Prolactin IRMA
®
Coat-A-Count Prolactin IRMA
English
Intended Use: Coat-A-Count Prolactin
IRMA is an immunoradiometric assay
designed for the quantitative
measurement of prolactin in serum. It is
intended strictly for in vitro diagnostic use
as an aid in the investigation of pituitary
status and infertility.
Catalog numbers: IKPR1 (100 tubes)
The 100-tube kit contains less
than 20 microcuries
(740 kilobecquerels) of
125
radioactive I monoclonal anti-prolactin.
Summary and Explanation of
the Test
Human prolactin is a polypeptide hormone
of the anterior pituitary with a molecular
mass of about 22,800. It plays an
essential role in the secretion of milk and
has the ability to suppress gonadal
function. The very existence of prolactin
as a substance distinct from human
growth hormone was established only in
1970. Since that time, determination of
prolactin has become an important tool in
the investigation of amenorrhea,
galactorrhea and hypothalamic-pituitary
disorders.
As a reference range for circulating
prolactin, the literature suggests
concentrations up to approximately
20 ng/mL. Values are distinctly elevated at
birth but decline to adult levels in less than
three months.
Women are reported to have slightly
higher mean levels than men, with a slight
rise at puberty — apparently estrogen
related — and a corresponding fall at
menopause. During pregnancy, the
prolactin level climbs steadily to ten or
twenty times its former value, then drops
back down to normal after delivery —
within three weeks in non-nursing
mothers. In those who breast-feed, the
decline to normal is more gradual because
of the prompt and dramatic surges in
prolactin release induced by suckling.
Women taking oral contraceptives or
2
under estrogen treatment may have
prolactin levels higher than normal.
In assessing the significance of moderate
elevations, it is important to keep in mind
that prolactin is a stress hormone. Not
only surgery, but events no more
distressing than venipuncture or a clinical
interview have been reported to occasion
a transient rise. Moreover, the release of
prolactin is inherently episodic, and
day-to-day fluctuations with CVs as high
as 30% have been encountered. Finally,
there is a sleep-related diurnal variation:
prolactin levels increase during sleep and
reach their lowest a few hours after
waking. The advice sometimes given to
draw samples "between nine and noon" is
based on the assumption that subjects
observe reasonably normal waking hours.
Principle of the Procedure
Coat-A-Count Prolactin IRMA is a
solid-phase immunoradiometric assay
based on monoclonal and polyclonal
125
anti-prolactin antibodies: one I-labeled
anti-prolactin monoclonal antibody in liquid
phase, and one polyclonal anti-prolactin
antibody immobilized to the wall of a
polystyrene tube.
In the procedure:
Prolactin is captured between polyclonal
anti-prolactin antibodies immobilized on
the inside surface of the polystyrene tube
and the radiolabeled monoclonal antiprolactin tracer.
125
Unbound I-labeled anti-prolactin
antibody is removed by decanting the
reaction mixture and washing the tube;
this reduces nonspecific binding to a very
low level, and ensures excellent low-end
precision.
The prolactin concentration is directly
proportional to the radioactivity present in
the tube after the wash step. The
radioactivity is counted using a gamma
counter, after which the concentration of
prolactin in the patient sample is obtained
by comparing the patient
counts-per-minute with those obtained for
the set of calibrators provided.
Reagents to Pipet: 1
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
Total Incubation Time: 2 Hours (on a
rack shaker)
Total Counts at Iodination:
approximately 300,000 cpm
Warnings and Precautions
For in vitro diagnostic use.
Reagents: Store at 2–8°C in a refrigerator
designated for incoming radioactive
materials. Dispose of in accordance with
applicable laws.
Do not use reagents beyond their
expiration dates.
Some components supplied in this kit may
contain human source material and/or
other potentially hazardous ingredients
which necessitate certain precautions.
Follow universal precautions, and handle
all components as if capable of
transmitting infectious agents. Source
materials derived from human blood were
tested and found nonreactive for syphilis;
for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis
B surface antigen; and for antibodies to
hepatitis C.
Sodium azide, at concentrations less than
0.1 g/dL, has been added as a
preservative. On disposal, flush with large
volumes of water to prevent the buildup of
potentially explosive metal azides in lead
and copper plumbing.
Water: Use distilled or deionized water.
Radioactivity
A copy of any radioisotope license
certificate (Specific or General) issued to a
US customer must be on file with Siemens
Healthcare Diagnostics before kits or
components containing radioactive
material can be shipped. These
radioactive materials may be acquired by
any customer with the appropriate Specific
license. Under a General license these
radioactive materials may be acquired
only by physicians, veterinarians in the
practice of veterinary medicine, clinical
laboratories and hospitals — and strictly
for in vitro clinical or laboratory tests not
involving external or internal
administration of the radioactive material
or its radiation to human beings or other
animals. Its acquisition, receipt, storage,
use, transfer and disposal are all subject
to the regulations and a (General or
Specific) license of the U.S. Nuclear
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
Regulatory Commission or a State with
which the NRC has entered into an
agreement for the exercise of regulatory
control.
Handle radioactive materials according to
the requirements of your General or
Specific license. To minimize exposure to
radiation, the user should adhere to
guidelines set forth in the National Bureau
of Standards publication on the Safe
Handling of Radioactive Materials
(Handbook No. 92, issued March 9, 1964)
and in subsequent publications issued by
State and Federal authorities.
Wipe up spills promptly and
decontaminate affected surfaces. Avoid
generation of aerosols. Dispose of solid
radioactive waste according to license
requirements. General licensees (holders
of NRC Form 483) may dispose of solid
radioactive waste as nonradioactive
waste, after removing labeling. Specific
licensees (NRC Form 313) should refer to
Title 10, Code of Federal Regulations,
Part 20. Licensees in Agreement States
should refer to the appropriate regulations
of their own state. General licensees may
dispose of liquid radioactive waste of the
type contained in this product through a
laboratory sink drain. Licensees must
remove or deface labels from empty
containers of radioactive materials before
disposal of solid waste. Specific licensees
may dispose of small quantities of liquid
radioactive waste of the type used in this
product through a laboratory sink drain.
Refer to the appropriate regulations
applicable to your laboratory.
Materials Supplied:
Initial Preparation
Prolactin Ab-Coated Tubes (IPR1)
Polystyrene tubes coated with
anti-prolactin goat polyclonal antibodies
and packaged in zip-lock bags. Store
refrigerated and protected from moisture,
carefully resealing the bags after opening.
Stable at 2–8°C until the expiration date
marked on the bag.
IKPR1: 100 tubes.
125
I Prolactin Ab (IPR2)
11 mL of iodinated anti-prolactin murine
monoclonal antibody. The reagent is
supplied in liquid form, ready to use.
Stable at 2–8°C for 30 days after opening
3
or until the expiration date marked on the
label.
IKPR1: 2 vials.
Plastic storage container with lid — for
preparation and storage of Buffered Wash
Solution
Prolactin Calibrators (PRI3–9, X)
Eight vials, labeled A through H, of
lyophilized prolactin calibrators in a
serum/buffer matrix. At least 30 minutes
before use, reconstitute the zero calibrator
A with 5 mL distilled or deionized water,
and each of the remaining calibrators B
through H with 2 mL distilled water.
Stable at –20°C for 30 days after
reconstitution. Aliquot, if necessary, to
avoid repeated freezing and thawing.
IKPR1: 1 set.
Immunoassay
Micropipets: 50 µL and 200 µL
The calibrators have lot-specific values of
approximately 0, 2.5, 5, 10, 20, 50, 100
and 200 nanograms of prolactin per
milliliter (ng/mL) in terms of the World
Health Organization's Third International
Standard for Prolactin 84/500.
Intermediate calibration points may be
obtained by mixing calibrators in suitable
proportions. Refer to vial labels for exact
values in ng/mL.
Note that the Coat-A-Count Prolactin
IRMA calibrators are not interchangeable
with those supplied in other Prolactin kits
from Siemens Healthcare Diagnostics.
Buffered Wash Solution Concentrate
(1TSBW)
40 mL of a concentrated buffered saline
solution, with surfactants and preservative.
Using a transfer container, dilute the
contents of each vial with 400 mL distilled
water, for a total volume of 440 mL. Stable
at 2–8°C for 6 months after preparation.
IKPR1: 1 vial.
Materials Required But Not
Provided
Gamma counter — compatible with
standard 12×75 mm tubes
Rack shaker — set at approximately 200
strokes per minute
Reagent Preparation
Distilled or deionized water
Volumetric pipets: 2.0, 5.0 and 11.0 mL
Graduated cylinder — for dispensing
400 mL
4
Dispenser — for delivering 2.0 mL of
Buffered Wash Solution
Foam decanting rack — available from
Siemens Healthcare Diagnostics (catalog
number: FDR).
3-cycle log-log graph paper
A tri-level, human serum-based
immunoassay control, containing prolactin
as one of over 25 assayed constitutents, is
available from Siemens Healthcare
Diagnostics (catalog number: CON6).
Specimen Collection
The patient need not be fasting, and no
special preparations are necessary.
17
Collect blood by venipuncture into plain
tubes, avoiding hemolysis, and separate
the serum from the cells. The time of
collection should be noted.
The use of an ultracentrifuge is
recommended to clear lipemic samples.
Hemolyzed samples may indicate
mistreatment of a specimen before receipt
by the laboratory; hence the results should
be interpreted with caution.
Blood collection tubes from different
manufacturers may yield differing values,
depending on materials and additives,
including gel or physical barriers, clot
activators and/or anticoagulants. Coat-ACount Prolactin IRMA has not been tested
with all possible variations of tube types.
Consult the section on Alternate Sample
Types for details on tubes that have been
tested.
Volume Required: 50 µL per tube
Storage: 7 days at 2–8°C, or for up to
3 months (aliquotted) at –20°C.
Before assay, allow the samples to come
to room temperature (15–28°C) and mix
by gentle swirling or inversion. Do not
attempt to thaw frozen specimens by
heating them in a waterbath.
Note that samples with prolactin
concentrations greater than 2,500 ng/mL
may yield apparent prolactin results less
than that of the kit's highest calibrator
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
(200 ng/mL). Samples expected to exceed
this concentration should be diluted with
the zero calibrator before assay.
3
All components must be at room
temperature (15–28°C) before use.
Label sixteen Prolactin Ab-Coated
Tubes A (nonspecific binding) and B
through H ("maximum binding") in
duplicate. Label additional
antibody-coated tubes, also in
duplicate, for controls and patient
samples.
Approximate
ng/mL
T*
—
A(NSB)
0
B
2.5
C
5
D
10
E
20
F
50
G
100
H("MB")
200
* Optional total counts tubes
Note: The values of the calibrators
are lot-specific. Refer to the calibrator
vial labels for actual values in ng/mL.
2
Pipet 50 µL of each calibrator, control
and patient serum sample into the
tubes prepared.
Pipet directly to the bottom.
Samples expected to contain prolactin
concentrations greater than the
highest calibrator (200 ng/mL) should
be diluted in the zero calibrator before
assay. The use of disposable-tip
micropipets is recommended, to avoid
carryover from sample to sample.
Positive-displacement pipets and
automatic pipettor-diluters should be
used only if the possibility of carryover
has been evaluated and found to be
insignificant.
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
I Prolactin Ab to
4
Shake for 2 hours on a rack shaker.
5
Decant and drain thoroughly. Add
2 mL Buffered Wash Solution to each
tube. Wait 1 to 2 minutes, then decant
thoroughly. Again add 2 mL Buffered
Wash Solution, wait 1 to 2 minutes,
and decant thoroughly.
If Total Counts tubes are required for
data reduction, label two plain
(uncoated) polystyrene tubes T (Total
Counts) and set them aside until
step 3.
Calibrators
125
Pipet directly to the bottom, and
make sure that sample and tracer are
thoroughly mixed, without foaming. A
repeating dispenser is recommended.
Set the (optional) T tubes aside for
counting at step 6; they require no
further processing.
Immunometric Assay
Procedure
1
Add 200 µL of
every tube.
Removing all visible moisture will
greatly enhance precision. After the
second wash, decant the contents of
all tubes (except the T tubes) using a
foam decanting rack, and allow them
to drain for 2 or 3 minutes. Then strike
the tubes sharply on absorbant paper
to shake off all residual droplets.
6
Count for 1 minute in a gamma
counter.
In multi-head gamma counters, the
(optional) Total Counts tubes should
be separated from the remaining
assay tubes by at least one space, to
minimize the possibility of spillover.
Calculation and Quality Control
To calculate results (in terms of
concentration units) from a log-log
representation of the calibration curve, first
correct the counts per minute (CPM) of
each pair of tubes by subtracting the
average CPM of the nonspecific binding
tubes (calibrator A):
Net Counts = Average CPM minus Average
NSB CPM
Then determine percent binding (relative
to that of the highest calibrator) — here
called "%B/MB" — of each pair of tubes as
a percent of "maximum binding," with the
NSB-corrected counts of the highest
calibrator taken as 100%:
Percent Bound = (Net Counts / Net MB Counts)
× 100
Using the 3-cycle log-log graph paper, plot
Percent Bound versus Concentration for
5
each of the nonzero calibrators, and draw
a curve approximating the path of these
points. (Connect the calibration points with
arcs or straight line segments. Do not
attempt to fit a single straight line to the
data.) Concentrations for controls and
unknowns within range of the nonzero
calibrators may then be estimated from
the calibration curve by interpolation. An
additional plot of Percent Bound versus
Concentration for the three lowest
calibrators on linear-linear graph paper
may be used for interpolation near zero
dose.
Comments: Although other approaches
are acceptable, data reduction by the
method just described has certain
advantages from the standpoint of quality
control. In particular, it yields a calibration
curve that is relatively linear in both log-log
and linear-linear representations, and
relatively stable from assay to assay. It
also yields valuable QC parameters,
namely, Percent Bound (%B/MB) values
for the nonzero calibrators. A still more
informative graph, conveying a sense of
within-assay reproducibility as a function
of concentration, can be obtained by
plotting the Percent Bound values of
individual calibrator tubes directly, i.e.
without first averaging the CPM of
replicates.
Alternatives: Although Percent Bound
can be calculated directly from Average
CPM, correction for nonspecific binding
usually produces a calibration curve that is
more nearly linear throughout its range. A
calibration curve can also be constructed
by plotting CPM or Average CPM directly
against Concentration on either log-log or
linear-linear graph paper. (Semi-log graph
paper should not be used.) This approach
has the virtue of simplicity, but is less
desirable from the standpoint of quality
control.
Computerized Data Reduction: "Pointto-point" methods, including linear and
cubic spline fits, are suitable; but since
they provide little assistance in monitoring
the integrity of an assay, it is important to
prepare the recommended log-log plot of
the calibration curve, either manually or by
computer, as a quality control step. Data
reduction techniques based on the logistic
model may also be applicable. Within this
family, curve fitting routines based on the
4- or 5-parameter logistic are the most
6
suitable candidates. However, some
algorithms currently in use may not
converge successfully, even when the
logistic model is true to the data. If a
logistic method is adopted, it is essential
to verify its appropriateness for each day's
assay by monitoring the backcalculation of
the calibrators, and other parameters. In
addition, a plot of the calibration curve in a
log-log representation is highly
recommended, as this is more informative
than the conventional semi-log plot.
Sample Handling: The instructions for
handling and storing patient samples and
components should be carefully observed.
Dilute patient samples expected to contain
prolactin concentrations greater than the
highest calibrator (200 ng/mL) with the
zero calibrator before assay. All samples,
including the calibrators and controls,
should be assayed at least in duplicate. It
is important to use a disposable-tip
micropipet, changing the tip between
samples, to avoid carryover
contamination. Positive-displacement
pipets and automatic pipettor-diluters
should be used only if the possibility of
carryover has been evaluated and found
to be insignificant. Pairs of control tubes
may be spaced throughout the assay to
help verify the absence of significant drift.
Inspect the results for agreement within
tube pairs.
Gamma Counter: To minimize the
possibility of spillover in multi-well gamma
counters, the optional total counts tubes
(T) should be separated by one or more
spaces from the other assay tubes.
Alternatively, add only 25 µL of the tracer
to each of the T tubes at step 3, and
multiply the observed counts per minute in
these tubes by 4.
Controls: Controls or serum pools with at
least two prolactin concentration levels
(low and high) should routinely be
assayed as unknowns, and the results
charted from day to day as described in
Westgard JO, et al. A multi-rule chart for
quality control. Clin Chem 1981; 27:493501. Repeat samples are a valuable
additional tool for monitoring interassay
precision.
QC Parameters: We recommend keeping
track of these performance measures:
T = Total Counts (as counts per minute)
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
%NSB = 100 × (Average NSB Counts / Total
Counts)
Conversion Factor:
ng/mL × 21.2 → mIU/L
%MB = 100 × (Net MB Counts / Total Counts)
Calibration Range: Up to 200 ng/mL
[WHO 3rd IS 84/500] Calibrators are
lot-specific.
And the Percent Bound ("%B/MB") values
of all but the highest of the nonzero
calibrators, for example:
%C/MB = 100 × (Net Calibrator "C" Counts / Net
MB Counts)
Analytical Sensitivity: 0.1 ng/mL
High-dose Hook Effect: None up to
2,500 ng/mL
Record Keeping: It is good laboratory
practice to record for each assay the lot
numbers of the components used, as well
as the dates when they were first
reconstituted or opened.
Intraassay (Within-Run) Precision:
Statistics were calculated for samples
from the results of 20 pairs of tubes in a
single assay. (See "Intraassay Precision"
table.)
Further Reading: See Dudley RA, et al.
Guidelines for immunoassay data
reduction. Clin Chem 1985; 31:1264-71.
Interassay (Run-to-Run) Precision:
Statistics were calculated for samples
from the results of pairs of tubes in 20
different assays. (See "Interassay
Precision" table.)
Example Run: For illustration only, not for
calculating results from another run.
Because the calibrator values are
lot-specific, concentrations listed in the
right column may not match the values of
the calibrators supplied in your shipment.
(See "Example Run" table.)
Expected Values
Testing of the Coat-A-Count Prolactin
IRMA assay was performed at a large
independent hospital laboratory, with the
following results in ng/mL.
Group
Median
Absolute
Range
Adult
Males
6.6
3.1 – 16.5
Adult
Females
7.8
95%
Range
n
19
3.6 – 18.9 70
Laboratories should consider these results
as guidelines only. Each laboratory should
establish its own reference ranges.
Performance Data
The following sections contain data
representative of the Coat-A-Count
Prolactin IRMA kit's performance.
Prolactin results are expressed as
nanograms of prolactin per milliliter
(ng/mL). To convert from ng/mL to mIU/L,
in terms of the World Health
Organization's Third International
Standard for Prolactin, number 84/500,
multiply by 21.2:
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
End-of-Run Effect: None up to
approximately 200 tubes. (See "End-ofRun Effect" table.)
Linearity: Samples were assayed under
various dilutions. (See "Linearity" table for
representative data.)
Recovery: Samples spiked 1 to 19 with
three prolactin solutions (500, 1,500 and
3,000 ng/mL) were assayed. (See
"Recovery" table for representative data.)
Specificity: The kit is highly specific for
prolactin, with low crossreactivity to other
glycoprotein hormones such as FSH,
HCG, LH, TSH, hGH and HPL.
Bilirubin: Presence of bilirubin in
concentrations up to 200 mg/L has no
effect on results, within the precision of the
assay.
Hemolysis: Presence of packed red blood
cells in concentrations up to 30 µL/mL has
no effect on results, within the precision of
the assay.
Lipemia: Presence of triglycerides in
concentrations up to 3,000 mg/dL has no
effect on results, within the precision of the
assay.
Alternate Sample Type: To assess the
effect of alternate sample types, blood
was collected from 27 volunteers into
plain, heparinized, EDTA and Becton
®
Dickinson SST vacutainer tubes. All
samples were assayed by the Coat-ACount Prolactin IRMA procedure, with the
following results.
7
(EDTA) = 0.87 (Serum) + 0.31 ng/mL
r = 1.0
(Heparin) = 0.89 (Serum) + 0.21 ng/mL
r = 1.0
(SST) = 0.97 (Plain tubes) + 0.26 ng/mL
r = 1.0
Means:
8.7 ng/mL (Serum)
7.9 ng/mL (EDTA)
7.9 ng/mL (Heparin)
8.7 ng/mL (SST)
Method Comparison: Data was
combined from three different studies for
method comparisons. A total of 157
patient samples were assayed by the
Coat-A-Count Prolactin IRMA procedure
and by Double Antibody Prolactin kit. By
linear regression:
(CAC IRMA) = 0.97 (DA) + 2.3 ng/mL
r = 0.990
Means:
16.9 ng/mL (Coat-A-Count IRMA)
15.0 ng/mL (Double Antibody)
In another study, 159 patient samples
were assayed by the Coat-A-Count
Prolactin IRMA kit and by Coat-A-Count
Prolactin kit. By linear regression:
(CAC IRMA) = 0.95 (CAC) + 0.46 ng/mL
r = 0.989
Means:
12.0 ng/mL (Coat-A-Count IRMA)
12.2 ng/mL (Coat-A-Count)
References
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Standards. Procedures for the collection of
diagnostic blood specimens by venipuncture;
approved standard. 4th ed. NCCLS Document
H3-A4, Wayne, PA: NCCLS, 1998.
Technical Assistance
In the United States, contact Siemens
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The Quality System of Siemens Healthcare
Diagnostics Inc. is certified to ISO 13485:2003.
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of immunoaffinity chromatography for
8
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
Interassay Precision (ng/mL)
Tables and Graphs
Mean1
Example Run
Tube1
Approx.
