RELATÓRIO TÉCNICO-CIENTÍFICO FINAL
(Observação: as informações prestadas neste relatório poderão, no todo ou em parte, ser
publicadas pela FAPESC.)
1. IDENTIFICAÇÃO DO PROJETO (item a ser preenchido pela FAPESC)
1.1. N° do Contrato: 12312/2007-9
Nº Convênio:
Nº FCTP: 1409/000 Chamada Pública a que se refere: Pesquisa UniversalCT&IFAPESC03/2006
1.2. Título do Projeto: Atividade de cucurbitacinas derivadas de Wilbrandia ebracteata sobre a
adesão, migração e citoesqueleto de células de melanoma da linhagem B16F10: alternativa
terapêutica para o tratamento de processos tumorais
1.3 Grande Área do Conhecimento (usar a nomenclatura do CNPq):
Etnofarmacologia
1.4. Coordenador(a) do Projeto: Rosa Maria Ribeiro do Valle Nicolau
1.5. Localização do projeto (Cidade/Região/SDR): Florianópolis/SC
1.5.1. Instituição: Universidade Federal de Santa Catarina
1.6.1. Valor total do projeto (incluindo todos os intervenientes): R$ 113.500,00
1.6.2. Participação da FAPESC: R$ 16.000,00
Custeio : R$ 16.000,00
Capital:
1.7. Início do Projeto: 01/01/2008
Término: 31/12/2008
______________________________________________________________________________________________
1.8 Equipe Executora
Nome
(1) Profa. Dra. Rosa Maria
Ribeiro-do-Valle Nicolau;
(2) Profa. Dra. Mareni
Rocha Farias;
(3) Prof. Dr. Paulo
Fernando Dias;
(4) Dr. Jarbas Mota
Siqueira Junior;
(5) Dra. Silvia DalBó;
(6) Andressa Córneo
Gazola;
(7) Christiane Borges de
Souza;
(8) Marcella de Araújo
Prudêncio.
(9) Karin Scheschowitsch
Titulação
Instituição
(1) Doutorado
(1) UFSC
(2) Doutorado
(2) UFSC
(3) Doutorado
(3) UFSC
(4) Doutorado
(4) UFSC
(5) Doutorado
(5) UFSC
(6) Mestrado
(6) UFSC
(7) Graduação
(7) UFSC
(8) Graduação
(8) UFSC
(9) Graduação
(9) UFSC
Função no projeto
(1) Coordenador
da
pesquisa;
(2) Isolamento de princípios
ativos
de
origem
vegetal;
(3) Atividade antitumoral;
(4) Atividade antitumoral e
fitoquímica;
(5) Atividade antitumoral e
fitoquímica;
(6) Fitoquímica
e
isolamento de princípios
ativos;
(7) Atividade antitumoral;
(8) Atividade antitumoral;
(9) Atividade antitumoral.
