtenidas entre el título
obtenido con Dimertest® Látex Test y el título esperado (basado en los valores de
XDP en ELISA) fueron, r = 0,91 para las muestras tratadas con citrato, r= 0,73 para
las muestras tratadas con EDTA y r = 0,78 para las muestras tratadas con heparina.
De aquí se obtuvo que el citrato es el anticoagulante que se debe usar en este test.
Bibliografía
1. Pepper, D.S.; Preston, F.E.; Mibashan, R.S. Seminars in Hematology 15: 73-92;
1978.
2. U.S. Department of Health and Human Services CDC, Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, HHS Publication (CDC) 93-8395; 1999; Section II; 8-16
3. Gaffney, P.J. Clin. Chim. Acta 65: 109-115; 1975.
4. Lane, D.A.; Preston, F.E.; van Ross, M.E.; Kakkar, V.V. Brit. J. Haematol. 40:
609-615; 1978.
5. Whitaker, A.N.; Rowe, E.A.; Masci, P.P.; Gaffney, P.J. Thromb. Res. 18: 453-459;
1980.
6. Graef, H.; Hafter, R. Sem. Thromb. Haemostas, 8: 57-68; 1982.
7. Yoshioka, K.; Mizuno, S.; Myata, H.; Maki, S. Eur, Pediatrics. 138: 46-48; 1982.
8. Rylatt, D.B.; Blake, A.S.; Cottis, L.E.; Massingham, D.A.; Fletcher, W.A.; Masci,
P.P.; Whitaker, A.N.; Elms, M.; Bunce, I.; Webber, A.J.; Wyatt, D.; Bundesen,
P.G. Thromb. Res. 31: 767-778; 1983.
9. Elms, M.J.; Bunce, I.H.; Bundesen, P.G. Rylatt, D.B.; Webber, A.J.; Masci, P.P.;
Whitaker, A.N. Am. J. Clin. Path. 85: 360-364; 1986.
10. Greenberg, C.S.; Devine, D.V.; McCrea, K.M. Am. J. Clin. Path. 87: 94-100;
1986.
11. Whitaker A.N.; Elms, M.J.; Masci, P.P.; Bundesen, P.G.; Rylatt, D.B.; Webber,
A.J.; Bunce, I.H. J. Clin. Pathol. 37: 882-887; 1984.
Se garantiza, que la manera de actuar de este producto corresponde con los datos
dados en el envase y en la literatura del mismo. Dade Behring no responde por la
venta o el uso de este producto, en el caso de que éste sea usado con alguna
otra finalidad, como tampoco por cualquier tipo de daños consecutivos que
resulten de la garantía antes mencionada.
Dade es una marca registrada de Dade Behring Inc. en USA, Alemania y en otros
países.
Dimertest es una marca registrada de AGEN Biomedical Ltd.
Fabricado para Dade Behring Marburg GmbH por AGEN Biomedical Ltd Brisbane,
Australia.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
www.dadebehring.com
Para la correcta dosificación de la gota...
... limpie y seque la punta antes de usarla
B4233 G60 E1940 H
2
Teste de Látex Dimertest® Dade®*
Para a determinação qualitativa e semiquantitativa de derivados de fibrina
reticulados transversalmente (contendo domínio de dímero D) encontrados
no plasma.
Campo de aplicação
O Teste de Látex Dimertest® serve para a avaliação qualitativa e semiquantitativa de
derivados de (fibrina reticulados transversalmente (PDX) circulantes no plasma humano.
Significado diagnóstico e princípio metodológico
O coágulo de fibrina forma-se a partir de fibrina solúvel mediante fraccionamento
trombinocatalizado, dando origem a monómeros de fibrina. Os monómeros de fibrina agregam-se, formando um padrão sobreposto, transposto, e dão origem a feixes
que gelificam pouco a pouco, formando o coágulo de fibrina. Durante esta fase da
polimerização da fibrina, a trombina activa o factor XIII, o qual se converte, em virtude disso, numa enzima activa, o factor XIIIa. Mediante a reticulação com moléculas
de fibrina vizinhas nas cercanias do domínio D, o factor XIIIa converte, então, a
fibrina solúvel em um coágulo de fibrina insolúvel1.