Duplicate Average Net Percent Prolactin
2
3
4
5
CPM
CPM
CPM Bound ng/mL6
T7
258,255
256,870
A
(NSB)8
91
117
104
B
1,637
1,542
1,590
1,486
1.4%
2.6
C
3,088
3,027
3,058
2,954
2.8%
5.3
D
6,081
6,185
6,133
6,029
5.7%
9.9
E
12,576
12,708
12,642
12,538
12%
19
F
29,007
29,275
29,141
29,037
27%
47
G
55,888
56,397
56,143
56,039
53%
94
H
("MB")9
107,424
105,313
106,369 106,265 100%
171
Unknowns:
257,563
SD2
CV3
1
3.8
0.24
6.3%
2
9.0
0.24
2.7%
3
16
0.44
2.8%
4
21
0.51
2.4%
5
43
1.2
2.8%
6
55
2.0
3.6%
7
130
2.1
1.6%
End-of-Run Effect (ng/mL)
Tubes1
28–45
Tubes
102–113
Tubes
170–181
Tubes
238–249
1
11.3
11.4
11.7
11.6
2
12.6
12.7
13.1
12.7
3
21.4
21.0
22.0
21.0
4
24.5
25.3
25.5
25.0
5
57.3
57.0
57.9
57.6
6
74.8
76.5
72.5
72.7
10
X1
5,098
4,854
4,976
4,872
4.6%
8.2
X2
13,683
13,791
13,737
13,633
13%
21
X3
34,169
35,076
34,623
34,519
32%
57
Quality Control Parameters:11
T7 = 257,563 cpm
%NSB8 = 0.4%
%MB9 = 42%
20% Intercept12 = 34 ng/mL
50% Intercept = 90 ng/mL
80% Intercept = 140 ng/mL
Linearity (ng/mL)
Dilution1
1
2
Intraassay Precision (ng/mL)
5
Observed2 Expected3
%O/E4
32 in 32
194.0
—
—
16 in 32
99.7
97.0
103%
8 in 32
51.0
48.5
105%
4 in 32
24.7
24.3
102%
2 in 32
12.1
12.1
100%
32 in 32
109.7
—
—
16 in 32
55.3
54.9
101%
8 in 32
26.9
27.5
98%
4 in 32
13.2
13.7
96%
2 in 32
6.8
6.9
99%
32 in 32
112.1
—
—
Mean1
SD2
CV3
1
3.7
0.10
2.7%
2
8.8
0.14
1.6%
16 in 32
58.2
56.1
104%
3
16
0.26
1.6%
8 in 32
28.8
28.0
103%
4
20
0.38
1.9%
4 in 32
14.2
14.0
101%
5
41
0.83
2.0%
2 in 32
7.4
7.0
106%
6
55
0.89
1.6%
7
131
1.4
1.1%
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
3
9
3
Recovery (ng/mL)
1
Solution1 Observed2 Expected3 % O/E4
1
2
3
4
—
6.9
—
—
A
31.3
31.6
99%
B
83.0
81.6
98%
C
173.7
156.6
111%
—
6.2
—
—
A
30.4
30.9
98%
B
82.1
80.9
102%
C
172.1
155.9
110%
—
7.4
—
—
A
33.2
32.0
104%
B
83.5
82.0
102%
C
176.8
157.0
113%
—
7.7
—
—
A
32.0
32.3
99%
B
85.0
82.3
103%
C
173.0
157.3
110%
Deutsch. Example Run: 1Röhrchen, 2Duplikat
CPM, 3Mittelwert CPM, 4Netto CPM, 5Prozent
Bindung, 6Ca. Prolaktin, ng/mL, 7Total, 8%NSB,
9
%MB, 10Unbekannte,
11
Qualitätskontrollparameter, 1220% Intercept.
Intraassay Precision: 1Mittelwert, 2SD
(Standardabweichung), 3CV
(Variationskoeffizient). Interassay Precision:
1
Mittelwert, 2SD (Standardabweichung), 3CV
(Variationskoeffizient). Linearity: 1Verdünnung,
2
Beobachtet (B), 3Erwartet (E), 4% B/E, 58 in 8.
Recovery: 1Lösung, 2Beobachtet (B), 3Erwartet
(E), 4% B/E. End-of-Run Effect: 1Röhrchen.
Español. Example Run: 1Tubo, 2Duplicado
CPM, 3Media CPM, 4 CPM Netas, 5Porcentaje
de unión, 6Prolactina, aprox., ng/mL, 7Total,
8
%NSB, 9%MB, 10Desconocidos, 11Parámetros
del control de calidad, 12Corte al 20%.
Intraassay Precision: 1Media, 2DS, 3CV.
Interassay Precision: 1Media, 2DS, 3CV.
Linearity: 1 Dilución, 2Observado (O),
3
Esperado (E), 4%O/E, 58 en 8. Recovery:
1
Solución, 2Observado (O), 3Esperado (E),
4
%O/E. End-of-Run Effect: 1Tubos.
Français. Example Run: 1Tube, 2Duplicate
CPM, 3 CPM moyen, CPM corrigé,
5
Pourcentage lié, 6Approx. Prolactine, ng/mL,
7
Total, 8%NSB, 9%MB, 10Patients, 11Paramètres
Contrôle de Qualité, 1220% Intercept. Intraassay
Precision: 1Moyenne, 2SD, 3CV. Interassay
Precision: 1Moyenne, 2SD, 3CV. Linearity:
1
Dilution, 2Observé (O), 3Attendu (A), 4%O/A, 58
dans 8. Recovery: 1Solution, 2Observé (O),
10
Attendu (A), 4%O/A. End-of-Run Effect:
Tubes.
Italiano. Example Run: 1Provetta, 2CPM in
duplicato, 3CPM Medio, 4CPM Netti,
5
Percentuale di Legato, 6Appross. Prolattina,
ng/mL, 7Totale, 8%NSB, 9%MB, 10 Campioni Non
Noti, 11Parametri per il Controllo di Qualità,
12
Intercetta al 20%. Intraassay Precision:
1
Media, 2SD (Deviazione Standard), 3CV
(Coefficiente di Variazione). Interassay
Precision: 1Media, 2SD (Deviazione Standard),
3
CV (Coefficiente di Variazione). Linearity:
1
Diluizione, 2Osservato (O), 3Atteso (A), 4%O/A,
5
8 in 8. Recovery: 1Soluzione, 2Osservato (O),
3
Atteso (A), 4%O/A. End-of-Run Effect:
1
Provette.
Português. Example Run: 1Tubo, 2Duplicado
CPM, 3Média de CPM, 4Net CPM, 5Percentagem
de Ligação, 6Aprox. Prolactina, ng/mL, 7Total,
8
%NSB, 9%MB, 10Desconhecidas, 11Parâmetros
do controlo de qualidade, 1220% Intercepção.
Intraassay Precision: 1Média, 2Desvio padrão,
3
Coeficiente de variação. Interassay Precision:
1
Média, 2Desvio padrão, 3Coeficiente de
variação. Linearity: 1Diluição, 2Observado (O),
3
Esperado (E), 4%O/E, 58 em 8. Recovery:
1
Solução, 2Observado (O), 3Esperado (E),
4
%O/E. End-of-Run Effect: 1Tubos.
Deutsch
Coat-A-Count Prolaktin IRMA
Anwendung: Immunradiometrischer
Assay zur quantitativen Bestimmung von
Prolaktin in Serum. Der Assay ist
ausschließlich in der In-Vitro Diagnostik im
Zusammenhang mit Untersuchungen des
hypophysären Status und der Infertilität
einzusetzen.
Artikelnummern: IKPR1 (100 Tests)
Die Packung mit 100 Röhrchen
enthält weniger als 20 Microcurie
(740 Kilobequerel) an
125
I-monoklonalen Anti-Prolaktin.
Klinische Relevanz
Humanes Prolaktin ist ein PolypeptidHormon der vorderen Hypophyse mit
einem Molekulargewicht von ca. 22 800.
Es ist von essentieller Wichtigkeit für die
Produktion von Muttermilch und kann
gonadale Funktionen unterdrücken. Die
genaue Definition von Prolaktin, als eine
vom menschlichen Wachstumhormon zu
unterscheidende Substanz, gelang erst
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
1970. Seit diesem Zeitpunkt, wurde die
Bestimmung von Prolaktin eine wichtige
Methode in der Diagnostik der
Amenorrhoe, Galactorrhoe und
Hypothalamus-, bzw.
Hypophysendysfunktionen.
Als Referenzwertebereich für
zirkulierendes Prolaktin werden in der
Literatur Konzentrationen bis annähernd
20 ng/ml angegeben. Die Prolaktinspiegel
sind zum Zeitpunkt der Geburt deutlich
erhöht, sinken aber auf normale
Erwachsenenwerte in weniger als 3
Monaten.
Für Frauen werden geringfügig höhere
Durchschnittswerte angegeben, mit einem
leichten Anstieg während der Pubertät
und ein entsprechender Abfall nach der
Menopause, als für Männer. Während der
Schwangerschaft steigen die
Prolaktinwerte beständig bis zum 10- oder
20-fachen der Ausgangswerte an. Nach
der Geburt fallen die Werte für nicht
stillende Mütter innerhalb 3 Wochen auf
ein normales Niveau. Bei stillenden
Müttern ist der Rückgang auf normale
Werte verzögert, da das Saugen des
Kindes zu einem schnellen und
dramatischen Anstieg der
Prolaktinfreisetzung führt. Frauen die
Kontrazeptiva einnehmen bzw. unter
Östrogenbehandlung stehen, weisen
ebenfalls erhöhte Prolaktinspiegel auf. In
der Beurteilung geringfügiger
Konzentrationsanstiege sollte immer
berücksichtigt werden, daß Prolaktin ein
Streßhormon ist.
Nicht allein das Stillen sondern auch
geringfügige Eingriffe wie Blutentnahme
oder eine Anamnesebefragung, sind als
Ursache für kurzfristige
Konzentrationserhöhungen registriert
worden. Überdies ist die Freisetzung von
Prolaktin von Natur aus episodisch. Von
Tag zu Tag wurden Fluktuationen mit
Variationskoeffizienten höher als 30%
beobachtet. Schließlich gibt es
schlafabhängige tägliche Variationen: Die
Prolaktinkonzentrationen steigen während
des Schlafes und erreichen ihre
niedrigsten Werte wenige Stunden nach
dem Aufwachen. Die Empfehlung Proben
zwischen 9,00 und 12,00 Uhr zu
entnehmen, beruht auf der Annahme
„normaler“ Aufwachzeiten.
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
Methodik
Der Coat-A-Count Prolaktin IRMA ist ein
Festphasen immunradiometrischer Assay
(beschichtete Röhrchen) mit
monoklonalen und polyklonalen anti125
Prolaktin Antikörpern: Ein I-markierter
monoklonaler anti-Prolaktin Antikörper in
der flüssigen Phase und ein polyklonaler
anti-Prolaktin Antikörper immobilisiert auf
der Wand eines Röhrchens.
Testablauf:
Prolaktin wird zwischen den polyklonalen
auf der Wand eines Polystyrolröhrchens
immobilisierten anti-Prolaktin Antikörpern
und dem radioaktiv markierten
monoklonalen anti-Prolaktin Antikörpern
gebunden.
125
Ungebundene I-markierte anti-Prolaktin
Antikörper werden durch Dekantieren des
Reaktionsgemisches und anschließendem
Waschen der Röhrchen entfernt; dies
reduziert die unspezifischen Bindungen
sehr stark und gewährleistet eine
exzellente Präzision bei niedrigen
Konzentrationen.
Die Prolaktin Konzentration ist der nach
dem Waschen im Röhrchen verbliebenen
Radioaktivität direkt proportional. Die
Radioaktivität wird in einem GammaCounter gemessen. Die Prolaktin
Konzentration in der Patientenprobe wird
durch den Vergleich der gemessenen
Counts pro Minute mit denen der
mitgelieferten Standards unterschiedlicher
Konzentration ermittelt.
Zu pipettierende Reagenzien: 1
Testdauer: 2 Stunden (auf einem
Schüttler)
Totalaktivität zum Zeitpunkt der
Markierung: ca. 300 000 cpm
Hinweise und
Vorsichtsmaßnahmen
Zur In-vitro-Diagnostik.
Reagenzien: Die Packung mit den
Reagenzien sollte bei 2–8°C in einem
Kühlschrank gelagert werden, der für
radioaktives Material ausgewiesen ist. Die
Entsorgung muss nach den jeweils
gültigen Gesetzen erfolgen.
Die Reagenzien dürfen nur bis zum
Verfallsdatum verwendet werden.
11
Einige Komponenten des Kits können
Material humanen Ursprungs und/oder in
anderer Weise gefährliche Inhaltsstoffe
enthalten, die es unbedingt notwendig
machen die folgenden
Vorsichtsmaßnahmen einzuhalten.
wiederverschließbaren Plastikbeuteln.
Kühl lagern, vor Feuchtigkeit schützen und
nach dem Öffnen wieder sorgfältig
verschließen. Lagerung bei 2–8°C bis zum
Verfallsdatum.
IKPR1: 100 Röhrchen.
Die generell geltenden
Vorsichtsmaßnahmen sind einzuhalten
und alle Komponenten als potenziell
infektiös zu behandeln. Alle aus
menschlichem Blut gewonnenen
Materialien wurden auf Syphilis,
Antikörper gegen HIV-1 und HIV-2,
Hepatitis-B-Oberflächenantigen und
Hepatitis-C-Antikörper untersucht und
negativ befundet.
I Prolaktin Antikörper (IPR2)
11 ml jodierte monoklonale anti-Prolaktin
Antikörper von der Maus. Das Reagenz
wird gebrauchsfertig, in flüssiger Form
geliefert. Bei 2–8°C 30 Tage nach dem
Öffnen oder bis zum Verfallsdatum auf
dem Etikett haltbar.
IKPR1: 2 Flaschen.
Bestimmten Komponenten wurde
Natriumazid (<0,1 g/dl) hinzugefügt. Um
die Bildung von explosiven Metallaziden in
Blei- und Kupferrohren zu vermeiden,
sollten die Reagenzien nur zusammen mit
großen Wassermengen in die Kanalisation
gespült werden.
Wasser: Destilliertes bzw. deionisiertes
Wasser benutzen.
Radioaktivität
Der Umgang mit radioaktivem Material ist
in Deutschland genehmigungspflichtig.
Deshalb muss der Siemens Healthcare
Diagnostics eine Kopie der aktuellen
gültigen Umgangsgenehmigung des
Kunden vorliegen, bevor radioaktive
Reagenzien versendet werden dürfen. Die
Strahlenschutzverordnung ist zu
beachten.
Das radioaktive Material ist gemäß der
jeweiligen Umgangsgenehmigung zu
handhaben.
Die Strahlenexposition ist zu minimieren.
Spritzer sind sofort aufzuwischen und die
betroffene Oberfläche zu dekontaminieren. Aerosolbildung ist zu vermeiden.
Flüssiger und fester radioaktiver Abfall
sind unter Beachtung der gültigen
Richtlinien zu entsorgen.
Bestandteile der Testpackung:
Vorbereitung
Prolaktin Antikörper-beschichtete
Röhrchen (IPR1)
Polystyrol Röhrchen beschichtet mit
polyklonalen anti-Prolaktin Antikörper von
der Ziege, verpackt in
12
125
Prolaktin Standards (PRI3–9, X)
8 Flaschen, A – H, lyophilisierte Prolaktin
Standards in einer Serum/Puffer Matrix.
Mindestens 30 Minuten vor dem
Testansatz, den 0-Standard A mit 5 ml
destilliertem oder deionisiertem Wasser
und jeden restlichen Standard B – H mit
2 ml destilliertem oder deionisiertem
Wasser auflösen. Bei –20°C für 30 Tage
nach dem Auflösen haltbar. Falls
notwendig, portionieren, um wiederholtes
einfrieren und auftauen zu vermeiden.
IKPR1: 1 Set.
Die Standards haben chargen-spezifische
Werte von ca. 0; 2,5; 5; 10; 20; 50; 100
und 200 ng/mL kalibriert am “World Health
Organization's Third International
Standard” für Prolaktin 84/500. Weitere
Standardkurvenpunkte können durch
Mischen der Standards hergestellt
werden. Die exakten Konzentrationen
entnehmen Sie bitte den Etiketten der
Standardflaschen.
Bitte beachten: Die Coat-A-Count
Prolaktin IRMA Standards können nicht
mit denen in anderen Prolaktin Kits
mitgelieferten ausgetauscht werden.
Gepufferte Waschlösung, Konzentrat
(1TSBW)
40 ml gepufferte Waschlösung,
konzentriert mit Detergenzien und
Konservierungsmitteln. Unter
Zuhilfenahme eines Transferbehälters
jede Flasche Konzentrat mit 400 ml
destilliertem Wasser lösen, das
Endvolumen beträgt 440 ml. Bei 2–8°C für
6 Monate nach Zubereitung stabil.
IKPR1: 1 Flasche.
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
Erforderliche Laborgeräte und
Hilfsmittel
Gammacounter – kompatibel mit
12x75 mm Röhrchen
Schüttler – ca. 200 Zyklen pro Minute
einstellen
Reagenzienvorbereitung
Destilliertes oder entionisiertes Wasser
Volumetrische Pipetten: 2,0; 5,0 und
11,0 ml
Messzylinder – zum Abmessen von
400 ml
Details der getesteten Röhrchenarten sind
dem Kapitel "Alternative Probenarten" zu
entnehmen.
Erforderliche Menge: 50 µl pro Röhrchen
Lagerung: 7 Tage bei 2–8°C, oder für
3 Monate (portioniert) bei –20°C.
Die Proben vor Testbeginn auf
Raumtemperatur (15–28°C) bringen und
vorsichtig durchmischen. Gefrorene
Proben dürfen nicht durch Erhitzen im
Wasserbad aufgetaut werden.
Plastikbehälter mit Verschluss – zur
Herstellung und Lagerung der gepufferten
Waschlösung
Proben mit Konzentrationen von
2 500 ng/ml können Prolaktin Ergebnisse
unter dem höchsten Standard (200 ng/ml)
hervorrufen und müssen vor der Messung
mit 0-Standard verdünnt werden.
Immunoassay
Mikropipetten: 50 µl und 200 µl
Immunometrischer Assay
Testdurchführung
Dispenser – Für die Zugabe von 2,0 ml
der gepufferten Waschlösung
Alle Testkomponenten vor Testbeginn auf
Raumtemperatur (15–28°C) bringen.
Dekantierständer – erhältlich bei Siemens
Healthcare Diagnostics (Artikelnummer:
FDR).
Logarithmisches Papier, 3 Dekaden
Immunoassay-Kontrollen (mehrere
Parameter, 3 Konzentrationen)
(Artikelnummer: CON6).
Probengewinnung
Es ist keine besondere Vorbereitung der
Patienten nötig. Blutentnahme durch
17
Venepunktion in unbeschichtete
Röhrchen, Hämolyse vermeiden,
Trennung der Serums von den Zellen. Der
Abnahmezeitpunkt sollte notiert werden.
Der Einsatz einer Ultrazentrifuge wird zur
Klärung von lipämischen Proben
empfohlen.
Bei hämolysierten Proben besteht die
Möglichkeit einer unsachgemäßen
Handhabung vor Eintreffen im Labor,
daher sind die Ergebnisse mit Vorsicht zu
interpretieren.
Blutentnahmeröhrchen von verschiedenen
Herstellern können differierende Werte
verursachen. Dies hängt von den
verwendeten Materialien und Additiven
(Gel oder physische Trennbarrieren,
Gerinnungsaktivatoren und /oder
Antikoagulantien) ab. Coat-A-Count IRMA
Prolaktin sind nicht mit allen möglichen
Röhrchenvariationen ausgetestet worden.
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
1
Jeweils 2 Prolaktin-Antikörperbeschichtete Röhrchen mit A
(unspezifische Bindung, 0-Standard)
und von B bis H (Maximalbindung)
beschriften. Jeweils 2 weitere
Antikörper-beschichtete Röhrchen für
Kontrollen und Patientenproben
beschriften.
Wenn die Totalaktivität für die
Datenreduktion erfordlich sind, jeweils
2 unbeschichtete 12x75 mm
Polypropylen-Röhrchen mit T (Totalaktivität) beschriften und bis Schritt 3
beiseite stellen.
Standards
Ca. ng/mL
T*
—
A(NSB)
0
B
2,5
C
5
D
10
E
20
F
50
G
100
H("MB")
200
* Optional Totalaktivität Röhrchen
Bitte beachten: Die Konzentrationen
der Standards sind chargenspezifisch.
Die exakten Werte entnehmen Sie
bitte den Etiketten auf den Flaschen.
13
2
50 µl der Standards, Kontrollen und
Patientenserumproben in die
vorbereiteten Röhrchen pipettieren.
Direkt auf den Boden des
Röhrchens pipettieren. Proben, in
denen Konzentrationen erwartet
werden, die über dem höchsten
Standard (200 ng/ml) liegen, sind vor
dem Einsatz in den Assay mit 0Standard zu verdünnen. Um
Verschleppung zu vermeiden, wird die
Verwendung von Einmal-Pipettenspitzen empfohlen. Verdrängungspipetten, sowie automatische PipettorDilutoren sollten nur verwendet
werden, wenn eine mögliche
Verschleppung untersucht und für
vernachlässigbar befunden wurde.
3
125
200 µl of I Prolaktin Antikörper in
jedes Röhrchen hinzufügen.
Direkt auf den Boden pipettieren.
Vergewissern Sie sich, dass Probe
und Tracer gut gemischt sind, ohne zu
schäumen. Die Verwendung eines
Dispensers wird empfohlen. Die TRöhrchen bis zur Messung (siehe
Schritt 6) beiseite stellen; sie bedürfen
keiner weiteren Behandlung.
4
Für 2 Stunden auf einem Schüttler
inkubieren.
5
Vollständig dekantieren und trocknen.
2 ml gepufferte Waschlösung in jedes
Röhrchen geben, 1–2 Minuten warten,
dann vollständig dekantieren.
Nochmals 2 ml gepufferte
Waschlösung in jedes Röhrchen
geben, 1–2 Minuten warten und
erneut vollständig dekantieren.
Vollständiges Entfernen der
Flüssigkeit verbessert die Präzision
deutlich. Nach dem 2. Waschgang,
mit Hilfe eines Dekantierständers alle
Röhrchen (außer die T-Röhrchen)
dekantieren und 2 - 3 Minuten umgedreht stehen lassen. Anschließend
werden die Röhrchen kräftig auf
Fließpapier ausgeklopft, um alle
restlichen Tröpfchen zu entfernen.
6
Alle Röhrchen 1 Minute im GammaCounter messen.
In Mehrkanal-Gamma-Countern
sollten die T-Röhrchen mindestens 1
Position Abstand von den übrigen
Teströhrchen haben, um ein
“Spillover” zu vermeiden.
14
Berechnung und
Qualitätskontrolle
Um die Konzentrationen aus der Log-Log
Darstellung der Standardkurve abzulesen
werden zunächst der Mittelwert jedes
Röhrchenpaars, bereinigt um den
Mittelwert der NSB (Standard A) Counts
pro Minute (cpm) berechnet:
Netto CPM = Mittelwert CPM minus Mittelwert
NSB CPM
Anschließend wird die Bindung jedes
Röhrchenpaars als Prozent der
Maximalbindung (MB, Bmax) bestimmt
(%B/MB). Hierzu werden die korrigierten
NSB Counts des höchsten Standards als
100% gesetzt:
Prozentbindung = (Netto Counts / Netto MB
Counts) × 100
Die Prozentbindungen der Standards
werden gegen die Konzentration auf
Logarithmenpapier mit je 3 Dekaden
aufgetragen und durch eine Kurve mit
bestmöglicher Annäherung an diese
Punkte verbunden. (Die einzelnen
Standardpunkte sollten jeweils mit einem
Bogen oder einer geraden Linie aber nicht
durch eine gerade Linie durch alle Punkte
verbunden werden.) Prolaktin
Konzentrationen innerhalb des
Konzentrationsbereichs der Standards
können an der Kurve durch Interpolation
abgelesen werden. Die Prozentbindungen
der drei niedrigsten Standards können
zusätzlich auf linearem Papier gegen die
Konzentration aufgetragen werden, um
durch Interpolation Ergebnisse in der
Nähe von 0 genauer zu ermitteln.
Hinweis: Obwohl auch andere Verfahren
akzeptabel sind, hat die beschriebene
Berechnung der Daten Vorteile im Sinne
der Qualitätskontrolle. Man erhält eine
Standardkurve, die sowohl in der Log-Log,
als auch in der Lin-Lin Darstellung
weitgehend linear verläuft und sich von
Ansatz zu Ansatz nur wenig verändert.
Man erhält so auch wichtige Parameter für
die Qualitätskontrolle wie die
Prozentbindungen der Standards mit
Konzentrationen ungleich 0 (%B/Bmax oder
"%B/MB"). Mehr Informationen über die
Intra-Assay-Präzision als Funktion der
Konzentration vermittelt die direkte
Darstellung der Prozentbindung jedes
einzelnen Standard-röhrchens und nicht
des Mittelwertes.
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
Alternative Berechnung: Obwohl die
Berechnung der Prozentbindung auch
direkt aus dem Mittelwert der CPM
erfolgen kann, führt die Korrektur um die
NSB normalerweise eher zu einer über
den gesamten Messbereich linear
verlaufenden Kurve. Eine Standardkurve
kann auch durch das direkte Auftragen
der CPM, bzw. mittleren CPM gegen die
Konzentration auf Log-Log oder Lin-Lin
Papier erstellt werden.
(Halblogarithmisches Papier sollte nicht
verwendet werden.) Dieses Verfahren ist
zwar einfacher, aber weniger hilfreich für
die Qualitätskontrolle von Lauf zu Lauf.
Computergestützte Berechnung:
"Punkt-zu-Punkt" Methoden, insbesondere
lineare und kubische-spline
Berechnungen können für den Coat-ACount Prolaktin IRMA angewendet
werden. Auch wenn die Berechnung durch
ein Computerprogramm erfolgt, ist die
grafische Log-Log Darstellung der
Standardkurve (manuell oder automatisch)
als ein weiterer Schritt der
Qualitätskontrolle empfehlenswert. Für die
Berechnung der Daten sind auch sog.
logistische Verfahren anwendbar. Aus
dieser Gruppe sind die 4- oder 5Parameter Logistik am besten geeignet.
Es ist zu berücksichtigen, dass manche
der üblichen Algorithmen sich nicht
erfolgreich annähern, selbst wenn
logistische Modelle die Daten richtig
erfassen. Wird ein logistisches Verfahren
angenommen, ist es in jedem Fall
erforderlich, die Korrektheit des täglichen
Ansatzes mit Hilfe der Rückberechnung
der Standards und anderer Parameter zu
beurteilen. Zusätzlich wird die grafische
Darstellung in Log-Log-Form empfohlen,
da diese mehr Informationen bietet als die
konventionelle halblogarithmische
Darstellung.
Proben-Handhabung: Die Anweisungen
zur Handhabung und Lagerung von
Proben und Komponenten müssen
beachtet werden. Patientenproben mit
erwarteten Konzentrationen über dem
höchsten Standard (200 ng/ml) müssen
vor dem Einsatz in den Test mit 0Standard verdünnt werden. Alle Proben,
inklusive Standards und Kontrollen, sollten
in Doppelbestimmung gemessen werden.
Um Verschleppung zu vermeiden ist es
wichtig, Pipetten mit Einwegspitzen zu
verwenden und diese zwischen den
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
Proben zu wechseln. Verdrängungspipetten, sowie automatische PipettorDilutoren sollten nur verwendet werden,
wenn eine mögliche Verschleppung
untersucht und für vernachlässigbar befunden wurde. Kontrollpaare sollten an
verschiedenen Stellen des Testansatzes
platziert werden, um eine eventuelle Drift
zu erkennen. Die Einzelergebnisse der
Duplikate sollten auf Übereinstimmung
überprüft und Verschleppung von Probe
zu Probe vermieden.
Gamma Counter: In Mehrkanal-GammaCountern sollten die T-Röhrchen
mindestens 1 Position Abstand von den
übrigen Teströhrchen haben, um ein
“Spillover” zu vermeiden. Alternativ
können auch nur 25 µl in die Röhrchen mit
der Totalaktivität im Schritt 3 pipettiert und
anschließend die CPM mit dem Faktor 4
multipliziert werden.
Kontrollen: Kontrollen mit mindestens 2
Prolaktin Konzentrationen (niedrig und
hoch) sollten routinemäßig als unbekannte
Proben eingesetzt und von Tag zu Tag
protokolliert werden.
Wiederholungsmessungen von Proben
sind ein wertvolles Hilfsmittel in der
Beurteilung der Interassay Präzision.
Qualitätskontroll-Parameter: Es wird
empfohlen die folgenden Parameter zu
protokollieren:
T = Total Counts (als Counts pro Minute)
%NSB = 100 × (Mittlere NSB Counts / Total
Counts)
%MB = 100 × (Net MB Counts / Total Counts)
Und die Prozentbindungen (%B/Bmax oder
"%B/MB") aller Standards mit Ausnahme
des höchsten Standards, zum Beispiel:
%C/MB = 100 × (Netto Standard "C" Counts /
Net MB Counts)
Aufzeichnungen: Es ist gute Laborpraxis
die Chargennummern, sowie das Datum
der ersten Öffnung bzw. Rekonstitution
der verwendeten Komponenten zu
protokollieren.
Literatur: Siehe auch: Dudley RA, et al.
Guidelines for immunoassay data
reduction. Clin Chem 1985;31:1264-71.
15
Auswertebeispiel: Dieses Beispiel dient
nur zur Veranschaulichung und ist nicht
dazu geeignet Werte aus einem anderen
Testansatz damit zu ermitteln.
Aufgrund der Chargenabhängigkeit der
Standardkonzentrationen müssen die in
der rechten Spalte der Tabelle gelisteten
Konzentrationen nicht mit den Konzentrationen in Ihrer Lieferung übereinstimmen. (siehe Tabelle "Example Run").
Referenzwerte
In einem großen unabhängigen
Krankenhauslabor wurden Messungen mit
dem Coat-A-Count Prolaktin IRMA mit den
folgenden Ergebnissen in ng/ml
durchgeführt.
Median
Absolut
Bereich
Erwachsene
Männer
6,6
3,1 – 16,5
Erwachsene
Frauen
7,8
Gruppe
95%
Bereich
n
19
3,6 – 18,9 70
Im Labor sollten diese Ergebnisse
lediglich als Richtwerte betrachtet werden.
Jedes Labor sollte seine eigenen
Referenzbereiche etablieren.
Leistungsdaten
Die folgenden Abschnitte zeigen
repräsentative Daten für Coat-A-Count
Prolaktin IRMA. Die Ergebnisse sind in
ng/ml angegeben. Um von ng/ml in mIU/l
im Sinne der “World Health Organization's
Third International Standard“ für Prolaktin,
Nummer 84/500, umzurechnen, ist mit
21,2 multiplizieren.
Umrechnungsfaktor:
ng/ml × 21,2 → mIU/l
[WHO 3rd IS 84/500]
Messbereich: Bis 200 ng/ml
[WHO 3rd IS 84/500] Die Standards sind
chargenspezifisch
Analytische Sensitivität: 0,1 ng/ml
High-Dose-Hook-Effect: Tritt bis
2 500 ng/ml nicht auf
Intraassay-Präzision: Statistische
Berechnung der Ergebnisse von Proben,
die in 20 Röhrchenpaaren in einem
Ansatz gemessen wurden. (Siehe Tabelle
„Intraassay-Precision“.)
16
Interassay-Präzision: Statistische
Berechnung der Ergebnisse von Proben,
die in 20 Röhrchenpaaren in
verschiedenen Ansätzen gemessen
wurden. (Siehe Tabelle „InterassayPrecision“.)
"End of Run" Effekt: Tritt bis ca.
200 Röhrchen nicht auf. (siehe Tabelle
"End-of-Run Effect".)
Linearität: Proben wurden in
verschiedenen Verdünnungen getestet.
(Repräsentative Daten entnehmen Sie
bitte der Tabelle „Linearität“.)
Wiederfindung: Proben wurden 1:19 mit
3 Prolaktin Lösungen (500, 1 500 und
3 000 ng/ml) versetzt und gemessen.
(Repräsentative Daten entnehmen Sie
bitte der Tabelle „Recovery“.)
Spezifität: Das in diesem Testbesteck
verwendete Antiserum ist hochspezifisch
mit niedrigen Kreuzreaktivitäten zu
anderen Glykoproteinhormonen, wie FSH,
HCG, LH, TSH, hGH und HPL.
Bilirubin: Bilirubin hat in Konzentrationen
bis zu 200 mg/l keinen Einfluss auf die
Ergebnisse, der größer als die Impräzision
des Assays selbst ist.
Hämolyse: Erythrozytenkonzentrate
haben in Konzentrationen bis zu 30 µl/ml
keinen Einfluss auf die Messung, der
größer als die Impräzision des Assays
selbst ist.
Lipämie: Triglyceride haben in
Konzentrationen bis zu 3 000 mg/dl
keinen Einfluss auf die Ergebnisse, der
größer als die Impräzision des Assays
selbst ist.
Alternativer Probentyp: Um die
Auswirkungen von verschiedenen
Probenarten zu untersuchen, wurde Blut
von 27 Freiwilligen in Röhrchen ohne
Additiva, in Heparin-, EDTA- und Becton
®
Dickinson SST Vacutainer-Rörchen
gesammelt. Alle Proben wurden mit dem
Coat-A-Count Prolaktin IRMA Assay mit
den nachfolgend aufgeführten
Ergebnissen bestimmt.
(EDTA) = 0,87 (Serum) + 0,31 ng/ml
r = 1,0
(Heparin) = 0,89 (Serum) + 0,21 ng/ml
r = 1,0
(SST) = 0,97 (einfachen Röhrchen) + 0,26 ng/ml
r = 1,0
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
Mittelwerte:
8,7 ng/ml (Serum)
7,9 ng/ml (EDTA)
7,9 ng/ml (Heparin)
8,7 ng/ml (SST)
Methodenvergleich: Für den
Methodenvergleich wurden Daten aus 3
verschiedenen Studien kombiniert.
Insgesamt wurden 157 Patientenproben
im Coat-A-Count Prolaktin IRMA
Verfahren und dem Doppel-Antikörper
Prolaktin Kit verglichen. Berechnung der
linearen Regression:
(CAC IRMA) = 0,97 (DA) + 2,3 ng/ml
r = 0,990
Mittelwerte:
16,9 ng/ml (Coat-A-Count IRMA)
15,0 ng/ml (Double Antibody)
In einer weiteren Studie, wurden 159
Patientenproben mit dem Coat-A-Count
Prolaktin IRMA und dem Coat-A-Count
Prolaktin verglichen. Berechnung der
linearen Regression:
(CAC IRMA) = 0,95 (CAC) + 0,46 ng/ml
r = 0,989
Mittelwerte:
12,0 ng/ml (Coat-A-Count IRMA)
12,2 ng/ml (Double Antibody)
Anwendungsberatung
Bei Rückfragen wenden Sie sich bitte an
Ihre Niederlassung.
www.siemens.com/diagnostics
Das Qualitätsmanagement-System der Siemens
Healthcare Diagnostics Inc. ist zertifiziert nach
DIN EN ISO 13485:2003.
Español
Coat-A-Count Prolactina IRMA
Utilidad del análisis: Coat-A-Count
Prolactina IRMA es un ensayo
radioinmunométrico diseñado para la
determinación cuantitativa de prolactina
en suero. Su uso es estrictamente para
diagnóstico in vitro, como una ayuda en la
investigación del estado de la hipófisis y la
infertilidad.
Referencia: IKPR1 (100 tubos)
El kit de 100 tubos contiene
menos de 20 microcurios
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
(740 kilobequerelios) de un anticuerpo
monoclonal anti-prolactina marcado con
125
I radiactivo.
Resumen y Explicación del
Test
La prolactina humana es una hormona
polipeptídica de la hipófisis anterior, con
un peso molecular de 22 800 daltons.
Juega un papel esencial en la secreción
de la leche y tiene la habilidad de suprimir
la función gonadal. La existencia de la
prolactina como una sustancia distinta de
la hormona de crecimiento humana fue
demostrada en 1970. Desde esa fecha, la
determinación de prolactina se ha
convertido en una herramienta importante
en la investigación de la amenorrea, la
galactorrea y las enfermedades
hipotalámicas-hipofisiarias.
Como rango de normalidad de la
prolactina sérica, las publicaciones
sugieren concentraciones hasta
aproximadamente 20 ng/ml. Los niveles
de prolactina son elevados en el
nacimiento y van cayendo hasta los
niveles adultos en menos de tres meses.
Las mujeres tienen niveles
significativamente superiores que los
varones, con una elevación en la pubertad
— aparentemente relacionada con los
estrógenos — y una drástica caída en la
menopausia. Durante el embarazo, el
nivel de prolactina se eleva entre diez y
veinte veces su valor, volviendo a caer por
debajo de la normalidad después del
parto — en un periodo de tres semanas
en mujeres que no dan el pecho. En las
que dan el pecho, la caída a los valores
normales es más gradual porque la
succión induce la liberación de prolactina.
Las mujeres que toman anticonceptivos
orales o que están bajo terapia
estrogénica pueden tener niveles de
prolactina por encima de lo normal.
Debe tenerse en cuenta el significado de
un incremento moderado, ya que la
prolactina es una hormona de estrés,
elevándose transitoriamente, no sólo en
los procesos quirúrgicos, sino también en
circunstancias menos traumáticas como la
venipunción o las pruebas clínicas.
Además, la secreción de prolactina es
pulsátil, habiéndose encontrado
fluctuaciones diarias con CVs superiores
al 30%. Finalmente, hay una variación
17
diurna relacionada con el sueño: los
niveles de prolactina se incrementan
durante el sueño y alcanzan su valor más
bajo unas horas después de despertarse.
La advertencia de tomar las muestras
entre las nueve y las doce del mediodía
se debe a que se asume que los
individuos hace tiempo que están
despiertos.
material radiactivo. Desechar de acuerdo
a la legislación en vigor.
Principio del análisis
Siga las precauciones universales y
manipule todos los componentes como si
fueran capaces de transmitir agentes
infecciosos. Los materiales derivados de
sangre humana han sido analizados y son
negativos para sífilis; para anticuerpos
frente al VIH 1 y 2; para el antígeno de
superficie de hepatitis B y para los
anticuerpos de hepatitis C.
Coat-A-Count Prolactina IRMA es un
ensayo radioinmunométrico en fase sólida
basado en anticuerpos monoclonales y
policlonales anti-prolactina: anticuerpo
monoclonal anti-prolactina marcado con
125
I en fase líquida y anticuerpo policlonal
anti-prolactina inmovilizado en la pared de
un tubo de poliestireno.
En el procedimiento:
La prolactina es capturada entre los
anticuerpos policlonales anti-prolactina
que están inmovilizados en la superficie
interna del tubo de poliestireno y el
trazador monoclonal anti-prolactina
marcado radiactivamente.
El anticuerpo anti-prolactina marcado con
125
I no unido se remueve decantando la
mezcla de reacción y lavando el tubo; esto
reduce la unión inespecífica a un nivel
muy bajo, y asegura una precisión
excelente a concentraciones bajas.
La concentración de prolactina es
directamente proporcional a la
radiactividad presente en el tubo después
del paso de lavado. La radiactividad se
cuenta en un contador gama, después de
lo cual se obtiene la concentración de
prolactina en la muestra del paciente
comparando las cuentas por minuto del
paciente con aquellas obtenidas con el
juego de calibradores suministrados.
Reactivos a pipetear: 1
Tiempo total de incubación: 2 horas (en
un agitador de gradillas)
Cuentas totales en la iodización:
aproximadamente 300 000 cpm
Advertencias y precauciones
Para uso diagnóstico in vitro.
Reactivos: Almacenar a 2–8°C en una
cámara preparada para almacenar
18
No usar los reactivos después de su fecha
de caducidad.
Algunos componentes suministrados en el
kit pueden contener material de origen
humano y/o otros componentes
potencialmente peligrosos que necesitan
ciertas precauciones.
Se ha usado Azida sódica, en
concentraciones menores de 0,1 g/dl,
como conservante. Para su eliminación,
lavar con grandes cantidades de agua
para evitar la constitución de residuos de
azidas metalicas, potencialmente
explosivas, en las cañerías de cobre y
plomo.
Agua: Usar agua destilada o desionizada.
Radiactividad
Una copia de cualquier certificado de
licencia de radioisótopos (específico o
general) emitido a la aduana de los
EE.UU. se registrará en los ficheros de
Siemens Healthcare Diagnostics antes de
que se puedan enviar kits o componentes
conteniendo material radiactivo. Estos
materiales radiactivos pueden adquirirse
por cualquier cliente con la licencia
específica apropiada. Con una licencia
general, estos materiales radiactivos
pueden adquirirse sólo por médicos,
veterinarios en la práctica de la medicina
veterinaria, laboratorios clínicos y
hospitales — y estrictamente para la
clínica in vitro o tests de laboratorio que
no conlleven la administración interna o
externa de material radiactivo o su
radiación a humanos u otros animales. Su
adquisición, recepción, almacenaje, uso,
trasferencia y desecho están regulados y
se expenderá una licencia (general o
específica) de la Comisión Nuclear de
EE.UU. o de un Estado con el NRC para
su consiguiente control.
Manejar los materiales radiactivos de
acuerdo a los requerimientos de su
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
licencia general o específica. Para
minimizar la exposición a la radiación, el
usuario debe adherirse al cuarto conjunto
de guías publicadas por el National
Bureau of Standards con el nombre Safe
Handling of Radioactive Materials
(Handbook No. 92, issued March 9, 1964)
y en las consiguientes publicaciones de
las autoridades Federales o Estatales.
Limpiar y decontaminar rápidamente las
superficies afectadas. Evitar la generación
de aerosoles. Eliminar los residuos sólidos
radiactivos de acuerdo con los
requerimientos de su licencia. Licencias
generales (NRC Form 483) pueden
eliminar sus residuos sólidos radiactivos
como residuos no radiactivos, después de
retirar las etiquetas. Licencias específicas
(NRC Form 313) se deben referir al Título
10, Código de Regulaciones Federales,
Parte 20. Las licencias en Estados
Asociados deben referirse a las
normativas de su correspondiente Estado.
Licencias generales pueden eliminar sus
residuos líquidos radiactivos contenidos
en este tipo de productos como cualquier
otro material líquido, quitando las
etiquetas de los contenedores y
procesándolos como residuos sólidos.
Licencias específicas pueden eliminar
pequeñas cantidades de residuos líquidos
radiactivos contenidos en este tipo de
productos como cualquier otro material
líquido. Refiérase a la normativa aplicable
a su laboratorio.
