TÍTULO: AVALIAÇÃO DO EFEITO DO LASER VERMELHO COM FOTOSSENSIBILIZADOR AZUL DE
METILENO SOBRE PROPIONIBACTERIUM ACNES
CATEGORIA: EM ANDAMENTO
ÁREA: CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E SAÚDE
SUBÁREA: FARMÁCIA
INSTITUIÇÃO: FACULDADES INTEGRADAS DE FERNANDÓPOLIS
AUTOR(ES): ROXANE RAMANHOLI, BRUNA FABIOLA DOS SANTOS, CRISTIANA ROSA DE JESUS
DE SOUZA, JULIANA LORENTTI CANDELÁRIA, LIDIANE CARVALHO DA SILVA
ORIENTADOR(ES): JEFERSON LEANDRO DE PAIVA, ROGÉRIO RODRIGO RAMOS
COLABORADOR(ES): FERNANDO LEITE HOFFMANN, JOSÉ PAULO FRANCO DOS SANTO GOMES,
OCIMAR ANTÔNIO DE CASTRO
RESUMO - Neste estudo foi avaliada in vitro a atividade fotodinâmica do
fotossensibilizador (Fs) azul de metileno (AM), a irradiação com Laser a 660nm em
Propionibacterium acnes. Os ensaios foram submetidos a irradiação por 8 ciclos de
5 minutos com intervalos de 3 minutos. No presente estudo foi evidenciado o
destaque da ação da luz sobre a P. acnes aos 20 minutos (4º ciclo), a ação do AM
em P. acnes entre os 20 (4º ciclo) e 40 minutos (8º ciclo) e a ação do AM com
irradiação da luz sobre P. acnes nos primeiros 20 minutos de tratamento. Apesar
dos resultados favoráveis, o tempo de irradiação do Laser associado ao Fs AM não
foram suficientes para inibir totalmente a proliferação da bactéria. Sugere-se a
realização de outros estudos in vitro para elaboração de novos ensaios clínicos no
sentido de viabilizar a aplicação clínica deste fotossensibilizador em PDT.
INTRODUÇÃO
A
acne é
uma
enfermidade
inflamatória
da
unidade
pilossebácea,
caracterizada com manifestações clínicas por comedões, pápulas e cistos. (RAMOSE-SILVA et al., 2003; COSTA et al., 2007). Clinicamente, é classificada em quatro
níveis: Grau I, com presença de comedões fechados e abertos; grau II, os
comedões, se associam pápulas e pústulas de conteúdo purulento; grau III, quando
se somam nódulos mais exuberantes; e grau IV, formação de abscessos e fístulas
(COSTA et al., 2007; TEIXEIRA; FRANÇA, 2007). Na tentativa de buscar novas
opções terapêuticas, a terapia fotodinâmica (PDT) tem sido considerada um
tratamento promissor para a acne, além de ser considerado um método rápido e
eficaz (ISSA; MANELA-AZULAY, 2010). A PDT é uma modalidade terapêutica
consolidada que tem sua atividade na fotooxidação de matéria biológica, a qual é
decorrente da atividade de espécies reativas de oxigênio (EROs). Tais espécies são
geradas in situ e ocasionam a morte celular por luz visível na presença de um
fotossensibilizador e de oxigênio (INADA et al., 2012).
OBJETIVO
O objetivo do estudo é avaliar a ação da luz do Laser vermelho com o
fotossensibilizador Azul de Metileno sobre o Propionibacterium acnes in vitro.
METODOLOGIA
O presente estudo foi desenvolvido no Laboratório de Análises Clínicas da
Fundação Educacional de Fernandópolis/SP. Para determinação da atividade
antibacteriana foi empregada a cepa Propionibacterium acnes ATCC (American
Type Culture Collection) 6919. Foi ensaiado o fotossensibilizador (corante) azul de
metileno a 1% dissolvido em dimetilsufóxido (DMSO), na concentração de 1mg/mL-1.
