I - CALIBRAÇÃO DO ESPECTROFOTOMETRO
SOLUÇÕES PADRÕES DE MICOTOXINAS.
PARA
PADRONIZAÇÃO
DE
1. Equipamentos.
- balança analítica com no mínimo quatro casas decimais;
- cubetas de quartzo de 1 cm;
- espectrofotômetro (faixa de 200 a 400 nm);
- estufa;
- termômetro (até 200°C).
2. Material
- pipetas volumétricas de 1 e 25 mL;
- balões volumétricos de 50, 1000 e 2000 mL;
- béquer de 10 mL.
3. Soluções e reagentes
- ácido sulfúrico concentrado p.a.;
- dicromato de potássio padrão primário, dessecado a 140 -160°c, por 30 - 60
minutos;
- água deionizada.
4. Procedimentos
4.1 Preparo da solução de ácido sulfúrico (aproximadamente 0,018 N)
- medir 1 mL de ácido sulfúrico concentrado em pipeta, transferir para balão
volumétrico de 2000 mL, contendo certo volume de água deionizada, completar o
volume e homogeneizar.
4.2 Preparo das soluções de dicromato de potássio
- pesar em balança analítica massa adequada de dicromato de potássio
dessecado para preparar solução 0,25 mM;
- transferir quantitativamente a massa pesada para balão volumétrico de 1000
mL, utilizando solução de ácido sulfúrico 0,018 N como solvente e homogeneizar;
- preparar solução de dicromato de potássio 0,125 mM pipetando 25 mL da
solução 0,25 mM, transferindo para um balão volumétrico de 50 mL, completando o
volume com ácido sulfúrico 0,018 N e homogeneizar;
- preparar a solução de dicromato de potássio 0,0625 mM pipetando 25 mL da
solução 0,125mM, transferindo para um balão volumétrico de 50 mL, completando o
volume com ácido sulfúrico 0,018 N e homogeneizar.
4.3 Calibração do equipamento
- determinar a absorbância da solução de ácido sulfúrico 0,018 N na faixa de
comprimento de onda entre 280 e 400 nm e zerar o equipamento;
- determinar a absorbância das soluções de dicromato de potássio em ácido
sulfúrico 0,018 N (0,25; 0,125 e 0,0625 mM), na faixa de comprimento de onda entre
280 e 400 nm, a um λ máximo próximo de 350 nm, contra um branco de ácido
sulfúrico 0,018 N;
- calcular a absortividade molar (Є), para cada solução, pela seguinte fórmula:
Є = (A x 1000)/concentração em mM;
- calcular o fator de correção (FC) do espectrofotômetro pela equação abaixo,
sendo o valor 3160, a absortividade molar para soluções de dicromato de potássio;
FC = 3160/ Emédio;
- considerar como aceitáveis fatores de correção obtidos entre 0,95 e 1,05.