Materiales Suministrados:
Preparación Inicial
Tubos recubiertos de anticuerpo frente
a la Prolactina (IPR1)
Tubos de poliestireno recubiertos con un
anticuerpo policlonal de cabra antiprolactina y embalados en bolsas de
cierre hermético. Almacenar refrigerados y
protegidos de la condensación, cerrando
cuidadosamente las bolsas después de su
uso. Estable a 2–8°C hasta la fecha de
caducidad impresa en la bolsa.
IKPR1: 100 tubos.
125
I Prolactina Ab (IPR2)
11 ml de anticuerpo monoclonal murino
anti-prolactina yodado. El reactivo se
suministra en forma líquida, listo para
usar. Estable a 2–8°C durante 30 días
después de su apertura, o hasta la fecha
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
de caducidad impresa en el etiqueta.
IKPR1: 2 viales.
Calibradores de Prolactina (PRI3–9, X)
Ocho frascos, marcados de A a H, de
calibradores de prolactina liofilizados en
una matriz de suero/solución
amortiguadora. 30 minutos, como mínimo,
antes de su uso: reconstituir el calibrador
cero A con 5,0 ml de agua destilada y los
calibradores restantes B a H con 2,0 ml
de agua destilada. Estable a –20°C
durante 30 días tras su reconstitución. Si
es necesario alicuotar, para evitar
repetidas congelaciones y
descongelaciones.
IKPR1: 1 juego.
Los calibradores tienen valores loteespecíficos de aproximadamente 0, 2,5, 5,
10, 20, 50, 100 y 200 nanogramos de
prolactina por mililitro (ng/ml) en términos
del Tercer Estándar Internacional para
Prolactina de la Organización Mundial de
la Salud, número 84/500. Se pueden
obtener los puntos de calibración
intermedios mezclando los calibradores
en las proporciones adecuadas. Ver las
etiquetas de cada vial de calibrador para
conocer el valor en ng/ml.
Note que los calibradores Coat-A-Count
Prolactina IRMA no son intercambiables
con aquellos suministrados en otros kits
para Prolactina.
Concentrado de Solución
Amortiguadora de Lavado (1TSBW)
40 ml de solución salina amortiguadora,
con surfactantes y conservante. Utilizando
un depósito de transferencia, diluir el
contenido de cada frasco con 400 ml de
agua destilada, para un volumen total de
440 ml. Almacenar refrigerado. Estable a
2–8°C durante 6 meses después de la
preparación.
IKPR1: 1 vial.
Materiales Requeridos pero no
suministrados
Contador Gamma — compatible con
tubos estándar de 12 x 75 mm
Agitador — configurado para dar
aproximadamente 200 sacudidas por
minuto
Preparación del Reactivo
Agua destilada o desionizada
19
Pipetas volumétricas: 2,0, 5,0 y 11,0 ml
Probeta graduada — para dispensar
400 ml
Depósito para almacenamiento de plástico
con tapa — para la preparación y
almacenaje de la Solución Amortiguadora
de Lavado.
Inmunoensayo
Micropipetas: 50 µl y 200 µl
Dispensador – para dispensar 2,0 ml de
Solución Amortiguadora de Lavado
Gradilla de espuma — disponible en
Siemens Healthcare Diagnostics
(Referencia: FDR).
Conservación: 2–8°C durante 7 días, o
hasta 3 meses (alicuotados) a –20°C.
Antes del ensayo, llevar todas las
muestras a temperatura ambiente (15–
28°C) y mezclar por inversión. No intentar
la descongelación de muestras
congeladas calentándolas en un baño de
agua.
Note que las muestras con
concentraciones de prolactina mayores de
2 500 ng/ml pueden producir resultados
de prolactina aparentes menores que el
del calibrador más alto del kit (200 ng/ml).
Las muestras que se espere que excedan
esta concentración se deberán diluir con
el calibrador cero antes del análisis.
Papel para gráfica log-log de 3 ciclos
Un control de inmunoensayo de tres
niveles con base de suero humano,
conteniendo prolactina junto con más de
otros 25 analitos que puede obtenerse en
Siemens Healthcare Diagnostics
(Referencia: CON6).
Recogida de la muestra
El paciente no necesita estar en ayunas
así como tampoco cualquier otro tipo de
preparación. Recoger la sangre por
17
venipunción en tubos limpios, evitando
la hemólisis, y separar el suero de las
células. Se deberá registrar la hora en
que se tomó la muestra.
Se recomienda el uso de una
ultracentrífuga para aclarar las muestras
lipémicas.
Ensayo Immunometrico
Todos los componentes deben llevarse a
temperatura ambiente (15–28°C) antes de
su uso.
1
Marcar por duplicado dieciséis tubos
recubiertos con anticuerpo antiprolactina como A (unión no
específica) y B a H (“unión máxima”).
Marcar otros tubos recubiertos con
anticuerpo, también por duplicado,
para los controles y las muestras del
paciente.
Si se requieren tubos de Cuentas
Totales para la reducción de datos,
marcar dos tubos de poliestireno (sin
recubrir) como T (Cuentas Totales) y
dejarlos a un lado hasta el paso 3.
Las muestras hemolizadas podrían indicar
una mala manipulación de la muestra
antes de ser recibida por el laboratorio; en
este caso, los resultados deben
interpretarse con precaución.
Calibradores
Aproximado
ng/ml
T*
—
Los tubos para recoger sangre de
distintos fabricantes pueden producir
valores diferentes, dependiendo del
material del tubo y de los aditivos,
incluyendo barreras de gel o barreras
físicas, activadores de la coagulación y/o
anticoagulantes. El Prolactina Coat-ACount IRMA no ha sido analizado con
todos los distintos tipos de tubos. Para
obtener detalles sobre los tipos tubos que
se han analizado, consulte la sección de
Tipos de Muestras Alternativos.
C
5
D
10
E
20
Volumen requerido: 50 µl por tubo.
20
A(NSB)
0
B
2,5
F
50
G
100
H("MB")
200
*Tubos opcionales para cuentas totales
Nota: Los valores de los calibradores
son lote específicos. Ver las etiquetas
de cada vial de calibrador para
conocer el valor en ng/ml.
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
2
Pipetear 50 µl de cada calibrador,
control y muestra de suero del
paciente en los tubos preparados.
Pipetear directamente en el fondo
del tubo. Las muestras de los
pacientes que se espera que
contengan concentraciones de
prolactina mayores que la del
calibrador más alto (200 ng/ml) se
deberán diluir con el calibrador cero
antes del ensayo. Se recomienda usar
micropipetas con puntas desechables
para evitar el arrastre de una muestra
a otra. Sólo se deberán usar pipetas
de desplazamiento positivo y equipos
de dilución automática si se ha
evaluado la posibilidad de arrastre y
se ha determinado que este sería
insignificante.
3
Añadir 200 µl del anticuerpo anti125
prolactina marcado con I a cada
tubo.
Pipetear directamente al fondo del
tubo, y asegurarse de que la muestra
y el trazador estén mezclados
completamente, sin hacer espuma. Se
recomienda usar un dispensador de
repetición. Dejar los tubos T a un lado
para su contaje (paso 6); no requieren
más procesamiento posterior.
4
Agitar durante 2 horas en un agitador
de gradillas.
5
Decantar y dejar escurrir
completamente. Añadir 2 ml de la
Solución Amortiguadora de Lavado a
cada tubo. Esperar 1 a 2 minutos,
luego decantar. Nuevamente, añadir
2 ml de la Solución Amortiguadora de
Lavado, esperar 1 a 2 minutos y
decantar.
Eliminar toda la humedad visible para
mejorar la precisión. Después del
segundo lavado, utilizando una
gradilla de decantación de espuma,
decantar el contenido de todos los
tubos (excepto los tubos T), y dejar
escurrir durante 2 a 3 minutos.
Golpear los tubos contra papel
absorbente para eliminar las gotas
residuales.
6
Contar durante 1 minuto en un
contador gamma.
En los contadores gamma
multicabezas, los tubos de Cuentas
Totales (opcional) deberán separarse
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
del resto de los tubos de ensayo por
cuando menos un espacio, para
minimizar la posibilidad de derrames a
los otros tubos.
Cálculo y Control de Calidad
Para calcular los resultados (en términos
de unidades de concentración) a partir de
una representación log-log de la curva de
calibración, primero corregir las cuentas
por minuto (CPM) de cada par de tubos
restando las CPM promedio de los tubos
de unión no específicos (calibrador A).
Cuentas netas = Media CPM menos Media NSB
CPM
Luego, determinar el porcentaje de unión
(relativo al del calibrador más alto) - aquí
llamado “%B/MB” - de cada par de tubos
como por ciento de “unión máxima,” con
los conteos NSB corregidos del calibrador
mas alto tomado como 100%:
Porcentaje de Unión = (Cuentas netas / Cuentas
MB netas) × 100
Utilizando papel de gráficas log-log de 3
ciclos, trazar el Porcentaje de Unión
versus la Concentración para cada uno de
los calibradores no cero y dibujar una
curva que se aproxime a la trayectoria de
estos puntos. (Conectar los puntos de
calibración con arcos o segmentos de
líneas rectas. No intente acomodar una
sola línea recta a los datos.) Las
concentraciones para controles y
desconocidos dentro del rango de
calibradores no cero puede entonces ser
calculada de la curva de calibración por
interpolación. Se puede usar un trazo
adicional de Porcentaje Unido versus
Concentración para los calibradores más
bajos en papel de gráfica lineal-lineal para
una interpolación cercana a la dosis cero.
Comentarios: Aunque otros enfoques
son aceptables, la reducción de datos por
el método recién descrito tiene ciertas
ventajas desde el punto de vista de
control de calidad. En particular,
proporciona una curva de calibración que
es relativamente lineal en
representaciones tanto log-log como
lineal-lineal y relativamente estable de
ensayo a ensayo. También proporciona
valiosos parámetros de Control de
Calidad, es decir, valores de Porcentaje
de Unión (%B/MB) para los calibradores
no cero. Se puede obtener una gráfica
21
todavía más informativa, dando un sentido
de reproducibilidad dentro del ensayo
como una función de la concentración,
graficando los valores de Porcentaje de
Unión de los tubos calibradores
directamente, esto es, sin primero
promediar las CPM de los duplicados.
Alternativas: Aunque el Porcentaje de
Unión se puede calcular directamente de
laas CPM Promedio, la corrección para la
unión no específica generalmente
produce una curva de calibración que es
mas lineal a lo largo de su rango. Una
curva de calibración también puede
construirse trazando las CPM o CPM
Promedio directamente contra la
Concentración en papel de gráfica log-log
o lineal-lineal. (No debe emplearse papel
de gráfica semilogarítmico.) Este enfoque
tiene la virtud de la simplicidad, pero es
menos deseable desde el punto de vista
del control de calidad.
Reducción de Datos por Ordenador:
Los métodos “punto a punto”, incluyendo
lineal y spline cúbico, no son adecuados;
pero ya que proporcionan poca ayuda en
el monitoreo de la integridad de un
ensayo, es importante preparar el trazo
log-log recomendado de la curva de
calibración, ya sea manualmente o por
ordenador, como un paso de control de
calidad. Las técnicas de reducción de
datos basadas en el modelo logístico
también pueden ser aplicables. Dentro de
esta familia, las rutinas de curva basada
en el parámetro logístico de 4 o 5 son los
candidatos más apropiados. Sin embargo,
algunos algoritmos actualmente en uso no
pueden convergir con éxito, aun cuando el
modelo logístico es fiel a los datos. Si se
adopta un método logístico, es esencial
verificar su propiedad para el ensayo de
cada día monitoreando el retrocálculo de
los calibradores y otros parámetros.
Adicionalmente, se recomienda un trazo
de la curva del calibrador en una
representación log-log, ya que esto es
más informativo que el trazo
semilogarítmico convencional.
Manipulación de la Muestra: Las
instrucciones para manipular y almacenar
las muestras de los pacientes y los
componentes deberán observarse
cuidadosamente. Antes de analizar, diluir
las muestras de los pacientes que se
espera que contengan concentraciones
de prolactina mayores que la del
22
calibrador más alto (200 ng/ml) con el
calibrador cero. Todas las muestras,
incluyendo los calibradores y controles,
deberán someterse a ensayo cuando
menos por duplicado. Es importante
utilizar una micropipeta con punta
desechable, cambiando la punta entre
muestras para evitar contaminación por
arrastre. Se deberán usar pipetas de
desplazamiento positivo y pipetoresdilutores automáticos sólo si se ha
evaluado la posibilidad de arrastre y se ha
determinado que esta sería insignificante.
Se pueden espaciar pares de tubos de
control a lo largo del ensayo para ayudar
a verificar la ausencia de arrastre
significativo. Inspeccionar los resultados
para comprobar el acuerdo entre pares de
tubos.
Contador Gamma: Para minimizar la
posibilidad de derrames en los contadores
gamma de múltiples pozos, los tubos de
cuentas totales (T) opcionales deberán
estar separados de los otros tubos del
ensayo por uno o más espacios.
Alternativamente, agregar sólo 25 µl del
trazador a cada uno de los tubos T en el
paso 3 y multiplicar las cuentas por minuto
observadas en estos tubos por 4.
Controles: Los controles o pools de
sueros con al menos dos niveles de
concentración de prolactina (bajo y alto)
deberán ensayarse rutinariamente como
desconocidos y los resultados se deberán
trazar de día en día como se describe en
Westgard JO, et al. A multi-rule chart for
quality control. Clin Chem 1981; 27:493501. Las muestras de repetición son una
valiosa herramienta adicional para el
seguimiento de la precisión Inter-ensayo.
Parámetros de Control de Calidad:
Recomendamos controlar estos
parámetros de rendimiento:
T = Cuentas totales (como CPM)
%NSB = 100 × (Media cuentas NSB / Cuentas
totales)
%MB = 100 × (Cuentas MB netas / Cuentas
totales)
Y los valores de Unión Porcentual
(“%B/MB”) de todos menos los
calibradores no cero mas altos, por
ejemplo:
%C/MB = 100 × (Cuentas netas calibrador “C” /
Cuentas netos MB)
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
Mantenimiento de Registros: Es una
buena práctica de laboratorio registrar
para cada ensayo los números de lote de
los componentes usados, así como las
fechas en las que fueron abiertos por
primera vez y reconstituidos.
Lectura Adicional: Ver Dudley RA, et al.
Guidelines for immunoassay data
reduction. Clin Chem 1985;31:1264-71.
Ejemplo: Sólo como ilustración, no se
puede utilizar para calcular resultados. Al
ser los valores de los calibradores loteespecíficos, las concentraciones
expresadas en la columna derecha no
pueden coincidir con los valores de los
calibradores suministrados en su envío.
(Ver la tabla “Example Run”)
Valores esperados
El ensayo Coat-A-Count Prolactina IRMA
se probó en el laboratorio de un hospital
independiente grande, dando los
siguientes resultados en ng/ml.
Mediana
Rango
absoluto
Hombres
adultos
6,6
3,1 – 16,5
Mujeres
adultas:
7,8
Grupo
Rango
95%
n
19
3,6 – 18,9 70
Los laboratorios deben considerar estos
resultados sólo como una guía. Cada
laboratorio deberá establecer sus propios
intervalos de referencia.
Características analíticas
Las secciones siguientes contienen datos
representativos del rendimiento del kit
Coat-A-Count Prolactina IRMA. Los
resultados de prolactina se expresan en
nanogramos de prolactina por mililitro
(ng/ml). Para convertir los ng/ml a mIU/l,
en términos del Tercer Estándar
Internacional para Prolactina de la
Organización Mundial de la Salud, número
84/500, multiplicar por 21,2:
Factor de Conversión:
ng/ml × 21,2 → mIU/l
Intervalo de calibración: Hasta
200 ng/ml [WHO 3rd IS 84/500]
Los calibradores son lote-específicos.
Sensibilidad analítica: 0,1 ng/ml
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
Efecto de gancho a altas dosis:
Ninguno hasta 2 500 ng/ml.
Precisión intraensayo (dentro de una
tanda): Las estadísticas se calcularon
para las muestras a partir de los
resultados de 20 pares de tubos en una
tanda. (Ver la tabla "Intraassay
Precision".)
Precisión entre ensayos (de una tanda
a otra): Las estadísticas se calcularon
para las muestras a partir de los
resultados obtenidos por duplicado en 20
ensayos diferentes. (Ver la tabla
"Interassay Precision".)
Efecto deriva: Ninguno hasta
aproximadamente 200 tubos. (Ver tabla
"End-of-Run Effect".)
Linealidad: Las muestras fueron
analizadas con varias diluciones. (Véase
la tabla "Linearity" para resultados
representativos.)
Recuperación: Se han analizado las
muestras cargadas 1 a 19 con tres
soluciones de prolactina (500, 1 500 y
3 000 ng/ml). (Ver la tabla "Recovery"
para resultados representativos.)
Especificidad: El kit es altamente
específico para prolactina, con una
reactividad cruzada baja para otras
hormonas glicoproteicas como FSH, HCG,
LH, TSH, hGH y HPL.
Bilirrubina: La presencia de bilirrubina,
en concentraciones de hasta 200 mg/l, no
tiene ningún efecto sobre los resultados
en términos de precisión.
Hemólisis: La presencia de eritrocitos
hasta concentraciones de 30 µl/ml no
tiene efecto en los resultados, en lo
concerniente a la precisión del ensayo.
Lipemia: La presencia de triglicéridos en
concentraciones de hasta 3 000 mg/dl no
tiene efecto alguno en los resultados, en
lo correspondiente a la precisión del
ensayo.
Tipo de Muestra Alternativa: para
evaluar el efecto de los diferentes tipos de
muestras alternativos, se recogió sangre
de 27 voluntarios en tubos normales,
tubos con Heparina, tubos con EDTA y
®
tubos vacutainer SST de Becton
Dickinson. Todas las muestras fueron
analizadas con el procedimiento Coat-ACount Prolactina IRMA, con los siguientes
resultados.
23
(EDTA) = 0,87 (Suero) + 0,31 ng/ml
r = 1,0
l'investigation de l'état hypophysaire et
dans l'infertilité.
(Heparina) = 0,89 (Suero) + 0,21 ng/ml
r = 1,0
Référence catalogue : IKPR1 (100 tubes)
(SST) = 0,97 (tubos simples) + 0,26 ng/ml
r = 1,0
Medias:
8,7 ng/ml (Suero)
7,9 ng/ml (EDTA)
7,9 ng/ml (Heparina)
8,7 ng/ml (SST)
Comparación de los métodos: Se
combinaron datos de tres estudios
distintos para comparar los métodos. Se
analizó un total de 157 muestras de
pacientes con el procedimiento Coat-ACount Prolactina IRMA y con el kit Doble
Anticuerpo Prolactina. Por regresión
lineal:
(CAC IRMA) = 0,97 (DA) + 2,3 ng/ml
r = 0,990
Medias:
16,9 ng/ml (Coat-A-Count IRMA)
15,0 ng/ml (Double Antibody)
En otro estudio, se analizaron 159
muestras de pacientes con el kit Coat-ACount Prolactina IRMA y con el kit Coat-ACount Prolactina. Por regresión lineal:
(CAC IRMA) = 0,95 (CAC) + 0,46 ng/ml
r = 0,989
Medias:
12,0 ng/ml (Coat-A-Count IRMA)
12,2 ng/ml (Coat-A-Count)
Asistencia técnica
Póngase en contacto con el distribuidor
nacional.
www.siemens.com/diagnostics
El Sistema de Calidad de Siemens Healthcare
Diagnostics Inc. está certificado por la ISO
13485:2003.
Français
Coat-A-Count Prolactine IRMA
Domaine d'utilisation : Coat-A-Count
Prolactine IRMA est un dosage
radioimmunométrique destiné à la mesure
quantitative de l'hormone prolactine dans
le sérum. Il est réservé à un usage
diagnostic in vitro et constitue une aide à
24
Le coffret de 100 tubes contient
moins de 20 microcuries
(740 kilobecquerels) d'anticorps
monoclonal anti-prolactine marqué à l'iode
125 .
Introduction
La prolactine humaine est une hormone
polypeptidique sécrétée par l'antéhypophyse, d'un poids moléculaire de
22 800 Daltons. Elle joue un rôle essentiel
dans la sécrétion du lait et a un pouvoir
suppresseur sur les fonctions gonadiques.
La prolactine a été reconnue comme
hormone distincte de l'hormone de
croissance dans les années 1970. Depuis,
le dosage de la prolactine est devenu un
outil important dans la détermination des
causes d'aménorrhées, de galactorrhées
et des désordres de l'axe hypothalamohypophysaire.
Dans la littérature, les valeurs normales
de la prolactine circulante vont jusqu'à des
concentrations maximales de 20 ng/ml.
Les concentrations en prolactine sont
élevées à la naissance mais diminuent
très vite, en moins de trois mois, jusqu'aux
valeurs trouvées chez l'adulte.
Les femmes ont, en moyenne, des valeurs
légèrement plus élevées que les hommes.
Une légère augmentation de ces valeurs
est observée chez la femme à la puberté,
apparemment liée aux œstrogènes et une
diminution à la ménopause. Pendant la
grossesse, le taux de prolactine augmente
progressivement pour atteindre 10 à 20
fois sa valeur de base, puis rechute, dans
les trois semaines après l'accouchement,
vers une valeur normale chez les femmes
qui n'allaitent pas. Par contre chez les
femmes qui allaitent, la baisse du taux de
prolactine est beaucoup plus étalée dans
le temps du fait des sécrétions ponctuelles
de prolactine induites par les allaitements.