Como fonte de luz foi utilizada o Laser vermelho com comprimento de onda 660nm
com 192 J/cm2. A preparação do inóculo de linhagem ATCC 6919 foi cultivada em
meio (TSB OXOID®) por 24 horas e 28°C, quando se procedeu à centrifugação
(3.000 rpm por 1 minuto), em seguida o sobrenadante foi desprezado e o material
precipitado ressuspendido em solução estéril de NaCl (0,5%) esterilizada e
novamente foi centrifugado. Este procedimento foi repetido 5 vezes para lavagem
das células bacterianas e retirada de componentes do meio de cultura. Após a 5º
lavagem, o material precipitado foi ressuspendido novamente e ajustado na escala
de Mc Farland 0,5 e em seguida realizada a diluição seriada até a concentração de
10-5.
DESENVOLVIMENTO
A ação fotodinâmica foi realizada utilizando-se delineamento experimental
inteiramente casualizado, constituído por quatro tratamentos (1- controle sem
aplicação de luz e sem fotossensibilizador, 2 – aplicação de luz, 3 – AM sem luz, e 4
– AM + luz). Foram depositados em tubos de ensaio 1,05mL da suspensão
bacteriana e 0,05mL de solução do fotossensibilizador. Os ensaios foram mantidos
sob abrigo da luz e 28oC por 15 minutos, e posteriormente submetidos a irradiação
por 8 ciclos de 5 minutos com intervalados de 3 minutos. As amostras foram
irradiadas com Laser 660nm. A cada ciclo foi removida uma alíquota de 0,05mL e
transferida para placa de Petri contendo ágar TSA. No meio foi uniformemente
distribuída, com o auxílio de alça de drigalski e as placas foram incubadas a 35oC
por 24 horas. Decorrido este período foi efetuado a contagem de unidade formadora
de colônias (UFC) para a avaliação da atividade fotodinâmica sobre P. acnes. Todo
o procedimento foi realizado em triplicata.
RESULTADOS PRELIMINARES
A Figura 1 mostra que o desenvolvimento bacteriano foi inibido tanto na
presença do Fs AM como na presença de Laser e Fs + Laser. Pode-se observar que
o crescimento bacteriano teve sua inibição mais acentuada nos primeiros 20 minutos
depois de exposto a incidência do Laser. O fotossensibilizador AM induziu a inibição
no crescimento bacteriano, e seu melhor efeito foi observado entre o tempo de 20 e
40 minutos. A associação dos dois fatores “Laser e AM” mostram-se com grande
capacidade de inibição do crescimento bacteriano.
160
Controle
140
Número de Colônias
120
Laser
100
Corante
80
60
Corante+Laser
40
20
0
0
10
20
30
40
Tempo (minutos)
Figura 01: A Figura apresenta os resultados obtidos para o crescimento bacteriano no intervalo de
tempo em condições distintas. Exposta ao Laser, ao corante e na associação de corante + Laser.
FONTES CONSULTADAS
ISSA, M.C.; MANELA-AZULAY, M. Photodynamic therapy: a review of the literature
and image documentation. An Bras Dermatol. v.85, n.4, p. 501-511, 2010.
COSTA, A.; ALCHORNE, M.M.A.; MICHALANY, N.S. et al. Acne vulgar: estudo
piloto de avaliação do uso oral de ácidos graxos essenciais por meio de análises
clínica, digital e histopatológica. An Bras Dermatol. v.82, N.2, p.129-134, 2007.
INADA, N.M.; COSTA, M.M.; GUIMARÃES, O.C. et al. Photodiagnosis and treatment
of condyloma acuminatum using 5-aminolevulinic acid and homemade devices.
Photodiagn Photodyn Ther. v.9, n.1, p.60-68, 2012.
RAMOS-E-SILVA, M.; CARNEIRO, S.C.S.; PONZIO, H.A. et al. Estudo clínico aberto
multicêntrico da efetividade e tolerabilidade do gel de adapaleno a 0,1% em
pacientes com acne vulgar. An Bras Dermatol. v.78, n.2, p.155-168, 2003.
TEIXEIRA, M.A.G.; FRANÇA, E.R. Mulheres adultas com acne: aspectos
comportamentais, perfis hormonal e ultrassonográfico ovariano. Rev Bras Saude
Matern Infant. v.7, n.1, p.39-44, 2007.