2
DESCRIÇÃO DA PESQUISA, RESULTADOS E IMPACTOS
2.1 Resumo da pesquisa (até 500 palavras, espaço simples, fonte times new roman, tamanho 0).
O estudo de novas alternativas terapêuticas para o tratamento do câncer torna-se cada vez
mais relevante. A introdução de agentes ativos derivados de produtos naturais tem alterado a história
de muitos tipos de câncer humano e vários compostos de origem vegetal são atualmente
empregados. Novas moléculas de origem natural oferecem uma grande oportunidade para avaliar
não somente novas classes químicas de agentes antitumorais, mas também novos e potencialmente
relevantes mecanismos de ação. Vários agentes quimiopreventivos de origem vegetal como, por
exemplo, cucurmina, resveratrol e catequinas têm demonstrado interferir com as vias regulatórias do
ciclo celular, qualificando-as como agentes terapêuticos. Estudos farmacológicos realizados
anteriormente pelo nosso grupo de pesquisa demonstraram que a fração diclorometânica de
Wilbrandia ebracteata (WEDC), rica em cucurbitacinas, possui uma potente ação
antiedematogênica e analgésica. Além disto, WEDC demonstrou atividade antiinflamatória através
da redução da migração celular e do exudato pleural. Em projeto anterior financiado por essa
instituição, procurou-se avaliar uma possível interação entre enzimas pró-inflamatórias e processos
tumorais, uma vez que vários relatos na literatura indicam a participação da enzima COX-2 na
tumorigênese. Nossos resultados demonstraram que compostos derivados de W. ebracteata
apresentaram atividade antitumoral in vitro em modelos de viabilidade, proliferação e migração
celular, utilizando células de melanoma murino B16F10. Relatamos ainda que, este efeito é
independente da atividade inibitória sobre a COX-2. O presente trabalho avaliou o efeito de
compostos derivados de W. ebracteata em modelos de adesão, migração celular e sobre o
citoesqueleto de células de melanoma murino B16F10, investigando ainda possíveis alvos
moleculares relacionados aos processos necessários para a aderência celular. De acordo com os
resultados obtidos, foi observado que o tratamento de células B16F10 com diferentes doses de
dihidrocucurbitacina B (DHCB) é capaz de alterar a adesão e diminuir a taxa de proliferação das
mesmas.Observou-se que a DHCB não provoca apenas um prejuízo na organização da actina, mas
também altera a distribuição dos pontos de adesão focal, concentrando-os e sobrepondo-os à
marcação observada para o citoesqueleto. Uma vez que muitos compostos de origem vegetal vêm
sendo empregados na terapêutica de diversos tipos de cânceres, os resultados obtidos na realização
deste projeto são bastante promissores. Apesar da DHCB não induzir apoptose das células tumorais
estudadas, ela é capaz de promover diversas alterações estruturais importantes nas mesmas,
principalmente no que diz respeito á adesão das células e, portanto, maior dificuldade em migrar e
aderir em novas superfícies e, possivelmente, dificultar a ocorrência de metástases quando testada
em modelos in vivo.
2.2 Caracterização da Pesquisa:
PESQUISA BÁSICA (PB):
PB visando o avanço do conhecimento sobre o tema em estudo (BAC)
PB para avançar conhecimento, com potencial de aplicação tecnológica (BT)
PB para o avanço do conhecimento, com potencial para contribuir em políticas públicas (BP)
PB visando avançar o conhecimento, com potencial de aplicação pública ou privada (BPP)
PESQUISA TECNOLÓGICA (PT)
PESQUISA EM POLÍTICAS PÚBLICAS (PP)
PESQUISA TECNOLÓGICA E POLÍTICAS PÚBLICAS (TPP)
2.3 Síntese de resultados e impactos da pesquisa - cumprimento dos objetivos; impactos dos
resultados da pesquisa: avanço do conhecimento; inovação tecnológica; benefícios sociais,
econômicos, ambientais, culturais e regionais, efetivos ou esperados; contribuição à formulação de
políticas públicas; outros impactos ou efeitos observados ou potenciais (até 500 palavras, espaço
simples, fonte times new roman, tamanho 10)
De acordo com os resultados obtidos, foi observado que o tratamento de células B16F10 com
diferentes doses de dihidrocucurbitacina B é capaz de alterar a adesão celular. A DHCB
principalmente na concentração de 10 µg/mL e no intervalo de 60 min, reduziu a quantidade de
células aderidas em 51,7%. Outro fato importante observado foram as alterações morfológicas
provocadas nas células tumorais pelo tratamento com DHCB, bem como uma diminuição na taxa de
proliferação das mesmas. Tanto as alterações morfológicas quanto a diminuição da taxa de
proliferação observada, puderam ser confirmadas com a avaliação do citoesqueleto por
imunofluorescência. Outros pesquisadores já haviam demonstrado que cucurbitacinas,
principalmente cucurbitacina E, são potentes “desorganizadores” da integridade do citoesqueleto por
aumentar os filamentos ou induzir a polimerização da actina em células de carcinoma de próstata.
