Instruções de Uso
__________________________________
Reagentes Líquidos – pronto para uso
ANTI-D (IgM/IgG)
REAGENTE MONOCLONAL PARA GRUPO SANGUÍNEO
SOMENTE PARA USO PROFISSIONAL!
Para Tubos, DiaMed-ID, Ortho BioVue, Microplacas
e Técnicas de lâminas
Referência
conteúdo
B05408
1 x 10 ml
Anti-D (IgM/IgG),
monoclonal
RESUMO
O sistema de RH do grupo sanguíneo foi descoberto em 1940. O
antígeno D é o antígeno mais clinicamente significativo não ABO da
célula vermelha do sangue e tem sido implicado nas causas de
reações Hemolíticas de Transfusão e doença Hemolítica do recémnascido.
ANTID
FENÓTIPO
CAUCASIANOS
%
+
0
RhD +ve
RhD -ve
85
15
AFROAMERICANOS
%
72
28
PRINCÍPIO
Os reagentes causarão aglutinação direta (aglutinação) nas células
vermelhas de teste que carregam o antígeno DIV e aglutinação
indireta no teste de células vermelhas que são CategoriaVI na fase
de teste da antiglobulina. Não aglutinação indica geralmente a
ausência do antígeno D (ver Limitações).
REAGENTES
O reagente DIALAB ANTI-D Monoclonal de tipagem sanguínea de
baixa proteínas, reagente homogêneo contendo ANTI-D IgG E IgM
Humana Monoclonal, diluído em tampão fosfato contendo Cloreto
de Sódio (0,9 g%), Albumina Bovina (3,0 g%) e Potencializadores
Macromoleculares. Quando testando amostras de pacientes esse
reagente irá aglutinar diretamente células RhD Positivas, incluindo a
maioria das variantes ( porém não DIV) e grandes porções de
fenótipo D-fraco ( Du) quando utilizando as técnicas recomendadas.
O reagente é fornecido em uma diluição apropriada para uso em
amostras de pacientes com todas as técnicas recomendadas abaixo
sem precisar de diluição adicional ou adição. Para referência do
número de lote e data de validade ver rótulo do frasco.
IgM/IgG
IgM
IgG
Cell Line/Clone
RUM-1
MS-26
BAIXA EXPRESSÃO DO ANTÍGENO RH
O termo coletivo Du é amplamente utilizado para descrever células
vermelhas como tendo mais baixa a expressão do antígeno D do
que o normal. O termo D fraco denota indivíduos com o número
reduzido de sítios complementares do antígeno D por células
vermelhas. O termo D- parcial denota indivíduos com falta de
epítotos de antígenos D. O reagente Dialab Anti-D (IgM/IgG) irá
detectar a maioria as amostras de D fraco e parcial de células
vermelhas pela aglutinação direta, mas não irá detectar células DVI
Este reagente irá detectar células DIV e D parcial na fase IAT.
ARMAZENAMENTO
Não congelar. Frascos de reagentes deverão ser armazenados a
2-8 ° C no momento da recepção.
Armazenamento prolongado em temperaturas fora desta faixa
pode resultar em perda acelerada de reatividade dos reagentes.
COLETA DE AMOSTRAS E PREPARAÇÃO
As amostras de sangue coletadas com ou sem anticoagulante
podem ser usadas para a tipagem do antígeno. Se o teste for
adiado, armazenar as amostras a 2-8 ° C.
Amostras coletadas com EDTA e Citrato devem ser ensaiadas no
prazo de 48 horas. Amostras coletadas em anticoagulantes ACD,
CPD ou CPDA-1 podem ser testadas até 35 dias a partir da data
de coleta. Todas as amostras de sangue devem ser lavadas pelo
menos duas vezes com PBS, antes de serem testadas. As
amostras de sangue evidenciando lise podem dar resultados
irreais.
CONTROLES E AVISOS
1. É recomendado que seja utilizado em paralelo para cada
bateria de testes um controle positivo (preferencialmente células
R1r), um controle negativo (preferencialmente células rr) e um
controle negativo de reagente.
2. Quando testando células vermelhas de pacientes é importante
que o controle negativo de reagente seja incluído pois os
potencializadores macromoleculares do reagente podem causar
reações falso positivas com
células revestidas com IgG, por
exemplo, em casos de AIHA e HDN.
3. Testar amostras para determinação de categoria DIV somente
pelas técnicas de Antiglobulina Indireta e Coombs Diamed-ID.
4. Antígenos D fracos ou variantes são pouco detectados por
técnicas de cartões Gel, placas de microlitros e lâmina.
5. A técnica de Antiglobulina em tudo somente pode ser
considerada válida se todos os testes negativos reagirem
positivamente com células vermelhas sensibilizadas com IgG.
