FACULTAD CIENCIAS EXACTAS FISICO QUIMICAS Y NATURALES DEPARTAMENTO CIENCIAS NATURALES ASIGNATURA OPTATIVA FISIOLOGÍA VEGETAL (Código 2104) MATERIA OPTATIVA DEL PLAN DE ESTUDIOS DEL PROFESORADO Y LICENCIATURA EN CIENCIAS BIOLÓGICAS. Profesoras Responsables: Dra. Guillermina Abdala y Dra. Virginia Luna Profesores: Dra. Guillermina Abdala, Dra. Virginia Luna, Dr. Sergio Alemano. Colaboradores: Dr. Fabricio Cassán, Lic. Mariana Reginato, Lic. Analía Llanes, Carga horaria: 120 hs. Clases teóricas: cuatro horas semanales Clases prácticas: un trabajo práctico semanal de 4 hs. Parciales: Tres. Régimen: Cuatrimestral Correlatividades: Cód. 2059 (aprobada para cursar), Cód. 2057 (aprobada para cursar) y Cód. 2033 (regular para cursar). Régimen de regulari dad: Exigencias que deben cumplir los alumnos: Asistencia al 80% de las clases teóricas, preparación, exposición y participación en seminarios, ejecución de los TP programados, elaboración y aprobación de informes escritos sobre los mismos. Se tomarán tres parciales escritos sobre los contenidos teóricos que deben manejar para acceder al coloquio final. La evaluación final será oral, en coloquio grupal en donde se plantearán preguntas problema en las que los alumnos deberán analizar los resultados experimentales, interpretarlos, discutirlos y sacar conclusiones. Régimen de promoción: Los alumnos que deseen promocionar deberán aprobar cada examen parcial con un mínimo de 7 puntos, tener un promedio de notas de informes y concepto de 7 puntos, y aprobar el coloquio final integrador con nota igual o superior a siete puntos. Objetivos Generales Profundizar en el conocimiento de la biología funcional de las plantas con especial énfasis en el metabolismo y su regulación por señales internas y ambientales. Estimular a los alumnos en el ejercicio de un rol protagónico, interactivo, con el fin de evitar la recepción pasiva de los conocimientos, realizando diseños 1 experimentales que imiten diferentes estímulos ambientales sobre las plantas y discutiendo resultados y bibliografía en seminarios-taller. Objetivos Específicos - Reconocer la importancia de las plantas superiores como eslabones primarios en los ecosistemas naturales y en la cadena productiva. - Analizar la importancia de la captura de carbono desde la atmósfera por las plantas, la biofísica molecular y bioquímica de la fotosíntesis. - Determinar la influencia de cada variable ambiental sobre la fisiología de la fotosíntesis y sus consecuencias para la población vegetal. - Comprender las bases fisiológicas e interpretar la flexibilidad de las respuestas frente a los estímulos lumínicos y de la gravedad. - Reconocer el papel de las hormonas vegetales, la traducción de su señal y la manera en que regulan la funcionalidad de las plantas determinando fenómenos de correlación. - Comprender las diferentes estrategias de las plantas para paliar el estrés ambiental. - Estudiar efecto de la interacción vegetal con microorganismos promotores del crecimiento y de vida simbiótica a nivel de la movilización de nutrientes y compuestos reguladores del metabolismo de la planta. Contenidos Tema 1. Unidad introductoria. Qué es la Fisiología Vegetal?. Son las plantas las fábricas del futuro? Las plantas y su funcionalidad en condiciones normales y de estrés (condiciones adversas). Tema 2. Fotosíntesis. Significación biológica. Estructura y organización del aparato fotosintético. Sistemas de pigmentos fotosintéticos. Las reacciones lumínicas. Mecanismos de transporte de electrones y protones. Generación de ATP y poder reductor. Regulación y reparación del aparato fotosintético. Genética, ensamblaje y evolución del sistema fotosintético. Caracterización de las enzimas principales. Plantas C3, C4 y CAM. Fotosíntesis y temperatura de la hoja, efectos y adaptaciones. Respuesta fotosintética a la concentración de O2C y a la temperatura ambiental. Concepto de Productividad. Productividad primaria de comunidades. Efecto de los polutantes del aire sobre la fotosíntesis. Tema 3. La luz y las plantas. a) Fitocromos. Propiedades fotoquímicas y bioquímicas. Pfr: forma fisiológicamente activa. Composición del fitocromo: dímero compuesto por dos polipéptidos, fitocromobilina, sintetizada en los plásticos, cromóforo y la proteína, sufren cambios conformacionales. Tipos de fitocromos identificados; codificación por familia de multigenes. Los genes PHY codifican los fitocromos 2 Tipo I y Tipo II. Localización de los fitocromos en tejidos y células. Respuestas de las plantas enteras inducidas por fitocromo. Respuestas que varían en el tiempo lag y en el tiempo de escape. Tipos de respuestas: de muy baja fluencia (RMBF), de baja fluencia (RBF), y de alta irradiancia (RAI). El fitocromo capacita a las plantas a adaptarse a los cambios de las condiciones de luz. b) Criptocromo: un sistema que induce procesos del desarrollo y protege del estrés lumínico. CRY1, un receptor de luz azul en plantas. Expresión génica regulada por luz azul. c) Fototropinas. phot1 y phot2 como sensores de luz azul. Su rol en el fototropismo, migración de cloroplastos, apertura estomática e inhibición del crecimiento del tallo. Tema 4. Fenómenos de Correlación. Movimiento de las plantas. Tropismos: fototropismo, gravitropismo, heliotropismo. Nastismos: nictinastia, hidronastia, tigmonastia. Formación de órganos de reserva (por ej. tubérculos). Tema 5. Señales químicas involucradas en las respuestas fisiológicas. Grupos involucrados. Su papel como intermediarios entre ambiente y morfogénesis. Correlaciones entre cambios de sensibilidad y etapas de desarrollo vegetativo. Acoplamiento del estímulo con la respuesta fisiológica. Regulación de la expresión génica. Estrategias de ingeniería genética para la obtención de tolerancia. Tema 6. La organización de las plantas condicionada por el ambiente. Concepto de entorno. Tipos de respuestas de las plantas al ambiente: directas, de encendido-apagado, retardadas y moduladas, homeostasis, efectos condicionantes, efectos de arrastre. Determinismo genético y ambiente. Ecotipos. Evolución de las plantas: la teoría adaptativa. La importancia de la individualidad en las respuestas al ambiente. Tema 7. Factores adversos. Concepto de estrés. Tolerancia. Efectos elásticos y plásticos. Efectos benéficos del estrés. Tipos de respuestas en función del tiempo: a corto, mediano y largo plazo. Concepto de fases de alarma, resistencia, agotamiento y regeneración. Conceptos de resistencia, tolerancia, susceptibilidad y evitación. Diferencias entre aclimatación, rusticación y adaptación. Diferentes tipos de estrés: biótico (ataque por patógenos) y abióticos: hídrico, salino, temperaturas extremas, anoxia, exceso de luz, radiación UV, metales pesados, polución (exceso de anhídrido carbónico, ozono). Elementos comunes a todos los tipos de estrés. Generación de especies activas del oxigeno (EAO). Estrés oxidativo. Relación entre estrés y senescencia. Parámetros de senescencia inducidos por estrés. Tema 8. Estrategias de la respuesta adaptativa. Tipos de adaptaciones: anatómicas, fisiológicas y ecológicas. Control del cierre estomático, regulación del flujo fotosintético de electrones, defensa antioxidante. Adaptaciones del aparato fotosintético a las condiciones de estrés. Impacto del estrés sobre el 3 transporte a través de membranas. Las membranas vegetales como sensores del ambiente. Proteínas transportadoras: canales, carriers y bombas, de membrana plasmática y de tonoplasto. Compartimentalización. Producción de compuestos osmocompatibles: prolina, glicina-betaína, azúcares, manitol, pinitol, polifenoles. Significado biológico. Mecanismos de acción comprobados y probables. Tema 9. Señales químicas involucradas en las respuestas a estrés. Jasmonatos (JAs). Acido jasmónico y compuestos relacionados. Diversidad estructural y biológica de los JAs. Formas químicas libres y conjugadas. Biosíntesis de JAs. Enzimas involucradas. Localización de la vía de síntesis a nivel celular y tisular. Metabolismo de JA. Inducción de metabolitos secundarios. Acción a nivel de diferentes procesos fisiológicos. Regulación de la expresión génica. Inducción de proteínas específicas. Niveles endógenos de JAs en procesos fisiológicos normales y relacionados a estrés. Papel de JA y derivados en el daño mecánico causado por insectos (wounding) y por patógenos. Métodos de análisis físicoquímicos. Tema 10. Ácido abscísico (ABA). Ocurrencia natural. Biosíntesis y metabolismo. Síntesis de epoxi-carotenoides. Clivage de xantofilas. Divergencia de roles en la familia multigénica de la CCDs (dioxigenasas clivadoras de carotenoides). Vía citosólica de C15. Catabolismo de ABA. Hidroxilación. Genes responsables de la misma. Conjugación. Significación biológica y ecológica de la regulación de la vía metabólica. Pasos claves, factores que influyen, niveles de regulación. Localización anatómica de las enzimas involucradas. Metabolismo del ABA en la embriogénesis y maduración de la semilla. Metabolismo del ABA en la respuesta ecofisiológica de dormición. Papel que cumple la ABA 8hidroxilasa. Metabolismo de ABA en la adaptación de la plantas al estrés abiótico. Evolución del metabolismo de este regulador clave de la respuesta adaptativa. Metabolismo en hongos y plantas inferiores. ABA como mensajero químico a larga distancia en plantas superiores. Su relación con otras vías de señalización en respuestas a estrés hídrico y salino. Control del cierre estomático. Interacciónes ABA-etileno, ABA-Giberelinas. Regulación de la expresión génica. Inducción de proteínas relacionadas estrés hídrico y salino. Segundos mensajeros involucrados. Uso de mutantes. Métodos físico-químicos de análisis para su extracción, purificación, identificación y cuantificación. Tema 11. Etileno. Propiedades del etileno. Biosíntesis y catabolismo en relación a su actividad fisiológica. Promoción de su síntesis por estrés. Efectos a nivel celular y tisular. Inhibición de su producción y/o acción. Interacciones auxinasetileno y ABA-etileno. Rol del etileno como inductor de senescencia. Métodos de análisis y cuantificación. Tema 12. Poliaminas. Aspectos generales del metabolismo de las poliaminas. Poliminas en plantas, bacterias y hongos. Funciones biológicas. Rutas metabólicas implicadas en la biosíntesis de poliaminas. Formas conjugadas. Características generales de las enzimas involucradas y regulación de su 4 actividad. Ornitina descarboxilasa. Espermidina y Espermina sintasa. S-adenosilmetionina descarboxilasa. Arginina descarboxilasa. Inhibidores de la biosíntesis. Biosíntesis de poliaminas endógenas en condiciones de estrés abiótico: salino e hídrico. Efecto de la aplicación exógena de Poliaminas en condiciones de estrés abiótico. Mecanismo de tolerancia al estrés salino e hídrico?. Perspectivas en el campo de la Biotecnología. Tema 13. Óxido Nítrico. Generalidades. Naturaleza química del óxido nítrico. Biosíntesis en plantas superiores y bacterias. Catabolismo. Efectos fisiológicos: Molécula señal. Germinación. Crecimiento radical. Expansión foliar. Senescencia. Estrés biótico y abiótico. Mecanismos de acción. Biosíntesis en otros organismos. Perspectivas en el campo de la Biotecnología. Tema 14. Influencias bióticas. Simbiosis. Endosimbiosis. Asociaciones con microorganismos rizosféricos de vida libre. Asociación con microorganismos fijadores de nitrógeno. Fijación simbiótica del nitrógeno. Principales géneros microbianos. Asociación con microorganismos de vida libre. Asociación con rizobacterias promotoras del crecimiento de plantas RPCP. Asociaciones micorríticas. Principales géneros microbianos. Mecanismos fisiológicos de promoción del crecimiento vegetal. Interacción con microorganismos patogénicos. Mecanismos de patogenicidad. Principales géneros microbianos. Virus y viroides. Trabajos Prácticos 1. Identificación de plantas C3 y C4 mediante reacciones bioquímicas. 