Observou-se que a DHCB não provoca apenas um prejuízo na organização da actina, mas também
altera a distribuição dos pontos de adesão focal, concentrando-os e sobrepondo-os à marcação
observada para o citoesqueleto. Porém, por motivos ainda desconhecidos, no ensaio de migração
celular o tratamento das células tumorais com DHCB 10 µg/mL não afetou significativamente sua
capacidade de migração, sendo observadas poucas diferenças entre o grupo controle e o grupo
tratado. De acordo com os resultados obtidos nos ensaios anteriores, era esperado que ocorresse uma
redução da migração das células B16F10 no campo observado. Este resultado pode, pelo menos em
parte, estar relacionado à alterações estruturais da DHCB, por possível formação de isômeros
inativos, uma vez que se esperaria que o composto afetasse a migração das células por gerar
alterações no citoesqueleto de actina e concentração dos pontos de adesão focal. Através da análises
da expressão de proteínas do ciclo celular, pela técnica de western blot, é possível sugerir que a
DHCB pode interferir no ciclo celular, promovendo um atraso na transição de G2/M e saída de M,
uma vez que a atividade do complexo ciclina B1/cdk1, necessária para a progressão nestas etapas do
ciclo celular, se encontrou prejudicada devido à redução na expressão da ciclina B1. Uma vez que
muitos compostos de origem vegetal vêm sendo empregados na terapêutica de diversos tipos de
cânceres, os resultados obtidos na realização deste projeto são bastante promissores. Apesar da
DHCB não induzir apoptose das células tumorais estudadas, ela é capaz de promover diversas
alterações estruturais importantes nas mesmas, principalmente no que diz respeito á adesão das
células e, portanto, maior dificuldade em migrar e aderir em novas superfícies e, possivelmente,
dificultar a ocorrência de metástases quando testada em modelos in vivo. Juntamente com nossos
resultados prévios, o incentivo da FAPESC nos motiva a continuar os estudos sobre os compostos
isolados de W. ebracteata na caracterização dos mecanismos envolvidos na atividade antitumoral em
células de melanoma da linhagem B16F10, com a perspectiva de gerar futuramente, um
fitomedicamento catarinense para o combate ao câncer.
3. DETALHAMENTO TÉCNICO
3.1. Data: 04/2008
Prestação de contas financeira: Finalizada
3.2. Avaliação (feita pelo(a) coordenador(a) da pesquisa):
Em atraso
A) O Projeto se desenvolveu segundo a proposta originalmente definida?
Sim
Não
Se houve mudanças significativas, elas foram especificadas e justificadas?
Sim
Não
Houve solicitação de alteração de rubrica (custeio/capital)?
Sim
Não
Descrever as alterações:
B) Equipamentos adquiridos, quando for o caso:
Não se aplica.
C) Problemas ou dificuldades na execução do projeto, quando houver:
A maior dificuldade encontrada foi na realização dos ensaios de western blotting, já que estes
necessitavam da aquisição de anticorpos e dependiam diretamente da verba do projeto. De forma
geral, não existiram riscos na execução do projeto uma vez que o Laboratório de Produtos Naturais,
coordenado pela Professora Drª Rosa Maria Ribeiro do Valle Nicolau, apresenta a infra-estrutura
necessária para a execução dos protocolos experimentais, pois os mesmos fazem parte da rotina de
investigação de Produtos Naturais.
D) Objetivos e metas previstas foram atingidas?
Totalmente
Parcialmente
Comentar:
Os objetivos propostos pelo projeto foram atingidos, embora com algumas adequações em relação à
proposta inicial devido à readequação orçamentária realizada. Algumas dificuldades foram
encontradas para as análises de western blot devido à demora na liberação da verba e aquisição dos
reagentes necessários.
