O composto E6446 poderia proteger animais de desenvolver malaria
cerebral e também alterar o perfil de citocinas?
iRBC (P. berghei ANKA)
Sobrevivência
1
E6446 (120mg/Kg)
12
Sangue
Baço
- Citocinas no soro (ELISA)
- Parasitemia
Cultivo com LPS ou CpG
- Citocinas no
sobrenadante (ELISA)
O composto E6446 aumenta
sobrevivência
dos
animais
infectados com malaria.
Qual o efeito do E6446 nas células dendríticas de camundongos
infectados com P. berghei?
E6446 (120mg/Kg) via oral
6p
infecção
Extração do baço
e obtenção celular
Células dendríticas
Análise da produção de citocinas pelas DC (citometria)
iRBC (P. berghei ANKA)
A infecção pelo Plasmodium aumenta a produção de TNF- e o tratamento com E6446 pode
reduzir esta citocina produzidas pelas DC.
Qual o efeito do E6446 em animais com malaria cerebral estabelecida?
E6446 (120mg/Kg)
ou água - via oral
3
5
7
12
– Sobrevivência
iRBC (P.berghei ANKA)
E6446 é eficiente no estágio inicial da malaria cerebral.
Os efeitos promovidos pelo E6446 estão realmente relacionados com os
receptores Toll-like endossomais?
Camundongos 3d
Mutação
UNC93B1
Akira, S. Takeushi, O. 2010.
Os efeitos promovidos pelo E6446 estão realmente relacionados com os
receptores Toll-like endossomais?
Camundongos 3d
Mutação
UNC93B1
iRBC (P. berghei ANKA)
Perfil de citocinas (Citometria)
Sobrevivência
Parasitemia
Os camundongos deficientes na resposta para TLR3, 7 e 9 apresentaram resultados semelhantes
aos obtidos por animais infectados e tratados com E6446.
O tratamento de camundongos com E6446 pode atenuar os sintomas da
malária cerebral?
E6446 (120mg/Kg)
ou água - via oral
12
12d
Tempo de infecção
Score clínico
Desequilibrio - 6
Paralisia - 8
Coma,convulsão e morte - 10
7d
iRBC (P.berghei ANKA)
200l A.evans (1%)
1h depois
Morte e retirada
do cérebro
Análise cerebral
O tratamento com E6446 de camundongos infectados com malaria significativamente diminuiu
os focos de derrame cerebral.
Conclusão...
O composto E6446
 Não altera a parasitemia nos animais;
 Inibe a ativação de TLR endossomais (7 e 9);
Reduz a responsividade dos TLRs ativados em animais com malaria;
 Reduz a produção de citocinas tais como IFN-γ, TNF-α, IL-6;
 Aumenta a sobrevida de camundongos infectados com malaria;
 Atenua os sintomas de malaria cerebral.
O E6446 atua como antagonista de TLR sensíveis a ácidos nucleicos (endossomais) e
pode ser uma alternativa para prevenção de malaria cerebral.
Pressão seletiva:
Proteção contra Malária Grave x Efeitos deletérios
• Polimorfismo FCγRIIB  Deficiência + Comum em Africanos,
relacionado com LES em descendentes fora da Africa;
• Willcocks et al. (2010) – Crianças africanas que possuíam
proteção contra malária grave, possuíam alguma perda de
função nesse receptor
Será que a susceptibilidade ao LES está relacionada à proteção
frente às formas graves da Malária?
Camundongos com predisposição ao LES são
protegidos contra a forma cerebral de Malária?
WT ou
FCγRIIB -/- .Yaa
I.P. 1x106
P. berghei
% Sobrevivência,
Parasitemia
Camundongos com predisposição ao LES são
protegidos contra a forma cerebral de Malária?
Kidney Inflammation
WT ou
FCγRIIB -/- .Yaa
I.P. 1x106
P. berghei
WT Brain Pathology
Peso órgão,
Score Clinico
Os animais propensos ao LES sobrevivem por
mais tempo, resistem à parasitemias maiores
e não apresentam sinais de edema cerebral
Brain
Camundongos com predisposição ao LES também são
protegidos contra a forma não cerebral de Malária?
WT ou
FCγRIIB -/- .Yaa
I.P. 1x104
P. yoelii
% Sobrevivência,
Parasitemia
Camundongos propensos ao LES não são
protegidos no caso de malária grave não cerebral
O aumento da expressão de TLR7 ou a deficiencia de FCγRIIB
protegem contra a forma cerebral de Malária de forma independente?
WT, TLR7.tg ou
FCγRIIB -/-
I.P. 1x106
P. berghei
% Sobrevivência,
Parasitemia,
Score Clínico
Ambos os camundongos TLR7.tg e FCγRIIB-/demonstram proteção contra as formas
graves de malária
Brain microhemorrhagies
Qual é o perfil de produção de citocinas nos
camundongos propensos ao LES?
WT ou
FCγRIIB -/- .Yaa
I.P. 1x106
P. berghei
Citocinas (soro)
ELISA
172
10, 100, 150, 160, 160, 200, 220, 250, 300
9, 9, 10, 10, 11, 20, 25, 50, 200
300
200
150
100
50
50
10
o
10
o
Qual é o perfil de produção de citocinas nos
camundongos propensos ao LES?
WT ou
FCγRIIB -/- .Yaa
I.P. 1x106
P. berghei
Citocinas
A (soro)
proteção dos
ELISA
animais propensos ao LES provavelmente
se deve aos níveis elevados de IL-10 antes, e os baixos
níveis de citocinas inflamatórias após a infecção
Qual o padrão celular no baço dos animais propensos ao LES?
Germinal center B cells
WT ou
FCγRIIB -/- .Yaa
Plama cells
Activated B Cells
Activated Helper T Cells
Inducible Costimulator
I.P. 1x106
P. berghei
Activated T Cells
7 dias
Activated Cytotoxic T Cells
Características de infecção crônica controlada
Quantificaçãoantes
de células
da infecção, presença de células Foxp3+
após,
Macrophages, DC
Citometria
deve conferir resposta controlada
CD4+ ICOS High
↑ IL-2, IL-3 e IFN-γ
Qual o padrão de resposta no cérebro dos animais infectados?
Quantificação de células
WT ou
(Citometria),
FCγRIIB -/- .Yaa
Real Time PCR
7 dias
I.P. 1x106
P. berghei
IL-10,
IFN-γ,
IL-6,
IL-12
IL-10
M2 MØ
Altos níveis de
Arginase
IL-12
TNF
MØ
Conclusão
Terapias e vacinas
+
LES, Hb-S