6. Nas técnicas recomendadas um volume é aproximadamente 50
ul quando utilizando o conta gotas fornecido com o kit.
7. O uso de reagentes e a interpretação de resultados devem ser
realizados por profissional treinado e qualificado de acordo com as
exigências do país onde os reagentes estão sendo utilzados.
8. O usuário deverá determinar a adequação dos reagentes para
uso em outras técnicas.
REAGENTES E MATERIAIS NECESSÁRIOS
Reagente de globulina Anti-humana ou Anti-IgG
Aplicador
Leitor automático de placas
Coombs lavadora de células
DiaMed ID-Cards (LISS/Coombs)
EUROTECH
DiaMed ID-Cards (Neutral)
DiaMed ID- Centrífuga
DiaMed ID-Diluente ex: ID-CellStab
DiaMed ID-Incubadora equilibrada para 37ºC ± 2ºC
Lâminas de vidro para microscópio
tubos de teste de vidro (10 x 75 mm ou 12 x 75 mm)
IgG sensibilizado para hemáceas
Centrífuga de microplacas
Ortho BioVue Sistema Cassettes (AHG/Coombs)
Ortho BioVue Sistema Cassettes (Neutral)
Ortho BioVue Sistema Centrífuga
Ortho BioVue Sistema Blocos de Aquecimento
equilibrados em 37ºC ± 2ºC
Ortho 0,8% Red Cell Diluente
Agitador de placa
Tampão fosfato salino (PBS): NaCl 0,9%, pH 7,0 ±
0,2 a 22 ° C ± 1 ° C
Tubo de teste de centrífuga
microplacas poços "U" validado
pipetas volumétricas
Banho de água ou incubadora de aquecimento seco
equilibrado para 37ºC ± 2ºC
TÉCNICAS RECOMENDADAS (NÃO PARA CATEGORIA DVI )
A. Técnica Tubo:
1. Preparar uma suspensão de 2-3% de células vermelhas de
teste lavadas em PBS.
2. Coloque em um tubo de ensaio
rotulado: 1 volume de reagente Anti-D (IgM/IgG) Dialab e 1
volume de suspensão de células vermelhas de teste. 3. Misturar
bem e centrifugar todos os tubos por 20 segundos a 1000 rcf ou
por uma alternativa adequada de tempo e força.
4.
Delicadamente, resuspender o botão de glóbulos vermelhos e ler
macroscopicamente para aglutinação. 5. Qualquer tubo, que
mostrar um resultado negativo ou questionável (como pode
acontecer com Du, ou amostras D-fracas), deve ser incubado por
15 minutos em temperatura ambiente. 6. Depois da incubação,
repita os passos 4 e 5.
B. Técnica DiaMed-ID Micro Técnica de tipagens (Neutral
Cards) :
1. Preparar uma suspensão de 0,8% de células vermelhas de
teste lavadas no ID - Diluente. 2. Remover a folha de alumínio de
quantos microtubos forem necessários. 3. Coloque no microtubo
adequado: 50 ul de suspensão de células vermelhas de teste e 25
uL de reagente Anti-D (IgM/IgG ) Dialab. 4. Centrifugar ID-Card
(s) em uma centrífuga de cartão DiaMed gel. 5. Leitura
macroscópica para aglutinação.
C. Técnica Ortho BioVue :
1. Preparar uma suspensão de 0,8% de células vermelhas de
teste lavadas em 0,8% Ortho Red Cell diluente. 2. Remover a
folha de alumínio para quantas câmaras de reação forem
necessárias. 3. Coloque na câmara de reação adequada: 50 µl
de suspensão de células vermelhas de teste e 40 µl de reagente
Anti-D (IgM/IgG) Dialab. 4. Centrifugar cassete (s) em uma
centrífuga BioVue Ortho System. 5. Leitura macroscópica para
aglutinação.
D. Técnica microplaca, utilizando poços em "U":
1. Preparar uma suspensão de 2-3% de células vermelhas de
teste lavadas em PBS. 2. Coloque no poço apropriado: 1 volume
reagente Anti-D (IgM/IgG) Dialab e 1 volume de suspensão de
células vermelhas de teste . 3. Misturar bem, de preferência com
um agitador, cuidando para evitar a contaminação entre poços.
4. Incubar à temperatura ambiente por 15 minutos (tempo
dependente do usuário). 5. Centrifugar a microplaca durante 1
minuto a 140 rcf ou por um tempo alternativo adequado e força.
Instruções de Uso
6.
Resuspender o botão celular utilizando agitação
cuidadosamente controlada em um
agitador.
7.
Leia
macroscopicamente ou com um leitor de validação automática. 8.
Qualquer reação fraca devem ser repetida pela técnica de tubos.
E. Técnica Lâmina:
1. Preparar uma suspensão 35-45% de células vermelhas de teste
em soro, plasma ou PBS.
