UNIVERSIDADE ABERTA DO BRASIL
UNIVERSIDADE FEDERAL DA PARAIBA - UFPB VIRTUAL
LICENCIATURA EM CIÊNCIAS BIOLÓGICAS A DISTÂNCIA
DISCIPLINA BIOQUÍMICA ESTRUTURAL
Ministrante: Prof. Dr. Carlos Alberto de Almeida Gadelha
Mediador: Tutor Daniel Lima de Farias
PLANO DE AULA PRÁTICA
Importante: As aulas práticas serão ministradas integralmente ou parcialmente, de acordo com o tempo
disponível para sua execução.
Objetivos gerais da prática:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Apresentação do material e manuseio dos instrumentos do Laboratório;
Familiarização com os conceitos de pH e capacidade tamponante;
Medir o pH de algumas soluções de nosso cotidiano;
Constatar o efeito tamponante e sua importância biológica;
Detectar o polissacarídeo amido em diferentes amostras;
Constatar a hidrólise do amido pela enzima amilase salivar;
Determinar a quantidade de vitamina C em diferentes tipos de alimentos.
Parte I – O Laboratório Didático: Materiais e Cuidados.
Procedimento geral:
Antes de efetuar os experimentos, é necessário conhecer o material e os
equipamentos existentes no laboratório. Seguido de procedimentos práticos para que se possa
saber manusear (pipetar, filtrar, pesar, etc.) os instrumentos existentes no laboratório, assim
como, saber manusear com inflamáveis, ácidos e bases fortes.
Parte II – pH e Capacidade Tamponante.
Procedimento geral:
Antes de efetuar as medições de pH com o potenciômetro, é necessário calibrá-lo usando
soluções tampão padrões, seguindo o procedimento descrito no manual do aparelho. Após isso ter sido
feito, mergulhe o eletrodo de forma que o poro em sua lateral fique sempre encoberto pelo líquido que
se deseja medir o pH.
- “Prática de medição do pH de diferentes amostras”.
1 –Reagentes:
Solução de diferentes substâncias (refrigerante de cola, vinagre, água sanitária, etc).
2 –Material:
- Béqueres de 100ml;
- Potenciômetro.
3 – Procedimentos:
Mergulhar o elétrodo do potenciômetro nas soluções onde serão determinados os pHs e anotar os
valores obtidos.
- “Prática de capacidade tamponante”.
1 –Reagentes:
- Água pura ou destilada;
- Solução Tampão TRIS 0,1M pH 7,4 (pKa = 8,3);
- Solução de ácido clorídrico (HCl) 0,1M;
- Solução de hidróxido de sódio (NaOH) 0,1M.
2 –Material:
- 4 Béqueres de 100ml;
- Potenciômetro.
3 – Procedimentos:
Em dois béqueres adicionar 50ml de água pura ou destilada e nos outros dois, adicionar 50ml de solução
tampão TRIS 0,1M pH 7,4. Mergulhar o elétrodo do potenciômetro nas soluções contidas nos 4
béqueres e anotar os valores de pH obtidos. Em seguida adicionar a um béquer de água pura e a um
béquer de solução tampão TRIS 0,1M pH 7,4, um mililitro de solução de ácido clorídrico 0,1M. Repetir o
procedimento adicionando um mililitro de solução de hidróxido de sódio 0,1M aos outros béqueres.
Mergulhar novamente o elétrodo do potenciômetro nas soluções contidas nos 4 béqueres e anotar os
valores de pH e comparar os resultados obtidos.
Parte III – Carboidratos.
- “Prática de Detecção do Amido em Diferentes Amostras”.
1 – Objetivo:
- Identificar a presença do amido em diferentes amostras de alimentos.
2 – Materiais:
• Frasco conta-gotas;
• Tintura de iodo comercial;
• Frascos de vidro transparente pequenos ou tubos de ensaio ou copos descartáveis de café;
• Pedaços, fatias ou pequenas porções de alimentos contendo amido (pão, maizena, goma de mandioca,
batata inglesa, inhame, macaxeira, etc).
3 – Procedimento:
Colocar pedaços, fatias ou pequenas porções de diferentes alimentos contendo iodo em frascos de vidro
transparente pequeno ou tubos de ensaio ou copos descartáveis de café e gotejar a solução de tintura
de iodo. O aparecimento de coloração azulada revela à presença do carboidrato amido na amostra.