2. Extracción, purificación y cuantificación de JA de tejidos vegetales mediante el uso de solventes orgánicos, columnas de sephadex y C18, separación por HPLC, cuantificación por LC-MS-MS. 3. Extracción, purificación y cuantificación de ABA mediante el uso de solventes orgánicos, columnas de intercambio iónico, separación por HPLC, cuantificación por LC-MS-MS. 4. Extracción, purificación y cuantificación de etileno de tejidos vegetales mediante GC y detector de ionización a llama. 5. Inhibición de la actividad a-amilasa por ABA en semillas de cebada. 6. Fotomorfogénesis con la triple respuesta de las leguminosas. Extracción y cuantificación de pigmentos 7. Prueba de nodulación de leguminosas (Burton). Identificación microscópica de micorrizas versículo-arbusculares (MVA) en gramíneas. 5 8. Cultivos en hidroponía con medios salinos de plantas tolerantes y no tolerantes, evaluando parámetros de crecimiento: altura de la planta, número de hojas, longitud de raíces, relación PS/PF y contenido de pigmentos fotosintéticos en respuesta a diferentes condiciones ambientales. De estas plantas se recogerán muestras para los análisis hormonales cuando hayan arribado a los potenciales osmóticos que se desean evaluar. Metodología La materia está organizada en clases teóricas y prácticas. En los Trabajos Prácticos se desarrollan experiencias que demuestran los conocimientos teóricos impartidos. Para la interpretación de los procesos fisiológicos básicos que regulan el funcionamiento de las plantas, se realizan prácticos experimentales en el laboratorio utilizando equipamiento destinado a trabajos de investigación, y en el invernáculo. En todos los prácticos las actividades realizadas quedan documentadas mediante la elaboración de un informe que puede incluir esquemas, tablas y gráficos y cuadros sinópticos. Los resultados obtenidos son discutidos a fin de que el alumno realice una integración de los conceptos impartidos. Bibliografía Azcón-Bieto J., Talón M. 2000. “Fundamentos de Fisiología Vegetal”. Mc Graw-Hill; Interamericana de España. Edificio Valreaity. Basauri 17. 1ra Planta. 28023 Aravaca. Madrid. España. Bradford K., Nonogaki H. (eds) 2007. Seed development, dormancy and germination. Blackwell Publishing Ltd., 9600 Garsington Road, Oxford OX4 2DQ, UK pp. 367 Buchanan B.B., Gruissem W., Jones R.L. 2000. “Biochemistry and Molecular Biology of Plants”. American Society of Plant Physiologists. 15501 Monona Drive. Rockville, Maryland 20855-2768 USA. Davies P.J. (ed) 2004. Plant Hormones. Biosynthesis, Signal Transduction, Action. 2nd edition. Kluwer Acad. Publishers, Dordrecht, The Netherlands. pp. 749 Jaiwal P.K., Singh R.P., Gulati A. 1997. Strategies for Improving salt tolerance in higher plants. Science Publishers, Inc. USA. pp. 443 Lamattina L., Polacco J.C. (eds) 2007. Nitric oxide in plant growth, development and stress physiology. Springer-Verlag, Berlin, Heilderberg, NY. pp. 282 Lambers H., Stuart Chapin F., Pons T.L. 1998. Plant Physiological Ecology. Springer Verlag New York INC. pp. 540 Lang G.A. 1996. “Plant Dormancy. Physiology, Biochemistry and Molecular Biology”. CAB International. UK. 6 Lerner H.R. 1999. Plant Responses to Environmental Stresses. From Phytohormones to Genome Reorganization. Marcel Dekker INC. pp. 730 Nilsen E.T., Orcutt D.M. 1996. The Physiology of Plants Under Stress. Abiotic factors. Jhon Willey and Sons, INC. New York. pp. 689 Nobel P.S. 1999. “Physicochemical and Environmental Plant Physiology”. 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