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DESENVOLVIMENTO DE UM DILUENTE A BASE DE EXTRATO DE BURITI
(MAURITIA FLEXUOSA) PARA O SÊMEN DE OVINOS
Rafael Lopes dos Santos (ICV/UFPI/CPCE), Ney Rômulo de Oliveira Paula (Orientador Medicina Veterinária - UFPI/CPCE), Janaina de Fátima Saraiva Cardoso (Colaborador/
UFPI/CPCE), Aderaldo da Silva Aquino (Colaborador/ UFPI/CPCE).
INTRODUÇÃO
Com o intuito de reduzir os danos causados às células durante o processo de
criopreservação, diversas substâncias são estudadas e mostraram-se úteis como agentes
crioprotetores. Os principais crioprotetores utilizados nos diluentes de sêmen, são macromoléculas
como a caseína do leite, as proteínas da gema de ovo e o glicerol. Conforme Gil et al. (2003), o uso
de aditivos de origem animal como gema de ovo e leite na diluição pode implicar em riscos sanitários,
não apenas pela inclusão de agentes microbiológicos, mas também por contaminantes que podem
comprometer a qualidade do produto. Como alternativa para esta dificuldade, estipula-se o uso de
produtos de origem vegetal que tenham, em sua composição, substâncias similares aos
crioprotetores convencionais, que possuam simplicidade de manipulação e sejam amplamente
distribuídos na natureza, além de não causarem danos irreversíveis à célula. Uma opção é o buriti
(Mauritia flexuosa), fruto encontrado em grande escala em diversos estados do Brasil e que contêm
muitas substâncias, dentre estas, vitaminas, proteínas, carboidratos, minerais e lipídios.
OBJETIVO
Desenvolvimento de um diluente a base de extrato bruto de buriti (Mauritia flexuosa) para a
conservação do sêmen de ovinos, além de avaliar a toxicidade in vitro do extrato bruto de buriti sobre
o sêmen de ovinos.
METODOLOGIA
Etapa 1: O extrato bruto de buriti foi diluído em solução salina fisiológica nas concentrações
de 5, 10, 15 e 20%. O sêmen foi coletado através de vagina artificial, diluído e avaliado a
termorresistência a 37°C. Neste teste, realizou-se a avaliação dos parâmetros de motilidade (%),
vigor (0 a 5), avaliação da morfologia espermática (0 a 200), após 5, 10, 15, 30, 60 e 120 minutos de
incubação a 37ºC em banho-maria. Como grupo controle utilizou-se a solução salina fisiológica.
Nesta etapa foram utilizados 15 ejaculados (n=15).
Após a diluição do extrato bruto de buriti foi aferido o pH com auxilio de pHmetro (TEC®
3MP ), as concentrações do extrato bruto de buriti (Mauritia flexuosa) apresentavam pH ácido,
variando de 2,3 a 3,5, com isso tornou-se nescessário a adição de uma base fraca (hidróxido de
potássio a 10%) até estabelecer o pH entre 6,8 e 7. Foi realizada a avaliação da morfologia
espermática, através da contagem de espermatozóides normais e degenerados.
Etapa 2: A concentração com melhor desempenho na etapa 1 foi utilizada nesta etapa.
Foram testadas três soluções tampões como base para o diluente empregado para conservação na
forma líquida. Foi testado o tampão Tris, tampão fosfato e tampão citrato. O meio diluente foi
composto por um tampão, uma fonte de açúcar (frutose) e o extrato bruto na melhor concentração
encontrada na etapa 1. Como grupo controle foi utilizado o diluente TRIS com gema de ovo.
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O sêmen foi diluído, avaliado pós-diluição e resfriados a 4ºC por 24 horas. Após as 24 horas
de estocagem, as amostras foram reaquecidas a 37ºC por 3 minutos e foram avaliados os parâmetros
de motilidade (%), vigor (0 a 5) e avaliação da morfologia espermática, para escolha do meio diluente
com melhor desempenho in vitro. Nesta etapa foram utilizados 15 ejaculados (n=15). Os dados foram
expressos na forma de média e desvio padrão, submetidos ao teste de normalidade e as médias
comparadas pelo teste t de student. As diferenças foram consideradas estatisticamente significantes
quando p <0,05.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
Etapa 1: Os valores médios de motilidade, vigor e morfologia espermática, a concentração de
5% de buriti não diferiu significativamente do grupo controle (p <0,05). Tanto a concentração de 5%
de buriti, quanto o grupo controle foram significativamente diferentes dos demais tratamentos. Com
isso a concentração de 5% de extrato de buriti (Mauritia flexuosa) foi escolhida como ideal para
utilização na composição do diluente de sêmem de ovinos, sendo utilizada na 2 etapa.