Les femmes qui utilisent des contraceptifs
oraux ou sous thérapie oestrogénique
peuvent avoir des taux de prolactine plus
élevés que la normale.
Il est important de ne pas oublier que la
prolactine est une hormone du stress, ce
qui explique certaines élévations
modérées. Des élévations transitoires de
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
l'hormone ont été rapportées non
seulement dans un contexte chirurgical
mais également par le stress du
prélèvement sanguin. De plus la libération
de l'hormone est proprement épisodique,
avec des fluctuations d'un jour à l'autre
allant parfois jusqu'à 30%. D'autre part, il
existe un rythme circadien dans la
sécrétion de prolactine : le taux de
l'hormone augmente pendant le sommeil
et atteint son niveau le plus bas quelques
heures après le réveil. Le conseil donné
parfois de prélever les échantillons entre 9
heures du matin et midi se base sur
l'hypothèse que les patients ont des
heures de réveil régulières.
Principe du test
Coat-A-Count Prolactine IRMA est un
dosage radioimmunométrique en phase
solide utilisant des anticorps monoclonaux
et polyclonaux anti-prolactine: un
anticorps monoclonal anti-prolactine,
marqué à l'iode 125, en phase liquide et
un anticorps polyclonal anti-prolactine fixé
à la paroi du tube en polystyrène.
Dans le protocole :
La prolactine est capturée entre l'anticorps
polyclonal anti-prolactine fixé à la surface
interne du tube en polystyrène et
l'anticorps monoclonal anti-prolactine du
traceur radiomarqué.
L'anticorps libre anti-prolactine marqué à
l'iode 125 est éliminé du mélange
réactionnel par décantation et lavage du
tube; il en résulte une très faible liaison
non spécifique, assurant ainsi une
excellente précision pour les valeurs
basses.
La concentration de prolactine est
directement proportionnelle à la
radioactivité présente dans le tube après
l'étape de lavage. La radioactivité est
mesurée grâce à un compteur gamma et
les concentrations de prolactine dans les
échantillons de patients sont obtenues en
comparant les cpm du patients à ceux
obtenus par la gamme d'étalonnage.
Réactifs à distribuer : 1
Temps d'incubation totale : 2 heures
(sur un portoir mélangeur)
Activité totale en début de marquage :
environ 300 000 cpm
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
Précautions d'emploi
Réservé à un usage diagnostique in vitro.
Réactifs : Conserver à +2/+8°C dans un
réfrigérateur autorisé à recevoir du
matériel radioactif. Éliminer les déchets
conformément aux lois en vigueur.
Ne pas utiliser les réactifs au delà de leur
date d'expiration.
Certains composants fournis avec ce
coffret peuvent contenir des agents
humains et/ou d'autres éléments
potentiellement infectieux qui nécessitent
certaines précautions.
Respecter les précautions d'emploi et
manipuler tous les composants du coffret
comme des produits potentiellement
infectieux. Les réactifs dérivés de produits
humains et utilisés dans ce coffret ont subi
un test sérologique pour la Syphilis et des
tests de dépistage pour les anticorps antiVIH1 et 2, anti-VHC et pour l'antigène de
surface de l'hépatite B, qui se sont tous
avérés négatifs.
De l'azide de sodium à des concentrations
inférieures à 0,1 g/dl a été ajouté comme
conservateur ; lors de l'élimination,
l'évacuer avec de grandes quantités d'eau
pour éviter une accumulation d'azides
métalliques explosifs dans les
canalisations.
Eau : Utiliser de l'eau distillée ou
désionisée.
Radioactivité
Ce coffret de réactif est reservé à l'usage
in vitro (Autorisation DGSNR).
Règles de base de protection contre les
rayonnements ionisants et précautions
d'emploi.
Ce produit radioactif ne peut être reçu,
acheté, détenu ou utilisé que par des
personnes autorisées à cette fin et dans
des laboratoires dotés de cette
autorisation. Cette solution ne peut en
aucun cas être administrée à l'homme ou
aux animaux. Respecter impérativement
les dates de péremption indiquées sur
l'emballage extérieur et sur les étiquettes
des différents réactifs du coffret. Tous les
réactifs, dont les tubes revêtus
d'anticorps, doivent être conservés à
+ 4/+ 8° C dans leur conditionnement
d'origine avant d'être utilisés. L'achat, la
possession, l'utilisation et l'échange de
25
matières radioactives sont soumis aux
réglementations en vigueur dans le pays
de l'utilisateur. Les règles de base de
protection contre les rayonnements
ionisants doivent être respectées selon
des procédures en vigueur. Ne pas
pipeter des solutions radioactives avec la
bouche. Eviter le contact direct avec la
peau ou les muqueuses de tout produit
radioactif en utilisant des blouses et gants
de protection. Toute manipulation de
matières radioactives se fera dans un
local ad hoc éloigné de tout passage. Les
produits radioactifs seront stockés dans
leur conditionnement d'origine dans un
local approprié. Un cahier de réception et
de stockage de produits radioactifs sera
tenu à jour. Le matériel de laboratoire et la
verrerie qui ont été contaminés doivent
être éliminés au fur et à mesure afin
d'éviter une contamination croisée de
plusieurs isotopes. Chaque contamination
ou perte de substance radioactive devra
être réglée selon les procédures établies.
Toute mise aux déchets de matière
radioactive se fera en accord avec les
réglementations en vigueur. Ne pas
manger, ni boire, ni fumer, ni appliquer
des cosmétiques dans les laboratoires où
des produits radioactifs sont utilisés. Les
réactifs radioactifs ne peuvent être vendus
qu'à des personnes habilitées à manipuler
des substances radioactives.
Matériel Fourni :
Préparation Initiale
Tubes revêtus d'anticorps antiprolactine (IPR1)
Tubes en polystyrène revêtus d'anticorps
polyclonal de chèvre anti-prolactine,
conditionnés dans des sachets
hermétiques à glissière. Les conserver
réfrigérés et protégés de l'humidité, bien
refermer les sachets après utilisation.
Stable à +2/+8°C jusqu'à la date
d'expiration notée sur le sachet.
IKPR1 : 100 tubes.
Anticorps anti-prolactine marqué à
l'iode 125 (IPR2)
11 ml anticorps monoclonal murin antiprolactine marqué à l'iode 125. Le réactif
est fourni sous forme liquide, prêt à
l'emploi. Stable à +2/+8°C pendant 30
jours après ouverture, ou jusqu'à la date
d'expiration marquée sur l'étiquette.
IKPR1 : 2 flacons.
26
Standards Prolactine (PRI3–9,X)
Huit flacons, étiquetés de A à H, de
standard prolactine dans une matrice
sérique humaine en tampon. Les
standards sont fournis sous forme
lyophilisés : au moins 30 minutes avant
emploi, reconstituer le flacon de standard
zéro A avec 5 ml d'eau distillée ou
désionisée, et 2 ml pour les autres flacons
de standard, de B à H, chacun. Stable à
+2/+8°C pendant 30 jours après
ouverture. Pour une conservation plus
longue, aliquoter et congeler : stable à
–20°C pendant 2 mois.
IKPR1 : 1 jeu.
Ces standards ont des valeurs spécifiques
à chaque lot, proches de 0, 2,5, 5, 10, 20,
50, 100 et 200 nanogrammes de
prolactine par millilitre (ng/mL) d'après la
3ième préparation internationale de
référence pour la prolactine O.M.S.
84/500. Se référer aux étiquettes sur les
flacons pour obtenir les concentrations
exactes des standards. Des points
intermédiaires peuvent être obtenus en
mélangeant des standards dans des
proportions compatibles.
Noter que les standards du coffret Coat-ACount Prolactine IRMA ne sont pas
interchangeables avec ceux fournis dans
d'autres coffrets Prolactine.
Solution de tampon de lavage
concentrée (1TSBW)
40 ml d'une solution tampon saline
concentrée, avec surfactants et azide de
sodium comme conservateur. Utiliser un
récipient de transfert, diluer le contenu de
chaque flacon avec 400 ml d'eau distillée,
pour obtenir un volume total de 440 ml.
Stable à +2–8°C 6 mois après
préparation.
IKPR1 : 1 flacon.
Matériel requis mais non fourni
Compteur Gamma – permettant
l'utilisation de tubes standards 12x75 mm
Agitateur — environ 200 tpm
Préparation des réactifs
Eau distillée ou désionisée
Pipettes volumétriques 2 ml, 5 ml et 11ml
Eprouvette graduée — pour distribuer
400 ml
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
Flacon de conservation en plastique avec
couvercle— pour la préparation et le
stockage de la solution de tampon de
lavage
Immunodosage
Micropipettes: 50 µl et 200 µl
Distributeur — pour distribuer 2,0 ml de
solution de tampon de lavage
Un portoir de décantation – disponible
chez Siemens Healthcare Diagnostics
(Référence catalogue : FDR).
Papier graphe Log-log 3-cycles
Un contrôle, à base de sérum humain, à
trois niveaux de concentration, contenant
de la prolactine (parmi les 25 paramètres
dosables), est disponible chez Siemens
Healthcare Diagnostics
(Référence catalogue : CON6).
Recueil des échantillons
(15–28°C), mélanger doucement par
rotations ou retournement. Ne pas tenter
de décongeler les spécimens congelés à
l'aide d'un bain marie.
Noter que des échantillons contenant des
concentrations en prolactine supérieures à
2 500 ng/mL peuvent donner un résultat
apparent inférieur (effet crochet) au
dernier standard (200 ng/mL). Les
échantillons de patients susceptibles
d'atteindre de telles concentrations
devront être dilués avec le standard zéro
du coffret avant analyse.
Protocole de dosage
Immunométrique
Chaque composant doit être à
température ambiante avant utilisation
(15°C–28°C).
1
Le patient n'a pas besoin d'être à jeun et
aucune préparation spéciale n'est requise.
17
Prélever le sang par ponction veineuse
sur tubes secs, en évitant l'hémolyse, et
séparer le sérum des cellules. Noter
l'heure de prélèvement, car la sécrétion de
prolactine montre un cycle circadien dans
sa sécrétion.
Etiqueter 2 tubes (non coatés)
12 x 75 mm en polypropylène pour
l'activité totale.
Il est recommandé de clarifier les
échantillons hyperlipémiques par
ultracentrifugation.
Des échantillons hémolysés peuvent être
révélateurs d'une préparation inadéquate
du prélèvement avant son envoi au
laboratoire ; il faudra donc interpréter les
résultats avec prudence.
Des tubes pour prélèvements sanguins
provenant de fabricants différents peuvent
donner des résultats différents, selon les
matériaux et additifs utilisés, y compris
gels ou barrières physiques, activateurs
de la coagulation et/ou anticoagulants. Le
coffret prolactine Coat-A-Count IRMA n'a
pas été testé sur tous les types de tubes
possibles. Veuillez consulter le chapitre
intitulé Autres Types d'Échantillons pour
plus de renseignements sur les tubes qui
ont été évalués.
Volume nécessaire : 50 µl par tube
Conservation: 7 jours à +2/+8°C ou
jusqu'à 3 mois (aliquotés) à –20°C.
Avant le dosage, laisser les échantillons
revenir à température ambiante
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
Etiqueter 16 tubes coatés d'anticorps
anti-prolactine en duplicate, A (liaison
non spécifique) et de B à H (liaison
maximale LM). Etiqueter les tubes
coatés d'anticorps supplémentaires,
également en duplicate, pour les
échantillons de patients et les
contrôles.
Standards
Conc. Approx.
ng/ml
T*
—
A(LNS)
0
B
2.5
C
5
D
10
E
20
F
50
G
100
H("LM")
200
* tubes activité totale optionnels
Note : Les concentrations des
calibrateurs sont spécifiques d'un lot.
Se référer à l'étiquetage des flacons
pour les valeurs exactes en ng/ml.
2
Pipeter 50 µl de chaque standard,
contrôle et échantillon sérique de
patient dans les tubes préparés.
Distribuer directement au fond du
tube. Les échantillons de patients
27
suspectés de contenir des
concentrations de prolactine
supérieures au standard le plus élevé
(200 ng/ml) doivent être dilués avec le
standard zéro avant le dosage. Il est
bon d'utiliser des embouts de
micropipettes jetables, de changer
d'embout entre les échantillons de
manière à éviter toute contamination.
Les pipettes à « capillaire » et les
pipetteurs-diluteurs automatiques ne
doivent être utilisés que si le risque de
contamination a été évalué et jugé
insignifiant.
3
Ajouter 200 µl d'anticorps antiprolactine marqué à l'iode 125 dans
chaque tube.
Distribuer directement au fond du
tube. Bien s'assurer que l'échantillon
et le traceur sont parfaitement
mélangés (éviter la formation de
mousse). Une multipette est
recommandée. Les tubes T peuvent
être mis de côté jusqu'au comptage
(étape 6); ils n'ont besoin d'aucun
autre traitement.
4
Incuber 2 heures sous agitation.
5
Décanter complètement. Ajouter à
chaque tube 2 ml de solution tampon
de lavage. Attendre 1 à 2 minutes et
décanter parfaitement. Ajouter de
nouveau 2 ml de solution tampon de
lavage, attendre 1 à 2 minutes et
décanter totalement.
Eliminer toute trace d'humidité pour
améliorer la précision. Après le
second lavage, utiliser un portoir de
décantation, décanter le contenu de
chacun des tubes (excepté les tubes
T) et laisser égoutter pendant 2 ou 3
minutes. Retourner alors
vigoureusement les tubes sur du
papier absorbant afin d'éliminer les
gouttelettes résiduelles.
6
Compter 1 minute dans un compteur
gamma.
Pour les compteurs gamma multipuits, les tubes T (optionnels) doivent
être séparés des autres tubes par au
moins un espace, afin de minimiser
les risques de contamination.
28
Calcul des Résultats et
Contrôle de Qualité
Pour calculer les concentrations de
prolactine à partir d'une courbe standard
représentée en log-log, il faut, dans un
premier temps, corriger les coups par
minute (cpm) de chaque paire de tubes en
soustrayant la moyenne des cpm des
tubes à liaison non spécifique (standard
A):
Coups corrigés = Moyenne CPM moins
Moyenne LNS CPM
Puis déterminer pour chaque doublet la
capacité de liaison en pourcentage
(%B/B200, ici nommée "%B/LM") de liaison
maximale (LM), corrigée des cpm dus au
LNS des tubes G tubes considérés à
100%:
% liaison = (Cpm corrigés / Cpm corrigés
H(LM)) × 100
Utiliser le papier log-log 3 cycles pour la
construction de la courbe, en portant sur
l'axe des ordonnées les pourcentages de
liaison, et sur l'axe des abscisses les
valeurs des standards différents de zéro.
Tracer la courbe qui passe
approximativement par ces points. Relier
les points par des arcs ou des segments
de droite. Ne pas chercher à réaliser une
seule droite à partir des résultats. Les
concentrations des contrôles et des
inconnus dans le domaine de mesure du
standard zéro peuvent être lues à partir de
la droite par interpolation. Il est possible
de tracer un autre graphe à partir des 3
premiers standards pour apprécier les
valeurs proches de zéro.
Commentaires : Bien que d'autres
approches de calcul soit aussi
acceptables, la réduction des données
avec la méthode indiquée ci-dessus a
certains avantages du point de vue du
contrôle de qualité. En particulier, elle
donne une courbe d'étalonnage qui est
relativement linéaire avec les
représentations log-log et linéaire-linéaire,
et est relativement stable d'une dosage à
l'autre. Elle donne également des
paramètres déterminants pour le contrôle
de qualité, plus précisément, les valeurs
de % de liaison (%B/B200 ou "%B/LM) pour
les standards différents de zéro. Un
graphique encore plus utile, donnant une
idée de la reproductibilité intra-essai, peut
être obtenu en représentant directement
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
le pourcentage de liaison de chaque
standard, par exemple sans faire un calcul
de valeur moyenne à partir des cpm des
doublets.
Alternatives : Le pourcentage de liaison
peut être aussi calculé directement à partir
de la moyenne des cpm, la correction par
la liaison non spécifique produit
habituellement une courbe de calibration
qui est pratiquement linéaire sur tout le
domaine. Une courbe de calibration peut
être aussi créée en portant directement
sur l'ordonnée les cpm ou la moyenne des
cpm et en abscisse la concentration sur
du papier log-log ou linéaire-linéaire (le
papier semi-log ne doit pas être utilisé).
Cette méthode à l'avantage de sa
simplicité mais elle est moins
recommandée pour ce qui concerne le
Contrôle de Qualité.
Traitement informatique des données :
Les méthodes "Point-par-point", incluant
les fonctions de lissage linéaire, peuvent
être utilisées ; bien qu'elles ne permettent
qu'une faible assistance pour le suivi de la
qualité des tests, il est important de tracer
en log-log, selon les recommandations, la
courbe d'étalonnage, soit manuellement
soit informatiquement, en considérant que
c'est une étape du Contrôle de Qualité. Le
traitement des données utilisant des
fonctions polynomiales de 4ème ou 5ème
degré est aussi possible et est adapté.
Garder à l'esprit, cependant, que certains
algorithmes actuellement utilisés peuvent
ne pas être adaptés. Si une de ces
méthodes semble adaptée, il est essentiel
de vérifier qu'elle reste appropriée dans le
temps, par recalcul des concentration de
standards et d'autres paramètres. De plus,
un tracé log-log de la courbe de
calibration est fortement recommandé car
il est plus informatif que le tracé habituel
en semi-log.
Traitement des échantillons : Les
recommandations données concernant
l'utilisation et la conservation des sérums
doivent être respectées. Les échantillons
de patients suspectés de contenir des
concentrations de prolactine supérieures
au standard le plus élevé (200 ng/mL)
doivent être dilués avec le standard zéro
avant le dosage. Tous les échantillons,
standards et contrôles inclus, doivent être
dosés en duplicate. Il est important
d'utiliser des micropipettes à embouts
jetables, de changer d'embout entre les
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
échantillons de manière à éviter toute
contamination. Les pipettes de transfert et
les pipeteurs diluteurs automatiques ne
doivent être utilisés que si le risque de
transmission de contamination a été
évalué et considéré comme insignifiante.
Les doublets de tubes de contrôles
doivent être espacés au long de la série
de dosage afin de vérifier l'absence de
dérive significative. Vérifier la
concordance des résultats entre les
doublets de tubes.
Compteur Gamma : Pour minimiser
l'éventualité d'une contamination dans le
compteur gamma multipuits, il convient de
séparer les tubes d'activité totale T des
autres tubes par au moins un espace. En
alternative, il est possible d'ajouter
uniquement 25 µl et de multiplier par 4 le
nombre de cpm obtenus comme activité
totale.
Contrôles : Les contrôles ou des pools de
sérum avec au moins deux niveaux de
concentration de prolactine (bas et élevé)
doivent être dosés en routine comme
inconnus, et les résultats notés jour après
jour comme décrit par exemple dans
Westgard JO, et al. A multi-rule chart for
quality control. Clin Chem 1981;27:493501. Un redosage d'échantillon peut être
précieux pour suivre la précision inter
essai.
Paramètres du Contrôle de Qualité:
Nous recommandons de garder une trace
de ces résultats de performances:
T = Activité totale (cpm)
%LNS = 100 × (Moyenne des cpm du LNS /
cpm Totaux)
%LM = 100 × (cpm corrigés H / cpm totaux)
Et toutes les valeurs de pourcentage de
liaison (%B/B200 ou "%B/LM") sauf la plus
élevée des standards différents de zéro,
par exemple:
%C/LM = 100 × (cpm standard C corrigés / cpm
H(LM) corrigés)
Conservation des données : Il est bon
d'enregistrer pour chaque dosage les
numéros de lots et la date de
reconstitution et/ou ouverture des
composants utilisés.
Bibliographie : Se reporter à Dudley RA,
et al. Guidelines for immunoassay data
reduction. Clin Chem 1985;31:1264-71.
29
Exemple de série : A titre d'exemple
uniquement, et non pour calculer des
résultats provenant d'une autre série.
Attention, les valeurs des standards
données dans la colonne de gauche ne
correspondent pas forcément à celles des
standards de votre coffret (Voir le tableau
“Example Run”.)
Valeurs de référence
Une étude du domaine de référence avec
le coffret Coat-A-Count Prolactine IRMA
effectuée dans un grand hôpital a donné
les résultats suivants en ng/ml.
Médiane
Domaine
Absolu
Hommes
adultes
6,6
3,1 – 16,5
Femmesa
dultes
7,8
Groupe
Limite
95%
n
19
3,6 – 18,9 70
Ces valeurs sont données à titre indicatif
uniquement.Chaque laboratoire devra
établir ses propres valeurs de référence.
Performances du test
Pour tous les paragraphes donnant les
performances analytiques du dosage
Coat-A-Count Prolactine IRMA les
concentrations de prolactine sont données
en nanogrammes de prolactine par
millilitre (ng/ml).Pour la conversion des
ng/mL en mUI/l, selon le standard intern.
référence 84/500, multiplier par 21,2:
Facteur de conversion :
ng/mL × 21,2 → mUI/l
Intervalle de linéarité : jusqu'à 200 ng/ml
[WHO 3rd IS 84/500] la valeur des
standards est spécifique du lot.
Sensibilité analytique : 0,1 ng/ml
Effet crochet : aucun jusqu'à
2 500 ng/ml.
Précision intra-dosage (au sein d'une
même série) : les statistiques ont été
réalisées sur les résultats de 20 replicata
d'échantillons dosés au cours d'une même
série. (Voir le tableau « Intraassay
Precision ».)