Nos locais onde ocorre uma coagulação sanguínea, forma-se plasmina. A plasmina
é a principal enzima da lise, podendo desintegrar tanto o fibronogénio quanto a
fibrina em diferentes produtos de desintegração. Ao contrário dos produtos de desintegração do fibrinogénio (PDF), na plasminólise de fibrina formada por reticulação
com o factor XIIIa resultam derivados (PDX) que ainda contêm domínio D reticulados transversalmente. Por isso, os derivados de fibrina no plasma, que contêm
dímero D, são um indicativo específico da fibrinólise.
O Teste de Látex Dimertest® Dade® destina-se à determinação qualitativa e semiquantitativa rápida de derivados de fibrina reticulados transversalmente (PDX) circulante no plasma humano. Um anticorpo monoclonal altamente específico de dímero
D está agregado às partículas de látex. Na presença do dímero D, tem lugar uma
aglutinação visível das partículas de látex. Esta é um indicativo positivo da fibrinólise. Pelo facto de que se utilizou o mesmo anticorpo monoclonal para fragmento de
dímero D humano purificado no teste Elisa, a sensibilidade analítica do Teste de
Látex Dimertest® Dade® foi adequada de tal modo que, a uma concentração de plasma de cerca de 0,20µg/ml de derivados de fibrina reticulados transversalmente contendo dímero D, obtém-se uma aglutinação positiva.
Reagentes
Composição
1. Dimertest® Látex Beads: Uma suspensão a 0,83% de partículas de látex, revestidas de derivados de dímero D humanos de fibrina reticulados transversalmente de anticorpos monoclonais do rato específicos. Contém estabilizadores e 0,1%
de azida sódica como conservante.
2. Controlo Positivo Dimertest®: A solução contém fragmento de dímero D humano purificado, estabilizadores e 0,1% de azida sódica como conservante. A solução, em associação com as Partículas de Látex Dimertest®, originam uma reacção de aglutinação positiva.
3. Controlo Negativo Dimertest®: A solução contém tampão e 0,1% de azida sódica como conservante. A solução não aglutina com as Partículas de Látex Dimertest®.
4. Tampão Dimertest®: A solução contém um tampão de fosfato 10 mM e 0,1% de
azida sódica como conservante.
Advertências e medidas de precaução
1. Somente para uso diagnóstico in vitro.
2. No manejo de agentes diagnósticos in vitro contendo azida sódica deve observar-se o seguinte: Evitar a ingestão e o contacto com a pele e as mucosas. A
azida sódica pode formar azidas explosivas com metais pesados, tais como o
cobre e o chumbo.
3. Tratar o presente produto como potencialmente infeccioso.
O Teste de Látex Dimertest® Dade® contém componentes de origem humana.
Cada doação de sangue individual, destinada à preparação destes componentes, foi analisada quanto à presença de antígeno de hepatite Bs, anti-HCV, antiHIV1 e anti-HIV2. Para a preparação utilizaram-se somente doações com resultado negativo.
Independentemente disso e uma vez que nunca se pode excluir totalmente o
risco de contaminação por agentes patogénicos, todos os materiais obtidos a
partir de sangue humano devem ser manuseados com o devido cuidado, observando-se as medidas de segurança recomendadas no caso de risco biológico 2.
Sinais de inutilização:
Ausência da reacção de aglutinação das partículas de látex no controlo positivo,
aglutinação com o controlo negativo ou evidente contaminação microbiana.
Estabilidade e condições de conservação
Os componentes do Teste de Látex Dimertest® devem ser conservados a uma temperatura de +2 - +8°C. Não congelar.
* U.S. Patent 4 758 524
B4233 G60 E1940 H
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Edição Outubro 2003
Amostras e preparação
Plasma
Plasma fresco ou recém-congelado (não mais que 2 semanas), colectado em citrato, EDTA ou heparina, é apropriado para o Teste de Látex Dimertest®. No caso da
utilização de EDTA ou heparina, obtêm-se em escala elevada reacções positivas
falsas. Após a separação do plasma por meio de centrifugação, as amostras podem
ser testadas directamente quanto à presença de PDX. Uma desfibrinização do plasma não é necessária nem recomendada.
