TRIAGEM NEONATAL PARA IMUNODEFICIÊNCIA COMBINADA GRAVE – SCID
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Autores
Instituição
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Dayse Oliveira de Alencar , José Pascoal Simonetti , Igor Brasil Costa , Eduardo Vieira Neto , João
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Flávio Botelho dos Santos Vasconcelos , Cintia M Ribeiro , Tatiana Ferreira Almeida , Marta Rocha
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Faria , Cláudio Baptista Schmidt , Armando Alves da Fonseca
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DLE - DLE - Medicina Laboratorial (Av Nossa Senhora de Copacabana 1018, 7º Andar),
FIOCRUZ (Av Brasil 4365)
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FIOCRUZ -
Resumo
OBJETIVOS
Implementação do teste de triagem neonatal para imunodeficiência combinada grave (do inglês: Severe Combined
Immunodeficiency – SCID).
MÉTODOS
Quantificação de TRECs (do inglês: T Cell Receptor Excision Circles – TREC) por RT-qPCR (do inglês: Real Time
Quantitative PCR) em amostras de DNA extraídas de DBS (do inglês: Dried blood spot – DBS).
RESULTADOS
O primeiro passo do protocolo foi o isolamento de DNA em uma amostra de 3.2 mm de DBS para proceder à etapa
de RT-qPCR. Para atender a necessidade de um teste robusto, com alto rendimento e custo reduzido para triagem
neonatal, foram utilizados reagentes comercialmente disponíveis. A metodologia de RT-qPCR foi otimizada com
recém-natos a termo e o cut-off adequando-se reprodutível com valores entre 100 a 1000 cópias de TREC/3.2 mm de
DBS. Um ensaio com gene referência (β-actina) incluimos sempre que uma amostra apresente uma quantidade baixa
de TREC. Isso possibilita identificar amostras com baixa qualidade de extração e com interferentes que inibem a
reação de PCR para TREC.
CONCLUSÃO
Foi otimizada com sucesso a quantificação de TRECs em amostras de DBS. Isso foi possível ajustando os
rendimentos de extração de DNA e aumentando a eficiência de RT-PCR. O ensaio de TREC é reprodutível, de baixo
custo e com características próprias de sensibilidade e especificidade, podendo ser realizado na mesma amostra
colhida para diferentes testes de triagem neonatal. Estão sendo analisadas um pool amostra com aproximadamente
1000 amostras de recém-natos a termo para determinar a reprodutibilidade e definir o ponto de corte do cut-off.
Palavras-chaves: SCID, TREC, β-actina, RT-qPCR, triagem neonatal
Agência de Fomento: