Resumos do 56º Congresso Nacional de Botânica.
Isolamento de proteínas de membrana em abacaxizeiro (Ananas
comosus, Bromeliaceae)
MARIA FERNANDA P.A.D.FORNI – UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO
HELENICE MERCIER – UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO
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A membrana plasmática vegetal é responsável pela interação célulacélula, respondendo por inúmeras funções dentre as quais a transdução
de sinal de eventos fisiológicos, manutenção da homeostase de solutos
intracelular, internalização de nutrientes e biossíntese de parede celular.
O isolamento de proteínas de membrana, por sua vez, é uma poderosa
ferramenta que permite averiguar a existência de receptores e enzimas
neste microambiente, além de possibilitar a execução de ensaios
enzimáticos sem interferência de enzimas citossólicas. Buscando
introduzir a técnica de isolamento de proteínas de membrana em nosso
laboratório utilizamos o abacaxizeiro (Ananas comosus) como modelo
experimental. Foram utilizadas plantas crescidas in vitro, com cerca de
seis meses. Realizou-se o isolamento de proteínas de membrana através
da separação de fases em Triton X-114, sendo realizado o teste de
porcentagem de pureza através da medição da atividade de ATPase de
membrana sensível a vanadato. Inicialmente a porcentagem de
membrana plasmática foi de 45 e 53 % para parte aérea e raiz,
respectivamente. O vanadato de sódio, utilizado em concentração de 50
mM poderia não estar inibindo completamente a ATPase, o que levou à
realização de um teste de inibição em concentrações crescentes.
Averiguou-se que a ATPase de membrana plasmática em abacaxizeiro
se encontra totalmente inibida na concentração de 200 mM de vanadato
para parte aérea e raiz. Após esta padronização o isolamento de
membranas teve resultados de pureza de 77% para parte aérea e 80%
para raíz. Podemos concluir que a metodologia empregada teve um alto
índice de pureza, necessário para a aplicação do método em análises
enzimáticas podendo, entretanto, ser otimizado por alterações no
protocolo a serem realizadas futuramente.