Procedimento
Conteúdo da embalagem comercial
Cat. N°
Produto
Tamanho da
embalagem
B4233-60
B4233-61L
Teste de Látex Dimertest® Dade®
Teste de Látex Dimertest® Dade®
60 ensaios
2,0 ml
Kit de teste, N° de encomenda D4233-60
1. Suspensão de Látex Dimertest®
2. Controlo Positivo Dimertest®
3. Tampão Dimertest®
4. Controlo Negativo Dimertest®
5. Suporte com 8 campos de reacção
6. Bastonetes plásticos para misturar e remexer o plasma
Outros materiais necessários
1. Pipetas e ponteiras de pipetas para quantidades de 20 até 100 µl.
Observação: Para a obtenção de resultados de teste exactos é indispensável
pipetar muito exactamente
2. Tubinhos de teste plásticos descartáveis (12x75mm)
3. Cavalete para tubos de ensaio
4. Rotor mecánico (opcional)
Controlo de qualidade
Tanto o controlo positivo quanto o controlo negativo devem ser efectuados em toda
série de teste, a fim de assegurar que o sistema funciona correctamente. Obedecer
às instruções para o teste de ensaio qualitativo na avaliação. Um resultado positivo
(aglutinação) é obtido, utilizando-s, em lugar do plasma a ser testado, o Plasma de
Controlo Positivo Dimertest® (passos 4-6). Um resultado negativo (aglutinação nula)
é obtido, utilizando-se, em lugar do plasma a ser testado, o Plasma de Controlo
Negativo Dimertest® (passos 4-6). Na execução do processo semiquantitativo, recomenda-se o acompanhamento de diluições seriadas do controlo positivo. O controlo
positivo do Dimertest® consiste numa solução de dímero D humano, em concentração de cerca de 0,8 µg/ml.
Metódica
Observação: Antes do uso, os componentes do Teste de Látex Dimertest® devem
ser levados à temperatura ambiente (faixa óptima +20 - +25°C a uma humidade
relativa do ar de >20%). Imediatamente antes do uso, as partículas de látex devem
ser misturadas mediante repetida rotação rápida do recipiente.
A Teste quantitativo
1. Levar os reagentes do Teste de Látex Dimertest® e o material de ensaio à temperatura ambiente.
2. Marcar e anotar as posições do material de ensaio e, eventualmente, dos plasmas de controlo positivo e negativo na placa de teste.
3. Manter o frasco conta-gotas com as partículas de látex em posição vertical e
adicionar uma gota a cada campo de reacção.
4. Deitar 20 µl de plasma não diluído ou 1 gota da solução de controlo ao lado das
gotas de látex. Misturar imediatamente a suspensão com a ponta de um dos
bastonetes plásticos, até que o campo de reacção esteja coberto. Descartar o
bastonete após cada utilização numa amostra.
5. Volver a placa de teste durante 3 minutos ligeiramente em movimento giratório manualmente ou com o auxílio de um rotor mecánico.
6. Exactamente 3 minutos depois da mistura, deve avaliar-se a aglutinação sob
uma fonte luminosa intensa.
Observação: Sob as condições descritas acima, o teste deverá ser avaliado após 3
minutos. Se a leitura do teste for feita depois de terem transcorrido 3 minutos, a
suspensão de látex pode ressecar e apresentar um resultado de teste falso. Em
caso de dúvida, repetir o ensaio.
B Teste semiquantitativo
No caso de material de ensaio contendo mais que cerca de 0,20 µg/ml de PDX no
plasma, normalmente resultará uma aglutinação positiva. Uma estimativa para um
teor mais elevado de PDX numa amostra poderá ser feita mediante uma diluição em
série do plasma em Tampão Dimertest®, seguida, como descrito na instrução acima,
de um teste das diluições de amostras. A diluição máxima na qual se manifesta uma
aglutinação visível é o título.
Exemplo: Se o material de plasma não diluído aglutinar, diluir uma parte (no mínimo
100 µl) do material de ensaio com um volume idêntico de tampão (preparar uma
diluição 1:2). Misturar uma quantidade volumétrica adequada desta amostra diluída
com a mesma quantidade volumétrica de tampão, resultando uma diluição 1:4. Repetir esta operação - como descrito - para preparar uma série de diluições.