Etapa 2: Os tratamentos Tris-gema (TG), Tris-buriti (TB) e Fosfato-buriti (FB), foram iguais
estatisticamente, através da motilidade espermática (%) imediatamente após a diluição, porém,
apresentaram diferenças significativas com o grupo Citrato-buriti (CB). Já na avaliação da motilidade
após 24 h de refrigeração, os tratamentos TG e TB apresentaram melhores resultados (Tabela 1).
Tabela 1: Média (± DP) da motilidade espermática (%) de semêm de ovinos, diluido em diferentes
diluidores, e avaliados imediatamente após a diluição e após 24 horas em refrigeração.
TRATAMENTO
PÓS-DILUIÇÃO
PÓS-REFRIGERAÇÃO
Tris-gema (TG)
63,67 ± 13,43a
60,67 ± 11,16a
Tris-buriti (TB)
63,67 ± 11,57a
44,00 ± 19,57a
Citrato-buriti (CB)
5,33 ± 11,72b
0,00 ± 0,00c
Fosfato-buriti (FB)
63,00 ± 10,49a
12,00 ± 13,73b
Letras diferentes (a, b, c, d) na mesma coluna são significativamente diferentes (p <0,05).
No que tange a avaliação do vigor espermático, os tratamentos TG, TB e FB foram iguais,
sendo estatisticamente superiores ao tratamento CB, na análise imediatamente após a diluição.
Entretanto na avaliação após 24 horas de refrigeração, apenas os grupos TG e TB apresentaram
resultados satisfatórios, não diferindo entre si. O tratamento CB ocasionou a morte de todos os
espermatozoides (Gráfico 1).
Pós-Diluição
Pós-Refrigeração
a
4
3
a
a
a
a
a
2
b
1
b
c
0
Tris-gema (TG)
Tris-Buriti (TB)
Citrato-Buriti (CB)
Fosfato-buriti (FB)
Grafico 1. Avaliação do vigor espermático (0 a 5), imediatamente após a diluição e após 24 horas de
refrigeração, utilizando diferentes diluentes (Tris-gema, Tris-Buriti, Citrato-buriti e Fosfato-buriti).
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O tratamento TB foi o que apresentou os melhores resultados, no tocante a avaliação da
morfologia espermática, apresentando a menor quantidade de células com alguma estrutura
danificada. Os tratamentos TG e CB foram iguais significativamente (P>0,05), entretanto foram
superiores ao tratamento FB, que apresentou os piores resultados (Gráfico 2).
a
198
b
196
194
b
c
192
190
188
Tris-Gema (TG)
Tris-Buriti (TB)
Citrato-Buriti (CB) Fosfato-Buriti (FB)
Grafico 2. Avaliação da Morfologia espermática, através da contagem de células normais (0 a 200),
após 24 horas de refrigeração, utilizando diferentes diluentes (TG, TB, CB, FB).
®
A criopreservação de sêmen ovino com uso de diluidor comercial Bioexcell com 6,4%
glicerol proporcionou resultados similares quando comparado ao diluidor à base de leite (GIL et al.,
2003). Outra alternativa comumente empregada em substituição a gema de ovo é o uso do produto
vegetal lecitina de soja (FOROUZANFAR et al., 2010).
Com isso, o uso de produtos de origem vegetal que tenham em sua composição,
substâncias similares aos crioprotetores convencionais, deve ser intensificada. Uma excelente opção
é o buriti (Mauritia flexuosa) a 5%, pois é fruto encontrado em grande escala em diversos estados do
Brasil e que contêm muitas substâncias, dentre estas, vitaminas, proteínas, minerais e lipídios.
CONCLUSÃO
A concentração de extrato bruto de buriti a 5% apresentou a menor toxicidade in vitro. A
utilização do buriti a 5% em conjunto com o tampão tris não apresentou diferença significativa com o
diluente tris-gema, demonstrando assim ser uma alternativa segura e econômica a substituição da
gema de ovo nos diluentes seminais, além de gerar bioprodutos com tecnologia nacional para
atender o mercado interno com um custo inferior ao dos bioprodutos importados, gerando renda e
empregos no estado do Piauí.
APOIO: CPCE/GPSRA
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
FOROUZANFAR, M.; SHARAFI, M.; HOSSEINI, S. M.; OSTADHOSSEINI, S.;HAJIAN, M.;
HOSSEINI, L.; ABEDI, P.; NILI, N.; RAHMANI, H. R.; NASR-ESFAHAN, M. H. In vitro comparison of
egg yolk-based and soybean lecithin-based extenders for cryopreservation of ram semen.
Theriogenology, v. 73, p. 480-487, 2010.
GIL, J. L.; NIELS, S. L., RODRÍGUEZ-MARTÍNEZ, H. Influence of extender, temperature, and addition
of glycerol on post-thaw sperm parameters in ram semen. Theriogenology, p. 1241-1255, 2003.
PALAVRAS-CHAVE: Diluidor, Ovinos, Buriti.