Congresso de Ciências Veterinárias [Proceedings of the Veterinary Sciences Congress, 2002], SPCV, Oeiras, 10-12 Out., pp. 217-218
Diagnóstico Laboratorial
As doenças bacterianas e a saúde animal
Regalla, J., Amado, A., Gonçalves, R., Botelho, A., Albuquerque, T., Temudo, P. e Vieira, R..
Departamento de Bacteriologia, Laboratório Nacional de Investigação Veterinária (LNIV), Estrada
de Benfica, 701, 1549-011 Lisboa, Portugal
O controlo das doenças, particularmente daquelas com graves repercussões socioeconómicas ou com impacto na saúde pública, é um objectivo importante da Medicina Veterinária.
Esse controlo requer um diagnóstico eficaz, que permitirá também a implementação de redes de
vigilância epidemiológica. Por vezes o diagnóstico, utilizando metodologias convencionais, é
difícil, tornando-se necessário desenvolver novas tecnologias ou melhorar as já conhecidas e
implementadas num passado recente. A investigação nas áreas da biologia molecular e da genética e
bioquímica bacterianas (estudo da variação genética, mapeamento genómico, clonagem,
sequenciação e expressão dos genes, variabilidade das proteínas e polissacáridos de superfície), tem
fornecido muita informação que tem permitido novos desenvolvimentos tecnológicos que são
aplicados como instrumentos de diagnóstico. Assim, têm sido propostos e aplicados ao diagnóstico
e à identificação dos agentes bacterianos mais importantes, métodos de amplificação de DNA por
PCR (Polymerase Chain Reaction) e sondas de DNA. Alguns testes serológicos novos têm surgido
nos últimos anos, baseados principalmente em ensaios imunoenzimáticos e em anticorpos
monoclonais.
No LNIV, a metodologia aplicada ao diagnóstico serológico da peripneumonia contagiosa
bovina (PPCB) foi melhorada com o desenvolvimento e introdução de um novo teste
imunoenzimático – teste do “immunoblotting” - que, devido à sua alta especificidade e
sensibilidade, se revelou fidedigno, podendo ser aplicado em áreas com baixa prevalência da
doença, onde são frequentemente encontradas reacções falsas negativas e falsas positivas na prova
de fixação do complemento. Relativamente ao diagnóstico bacteriológico, a detecção e a
identificação de Mycoplasma mycoides subsp. mycoides SC pode ser feita em 48 horas, em cultura
ou material clínico, por meio de sistemas de PCR. Estes sistemas permitem um diagnóstico
específico, sensível e mais expedito, reduzindo extraordinariamente o tempo que é necessário
quando são usados os métodos convencionais.
Em relação às micobacterioses, dispõe-se hoje de técnicas de PCR que possibilitam a
detecção directa dos microrganismos patogénicos na amostra clínica e a sua identificação a partir de
culturas. Está em curso a avaliação do teste de γ - IFN aplicado ao diagnóstico da tuberculose
bovina e prosseguem os estudos moleculares de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis no
sentido de se desenvolver um teste imunoenzimático mais específico e sensível.
A pesquisa dos factores de virulência e a determinação dos serótipos/serovares/ fagotipos
são fundamentais para um diagnóstico correcto, respectivamente, das colibaciloses e das
salmoneloses animais, ocupando a biologia molecular um lugar de destaque no diagnóstico das
colibaciloses.
O melhoramento do diagnóstico tem permitido aumentar, significativamente, a eficácia dos
programas de erradicação existentes e avaliar, de modo mais preciso, os animais a serem
introduzidos em explorações livres de doença, evitando controlos serológicos repetidos e abates
desnecessários de animais.
Congresso de Ciências Veterinárias [Proceedings of the Veterinary Sciences Congress, 2002], SPCV, Oeiras, 10-12 Out., pp. 217-218
The bacterial diseases and the animal health
Regalla, J., Amado, A., Gonçalves, R., Botelho, A., Albuquerque, T., Temudo, P. e Vieira, R..
Departamento de Bacteriologia, Laboratório Nacional de Investigação Veterinária (LNIV), Estrada
de Benfica, 701, 1549-011 Lisboa, Portugal
The control of diseases, either with socio-economic impact or public health importance is an
important objective of veterinary medicine. That control requires efficient diagnostic tools which
will also allow the implementation of epidemiological surveillance networks. Sometimes the
diagnosis, using conventional methodologies, is difficult and requires new technological
developments or improvement of available technology.
Bacterial research in molecular biology and genetics and biochemistry fields (genetic
variation, gene mapping, gene cloning and gene expression, variability of surface proteins and
carbohydrates, etc..) has provided an enormous amount of information which has allowed new
technological developments applied to the outcoming of diagnostic tools. Therefore, DNA
amplification by PCR (Polymerase Chain Reaction) and DNA probes have been proposed and
applied to the diagnosis and identification of the most important microorganisms. New serological
tests, based on enzyme-linked immunosorbent assay and monoclonal antibodies, have also been
implemented.
At LNIV, the methodology applied to the serodiagnosis of contagious bovine
pleuropneumonia (CBPP) was improved with the development and application of a new
immunoenzymatic assay – immunoblotting test. Due to its high specificity and sensitivity, it can be
applied to areas of low disease prevalence where both complement fixation test-false negative and
false positive results are often found. Regarding the bacteriological diagnosis, the detection and
identification of Mycoplasma mycoides subsp. mycoides SC, can be done within 48 hours from
culture or clinical material, by PCR systems. These systems allow a specific, sensitive and faster
diagnostic when compared with the conventional methods.
Relatively to the mycobaterioses, besides conventional methodologies, PCR methods are
now available enabling the direct detection of the pathogen in the clinical sample as well as its
identification in culture. The γ - IFN test applied to tuberculosis diagnosis is being evaluated and the
molecular studies of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis, in order to develop a more
specific and sensitive immunoenzymatic test, are in progress.
The investigation of virulence factors and the determination of serotypes/serovars/fagotypes
are essential for a correct diagnosis of colibacilosis and salmonellosis. The molecular biology has
an important role in the diagnosis of colibacilosis.
Based on this new diagnostic methodology the overall efficiency of disease eradication programmes
were increased greatly, through objective cost effective measures, such as curtailing new rounds of
testing, preventing the slaughter of animals showing serological false positive results and
monitoring accurately the introduction of animals into disease free herds.