Avaliação
A Teste qualitativo
No teste qualitativo devem ser obtidos resultados de acordo com o padrão seguinte:
Plasma não diluído
Concentração PDX
Negativo
menos que 0,20 µg/ml
Positivo
mais que 0,20 µg/ml
Observação: Todos os valores em µg/ml são aproximados.
B Teste semiquantitativo
A Tabela 1 mostra valores aproximados de PDX contendo domínio dímero D para
diluições de amostras. Como em todos os processos semiquantitativos, pode esperar-se uma certa variação na reacção da dose.
Tabela 1
Diluição das amostras
A reprodutibilidade intra-assay (i.e. no mesmo ensaio) foi determinada em 10 repetições de três amostras de plasma com diferentes níveis de PDX. Os resultados de
todas as repetições foram equivalentes.
A reprodutibilidade inter-assay (i.e. entre ensaios diferentes) foi determinada em 10
amostras de plasma com títulos de PDX entre 1 e 16. Em 10 ensaios, os valores de
repetição destas amostras não variaram de mais de um título.
A bilirrubina (0,2 mg/ml), a lipemia (30 mg/ml de triglicérides), a hemoglobina (5,0
mg/ml) e a proteína (0,06 g/ml de gama-globulina) não tiveram influência sobre o
Teste de Látex Dimertest® na concentração máxima testada.
Num estudo de anticoagulantes, no qual foram medidas paralelamente 50 amostras
de plasma misturadas com citrato, EDTA e heparina, a correlação entre os títulos
determinados com o Teste de Látex Dimertest® e os títulos esperados (baseados em
valores ELISA de PDX) foi de r = 0,91 para as amostras misturadas com citrato, r =
0,73 para as amostras misturadas com EDTA e r = 0,78 para as amostras misturadas com heparina. Dai resulta que o citrato deve ser utilizado como anticoagulante
para este teste.
Bibliografia
Faixa aproximada
Dímero D (PDX) (µg/ml)
< 0,20
0,20 - 0,40
0,40 - 0,80
0,80 - 1,60
1,60 - 3,20 *
não diluído
+
+
+
+
1:2
+
+
+
1:4
+
+
1:8
+
(“+” = aglutinação, “-” = aglutinação nula)
Vide a página 2.
Garante-se que o modo de agir deste produto corresponde às indicações na embalagem e na documentação sobre o produto. Dade Behring não assume a responsabilidade pela qualidade comercial nem pela aptidão do produto, caso o
mesmo seja utilizado para quaisquer outras finalidades que não as indicadas,
nem por quaisquer danos subsequentes que resultarem das garantias contratuais supracitadas.
* Valores de PDX acima de 3,2 µg/ml podem ser estimados por meio de diluições
subsequentes além de 1:8.
Dade é uma marca registada da Dade Behring Inc. nos EUA, na Alemanha e noutros
países.
Interpretação dos resultados
No ser humano normal, a concentração plasmática de produtos de desintegração
de fibrina reticulados transversalmente (PDX que contém o domínio D) tipicamente
é inferior a 0,20 µg/ml, razão pela qual se espera obter, no caso de material de
ensaio de pacientes normais, resultados negativos com os métodos de teste descritos acima. Concentrações de aproximadamente 0,20 µg/ml de PDX ou superiores
resultam numa aglutinação, com o Teste de Látex Dimertest®.
Um exame prévio do plasma quanto à presença de PDX adquire significado diagnóstico no caso de uma coagulação intravascular disseminada (CID) e de doenças
vasculares agudas, inclusive embolia pulmonar (EP) e trombose venosa profunda
(TVP). Portanto, no caso de resultados de exames que, em exames clínicos, são
muito difíceis de serem diagnosticados com segurança.
A concentração de PDX no plasma (expressa em µg/ml) pode ser determinada
semiquantitativamente, determinando-se o maior título de diluição que ainda apresenta um resultado positivo para um determinado material de ensaio (Tabela 1).