Précision inter-dosage (entre plusieurs
séries) : les statistiques ont été réalisées
sur des échantillons dosés dans 20 séries
30
différentes. (Voir le tableau « Interassay
Precision ».)
Effet de la position des tubes : Aucun
jusqu'à 200 tubes. (Voir le tableau « Endof-Run Effect ».)
Test de dilution : Des échantillons ont
été dosés à différentes concentrations.
(Voir le tableau « Linearity » pour des
données représentatives.)
Test de récupération : Des échantillons
chargés dans un rapport de 1 à 19 avec
trois solutions de prolactine (500, 1 500 et
3 000 ng/ml) ont été dosés. (Voir le
tableau « Recovery » pour des données
représentatives.)
Spécificité : L'anticorps utilisé dans la
technique Coat-A-Count Prolactin IRMA
est hautement spécifique de la prolactine,
avec de très faibles réactions croisées
pour des hormones glycoprotéiques
comme la FSH, l'hCG, LH, TSH, hGH et
HPL.
Bilirubine : La présence de bilirubine ne
présente aucun effet sur les résultats ni
sur la précision du dosage si la
concentration ne dépasse pas 200 mg/l.
Hémolyse : La présence d'agrégat
d'hématies jusqu'à une concentration de
30 µl/ml, n'a aucun effet sur les résultats
quant à la précision du dosage.
Lipémie : La présence de triglycérides
jusqu'à une concentration de 3 000 mg/dl
n'interfère ni sur la précision du dosage, ni
sur les résultats.
Autres types d'échantillons : pour
estimer l'effet de l'utilisation de différents
type d'échantillons, 27 volontaires ont été
prélevés sur tubes secs, héparinés, EDTA
®
et sur tubes vacutainer SST Becton
Dickinson. Tous les échantillons ont été
dosés avec le protocole Coat-A-Count
Prolactine IRMA et ont
(EDTA) = 0,87 (Sérum) + 0,31 ng/ml
r = 1,0
(Hépariné) = 0,89 (Sérum) + 0,21 ng/ml
r = 1,0
(SST) = 0,97 (tubes ordinaires) + 0,26 ng/ml
r = 1,0
Moyennes :
8,7 ng/ml (Sérum)
7,9 ng/ml (EDTA)
7,9 ng/ml (Hépariné)
8,7 ng/ml (SST)
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
Comparaison de méthodes : des
données provenant de trois études
comparatives ont été combinées, un total
de 157 échantillons patients ont été
analysés avec les coffrets Coat-A-Count
Prolactine IRMA et Double Antibody
Prolactine. Par régression linéaire :
(CAC IRMA) = 0,97 (DA) + 2,3 ng/ml
r = 0,990
Moyennes :
16,9 ng/ml (Coat-A-Count IRMA)
15,0 ng/ml (Double Antibody)
Dans une autre étude, 159 échantillons
étaient analysés en parallèle avec les
techniques Coat-A-Count Prolactine IRMA
et Coat-A-Count Prolactine. Par
régression linéaire :
(CAC IRMA) = 0,95 (CAC) + 0,46 ng/ml
r = 0,989
Moyennes :
12,0 ng/ml (Coat-A-Count IRMA)
12,2 ng/ml (Coat-A-Count)
Assistance technique
Contacter votre distributeur national.
www.siemens.com/diagnostics
Le Système Qualité de Siemens Healthcare
Diagnostics Inc. est certifié ISO 13485:2003.
Italiano
Coat-A-Count Prolattina IRMA
Uso: Il dosaggio Coat-A-Count Prolattina
IRMA è un dosaggio immunoradiometrico
per la determinazione quantitativa della
prolattina nel siero. Ad uso diagnostico in
vitro quale ausilio nella determinazione
dello stato dell'ipofisi e dell'inferitilità.
Codice: IKPR1 (100 provette)
Il kit da 100 determinazioni
contiene meno di 20 microcurie
(740 kilobecquerel) di anticorpi
monoclonali anti-Prolattina marcati con
125
I .
Riassunto e Spiegazione del
Test
un ruolo essenziale nella secrezione del
latte ed ha la capacità di sopprimere la
funzione delle gonadi. L'esistenza della
prolattina come sostanza distinta
dall'ormone della crescita è stata stabilita
solo nel 1970. Da quel momento, il
dosaggio della prolattina è diventato uno
strumento importante nell'indagine
dell'amenorrea, galactorrea e dei disturbi
ipotalamico-ipofisari.
Come range di riferimento per la prolattina
in circolo, la letteratura suggerisce
concentrazioni fino a circa 20 ng/mL. I
valori sono elevati in maniera netta alla
nascita, ma declinano a livelli da adulti
dopo tre mesi.
Le donne risultano avere livelli medi
leggermente più elevati degli uomini, con
un lieve innalzamento intorno alla pubertà
– apparentemente legato agli estrogeni –
ed una corrispondente caduta durante la
menopausa. Durante la gravidanza, i livelli
di prolattina salgono in maniera notevole
da 10 a 20 volte il valore iniziale, quindi
scendono a valori normali dopo il parto –
entro tre settimane nelle donne che non
allattano. Per coloro che allattano, il
declino verso valori normali è più graduale
a causa del pronto e repentino rilascio
indotto dall'allattamento. Le donne che
fanno uso di contraccettivi o sono
sottoposte a terapia estrogenica possono
avere livelli di prolattina più elevati del
normale.
Stabilendo la significatività di moderati
innalzamenti, è importante tenere
presente che la prolattina è un'ormone
indotto da situazioni di stress. Non solo la
chirurgia, ma eventi fonte di minore stress
quali un prelievo o un colloquio clinico
hanno fatto registrare un innalzamento
momentaneo. Inoltre, è stato riscontrato
che il rilascio della prolattina è episodico,
e che possono verificarsi fluttuazioni di
giorno in giorno con CV del 30%. Infine,
esiste una variazione diurna legata al
sonno: i livelli di prolattina si innalzano
durante il sonno e raggiungono i livelli più
bassi poche ore dopo il risveglio. L'avviso
di prelevare campioni “tra le nove e
mezzogiono” si basa sulla considerazione
che i pazienti osservino un ciclo normale
di veglia e sonno.
La Prolattina umana è un ormone
polipeptidico dell'ipofisi anteriore con una
massa molecolare di circa 22 800. Gioca
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
31
Procedura del Dosaggio
Il dosaggio Coat-A-Count Prolattina IRMA
è un dosaggio immunoradiometrico in fase
solida basato su anticorpi monoclonali e
policlonali anti-prolattina: l'anticorpo
125
monoclonale marcato con I è in fase
liquida, l'anticorpo policlonale è adeso alle
pareti di una provetta di polistirene.
Nel dosaggio:
La prolattina viene catturata tra gli
anticorpi policlonali anti-prolattina adesi
sulla superficie interna della provetta di
polistirene ed il tracciante monoclonale
anti-prolattina radiomarcato.
L'anticorpo non legato anti-prolattina
125
marcato con I viene rimosso
decantando la miscela di reazione e
lavando la provetta; ciò riduce il legame
non specifico ad un livello molto basso ed
assicura un'eccellente precisione low-end.
La concentrazione di prolattina è
direttamente proporzionale alla
radioattività presente nella provetta dopo il
lavaggio. La radioattività viene contata
utilizzando un gamma counter, dopodiché
la concentrazione di prolattina nel
campione viene ottenuta comparando le
conte al minuto del paziente con quelle
ottenute per il set di calibratori forniti.
Reagenti da Dispensare: 1
Tempo Totale di Incubazione: 2 ore
(su shaker)
Conte Totali alla iodinazione:
circa 300 000 cpm
Avvertenze e Precauzioni
Ad uso diagnostico in vitro.
Reagenti: Conservare a 2–8°C in un
frigorifero appositamente destinato al
materiale radioattivo. Eliminare secondo le
normative di legge vigenti.
Non utilizzare reagenti oltre la data di
scadenza.
Alcuni componenti forniti in questo kit
possono contenere materiale di origine
umana e/o altri ingredienti potenzialmente
pericolosi che necessitano di precauzioni
di utilizzo.
Seguire le precauzioni universali, e
manipolare tutti i componenti come se
potessero trasmettere agenti infettivi.
Sono stati dosati i materiali di origine
32
umana e sono stati trovati non reattivi per
la Sifilide; per gli Anticorpi Anti-HIV 1 e 2;
per l'Antigene di Superficie dell'Epatite B;
e per gli Anticorpi Anti-Epatite C.
E' stata aggiunta Sodio Azide a
concentrazioni inferiori a 0.1 g/dL come
conservante. Al momento
dell'eliminazione, irrorare con molta acqua
per evitare la formazione di azidi
metalliche potenzialmente esplosive nelle
tubature di piombo e di rame.
Acqua: Utilizzare solo acqua distillata o
deionizzata.
Radioattività
Una copia di tutti i certificati di
Autorizzazione per radioisotopi (Specifica
o Generica) rilasciata ad un cliente
americano deve essere conservata in file
presso la Siemens Healthcare Diagnostics
prima che i kit o i componenti contenenti
materiale radioattivo possano essere
spediti. Questi materiali radioattivi
possono essere acquisiti da qualsivoglia
cliente in possesso dell'Autorizzazione
Specifica. Con l'Autorizzazione Generica
questi materiali radioattivi possono essere
acquistati solo da medici, veterinari che
esercitino la professione, laboratori clinici
ed ospedalieri – e solo per l'esecuzione di
test clinici o di laboratorio in vitro che non
implichino somministrazione interna o
esterna del materiale radioattivo o delle
sue radiazioni alle persone o animali. La
sua acquisizione, ricevimento,
conservazione, utilizzo, trasferimento ed
eliminazione sono soggette a
regolamentazioni e ad Autorizzazione
(Generica o Specifica) della Commissione
Statunitense per il Nucleare o dello Stato
con il quale l'NRC abbia stipulato un
accordo per l'esercizio del controllo
regolatorio.
Manipolare i materiali radioattivi secondo
quanto previsto dall'Autorizzazione
Generica o Specifica. Per minimizzare
l'esposizione alle radiazioni, l'utilizzatore
deve attenersi alle linee guida stabilite dal
National Bureau of Standards publication
su “Safe Handling of Radioactive
Materials” “Norme per una corretta
manipolazione dei Materiali
Radioattivi”.(Guida N° 92, pubblicata il 9
Marzo 1964) e successive edizioni
pubblicate dallo Stato e dalle Autorità
Federali.
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
Assorbire immediatamente le fuoriuscite e
decontaminare le superfici contaminate.
Evitare la formazione di aerosol. Eliminare
i rifiuti solidi radioattivi secondo quanto
previsto dall'Autorizzazione. Le licenze
generiche (possessori di NRC Form 483)
possono eliminare i rifiuti radioattivi solidi
come non radioattivi, dopo aver rimosso
l'etichetta. I detentori di autorizzazioni
specifiche (NRC Form 313) devono fare
riferimento al Titolo 10, Codice delle
Regolamentazioni Federali Parte 20. I
detentori di Autorizzazioni negli Stati che
hanno stipulato un accordo con l'NRC
dovrebbero far riferimento alle
regolamentazioni idonee dei loro stati. I
detentori di Autorizzazioni Generali
possono eliminare i rifiuti radioattivi liquidi
del tipo contenuto in questo prodotto
attraverso il lavello del laboratorio. I
detentori di autorizzazione devono
eliminare o rendere illeggibili le etichette
dei contenitori vuoti di materiali radioattivi
prima di eliminare i rifiuti solidi. I detentori
di autorizzazioni specifiche possono
eliminare piccoli quantitativi di rifiuti
radioattivi liquidi del tipo utilizzato in
questo prodotto attraverso il lavello del
laboratorio. Fare riferimento alle
regolamentazioni appropriate applicabili al
Vostro laboratorio.
Materiali Forniti:
Preparazione Iniziale
Provette Prolattina Coattate con
Anticorpo (IPR1)
Provette di polipropilene coattate con
anticorpi policlonali di capra anti-prolattina
e confezionate in buste a cerniera.
Conservare refrigerate al riparo
dall'umidità, richiudendole dopo l'utilizzo.
Stabili a 2–8°C fino alla data di scadenza
indicata sulla confezione.
IKPR1: 100 provette.
125
Anticorpo Prolattina marcato con I
(IPR2)
11 mL di un anticorpo monoclonale murino
iodinato anti-prolattina. Il reagente viene
fornito in forma liquida, pronto all'uso.
Stabile a 2–8°C per 30 giorni dopo
l'apertura o fino alla data di scadenza
indicata sull'etichetta.
IKPR1: 2 flaconi.
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
Calibratori Prolattina (PRI3–9, X)
Otto flaconi, etichettati dalla A alla H, di
calibratori prolattina liofili in una
matrice/tampone di siero. Almeno 30
minuti prima dell'utilizzo, ricostituire il
calibratore zero A con 5 mL di acqua
distillata o deionizzata, e ciascuno dei
calibratori rimanenti dalla B alla H con
2 mL di acqua distillata. Stabile a –20°C
per 30 giorni dopo la ricostituzione.
Aliquotare, se necessario, per evitare cicli
ripetuti di congelamento e scongelamento.
IKPR1: 1 set.
I calibratori hanno valori lotto-specifici di
circa 0, 2,5, 5, 10, 20, 50, 100 e 200
nanogrammi di prolattina per millilitro
(ng/mL) in termini di Terzo Standard
Internazionale per la Prolattina del World
Health Organization numero 84/500. I
punti intermedi della calibrazione possono
essere ottenuti mescolando i calibratori in
proporzioni idonee. Fare riferimento alle
etichette dei flaconi per valori esatti in
ng/mL.
Attenzione che i calibratori del dosaggio
Coat-A-Count Prolattina IRMA non sono
interscambiabili con quelli forniti in altri kit
Prolattina.
Soluzione/Tampone di Lavaggio
Concentrata (1TSBW)
40 mL di una soluzione salina
concentrata, con surfactanti e conservanti.
Con l'utilizzo di un contenitore per il
trasferimento, diluire il contenuto di
ciascun flacone con 400 mL di acqua
distillata, per un volume totale di 440 mL.
Stabile a 2–8°C per 6 mesi dopo la
preparazione.
IKPR1: 1 flacone.
Materiali Richiesti Ma Non
Forniti
Gamma counter — compatibile con
provette standard 12x75 mm
Rack shaker — settato a circa 200 colpi al
minuto
Preparazione dei Reagenti
Acqua distillata o deionizzata
Pipette volumetriche: 2,0, 5,0 e 11,0 mL
Cilindro graduato — per la dispensazione
di 400 mL
33
Contenitore di plastica con coperchio –
per la preparazione e la conservazione
della Soluzione/Tampone di Lavaggio.
Immunodosaggio
Micropipette: 50 µL e 200 µL
Dispensatore — per la dispensazione di
2,0 mL di Soluzione/Tampone di Lavaggio
Foam per la decantazione — disponibile
presso Siemens Healthcare Diagnostics
(Codice: FDR).
Carta per grafici log-log a 3 cicli
Un controllo a tre-livelli, su base sierica
umana, contenente prolattina tra gli altri
oltre 25 costituenti dosati, disponibile
presso Siemens Healthcare Diagnostics
(Codice:CON6).
Attenzione che i campioni con
concentrazioni di prolattina superiori a
2 500 ng/mL possono produrre risultati di
prolattina apparente inferiori a quelli del
calibratore più elevato (200 ng/mL).
Campioni con valori attesi superiori a
questa concentrazione devono essere
diluiti con il calibratore zero prima del
dosaggio.
Procedura del Dosaggio
Tutti i componenti devono essere a
temperatura ambiente (15–28°C) prima
dell'utilizzo.
1
Prelievo dei Campioni
Non è necessario che il paziente sia a
digiuno, non sono necessarie preparazioni
17
particolari. Prelevare il sangue in
provette semplici, evitando l'emolisi, e
separando il siero dalle cellule. Occorre
annotare l'ora del prelievo.
Se le provette delle Conte Totali sono
richieste per il calcolo dei dati,
etichettare con T due provette
semplici (non coattate) di polistirene
(Conte Totali) e metterle da parte fino
al punto 3.
Si consiglia l'utilizzo di un'ultracentrifuga
per schiarire i campioni lipemici.
I campioni emolizzati posson indicare il
trattamento non idoneo del campione
prima dell'arrivo al laboratorio; per questo
motivo, i risultati devono essere
interpretati con prudenza.
Provette per il prelievo di sangue di
produttori diversi possono dare valori
differenti, a seconda dei materiali e degli
additivi usati, incluso gel o barriere fisiche,
attivatori di coaguli e/o anticoagulanti.
L'Coat-A-Count IRMA Prolattina non é
stato verificato con tutte le possibili
variazioni di tipi di provette. Consultare la
sezione riguardante Campioni Alternativi
per dettagli sulle provette testate.
Circa
ng/mL
T*
—
A(NSB)
0
B
2,5
C
5
D
10
E
20
F
50
G
100
H("MB")
200
Nota: I valori dei calibratori sono
lotto-specifici. Fare riferimento alle
etichette dei calibratori per i valori reali
in ng/mL.
Conservazione: 7 giorni a 2–8°C, o fino a
3 mesi (aliquotato) a –20°C.
34
Calibratori
* Provette per le conte totali opzionali
Volume Richiesto: 50 µL per provetta.
Prima del dosaggio, consentire ai
campioni di raggiungere temperatura
ambiente (15–28°C) e mescolare
scuotendo leggermente o capovolgendo la
provetta. Non tentare di scongelare i
campioni congelati riscaldandoli in un
bagnetto termostatato.
Etichettare sedici Provette A Coattate
con Anticorpo Prolattina (legame non
specifico) e da B ad H ("legame
massimo") in duplicato. Etichettare
altre provette coattate con anticorpo,
anch'esse in duplicato, per i controlli
ed i campioni dei pazienti.
2
Dispensare 50 µL di ciascun
calibratore, controllo e campione di
siero nelle provette preparate.
Pipettare direttamente al fondo.
Campioni con concentrazioni attese di
prolattina superiori al calibratore più
elevato (200 ng/mL) devono essere
diluiti con il calibratore zero prima del
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
dosaggio. Si consiglia l'utilizzo di
micropipette con puntali monouso per
evitare il trascinamento da un
campione all'altro. Si possono usare
pipette a dislocazione positiva e
pipettatori-diluitori automatici solo se
la possibilità che si verifichi il carryover è stata valutata e ritenuta
insignificante.
3
Aggiungre 200 µL di anticorpo anti125
Prolattina marcato con I ad ogni
provetta.
Pipettare direttamente al fondo, ed
assicurarsi che il campione ed il
tracciante siano completamente
mescolati senza formazione di
schiuma. Si consiglia l'utilizzo di un
dispensatore. Mettere da parte le
provette T per la conta (al punto 6);
non sono necessari ulteriori passaggi.
4
Scuotere per 2 ore su shaker.
5
Decantare ed asciugare
completamente. Aggiungere 2 mL si
Soluzione/Tampone di Lavaggio ad
ogni provetta. Attendere da 1 a 2
minuti, quindi decantare
completamente. Aggiungere 2 mL di
Soluzione/Tampone di Lavaggio,
attendere da 1 a 2 minuti, e decantare
completamente.
Rimuovere tutta l'umidità visibile
aumentando così la precisione. Dopo
il secondo lavaggio, decantare il
contenuto di tutte le provette (ad
eccezione delle provette T) utilizzando
un foam per la decantazione e fare in
modo che si asciughino per 2 o 3
minuti.
Tamponarle su carta assorbente per
eliminare completamente i liquidi.
6
Contare per 1 minuto in un gamma
counter.
In un gamma counter multi-testina, le
Conte Totali (opzionali) devono
essere separate dalle rimanenti
provette da almeno uno spazio per
minimizzare la possibilità di
fuoriuscite.
Calcolo dei Risultati e Controllo
di Qualità
Per calcolare i risultati (in termini di unità
di concentrazione) da una
rappresentazione log-log della curva di
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
calibrazione, correggere inizialmente le
conte per minuto (CPM) di ciascuna
coppia di provette sottraendo la media dei
CPM delle provette del legame non
specifico (calibratore A):
Conte Nette = Media dei CPM Meno Media CPM
NSB
Quindi determinare la percentuale di
legato (relativa a quella del calibratore più
elevato) – qui chiamato "%B/MB" – di
ciascuna coppia di provette come
percentuale del “legame massimo” con le
conte corrette con NSB del calibratore più
alto prese al 100%:
Percentuale di Legato = (Conte Nette / Conte
Nette MB) × 100
Utilizzando una carta per grafici log-log a
3 cicli, tracciare la Percentuale di Legato
vs. la Concentrazione per ciascuno dei
calibratori non zero e tracciare la curva
lungo il percorso di questi punti.
(Collegare i punti della calibrazione con
archi o segmenti. Non tentare di utilizzare
un'unica linea retta). Le concentrazioni per
i controlli ed i campioni non noti entro il
range dei calibratori non zero possono
essere calcolate dalla curva di
calibrazione per interpolazione. E'
possibile tracciare una curva ulteriore tra
la Percentuale di Legato e la
Concentrazione per i tre calibratori più
bassi con un grafico linear-linear per
calcolare l'interpolazione della dose
prossima a zero.
Commenti: Benché altri approcci risultino
accettabili, il calcolo dei dati con il metodo
appena descritto ha alcuni vantaggi dal
punto di vista del controllo di qualità. In
particolare, produce una curva di
calibrazione che è relativamente lineare
sia nella rappresentazione log-log che
linear-linear, e relativamente stabile da
dosaggio a dosaggio. Produce anche
parametri di QC validi, ad es.: Valori di
Percentuale di Legato (%B/MB) per i
calibratori non zero. Un grafico che porta
ancora più informazioni, con un senso di
riproducibilità intra-dosaggio in funzione
della concentrazione, può essere ottenuto
direttamente tracciando i valori della
Percentuale di Legato delle singole
provette dei calibratori, i.e. senza prima
calcolare la media dei CPM dei replicati.
Alternative: Benché la percentuale di
Legato possa essere calcolata
35
direttamente dai CPM medi, la correzione
per il legame non specifico produce
normalmente una curva di calibrazione
che è più lineare lungo il suo range. Una
curva di calibrazione può anche essere
costruita tracciando i CPM o la Media dei
CPM direttamente vs. la concentrazione
sia su grafico log-log che linear-linear.
(non utilizzare grafici semi-log). Questo
approccio ha il vantaggio della semplicità,
ma è meno auspicabile dal punto di vista
del controllo di Qualità.
Calcolo Computerizzato dei Dati: Sono
accettabili metodi "Punto-a-punto", incluse
linee spline cubiche e lineari; ma poiché
sono poco d'aiuto nel monitoraggio
dell'integrità del dosaggio, è importante
preparare la rappresentazione log-log
della curva di calibrazione, sia
manualmente che con il computer come
step del controllo di qualità. Possono
essere utilizzate anche le tecniche di
calcolo dei dati basati sul modello
logistico. All'interno di questa famiglia, le
routine di curve-fitting basate sulla
logistica a 4 o 5 parametri sono i candidati
più idonei. Tuttavia, alcuni algoritmi ad
oggi in uso possono non convergere in
modo uniforme, anche quando il modello
logistico è in accordo con i dati. Se viene
adottato un metodo logistico, è essenziale
verificarne l'appropriatezza per la routine
giornaliera monitorando il calcolo dei
calibratori e di altri parametri. Inoltre, si
consiglia una rappresentazione log-log
della curva di calibrazione, poiché fornisce
più informazioni della rappresentazione
convenzionale semi-log.
Manipolazione dei Campioni: Le
istruzioni per la manipolazione e la
conservazione dei campioni e dei
componenti del kit devono essere
scrupolosamente osservate. Diluire i
campioni con concentrazioni attese
elevate con il calibratore zero prima di
dosarli. Tutti i campioni, inclusi i calibratori
ed i controlli debbono essere dosati
almeno in duplicato. E' importante
utilizzare una micropipetta con puntali
monouso, cambiando il puntale tra i
campioni per evitare la contaminazione da
carry-over. E' possibile utilizzare pipette a
dislocazione positiva e pipettatori-diluitori
automatici solo se è già stata esclusa la
possibilità che si verifichi il carry-over.
Coppie di provette dei controlli possono
essere intervallate all'interno del dosaggio
36
per verificare l'assenza di deviazioni
significative. Controllare i risultati per
verificare la concordanza all'interno delle
coppie di provette.
Gamma Counter: Per minimizzare la
possibilità che si verifichino fuoriuscite in
gamma counter multi-pozzetto, le provette
delle conte totali opzionali (T) devono
essere separate da uno o più spazi dalle
altre provette. In alternativa, aggiungere
solo 25 µL del tracciante ad ognuna delle
provette T al punto 3, e moltiplicare le
conte al minuto osservate in queste
provette per 4.
Controlli: controlli o pool di sieri con
almeno due livelli di concentrazione di
Prolattina (basso ed alto) devono essere
dosati routinariamente come campioni non
noti, ed i risultati annotati giorno dopo
giorno come indicato in Westgard JO, et
al. A multi-rule chart for quality control.
Clin Chem 1981;27:493-501. Ripetere i
campioni quale ulteriore strumento di
monitoraggio della precisione interdosaggio.
Parametri di QC: Consigliamo di
annotare tali prestazioni:
T = Conte Totali (conte al minuto)
%NSB = 100 × (Conte NSB Medie / Conte
Totali)
%MB = 100 × (Conte Nette MB / Conte Totali)
Ed i valori delle Percentuali di Legato
("%B/MB") di tutti i calibratori ad
eccezione di quello più elevato tra i
calibratori non zero, ad esempio:
%C/MB = 100 × (Conte Nette del
Calibratore "C" / Conte Nette MB)
Archivio Dati: Si consiglia per ogni
dosaggio di annotare i numeri di lotto dei
componenti utilizzati, le date di
ricostituzione o di apertura.
Ulteriori Letture: See Dudley RA, et al.
Guidelines for immunoassay data
reduction. Clin Chem 1985; 31:1264-71.
Seduta Esemplificativa: a solo scopo
illustrativo e non per calcolare i risultati di
un'altra seduta.
Poiché i valori dei calibratori sono
lotto-specifici, le concentrazioni elencate
nella colonna a destra possono non
essere in accordo con i valori dei
calibratori forniti nella Vostra spedizione.
(vedi tabella "Example Run").
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
Valori Attesi
Il test sul dosaggio Coat-A-Count
Prolattina IRMA è stato effettuato presso
un grosso ospedale indipendente con i
seguenti risultati in ng/mL.
Gruppo
Range
Mediana Assoluto
Adulti
Maschi
6,6
Adulti
Femmine
7,8
95%
Range
3,1 – 16,5
n
19
3,6 – 18,9 70
I laboratori devono considerare questi
risultati soltanto come linee guida. Ogni
laboratorio dovrebbe stabilire i propri
range di riferimento.
Prestazioni del Dosaggio
Le seguenti sezioni contengono dati
rappresentativi delle prestazioni del
dosaggio Coat-A-Count Prolattina IRMA. I
risultati prolattina sono espressi come
nanogrammi di prolattina per millilitro
(ng/mL). Per convertire i ng/mL in mIU/L,
in termini di WHO Terza Preparazione
Standard per la Prolattina numero 84/500,
moltiplicare per 21,2:
Fattore di Conversione:
ng/mL × 21,2 → mIU/L
Range di Calibrazione: Fino a
200 ng/mL [WHO 3rd IS 84/500]
I calibratori sono lotto-specifici.
Sensibilità Analitica: 0,1 ng/mL
Effetto Gancio a Dosi Elevate: Nessuno
fino a 2 500 ng/mL.
Precisione Intra-Dosaggio (All'interno
della stessa seduta): Sono state
calcolate statistiche per campioni dai
risultati di 20 coppie di provette in un
unico dosaggio. (Vedi tabella “Intraassay
precision”.)
Precisione Inter-Dosaggio (Da una
seduta all'altra): Sono state calcolate
statistiche per campioni dai risultati di 20
coppie di provette in 20 dosaggi diversi.
(Vedi tabella “Interassay Precision”.)
Recupero: Sono stati dosati campioni
diluiti 1:19 con tre soluzioni di Prolattina
(500, 1 500 e 3 000 ng/mL). (Vedi tabella
“Recovery” per dati rappresentativi.)
Specificità: Il kit è altamente specifico per
la prolattina, con bassa crossreattività
verso altri ormoni glicoproteici quali FSH,
HCG, LH, TSH, hGH e HPL.
Bilirubina: La presenza di bilirubina in
concentrazioni fino a 200 mg/L non ha
nessun effetto sui risultati entro il range di
precisione del dosaggio.
Emolisi: La presenza di globuli rossi
impaccati in concentrazioni fino a
30 µL/mL non ha effetto sui risultati entro il
range di precisione del dosaggio.
Lipemia: La presenza di trigliceridi in
concentrazioni fino a 3 000 mg/dL non ha
nessun effetto sui risultati entro il range di
precisione del dosaggio.
Tipo di Campione Alternativo: Per
determinare l'effetto di campioni
alternativi, è stato prelevato del sangue da
27 volontari in provette semplici,
eparinizzate, EDTA e Becton Dickinson
®
vacutainer SST . Tutti i campioni si sono
analizzati mediante il procedimento di
Coat-A-Count Prolattina IRMA, con i
risultati seguenti.
(EDTA) = 0,87 (Siero) + 0,31 ng/mL
r = 1,0
(Eparina) = 0,89 (Siero) + 0,21 ng/mL
r = 1,0
(SST) = 0,97 (tubi semplici) + 0,26 ng/mL
r = 1,0
Valore medio:
8,7 ng/mL (Siero)
7,9 ng/mL (EDTA)
7,9 ng/mL (Eparina)
8,7 ng/mL (SST)
Comparazione di Metodi: Sono stati
combinati i dati di tre studi differenti per le
comparazioni di metodi. Sono stati dosati
un totale di 157 campioni di pazienti con il
dosaggio Coat-A-Count Prolattina IRMA
ed il dosaggio Doppio Anticorpo
Prolattina. Mediante regressione lineare:
(CAC IRMA) = 0,97 (DA) + 2,3 ng/mL
r = 0,990
Effetto Fine-Seduta: Nessuno fino a circa
200 provette. (vedi tabella "End-of-Run
Effect".)
Valore medio:
16,9 ng/mL (Coat-A-Count IRMA)
15,0 ng/mL (Double Antibody)
Linearità: I campioni sono stati dosati a
varie diluizioni. (Vedi tabella “Linearity” per
dati rappresentativi.)
In un altro studio, 159 campioni di pazienti
sono stati dosati con il dosaggio Coat-ACount Prolattina IRMA e con il kit Coat-A-
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
37
Count Prolattina. Mediante regressione
lineare:
decaem para valores de adulto em menos
de 3 meses.
(CAC IRMA) = 0,95 (CAC) + 0,46 ng/mL
r = 0,989
Os valores médios de prolactina
apresentam-se normalmente em valores
ligeiramente superiores na mulher que no
homem, com uma leve subida na
puberdade – aparentemente relacionada
com os estrogénios – e correspondente
descida na menopausa. Durante a
gravidez, os valores da prolactina
aumentam 10 a 20 vezes, voltando ao
normal após o parto – num prazo de
3 semanas para as mães que não
amamentam. Para as mães que
amamentam, o declínio para o normal é
gradual devido à secreção em impulsos
rápidos induzidos pelo aleitamento. Os
níveis de prolactina também poderão
surgir mais altos que o normal em
mulheres sob terapia com estrogénios ou
usando contraceptivos orais.
Valore medio:
12,0 ng/mL (Coat-A-Count IRMA)
12,2 ng/mL (Coat-A-Count)
Assistenza Tecnica
All'estero: Si prega di contattare il proprio
Distributore Nazionale.
www.siemens.com/diagnostics
Il Sistema Qualità della Siemens Healthcare
Diagnostics Inc. è certificato ISO 13485:2003.
Português
Coat-A-Count Prolactina IRMA
Utilização: Prolactina IRMA Coat-A-Count
é um ensaio imunoradiométrico designado
para a mensuração quantitativa de
prolactina no soro. É destinado somente
para uso diagnóstico in vitro usado como
um auxiliar na investigação do estado da
pituitária e infertilidade.
Números de catálogo: IKPR1 (100 tubos)
O kit de 100 tubos contêm menos
que 20 microcuries (740
kilobequerels) de anti-prolactina
125
monoclonal radioactivo I.
Sumário e explicação do teste
A prolactina humana é uma hormona
polipeptídica da pituitária anterior com um
peso molecular de aproximadamente
22 800 D. Desempenha um papel
principal na secreção do leite materno e
tem a capacidade de suprimir a função
gonadal. A existência real da prolactina
como uma substância distinta da hormona
de crescimento humana, só foi
estabelecida em 1970. Desde aí, a
determinação da prolactina tem-se
tornado uma ferramenta importante na
investigação da amenorreia, galactorreia e
desordens hipotalâmica – pituitárias.
A literatura sugere, como dado de
referência da prolactina circulante,
concentrações aproximadamente acima
de 20 ng/mL. Estes valores são
distintamente elevados à nascença mas
38
Relativamente ao significado das
elevações moderadas, é importante ter
em atenção que a prolactina é uma
“hormona de stress”. Também poderão
ocasionar aumentos transitórios não só a
cirurgia, mas também a punção venosa ou
uma outra intervenção clínica não muito
invasiva. No entanto, a libertação da
prolactina é inerentemente episódica, e
diariamente apresenta flutuações com
CV's próximos de 30%. Finalmente,
encontram-se variações diárias durante o
sono: os valores da prolactina aumentam
durante o sono e atingem os seus valores
mínimos poucas horas após o despertar.
Visto isto, e uma vez que os indivíduos
em geral acordam aproximadamente à
mesma hora, sugere-se que as amostras
para o doseamento da prolactina sejam
recolhidas entre as 9h:00 e as 12h:00.
Princípio do Procedimento
Prolactina IRMA Coat-A-Count é um
ensaio imunoradiométrico de fase sólida
baseado no anticorpo anti-prolactina
monoclonal e policlonal: um anticorpo
monoclonal anti-prolactina marcado com
125
I em fase líquida, e um anticorpo
policlonal anti-prolactina imobilizado na
parede de um tubo de poliestireno.
No procedimento:
A prolactina é capturada entre o anticorpo
policlonal anti-prolactina imobilizado no
interior da superfície do tubo de
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
poliestireno e o anticorpo anti-prolactina
radiomarcada.
apenas se estiverem diluídos e forem
lavados com grandes volumes de água.
O anticorpo anti-prolactina marcado com
125
I não ligado é removido por decantação
da mistura de reacção e pela lavagem do
tubo; isto reduz a ligação não específica a
um nível muito baixo, e assegura uma
excelente precisão na parte baixa da
curva.
Água: Utilize água destilada ou
deionizada.
A concentração de prolactina é
directamente proporcional a
radioactividade presente no tubo após o
item de lavagem. A radioactividade é
medida usando-se um contador gamma,
após a qual a concentração de prolactina
na amostra do paciente é obtida pela
comparação das contagens por minuto do
paciente com as obtidas do conjunto de
calibradores fornecidos.
Reagentes para Pipetar: 1
Tempo de Incubação: 2 horas (no rack
shaker)
Contagens Totais na Marcação com o
Iodo: aproximadamente 300 000 cpm
Precauções
Para uso de diagnóstico in vitro.
Reagentes: Conservar a 2–8°C num
frigorífico destinado para materiais
radioactivos. Eliminar de acordo com as
leis aplicáveis.
Não utilize reagentes com prazo de
validade expirado.
Alguns componentes fornecidos com este
dispositivo podem conter matéria de
origem humana e/ou outros ingredientes
potencialmente perigosos que necessitem
de algumas precauções.
Manipule com as devidas precauções
todos os materiais capazes de transmitir
doenças infecciosas. As matérias primas,
obtidas de soro humano, foram testadas,
revelando resultados negativos para a
sífilis, para os anticorpos do vírus da
imunodeficiência humana (HIV) 1 e 2;
para o antigénio de superfície da hepatite
B (HBsAg) e para os anticorpos do vírus
da hepatite C.
Azida de sódio foi adicionada como
conservante; para evitar acumulações de
azidas metálicas explosivas em
canalizações de cobre e alumínio, os
reagentes devem ser rejeitados no esgoto
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
Radioactividade
Uma cópia da licença de uso de produtos
radioactivos (especifico ou geral) enviada
pelo cliente, deve estar em poder da
Siemens Healthcare Diagnostics antes do
envio dos kits ou componentes contendo
material radioactivo. Estes materiais
radioactivos podem ser adquiridos por
qualquer cliente que possua a necessária
licença especifica. Com uma licença
generalista estes produtos radioactivos só
podem ser adquiridos por médicos,
veterinários na prática de medicina
veterinária, laboratórios clínicos e
hospitais. E somente para uso clinico in
vitro ou testes laboratoriais não
envolvendo administração externa ou
interna do material radioactivo ou da sua
radiação para o ser humano ou outros
animais. A sua aquisição, receita,
armazenamento uso, transporte e
eliminação estão sujeitas aos
regulamentos e à licenciada Comissão de
Regulação Nuclear ou do Estado
respectivo de acordo com a lei em vigor.
Tratar os materiais radioactivos de acordo
com a regulamentação da sua licença,
específica ou generalista. De modo a
minimizar a exposição à radiação deve o
utilizador seguir as instruções da
publicação do Departamento Nacional de
Padrões (Utilização segura de materiais
radioactivos-Livro No. 92, publicado em
Março de 1964) e publicações seguintes
do Estado e Autoridades Federais.
Limpar os derrames prontamente e
descontamine as superfícies afectadas.
Evitar os aerossóis. Elimine os lixos
radioactivos de acordo com a
regulamentação da licença. As licenças
generalistas (portadores da licença NRC
483) podem eliminar os lixos sólidos
radioactivos como lixo não radioactivo
depois de remover os rótulos. Licenças
Especificas (Licença NRC 313) devem ter
em conta o Capitulo 10 do artigo 20, do
Código de Regulamentações Federais.
Cada Estado deve referir a legislação em
vigor aprovada para o seu território. As
licenças generalistas podem eliminar os
lixos radioactivos líquidos do tipo deste
produto para um esgoto de laboratório. Os
39
licenciados devem remover os rótulos dos
frascos vazios de materiais radioactivos
antes de os colocar no esgoto sólido. As
licenças especificas podem eliminar
pequenas quantidades de lixo radioactivo
deste tipo de produto para o esgoto
normal do laboratório. Ter em atenção as
regulamentações em vigor para o seu
laboratório.
Materiais fornecidos:
Preparação inicial
Tubos revestidos com Prolactina Ab
(IPR1)
Tubos de poliestireno revestidos com
anticorpo policlonal de cabra antiprolactina embalados em sacos com
fecho de segurança. Conservar
refrigerado e protegido da humidade,
selar os sacos cuidadosamente após
cada abertura. Estável a 2–8°C até à data
de validade inscrita na embalagem.
IKPR1: 100 tubos.
125
Prolactina Ab I (IPR2)
11 mL de anticorpo monoclonal murino
anti-prolactina iodado. O reagente é
fornecido na forma líquida, pronto para
uso. Estável de 2–8°C por 30 dias após
aberto ou até a data de expiração
marcada no rótulo.
IKPR1: 2 frascos.
Calibradores de Prolactina (PRI3–9, X)
Oito frascos, rotulados de A a H, de
calibradores de prolactina liofilizados em
soro/matriz tamponada. Pelo menos 30
minutos antes do uso, reconstituir o
calibrador zero A com 5 mL de água
destilada ou deionizada, e cada calibrador
remanescente de B a H com 2 mL de
água destilada. Estável a –20°C por 30
dias após reconstituição. Aliquote, se
necessário, para evitar ciclos repetitivos
de congelamento e descongelamento.
IKPR1: 1 set.
Os calibradores possuem valores lote
específicos de aproximadamente 0, 2,5, 5,
10, 20, 50, 100 e 200 nanogramas de
prolactina por mililitro (ng/mL) nos termos
do Terceiro Padrão Internacional da
Prolactina 84/500 da Organização
Mundial da Saúde. Pontos de calibração
intermediários podem ser obtidos pela
mistura de calibradores em proporção
40
adequada. Referir-se aos rótulos dos
frascos para o valor exacto em ng/ml.
Nota-se que os calibradores da Prolactina
IRMA Coat-A-Count não são
intercambiáveis com os fornecidos em
outros kits de Prolactina.
Solução de Lavagem Concentrada
Tamponada (1TSBW)
40 mL de solução salina concentrada e
tamponada, com surfactantes e
preservate. Usando-se um container para
a transferência, diluir o conteúdo de cada
frasco com 400 mL de água destilada
para um volume total de 440 mL. Estável
de 2–8°C por 6 meses após preparação.
IKPR1: 1 frasco.
Materiais necessários mas não
fornecidos
Contador Gamma compatível com tubos
padrão 12x75 mm
Agitador de estante – com
aproximadamente 200 agitações por
minuto
Preparação do Reagente
Água destilada ou deionizada
Pipetas volumétricas: 2,0, 5,0, 11,0, mL
Cilindro graduado: para dispensação de
400 mL
Container plástico com tampa para
armazenamento – para a preparação e
armazenamento da solução de lavagem
tamponada.
Imunoensaio
Micro pipetas: 50 µL e 200 µL
Dispensador – para a dispensação de 2
ml da solução de lavagem tamponada
Rack de espuma de decantação –
disponível na Siemens Healthcare
Diagnostics (número de catálogo: FDR).
Papel gráfico logo-logo com 3 ciclos
Um controle de imunoensaios baseado
em soro humano com três níveis,
possuindo a prolactina como um dos 25
constituintes ensaiados esta disponível na
Siemens Healthcare Diagnostics (número
de catálogo CON6).
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
recobertos de anticorpo adicionais,
também em duplicata, para controles
e amostras de pacientes.
Colheita
O paciente não necessita de dieta, não
são necessárias preparações especiais.
17
Colectar o sangue por punção venosa
em tubos comuns, evitando-se a hemólise
e separar o soro das células. A hora da
colheita deve ser anotada.
Se os tubos de contagem total forem
requeridos para o calculo dos
resultados, rotular dois tubos comuns
(não recobertos) como sendo tubos T
(contagem total). E processa-los no
item 3.
Recomenda-se o uso de uma ultra
centrífuga para clarear amostras
lipémicas.
Amostras hemolisadas podem indicar
tratamento incorrecto de uma amostra
antes do envio para o laboratório; portanto
os resultados devem ser interpretados
com cuidado.
Os tubos para colheita sanguínea de
diferentes fabricantes, podem originar
diferentes valores, dependendo dos
materiais e aditivos, incluíndo gel ou
barreiras fisicas, activadores do coágulo
e/ou anti coagulantes. Coat-A-Count
IRMA Prolactina não foram ainda testados
com todas as possiveis variações
originadas pelos tipos de tubos. Consultar
a secção Tipos de Amostras Alternativas
para obter detalhes sobre os tubos que
foram testados.