Parte IV – Enzimas.
- “Ação da Enzima Amilase Salivar (Ptialina) sobre o Amido”.
1 – Objetivo:
- Observar a hidrólise do carboidrato amido por ação catalítica da enzima amilase salivar.
2 – Materiais:
• Frascos de vidro transparente pequenos ou tubos de ensaio ou copos descartáveis de café;
• Pipeta Pasteur ou conta-gotas;
• Tintura de iodo comercial;
• Água filtrada ou soro fisiológico (cloreto de sódio 0,9%);
•Amido;
• Saliva colhido de aluno voluntário (evitar pessoas que se alimentaram recentemente!).
3 – Procedimento:
Prepare três tubos de ensaio (frascos de vidro ou copos descartáveis de café) contendo solução de
amido como substrato (dissolva aproximadamente 0,5 g de maizena em 100ml de água) em seguida,
adicione a cada um dos três tubos (conforme apresentado na Tabela 1) 0,5ml da enzima (solução de
saliva diluída em água na proporção 1:10), misture e incube o frasco na mão fechada durante 15 a 20
minutos com suaves agitações casuais.
Tabela 1: Substrato e respectivos reagentes a serem adicionados em cada experimento.
Experimento
1
2
3
Substrato
2 ml de Solução de Amido
2 ml Solução de Amido
2 ml Solução de Amido
Enzima (reagente)
0,5 ml de Água (Branco)
0,5 ml de Solução de Amilase Salivar (1:10)
0,5 ml de Solução de Amilase Salivar (1:10) Fervida
Decorrido o tempo de incubação, adicionar uma ou duas gotas de tintura de iodo comercial e agitar.
Observar e comparar os resultados.
Parte V - Vitaminas.
- “Determinação de Vitamina C em Alimentos”.
1 – Objetivo:
O enfoque agora é determinar a quantidade de vitamina C em diferentes tipos de alimentos
através do teste do complexo iodo-amido.
2 – Materiais:
- 1 comprimido efervescente de 1g de Vitamina C;
- tintura de iodo a 2% (comercial);
- sucos de frutavariados;
- 5 seringas descartáveis;
- 1 fonte de calor (aquecedor, lamparina);
- 6 copos de vidro (ou vidros de geléia);
- 1 conta-gotas;
- 1 garrafa de refrigerante de 1L;
- 1recipiente de vidro de 500ml (meio litro).
3 – Procedimentos:
A) Prepare a mistura de amido com água do seguinte modo: aqueça 200ml (mais ou menos um copo) de
água num recipiente com capacidade para meio litro. Aqueça até uns 50ºC (mergulhando o dedo até
que fique difícil deixar dentro da água). Em seguida, adicione 1 colher de chá de amido de milho (pode
ser farinha de trigo) na água aquecida. Agite bastante até que adquira a temperatura ambiente.
B) Prepare uma solução de vitamina C. Em uma garrafa de refrigerante de 1L adicione mais ou menos
meio litro de água filtrada. A seguir adicione um comprimido de vitamina C. Agite e complete com água
até dar um litro.
C) Numere 6 copos de vidro e coloque em cada um deles 20mL da mistura de (amido +água).
D) No copo 2 adicione 5mL da solução de vitamina C.
E) Nos copos 3, 4, 5 e 6 adicione 5 ml de cada suco disponível.
F) A seguir, pingue, gota a gota, a solução de iodo no copo 1, agitando até que apareça a coloração azul.
Anote o número de gotas. (geralmente 1 é suficiente).
G) Repita o procedimento nos outros copos e anote os resultados.
ANEXOS:
Montagem de um experimento de titulação
Curva de titulação do ácido acético
Como funciona o tampão ácido acético/acetato ?
Transformações estruturais da molécula do aminoácido glicina ao longo de sua titulação.
Experimento Vitamina C :
Como já estudamos anteriormente, se misturarmos iodo em uma mistura de (amido +
água) obteremos a cor azul intensa, pois o iodo forma um complexo com o amido.
Os químicos testaram e descobriram que, ao misturarmos vitamina C com o complexo
iodo-amido, dá-se uma transformação química. O iodo sofre uma transformação e forma o
iodeto que é transparente.
Então, quanto mais vitamina C um alimento tiver, mais rapidamente a cor azul vai
desaparecendo. Ao mesmo tempo, se quisermos voltar a ter a cor azul teremos que colocar
mais iodo na solução.