Além disso, a quantidade de PDX a ser medida em uma amostra depende ainda de
uma série de factores interdependentes in vivo, p.ex. a gravidade do evento trombótico, a extensão da formação de derivados de fibrina reticulados transversalmente e o tempo transcorrido entre o evento trombótico e a coleta de sangue no doente.
Analogamente a todo teste de laboratório, o resultado de valores aumentados de
derivados de fibrina reticulados transversalmente no material de ensaio deve ser
avaliado em correlação com outras informações clínicas, a fim de estabelecer-se
um diagnóstico.
Mediante a utilização duma combinação de imunoprecipitação e técnicas de eletroforese de gel, determinaram-se, em pacientes, valores aumentados de produtos de
desintegração de fibrina contendo o domínio dímero D 3-7. Agora, anticorpos monoclonais (AcM) 8 permitem determinar exactamente o domínio dímero D e foram utilizados no diagnóstico de embolias pulmonares, trombose venosa profunda, trombose arterial e coagulação intravascular disseminada 9. O Teste de Látex Dimertest®
não produz reacção cruzada com fibronogénio, fibronogénio reticulado transversalmente com factor XIIIa 10 ou produtos de desintegração de fibrinogénio 9.
Dimertest é uma marca registada da AGEN Biomedical Ltd.
Produzido para Dade Behring Marburg GmbH por AGEN Biomedical Ltd Brisbane,
Australia.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
www.dadebehring.com
Para dosagem correcta das gotas...
...secar a ponteira do frasco antes do uso
Limitações do Procedimento
Factores reumáticos: Num estudo com amostras de pacientes que sofriam de artrite
reumatóide, observou-se uma aglutinação em 17 amostras com o Teste de Látex
Dimertest®. Em todas as 17 amostras foi possível inibir a aglutinação mediante a
adição do anticorpo monoclonal DD3B6/22 específico do dímero D. Na adição do
anticorpo monoclonal não específico IgG 3k do mesmo subgrupo, este efeito não se
manifestou, ou seja, o Teste de Látex Dimertest® não reage sensivelmente a perturbações por factores reumáticos.
Influências por outros factores são possíveis, mas até a data ainda não foram descritos. Em pacientes com uma anemia de hemácias falciformes que atravessaram uma
crise vasoclusiva, contudo, verificou-se uma aglutinação positiva com o Teste de
Látex Dimertest®.
Symbols Key / Symbolschlüssel / Explication des Symboles /
Interpretazione simboli / Clave de los Símbolos / Chave dos Símbolos
Manufactured by / Hergestellt von / Fabriqué par / Prodotto da / Fabricado por
Características do teste
Amostras de plasma de cento e setenta (170) doadores de sangue voluntários aparentemente saudáveis foram testadas com o Teste de Látex Dimertest®. Cento e
sessenta e duas (162) amostras apresentaram um resultado negativo. Isso corresponde a uma especificidade de 95,3% (162/170).
Cento e quarenta de cinco (145) amostras de plasma de doentes que sofriam dum
episódio trombótico ou nos quais existia uma elevada propensão para tromboses,
foram testadas com o Teste de Látex Dimertest® e um outro método de aglutinação de referência. A correlação foi de r = 0,94; a equação de regressão acusou
y = 1,19 x.
IVD
LOT
EXP
CCYY-MM-DD
Storage Temperature / Lagertemperatur / Température de Conservation / Temperatura
di conservazione / Temperatura de almacenamiento / Temperatura de armazenagem
CE Mark / CE-Zeichen / Marquage CE / Marchio CE / CE Marca / Marca CE
REF
B4233 G60 E1940 H
4
In Vitro Diagnostic Medical Device / In Vitro Diagnosticum / Dispositif Médical
Diagnostic In Vitro / Dispositivo Medico per Diagnostica In Vitro / Producto sanitario
para Diagnóstico In Vitro
Lot Number / Chargenbezeichnung / Numéro de Lot / Numero di Lotto / Número de
Lote
Expiration Date / Verfalldatum / Date de Péremtion / data di scadenza / Fecha de
vencimiento / termo da validade
Catalogue Number / Katalog Nummer / Référence / Codice Catalogo / Número de
Catálogo
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