DETECÇÃO DE DOENÇA MICRO-METASTÁTICA EM CÂNCER DE MAMA POR MEIO DE
ANÁLISE DE INSTABILIDADE DE MICROSSATÉLITES E PERDA DE HETEROZIGOSIDADE
COMO MARCADORES MOLECULARES
D’Angelo, Andrea; Garicochea, Bernado; Cancela, Anna; Devenz, Gabriela; Alves, Silvana; Silva, Andréa.
Hospital São Lucas da PUC - Instituto de Pesquisas Biomédicas/ Laboratório de Biologia Tumoral
O câncer de mama é o tipo de neoplasia mais diagnosticado entre as mulheres após
os cânceres de pele não-melanoma. Na última década, foram identificadas as principais
mutações responsáveis pelas alterações morfológicas do câncer de mama, as quais são
utilizadas como marcadores de prognóstico da doença. Defeitos neste sistema de reparo de
DNA estão presentes em alguns tipos de tumores. Uma das formas de verificação do
sistema de reparo é a análise da presença da MSI (MSI - Microsatellite instability) e LOH
(LOH - do inglês Loss of heterozygosity). Cada tumor apresenta um padrão de LOH e MSI
próprio. A caracterização destes padrões de eventos genéticos precoces torna-se uma
ferramenta importante para o adequado manejo dos pacientes com este diagnóstico. Este
padrão pode ser utilizado para "marcar" a presença de células tumorais residuais no sítio
primário, linfonodos ou à distância. Desse modo, serão obtidas cerca de 30 amostras de
tecido tumoral, de mama e linfonodos de pacientes do sexo feminino com diagnóstico de
câncer de mama com idade acima de 18 anos submetidas a cirurgia no Hospital São Lucas
da PUC. O DNA será extraído utilizando-se o Kit Wizard Genomic DNA Purificacion e
realizado a quantificação do ácido nucléico extraído através da leitura da densidade ótica
em espectrofotômetro utilizando-se o comprimento de onda de 260nm. Após, as amostras
de DNA, contendo 100 a 200ng, correspondentes ao tecido normal, de tumor e de
linfonodos serão submetidos à amplificação empregando-se a técnica da PCR. Serão
amplificadas 2 regiões para LOH e MSI. Todas as amplificações serão acompanhadas de
um controle negativo, isto é, todos reagentes exceto o DNA complementar. A análise dos
produtos de PCR será realizada em eletroforese vertical de gel de poliacrilamida 12% em
condições desnaturantes. Os géis serão corados com nitrato de prata, na posterior análise
dos géis a identificação de MSI e LOH será baseada no perfil das imagens das bandas
formadas pelos segmentos de DNA amplificados das amostras selecionadas. Este trabalho
apresenta como objetivo principal identificar se MSI e LOH podem ser marcadores
adequados de células tumorais residuais em câncer de mama e como objetivos secundários
estabelecer um painel de sensibilidade de MSI e LOH para câncer de mama e analisar nos
registros das pacientes a evolução clínica e sobrevida com status de instabilidade genômica.