2. Coloque em uma lâmina de vidro rotulada: 1 volume reagente
Anti-D (IgM/IgG) Dialab e 1 volume de suspensão de células
vermelhas de teste.
3. Usando um bastão aplicador limpo, misturar reagente e células
numa área de cerca de 20x40 mm.
4. Lentamente, incline a lâmina por 30 segundos, ocasionalmente
misturando ainda mais durante o período de 2 minutos, mantendo a
lâmina a temperatura ambiente.
5. Leia macroscopicamente após 2 minutos ao longo de uma luz
difusa e não confundir fios de fibrina, como aglutinação.
6. Qualquer reação fraca deve ser repetida pela técnica de tubos.
RECOMENDAÇÕES TÉCNICAS (PARA DETECTAR CATEGORIA
DVI )
A. Técnica Indireta de Antiglobulina (IAT):
1. Preparar uma suspensão de 2-3% de células vermelhas de teste
lavadas em PBS.
2. Coloque em um tubo de ensaio rotulado: 1 volume de reagente
Anti-D (IgM/IgG) Dialab e 1 volume de suspensão de células
vermelhas de teste.
3. Misturar bem e incubar à 37ºC por 15 minutos.
4. Lavar as células vermelhas 4 vezes com PBS, tomando cuidado
de decantar a salina entre as lavagens e ressuspender cada botão
celular depois de cada lavagem. Decantar completamente a salina
depois da última lavada.
5. Adicione duas gotas de globulina anti-humana ou Anti-IgG para
cada botão celular seco.
6. Misturar bem e centrifugar todos os tubos por 20 segundos a
1000 rcf ou por uma alternativa adequada de tempo e força.
7. Ressuspender cada botão de células e leia macroscopicamente.
8. Confirme a validade de todas as reações negativas com células
vermelhas sensibilizadas IgG.
B. DiaMed-ID Micro Técnica de Tipagem (LISS/Coombs cards):
1. Preparar uma suspensão de 0,8% de células vermelhas de teste
lavadas em ID-Diluente.
2. Remover a folha de alumínio de quantos microtubos forem
necessários.
3. Coloque no microtubo adequado: 50 ul de suspensão de células
vermelhas de teste e 25 uL de reagente Anti-D (IgM/IgG ) Dialab.
4. Incubar o ID-Card(s) por 25 minutos à 37ºC.
5. Centrifugue o ID-Card(s) uma centrífuga de cartão DiaMed gel.
6. Leia macroscopicamente para aglutinação.
C. Ortho BioVue Técnica de Tipagem (AHG/Coombs cards):
1. Preparar uma suspensão de 0,8% de células vermelhas de teste
lavadas em 0,8% Ortho Red Cell diluente.
2. Remover as folhas de alumínio para quantas câmaras de reação
forem necessárias.
3. Coloque na câmara de reação adequada: 50 µl de suspensão de
células vermelhas de teste e 40 µl de reagente Anti-D (IgM/IgG)
Dialab.
4. Centrifugar cassete (s) em uma centrífuga BioVue Ortho System.
5. Leitura macroscópica para aglutinação.
INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS
1. Positivo: aglutinação das células vermelhas de teste constitui um
resultado positivo do teste e dentro dos limites aceitos de
__________________________________
procedimento de ensaio, indica a presença do antígeno D no
teste de células vermelhas.
2. Negativo: Não aglutinação no teste das células vermelhas
constitui um resultado negativo e dentro dos limites admitidos no
processo de ensaio, indica a ausência do antígeno D no teste de
células vermelhas.
3. Os resultados do teste de células que são aglutinadas com o
reagente controle negativo devem ser excluídos, como a
aglutinação é mais provavelmente causada pelo efeito dos
potencializadores macromoleculares no reagente em células
sensibilizadas.
ESTABILIDADE DAS REAÇÕES
1. Leia todos os tubos e microplacas de testes logo após a
centrifugação.
2. Complete os passos de lavagem sem interrupções e
centrifugue e leia os testes imediantamente após adição de
globulina anti-humana porque atrasos podem causar uma
dissociação do complexo antígeno-anticorpo, conduzindo a um
falso negativo ou fracas reações positivas.
3. Lâminas testes devem ser interpretadas dentro de dois
minutos para garantir especificidade e para evitar a possibilidade
de um resultado negativo ser incorretamente interpretado como
positivo devido à secagem do reagente.
4. Recomenda-se precaução na interpretação dos resultados dos
testes realizados em temperaturas diferentes das recomendadas.
LIMITAÇÕES
1. Anti-D (IgM/IgG) Dialab não é adequado para uso com células
tratadas enzimaticamente ou suspensão de células em LISS. 2.
Sangue armazenado pode produzir reações mais fracas que
sangue fresco.
3. Aglutinações falso positiva podem ser vistas quando testadas
células sensibilizadas IgG. 4. Falso-positivos ou falso-negativos
também podem ocorrer devido a:
-- Contaminação de materiais de teste
-- Armazenamento impróprio, concentração de células, o tempo
de incubação ou temperatura
-- Centrifugação inadequada ou excessiva
-- Desvio em relação as técnicas recomendadas
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO ESPECÍFICAS
1.
Os reagentes foram caracterizados por todos os
procedimentos mencionados nas técnicas recomendadas.
2. Antes da liberação, cada lote de Dialab anti-D monoclonal
(IgM/IgG) foi testado pelas técnicas recomendadas contra um
painel de antígeno-positivo células vermelhas para assegurar uma
reatividade adequada.
3. Grupos de reagentes anti-D para o grupamento D de pacientes
não deve reagir com células DVI
utilizando os métodos
recomendados para o uso. “Seguidos” testes de resultados
negativos usando a antiglobulina, procederam como não
recomendado.
4.
Especificidade da fonte de anticorpos monoclonais é
demonstrada através um painel de células antígeno-negativos.
5. A potência dos reagentes foi testada contra os seguintes
padrões de referência mínimo de potência obtidos a partir do
National Institute of Biological Standards and Controls (NIBSC):
-- Anti-D referência padrão 99/836
6. O controle de qualidade dos reagentes foi realizado utilizando
células vermelhas que tinham sido lavadas duas vezes com PBS
antes do uso.
EUROTECH
7. Os reagentes cumprem as recomendações contidas na última
edição do “Guidelines for the UK Blood Transfusions Service”.
AVISO
1. O usuário é responsável pela execução dos reagentes por
qualquer método que não as mencionadas nas TÉCNICAS
RECOMENDADAS.
2.
Quaisquer desvios às técnicas
recomendadas devem ser validados antes da utilização.
PRECAUÇÕES
1. Os reagentes são destinados para uso em diagnóstico in vitro.
2. Se um frasco de reagente estiver rachado ou vazado, eliminar
o conteúdo imediatamente. 3. Não usar reagentes após a data
de vencimento (ver rótulo Frasco) . 4. Não utilize os reagentes se
um precipitado estiver presente.
5. Vestuários de proteção
devem ser usados na manipulação dos reagentes, tais como
luvas descartáveis e uma bata de laboratório. 6. Os reagentes
foram filtrados através de uma cápsula de 0,2 µm para reduzir a
bio-carga. Uma vez que um frasco ter sido aberto o conteúdo
deve permanecer viável até a data de validade, desde que não
haja turbidez acentuada, o que pode indicar deterioração do
reagente ou contaminação.
7. Os regentes contém <0,1% azida de sódio. Azida de sódio
pode ser tóxico se ingerido e pode reagir com chumbo e cobre
nas canalizações formando azidas metálicas explosivas. Sobre a
eliminação lavar com grandes volumes de água.
8. Materiais utilizados para a produção dos reagentes foram
testados na fonte e encontrados para serem negativos para HIV
1+2 e anticorpos HCV e HBsG aprovado usando testes
microbiológicos.
9. Nenhum teste conhecido pode garantir que os produtos
derivados de humanos ou de origem animal estão isentos de
agentes infecciosos. Cuidados devem ser tomados no uso e
descarte de cada frasco e seu conteúdo.
ELIMINAÇÃO DE REAGENTES E EM CASO DE DERRAMES
Para obter informações sobre a eliminação do reagente e
descontaminação de um local do derrame ver Fichas de
segurança, disponíveis sob pedido.
REFERÊNCIAS
Vide bula em ingles
DETENTOR DO REGISTRO – ANVISA
EUROTECH PRODUTOS LABORATORIAIS E
SERVIÇOS LTDA - ME.
CNPJ: 03.517.654/0001-85
Resp.Téc.: Dra. Alessandra Silva e Souza(CRBM-GO 1269)
IMPORTADO POR:
IMUNOTECH SISTEMAS DIAGNÓSTICOS Imp. e Exp. Ltda.
Endereço: Rua Arlindo Costa,161 – Bairro Jundiaí
Anápolis-GO
CNPJ: 00.904.728/0007-33
Fone: (62) 3327-0133
Fax: (62) 3327-0244
Resp. Téc.: Dra. Iracema Fontoura Parente (CRBM-3 nº 3073)
FABRICADO POR
DIALAB Produktion und Vertrieb von chemisch – technischen
Produkten und Laborinstrumenten Gesellschaft m.b.H.
A – 2351 Wiener Neudorf, Austria
Phone: ++43 (0) 2236 660910-0 Fax: ++43 (0) 2236 660910-30
DATA DA REVISÃO DAS INSTRUÇÕES DE USO
Revisada em Março de 2012.