2
1
Rotular 16 tubos recobertos de
Prolactina Ab em tubos A (ligação não
específica), e de B à H (ligação
máxima) em duplicata. Rotular tubos
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
--0
B
2,5
C
5
D
10
E
20
F
50
G
100
H ("MB")
200
Pipetar 50 µL de cada calibrador,
controle e amostra de soro de
paciente aos tubos pré-preparados.
Pipetar directamente para base dos
tubos. Amostras de pacientes nas
quais se esperam conterem
concentrações de prolactina
superiores ao calibrador mais alto
(200 ng/mL) devem ser diluídas com o
calibrador zero antes do ensaio.
Recomenda-se usar uma micropipeta
com ponteira descartável, evitando-se
o arraste entre as amostras. Pipetas
com desplaçamento positivo e
diluidores pipetadores automático
somente podem ser usados se a
possibilidade de arraste tiver sido
avaliada e for encontrada como sendo
insignificante.
Notar que as amostras de Prolactina com
concentrações superiores à 2 500 ng/mL
podem gerar resultados aparentes de
Prolactina inferiores ao calibrador mais
alto do kit (200 ng/mL). Amostras das
quais se esperam exceder esta
concentração devem ser diluídas com o
calibrado zero antes do ensaio.
Todos os componentes devem estar a
temperatura ambiente (15–28ºC) antes de
usar.
T*
A(NSB)
Nota: os valores dos calibradores são
lotes específicos, referir-se aos
frascos dos calibradores para os
valores reais ng/mL.
Deixar as amostras atingirem a
temperatura ambiente (15–28°C) e agitar
suavemente ou por inversão. Não
descongelar as amostras por aquecimento
em banho-maria.
Procedimento Imunométrico de
Doseamento
Aproximadamente
ng/mL
Tubos de contagem total (opcional)
Volume de amostra: 50 µL por tubo
Armazenagem: 7 dias de 2–8°C ou por
até 3 meses (aliquotado) a –20°C.
Calibradores
3
Adicionar 200 µL de
a todos os tubos.
125
I Prolactina Ab
Pipetar directamente no fundo, e ter
certeza que amostra e o traçador
estão bem misturados, sem espuma.
Um dispensador repetitivo, é
recomendado. Separar os tubos T
opcionais para a contagem no item 6,
41
pois ele não requer nenhum processo
a posterior.
4
Agitar por 2 hora em agitador de
estante
5
Decantar e drenar adequadamente.
Adicionar 2,0 mL da Solução de
Lavagem Tamponada a todos os
tubos. Esperar de 1 a 2 minutos, e
decantar vigorosamente. Novamente
adicionar 2,0 mL da Solução de
Lavagem Tamponada, esperar de 1 a
2 minutos e decantar vigorosamente.
Removendo todo líquido
remanescente melhora-se bastante a
precisão. Após a segunda lavagem
utilizar um rack de decantação
invertido para decantar o conteúdo de
todos os tubos (excepto T). Deixar os
tubos invertidos (em papel
absorvente) a escorrer por 2 ou 3
minutos. Eliminar todas as gotas
residuais com papel absorvente.
6
Contar 1 minuto em contador
gamma.
Em contadores gamma multicanal, os
tubos de contagem total (opcional)
devem ser separados dos demais
tubos do ensaio por pelo menos um
espaço, para minimizar a
possibilidade de espraiamento
radioactivo.
Cálculos e Controlos de
Qualidade
Para calcular os resultados (em termos de
unidades de concentração) da
representação tipo logo-logo, da curva de
calibração, primeiro corrigir as contagens
correcta por minuto (CPM) para cada par
de tubos pela subtracção da CPM média
dos tubos de ligação não específica
(calibrador A):
Contagem reais = CPM média minutos Média
NSB CPM
Então determinar a ligação percentual
(relativa ao calibrador mais alto) – aqui
chamada de % de B/MB – para cada par
de tubos como sendo a uma porcentagem
da ligação máxima, com as contagens
corrigidas para o NSB do calibrador mais
alto tomado como 100%.
Porcentagem de ligação = (Contagens Reais /
Contagens MB Reais) × 100
42
Usando-se um papel gráfico logo-logo
com 3 ciclos, plotar a porcentagem de
ligação versos a concentração para cada
calibrador diferente de zero e desenhar a
curva aproximada que une estes pontos.
(conectar os pontos de calibradores com
arcos ou linhas ou segmentos de linha
recta. Não tente juntar todos os pontos
com uma única linha recta) As
concentrações para os controles e
desconhecidos na faixa dos calibradores
diferentes de zero, podem ser estimados
pela interpolação da curva. Uma plotagem
adicional da capacidade de ligação versos
concentração para os 3 calibradores mais
baixo em um papel gráfico linear-linear
pode ser usado para interpolação ao
redor da dose zero.
Comentários: Apesar de outras
aproximações serem aceitáveis, o calculo
dos resultados pelo método acima
descrito possui certas vantagens do ponto
de vista do controle de qualidade. Em
particular, o mesmo gera uma curva de
calibração que é relativamente linear em
ambas representações logo-logo e linearlinear, e é relativamente estável de ensaio
a ensaio. Também gera parâmetros de
QC disponíveis, os valores de
porcentagem de ligação (porcentagem
B/MB) para os calibradores não zero. Um
informativo gráfico adicional, adequado
para reproducibilidade dentro do ensaio
como uma função da concentração, pode
ser obtida pela plotagem dos valores da
porcentagem de ligação directamente dos
tubos de calibrador individual, e é sem as
replicatas médias da CPM inicial.
Alternativas: Apesar da capacidade de
ligação poder ser calculada directamente
da média de CPM, a correcção para a
ligação não específica normalmente
produz uma curva de calibração que é
mais aproximadamente linear dentro da
sua faixa. Uma curva de calibração
também pode ser construída pela
plotagem da CPM ou CPM média
directamente contra a concentração em
ambos papeis gráficos logo-logo ou linearlinear (o papel gráfico semi logo não deve
ser usado) esta aproximação tem a
virtude de simplificar, mas isto é o menos
desejável do ponto de vista do controle de
qualidade.
Cálculos dos resultados
computadorizados: Métodos ponto a
ponto incluindo curvas linear e cubica, são
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
adequadas, mas desde que as mesmas
possam prover uma assistência mínima
na monitorização da integridade do
ensaio, é importante a preparação da
plotagem recomenda de logo-logo da
curva de calibração, seja manualmente ou
por computador como um item de controle
de qualidade. Técnicas de cálculos de
resultados baseados no modelo logístico
também podem ser aplicados. Dentro
desta família as rotinas de desenho de
curva baseado na logística de 4 ou 5
parâmetros são as candidatas mais
adequadas. Entretanto, alguns algoritmos
correntemente em uso podem não
convergir com sucesso, ainda quando o
modelo logística for verdadeiro para os
dados. Se o método logístico for
adoptado, é essencial verificar sua
adequação para cada dia de ensaio pela
monitorização dos cálculos anteriores dos
calibradores e outros parâmetros.
Adicionalmente, a plotagem de uma curva
de calibração na representação logo-logo
é fortemente recomendada, pois esta é
mais informativa do que a plotagem
convencional semi log.
Manuseio da Amostra: as instruções
para manuseio e armazenagem das
amostras dos componentes devem ser
cuidadosamente observadas. Diluir as
amostras dos pacientes das quais se
esperam conter concentrações de
Prolactina superiores ao calibrador mais
alto (200 ng/mL) com calibrador zero
antes do ensaio. Todas as amostras,
incluindo os calibradores e controles,
devem ser ensaiadas pelo menos em
duplicata. É importante o uso de
micropipetas com ponteiras descartáveis
trocando-as entre as amostras de maneira
a evitar a contaminação por arrastes.
Pipetas com desplaçamento positivo e
pipetadores diluidores automáticos
somente devem ser usados se a
capacidade de arraste estiver sido
previamente avaliada e encontrados como
sendo insignificantes. Pares de tubos
controles podem ser espaçados ao longo
do ensaio para verificar a ausência de
queda significativa. Inspeccionar os
resultados para sua concordância dentro
dos pares de tubos.
Contador Gamma: para minimizar a
quantidade de espraiamento em
contadores gamma multicanal, os tubos
de contagem total (T opcionais) devem
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
ser separados por um ou mais espaços
nos outros tubos do ensaio.
Alternativamente, adicionar somente
25 µL do traçador a cada tubo T no item
3, e multiplicar as CPM observadas
nesses tubos por 4.
Controles: controles ou pools de soros
controles com pelo menos dois níveis de
concentração de PROLACTINA (baixo e
alto) devem ser rotineiramente ensaiados
como desconhecidos, e os resultados
plotados dia a dia como descrito por
Westgard JO, et al. A multi-rule chart for
quality control. Clin Chem 1981;27:493501. A repetição de amostras são
ferramentas adicionais disponíveis para
monitorização da precisão inter ensaio.
Parâmetros de QC: nós recomendamos
a manutenção destas medidas da
performance:
T = contagem total (como contagem por minuto)
%NSB = 100 × (contagem NSB média /
contagens totais)
%MB = 100 × (contagens MB Reais / contagens
total)
e os valores da porcentagem de ligação
(porcentagem B/MB) para todos os
calibradores diferentes de zero, por
exemplo:
%C/MB = 100 × (contagens reais do calibrador
C / contagens reais do MB)
Manutenção de registro: é uma boa
pratica laboratorial a manutenção de
registro para cada ensaio dos números de
lote dos componentes usados, assim
como o dia que eles foram preparados e
inicialmente reconstituídos ou abertos.
Leituras a posterior: Ver Dudley RA, et
al. Guidelines for immunoassay data
reduction. Clin Chem 1985;31:1264-71.
Exemplo: Apenas para ilustração, não
para calcular os resultados de outro
ensaio. Em razão dos valores dos
calibradores possuírem serem lotes
específicos, as concentrações listadas na
coluna da direita podem não coincidir com
os valores dos calibradores fornecidos no
seu kit. (Ver tabela exemplo de ensaio.)
Valores de Referência
Os testes do ensaio de prolactina Irma
Coat-A-Count for realizado em um grande
laboratório hospitalar independente, com
os seguintes resultados em ng/mL.
43
Mediana
Faixa
absoluta
Homens
adultos
6,6
3,1 – 16,5
Mulheres
adultas
7,8
Grupo
Faixa de
95%
n
19
3,6 – 18,9 70
Os laboratórios devem considerar esses
resultados apenas como orientação. Cada
laboratório deve estabelecer seus próprios
valores de referência.
Características do Ensaio
As secções abaixo contem os dados
representativos da performance do kit
Prolactina Irma Coat-A-Count. Os
resultados de Prolactina estão expressos
como nanogramas de Prolactina por
mililitro (ng/mL) para converter de ng/ml a
mIU/L, em termos do Terceiro Padrão
Internacional para Prolactina da
Organização Mundial da Saúde, numero
84/500 multiplicar por 21,2:
Factor de conversão:
ng/mL x 21,2 → mIU/L
Calibração: Até 200 ng/mL (WHO 3 rd IS
84/500). Os calibradores são lote
específicos.
Sensibilidade Analítica: 0,1 ng/mL
Efeito Hook de Alta Dose: Nenhum até
2 500 ng/mL
Precisão Intra-ensaio (entre ensaios):
As estatísticas foram calculadas para
amostras dos resultados de 20 pares de
tubos em um único ensaio. (Consulte a
tabela Precisão Intraensaio)
Precisão Inter-ensaio (ensaio a ensaio):
As estatísticas foram calculadas para
amostras dos resultados de pares de
tubos em 20 ensaios diferentes. (Consulte
a tabela Precisão Inter-ensaio).
Efeito de fim de série: Nenhum até
aproximadamente 200 tubos. (Ver tabela
“Efeito fim-de-série”.)
Linearidade: As amostras foram
doseadas sob várias diluições. (Consulte
a tabela “Linearidade” para dados
representativos.)
Recuperação: As amostras foram
adicionadas na relação de 1 para 19 com
três soluções de Prolactina (500, 1 500 e
3 000 ng/mL) antes do doseamento.
44
(Consulte a tabela "Recovery" para dados
representativos.)
Especificidade: O kit é altamente
específico para Prolactina com uma baixa
reacção cruzada a outros hormónios
lipoproteicos tais como, FSH, HCG, LH,
TSH, hGH e HPL.
Bilirrubina: A presença de bilirrubina em
concentrações até 200 mg/mL não tem
efeito em resultados, dentro da precisão
do ensaio.
Hemólise: A presença de eritrócitos em
concentrações até 30 µL não tem efeito
no resultado, dentro da precisão do
ensaio.
Lipemia: A presença de trigliceridos em
concentrações até 3 000 mg/dL não tem
efeito nos resultados, dentro da precisão
do ensaio.
Tipo de amostra alternativa: Para
determinar o efeito de amostras
alternatives, foi colhido sangue de 27
voluntários em tubos secos, com EDTA,
®
heparinizados e tubos de vacum SST da
Becton Dickinson. Todas as amostras
foram ensaiadas pelo método prolactina
Irma Coat-A-Count, com os seguintes
resultados.
(EDTA) = 0,87 (Soro) + 0,31 ng/mL
r = 1,0
(Heparina) = 0,89 (Soro) + 0,21 ng/mL
r = 1,0
(SST) = 0,97 (tubos simples) + 0,26 ng/mL
r = 1,0
Médias:
8,7 ng/mL (Soro)
7,9 ng/mL (EDTA)
7,9 ng/mL (Heparina)
8,7 ng/mL (SST)
Comparação dos Métodos: Os dados
foram combinados de 3 estudos diferentes
para comparação dos métodos. Um total
de 157 amostras de pacientes foram
ensaiadas pelo procedimento de
Prolactina Irma Coat-A-Count e pelo kit
Prolactina Duplo Anticorpo. Regressão
linear:
(Irma CAC) = 0,97 (DA) + 2,3 ng/mL
r = 0,990
Médias:
16,9 ng/mL (Irma Coat-A-Count)
15,0 ng/mL (Duplo Anticorpo)
Em um outro estudo, 159 amostras de
pacientes foram ensaiadas pelo kit de
Prolactina Irma Coat-A-Count e pelo kit
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
Prolactina Coat-A-Count. Regressão
linear:
(Irma CAC) = 0,95 (CAC) + 0,46 ng/mL
r = 0,989
Médias:
12,0 ng/mL (Irma Coat-A-Count)
12,2 ng/mL (Coat-A-Count)
Assistência Técnica
Por favor contacte o seu Distribuidor
Nacional.
www.siemens.com/diagnostics
O Sistema da Qualidade da Siemens Healthcare
Diagnostics Inc. está registado sob a norma ISO
13485:2003.
Coat-A-Count® is a trademark of Siemens
Healthcare Diagnostics.
©2010 Siemens Healthcare Diagnostics Inc. All
rights reserved.
Origin: US
Siemens Healthcare Diagnostics Inc.
Los Angeles, CA 90045 USA
Siemens Healthcare Diagnostics Ltd.
Sir William Siemens Sq.
Frimley, Camberley, UK GU16 8QD
2010-11-03
PIIKPR – 9
Changes in this Edition:
cc#19759: Removed IKPR2 kit size and all
associated component sizes and radioactivity
information. In Materials Required But Not
Provided section, added FDR catalog number
for foam decanting rack; removed “available
from Siemens” claim for graph paper ZPIRM,
rack shaker DPSR1/DPSR2 and 2 mL dispenser
DB2ML. Removed Technical Bulletin ZJ019
from Further Reading section.
Understanding the Symbols
Understanding the Symbols
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Erklärung der Symbole
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Descripción de los símbolos
Es Español
Explication des symboles
Fr Français
Comprensione dei simboli
It
Descrição dos símbolos
Pt Português
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product labeling: / Die folgenden Symbole
können auf dem Produktetikett verwendet
werden: / Los siguientes símbolos pueden
aparecer en la etiqueta del producto: / Les
symboles suivants peuvent apparaître sur les
étiquettes des produits : / Sull'etichetta del
prodotto possono essere presenti i seguenti
simboli: / Os seguintes símbolos podem
aparecer no rótulo dos produtos:
Symbol Definition
En: In vitro diagnostic medical
device
De: Medizinisches Gerät zur
In-vitro Diagnose
Es: Dispositivo médico para
diagnóstico in vitro
Fr: Dispositif médical de
diagnostic in vitro
It: Dispositivo medico per
diagnostica in vitro
Pt: Dispositivo médico para
diagnóstico in vitro
En: Catalog Number
De: Katalog-Nummer
Es: Número de referencia
Fr: Numéro de référence
catalogue
It: Numero catalogo
Pt: Número de catálogo
En: Manufacturer
De: Hersteller
Es: Fabricante
Fr: Fabricant
It: Produttore
Pt: Fabricante
En: Authorized Representative in
the European Community
De: Autorisierte Vertretung in der
Europäischen Union
Es: Representante autorizado en
la Unión Europea
Fr: Représentant agréé pour
l’Union européenne
It: Rappresentante autorizzato
nella Comunità europea
Pt: Representante Autorizado na
Comunidade Europeia
En: CE Mark
De: CE-Kennzeichen
Es: Símbolo de la CE
Fr: Marque CE
It: Marchio CE
Pt: Marca CE
Italiano
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
45
Symbol Definition
En: CE Mark with identification
number of notified body
De: CE-Kennzeichen
Identifikationsnummer der
benannten Stelle
Es: Marca de la CE con número
de identificación del organismo
notificado
Fr: Marque CE avec numéro
d’identification du corps notifié
It: Marchio CE con numero
identificativo dell'ente notificato
Pt: Marca CE, com número de
identificação do órgão notificado
Symbol Definition
En: Upper limit of temperature
(≤ -20°C)
De: Obere Temperaturgrenze
(≤ -20°C)
Es: Limitación superior de la
temperatura (≤ -20°C)
Fr: Limite supérieure de
température (≤ -20°C)
It: Limite superiore di temperatura
(≤ -20°C)
Pt: Limite máximo de temperatura
(≤ -20°C)
En: Lower limit of temperature
(≥2°C)
De: Mindesttemperatur (≥2°C)
Es: Temperatura maxima (≥2°C)
Fr: Limite inférieure de
température (≥2°C)
It: Limite inferiore di temperature
(≥2°C)
Pt: Limite inferior de temperatura
(≥2°C)
En: Consult instructions for use
De: Bedienungshinweise
beachten
Es: Consulte las instrucciones de
uso
Fr: Consulter le mode d’emploi
It: Consultare le istruzioni per
l'uso
Pt: Consulte as instruções de
utilização
En: Do not freeze (> 0°C)
De: Nicht einfrieren (> 0°C)
Es: No congelar (> 0°C)
Fr: Ne pas congeler (> 0°C)
It: Non congelare (> 0°C)
Pt: Não congele (> 0°C)
En: Caution! Potential Biohazard
De: Vorsicht! Biologisches
Risikomaterial
Es: ¡Precaución! Peligro Biológico
Potencial
Fr: Avertissement ! Risque
biologique potentiel
It: Attenzione! Potenziale Pericolo
Biologico
Pt: Precaução! Potenciais Riscos
Biológicos
En: Radioactive Materials
De: Radioaktives Material
Es: Materiales radiactivos
Fr: Matériaux radioactifs
It: Materiali radioattivi
Pt: Materiais Radioactivos
En: Caution
De: Vorsicht
Es: Precaución
Fr: Avertissement
It: Attenzione
Pt: Precaução
En: Temperature limitation
(2–8°C)
De: Temperaturgrenze (2–8°C)
Es: Limitación de la temperatura
(2–8°C)
Fr: Limites de température
(2–8°C)
It: Limiti di temperatura (2–8°C)
Pt: Limites de temperatura
(2–8°C)
46
En: Keep away from sunlight
De: Vor Sonneneinstrahlung
schützen
Es: Mantener protegido de la luz
solar
Fr: Maintenir hors de portée de la
lumière du soleil
It: Non esporre alla luce del sole
Pt: Manter protegido da luz solar
LOT
En: Batch code
De: Chargenbezeichnung
Es: Código de lote
Fr: Numéro de code du lot
It: Codice lotto
Pt: Código de lote
En: Contains sufficient for (n)
tests
De: Es reicht für (n) tests
Es: Contiene material para (n)
pruebas
Fr: Suffisant pour (n) tests
It: Contiene materiale sufficiente
per (n) test
Pt: Contém o suficiente para (n)
testes
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
2008-01
Symbol Definition
En: Date format (year-month)
De: Datumsformat (Jahr-Monat)
Es: Formato de fecha (año-mes)
Fr: Format de la date
(année-mois)
It: Formato data (anno-mese)
Pt: Formato de data (ano-mês)
En: Use by
De: Verwendbar bis
Es: Fecha de caducidad
Fr: A utiliser avant
It: Usare entro
Pt: Use até
En: Harmful
De: Gesundheitsschädlich
Es: Nocivo
Fr: Nocif
It: Nocivo
Pt: Nocivo
En: Corrosive
De: Ätzend
Es: Corrosivo
Fr: Corrosif
It: Corrosivo
Pt: Corrosivo
En: Toxic
De: Giftig
Es: Tóxico
Fr: Toxique
It: Tossico
Pt: Tóxico
En: Dangerous for the
environment
De: Umweltgefährlich
Es: Peligroso para el medio
ambiente
Fr: Dangereux pour
l'environnement
It: Pericoloso per l'ambiente
Pt: Perigoso para o ambiente
Coat-A-Count Prolactin IRMA (PIIKPR-9, 2010-11-03)
47