Instituto Brasileiro de Medicina de Reabilitação
Disciplina: Biologia Celular e Molecular
Métodos em Microscopia
Reações citoquímicas e
imunohistoquímicas
Citologia: Métodos em Microscopia
- Microscopia de luz
- Microscopia de contraste de fase
- Microscopia Confocal
- Microscopia de fluorescência
Citologia: Métodos em Microscopia
 Microscopia Óptica (Campo claro)
Oculares
Objetivas
Charriot
Condensadora
Macro
/Micro
Filtros
Citologia: Métodos em Microscopia
# Preparo de amostras
Células e tecidos → tratamento químico
que garanta sua preservação
1. Fixação
2. Desidratação
3. Emblocamento
4. Microtomia
5. Coloração
Citologia: Métodos em Microscopia
# Coloração Hematoxilina-Eosina
Hematoxilina: cora azul estruturas ácidas (núcleo)
Eosina: cora rosa estruturas básicas (citoplasma)
Citologia: Métodos em Microscopia
Espécimes transparentes????
 Microscopia de Contraste de fase
- Sistema de lentes
- Luz muda de velocidade em estruturas com
índice de refração diferentes
- Estruturas mais claras e escuras
- Células vivas
Microscopia de Contraste de fase
Citologia: Métodos em Microscopia
Imagens NÃO são compostas de 1 plano
Superposições em foco simultâneo
 Microscopia confocal
- Plano focalizado de cada vez
- Reconstrução tridimensional
Vasos sanguíneos da retina a partir do disco óptico
Glicogênio em neurônios
Citologia: Métodos em Microscopia
 Microscopia Fluorescência
 Anticorpos → ligação específica ao antígeno
 Localizar moléculas-alvo
• Direta: Anticorpo fluorescente (fluorocromo)
• Indireta: Adicionar um fluorocromo
Microscópio de fluorescência
Filtros seletivos → apenas a luz do corante usado
é detectada
Citologia: Métodos em Microscopia
# Imunocitoquímica Direta
Reação antígeno-anticorpo auxiliando a localização de
estrutura celulares
Marcação direta
Coelho
Marcação Direta
Anticorpos
+
Ligante
Antígeno
Marcação indireta
Imunocitoquímica:(anticorpo secundário)
Flurocromo verde (1 canal)
Vermelho e amarelo (2 canais)
Glomérulo:
IgM
AntiC. botulinum
T. cruzi
Instituto Brasileiro de Medicina de Reabilitação
Disciplina: Biologia Celular e Molecular
CÉLULA E SUAS
ORGANELAS
CÉLULAS
Unidades estruturais e funcionais dos organismos vivos
Forma, tamanho e funções 
Características estruturais =
“... De um começo tão simples, formas infindáveis, as mais belas e as mais
maravilhosas, evoluíram e estão evoluindo.”
Charles Darwin - On the Origin of Species (1859)
EUCARIONTES:
PROCARIONTES:
Patogênicas
Ambientes
extremos
1º células surgiram há 3,5 bilhões de anos
PRINCIPAL DIFERENÇA ENTRE PROCARIONTE
E EUCARIONTE?
Membrana nuclear e organelas limitadas por membrana
COMO OS CONSTITUINTES CELULARES SÃO
ORGANIZADOS NAS CÉLULAS?
Procariontes
Eucariontes
Citoesqueleto e membranas
CITOESQUELETO
Estabiliza a forma celular, organiza o citoplasma e produz movimento
Procariontes
Eucariontes
CITOESQUELETO EUCARIONTES
Diferem em:
largura, composição e função
• Microfilamentos - contração muscular
Actina (todas as células) e miosina
• Filamentos intermediários
Vimentina (mesênquima), desmina (músculo
liso), queratina (epitélio)
• Microtúbulos
Tubulina (fuso mitótico)
QUEM DELIMITA O QUE É INTRA OU
EXTRA CELULAR?
Superfície externa da célula está em contato com outras células, com o matriz
extracelular, nutrientes, hormônios, fatores de crescimento e antígenos.
MEMBRANA PLASMÁTICA DELIMITA O QUE É
INTRA OU EXTRA CELULAR
MEMBRANA PLASMÁTICA
Componentes: Bicamada lipídica (colesterol, fosfolipídios) e proteínas imersas
Funções:
• Limita o que é intra e extracelular
MEMBRANA PLASMÁTICA
• Regula o que entra e sai da célula (seletiva)
• “Antenas moleculares” altamente específicas
GLICOCÁLICE
Endocitose e Exocitose
MEMBRANA PLASMÁTICA
 TRANSPORTES DE MEMBRANA
QUAL COMPONENTE PREENCHE O
CITOPLASMA?
- Partículas e organelas
CITOSOL
- H2O, proteínas, sais minerais, aa,
açúcares, precursores de ácidos nucléicos
CITOSOL
COMPONENTES CELULARES?
RETÍCULO ENDOPLASMÁTICO
 Rede intercomunicante de vesículas achatadas
 Membrana contínua
RETÍCULO ENDOPLASMÁTICO RUGOSO
# Contínuo a membrana
externa nuclear
# Ribossomos
# Secreção de proteínas
RETÍCULO ENDOPLASMÁTICO LISO
# Contínuo ao rugoso
# Síntese hormonal
# Fármacos
# Glicose-6-fosfatase
Hidrólise do glicogênio
COMPLEXO DE GOLGI
Direcionamento das proteínas
“Correio”
Proteínas são modificadas
(adição na cadeia lateral dos aminoácidos de
grupamentos sulfato, carboidratos e lipídios)
COMPLEXO DE GOLGI
ESTRUTURAS RESPONSÁVEIS PELA
DEGRADAÇÃO?
LISOSSOMOS
Vesículas esféricas com grande número
de grânulos
Enzimas hidrolíticas
Digerir moléculas
sólidas (grandes)
LISOSSOMOS
# Originados no complexo de Golgi
LISOSSOMOS E A DIGESTÃO CELULAR
ENDOCITOSE
Fagocitose
- Partículas sólidas
- Estruturas de grandes
dimensões
Pinocitose
- Líquidos extra-celulares
FAGOCITOSE
PINOCITOSE
PEROXISSOMO
# Reações oxidativas: radicais livres
# Oxidam moléculas menores → retiram átomos de H
Peróxido de hidrogênio
ORGANELA RESPONSÁVEL PELA PRODUÇÃO
DE ENERGIA?
MITOCÔNDRIA
# Membrana Externa - lisa
# Membrana interna - invaginada (cristas)
# Matriz - solução aquosa com enzimas e substâncias
envolvidas na produção de energia
MITOCÔNDRIA
Produtoras de ATP → ????
GLICOSE
Ácido Pirúvico
Citosol
CICLO DE KREBS
ATP
Ácido oxalacético
CENTRÍOLO
# Estruturas cilíndricas
# Microtúbulos
# Divisão celular
“Orientam" o deslocamento
dos cromossomos
QUAL A FUNÇÃO DA MEMBRANA NUCLEAR?
Informação Genética
NÚCLEO PRESENTE APENAS EM EUCARIONTES
NÚCLEO
Terra
Distância 1,5 x 1011
DNA corpo poderia ser esticado
até o Sol e voltar ~ 50 vezes
10
1
2
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3
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6
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7