BILIRUBIN T&D
Bilirrubina Total e Directa
DMSO. Colorimétrico
APLICAÇÃO AO SPINLAB 180
Determinação quantitativa de bilirrubina
IVD
Conservar a 2-8ºC
PRINCIPIO DO MÉTODO
A bilirrubina converte-se em azobilirrubina por acção do ácido
sulfanílico diazotado medindo-se fotométricamente. Das duas
fracções presentes no soro, bilirrubina-glucoronido e bilirrubina livre
ligada á albumina, apenas a primeira reage em meio aquoso
(bilirrubina directa) enquanto a segunda tem que ser solubilizada com
dimetilsulfóxido (DMSO) para que ocorra reacção (bilirrubina
indirecta). Na determinação da bilirrubina indirecta determina-se
também a directa, correspondendo o resultado á bilirrubina total. A
intensidade da coloração formada é proporcional á concentração de
bilirrubina presente na amostra ensaiada1,2.
SIGNIFICADO CLÍNICO
A bilirrubina origina-se por degradação da hemoglobina.
É transportada do baço ao fígado sendo excretada para a bilis.
A hiperbilirrubinemia é o resultado de um aumento da bilirrubina no
plasma. Causas mais prováveis da hiperbilirrubinemia:
Bilirrubina Total (T): Aumento da hemólise, alterações genéticas,
anemia neonatal, alterações eritropoiéticas, presença de drogas.
Bilirrubina Directa (D): Colestase hepática, alterações genéticas e
alterações hepáticas1,5,6
O diagnóstico clínico deve realizar-se tendo em conta todos los dados
clínicos e de laboratorio.
REAGENTES
Ácido sulfanílico
R 1 (D)
Ácido clorIdrico (HCl)
Ácido sulfanílico
R 2 (T)
Ácido cloridrico (HCl)
Dimetilsulfóxido (DMSO)
R3
Opcional
Nitrito de Sodio
30 mmol/L
150 mmol/L
30 mmol/L
50 mmol/L
7 mol/L
29 mmol/L
SPINTROL H CAL
PRECAUÇÕES
R1/R2/RT: Corrosivo (C): R35: Provoca quemaduras graves.
S26: Em caso de contacto com os olhos , lavar imediata e
abundantemente com agua e consultar o médico.
PREPARAÇÃO
Pipetar 660 µL de R2 para um frasco de R1. Agitar , evitando a
formação de espuma , encontrando-se pronto para utilização (RT).
Deixar repousar o reagente cerca de 30 min. antes de usar.
A estabilidade do reagente de trabalho (RT) é de 24 horas a
temperatura ambiente ou 1 semana a 2-8ºC.
CONSERVAÇÃO E ESTABILIDADE
Todos os componentes do kit são estavéis até á data de caducidade
indicada na etiqueta do frasco, desde que se mantenham os frascos
bem fechados a 2-8ºC, protegidos da luz e evitando-se a
contaminação durante a sua utilização. Não usar reagentes fora da
data indicada.
Indicadores de deterioração dos reagentes :
- Presença de partículas e turvação.
- Aparecimento de coloração no R 2.
MATERIAL ADICIONAL
- Espectrofotómetro ou analisador para leituras a 555 nm.
- Cuvetes de 1,0 cm de passo de luz.
- Equipamento habitual de laboratorio.
AMOSTRAS
Soro ou plasma livre de hemólise (separado o quanto antes das
hemácias). Proteger da luz.
Estabilidade da amostra já separada das hemácias: 4 dias a 2-8ºC
ou 2 meses a –20ºC.
SPBSIS36-P
18/02/13
Nome
Nome abreviado
Modo
Comp. ondas
Unidades
Decimais
Conc. Inferior
Conc. Superior
Calibrador
Check prozona
Bilirrubina
BILT o BILD
Endpoint
546 nm
mg/dL
1
0.1 mg/dL
15.0 mg/dL
CAL
Não
Ref. Homem Inf.
Ref. Homem Sup.
Ref. Mulher Inf.
Ref. Mulher Sup.
Ref. Ped. Inf.
Ref. Ped. Sup.
Valor pánico baixo
Valor pánico alto
Control 1
Control 2
Control 3
Factor correl.
Offset de correl.
0.0
1.1 o 0.25
0.0
1.1 o 0.25
0.0
12.0
*
*
*
*
*
1.000
0.000
MODO MONO
Branco amostra
Frasco R1 (mL)
Vol. normal
Vol. repet.
Amostra
Vol. normal
Vol. repet.
Não
25 mL
250 L
250 L
Incubação
11,5 min.
Factor
**
Branco reagente
Absorvancia inf.
Absorvancia sup.
Lim.Inf. Abs. Reag
Lim.Sup. Abs. Reag
Sim (0.000)
-0.100 Abs
3.000 Abs
-0.100 Abs
3.000 Abs
25.0 L
15.0 L
NOTA:Para controlos e /ou calibradores com uma concentração baixa
deste parâmetro será necessario mudar o branco de amostra para Sim para
se evitar a interferência pela coloração da própria amostra. Deverá medirse com R1 sem acrescentar R2.
CONTROLO DE QUALIDADE
É conveniente analizar junto com as amostras os soros controlos
valorizados: SPINTROL H Normal e Patológico (Ref. 1002120 e 1002210).
Se os valores encontrados estiverem fora do intervalo de tolerancia,rever o
equipamento,os reagentes e o calibrador.
Cada laboratorio deve dispôr do seu próprio Controlo de Qualidade e
estabelecer correcções caso os controlos não cumpram com as tolerancias.
VALORES DE REFERENCIA1
Bilirrubina Total
Até 1,10 mg/dL
18,81 mol/L
Até 0,25 mg/dL
4,27 mol/L
Bilirrubina Directa
Estes valores são orientativos. Recomenda-se que cada laboratorio
estabeleça os seus próprios valores de referencia.
NOTAS
1. Para a determinação da bilirrubina em recém-nascidos, pipetar 50 L
de amostra. Multiplicar o resultado obtido por 2.
BIBLIOGRAFIA
1. Kaplan A et al. Bilirubin. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis.
Toronto. Princeton 1984; 1238-1241. 436 and 650.
2. Malloy H T. et al. The determination of bilirubin with the photoelectric
colorimeter. J. Biol Chem 1937; 112, 2; 481-491.
3. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press,
1995.
4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC
2001.
5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
6. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
APRESENTAÇÃO
Ref: SP1001044
Cont.
R 1 (D): 5 x 25 mL
R 2 (T): 5 x 25 mL
R 3: 2 x 5 mL
SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
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