E) Disseminação do conhecimento e produção gerada pela pesquisa:
- Artigos publicados ou encaminhados – (quantidade): 1
- Dissertações ou teses originadas ou incorporadas: 1
- Livros publicados ou encaminhados:
- Divulgação na Internet:
- Participação em Congressos, Simpósios ou Seminários: 2
- Registro de Propriedade Intelectual:
- Outros:
Descrever a produção e sua repercussão:
O presente projeto custeado pela FAPESC teve papel essencial no desenvolvimento de uma tese de
doutorado do Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Além disso, utilizando os recursos
obtidos está sendo possível concluir mais uma dissertação de mestrado e outros projetos de Iniciação
Científica desenvolvidos no laboratório de Farmacologia de Produtos Naturais sob a supervisão da
coordenadora deste projeto. A verba concedida pela FAPESC contribuiu de maneira significativa
para a formação de recursos humanos nesta instituição. Os resultados obtidos foram recentemente
publicado na forma de artigo em uma revista científica internacional (Cancer Chemotherapy and
Pharmacology) com fator de impacto de 2,568. Os resultados também foram apresentados sob a
forma de painel no Congresso da Sociedade Brasileira de Farmacologia e no Seminário de Iniciação
Científica realizado anualmente na Universidade Federal de Santa Catarina. A presente pesquisa
resultados inéditos para aplicação de compostos de origem vegetal para o tratamento de câncer,
revelando novos composto que poderão no futuro ser empregados no tratamento desta patologia.
F) Principais benefícios efetivos ou potenciais para a sociedade em decorrência da pesquisa,
entre os seguintes aspectos, no que couber:
Incremento da renda familiar......................
Melhoria da saúde.....................................
Aumento da ocupação/emprego..................
Melhoria do saneamento...........................
Redução da jornada de trabalho..................
Melhoria da moradia.................................
Melhoria do sist. de transporte....................
Melhoria da alimentação...........................
Melhoria do sist. de comunicação................
Alternativa econômica/renda....................
Melhoria do fornec. de energia.....................
Melhoria da organização social..................
Aquisição de bens duráveis.........................
Melhoria na educação................................
Satisfação do beneficiado............................
Avanço do conhecimento científico.............
Melhoria do Meio Ambiente.........................
Inovação tecnológica..................................
Diretrizes para Políticas Públicas................
Melhoria em Sistema de Gestão..................
Avaliação de Políticas Públicas ...................
Regulação setorial......................................
Avaliação da Tecnologia no setor ................
Avaliação de condições Socioeconômicas....
Contribuição ao Desenvolvimento Regional..
Contribuição à inserção social....................
Possibilidade de obter patente.....................
Redução da desigualdade social.................
Agregação de valor a produtos.....................
Redução de consumo de energias..............
Redução de resíduos...................................
Outros:
Descrever os benefícios assinalados:
Os resultados obtidos neste projeto foram inovadores em relação à pesquisa de novas terapias para o
câncer. A utilização de compostos obtidos de uma espécie vegetal amplamente encontrada em nosso
Estado contribui para o desenvolvimento regional e melhoria da saúde da população local. Além
disso, foram obtidos avanços no conhecimento científico que foram divulgados por meio de
publicações científicas em revistas especializadas e apresentações em congressos de repercussão
nacional. A infra-estrutura do laboratório de Farmacologia de Produtos Naturais pode ser melhorada
através dos recursos do projeto e com isso a formação de recursos humanos e desenvolvimento de
novas pesquisas teve um crescimento significativo. A descoberta de novos compostos com
potencial terapêutico para o tratamento de câncer pode futuramente levar à geração de patentes.
4. VERIFICAÇÃO TÉCNICA DO PROJETO (campo da FAPESC)
4.1 Mediante as informações apresentadas pelo(a) coordenador(a) do projeto no presente
relatório, verifica-se que os objetivos, metas e resultados previstos foram:
Plenamente atingidos
Parcialmente atingidos
Não foram atingidos
4.2 Recomendações e encaminhamentos:
Florianópolis, SC, 25 de fevereiro de 2009.
Coordenador-de-projetos/FAPESC: