CARAcTERIZAÇÃO MOLECULAR DO
GENE Matrix GLA PROTEIN EM
DOENTES COM CANCRO COLORETAL
Dados preliminares
Eusébio M.1, Caiado H.2, Antunes A.G.1, Vaz A.M.1, Queiróz P. 1, Caldeira P.1, Tiago D.M.2,
Conceição N.2, Cancela M.L.2, Guerreiro H.1
1Serviço
de Gastrenterologia, Centro Hospitalar do Algarve
2Laboratório
de Biologia Molecular, Universidade do Algarve
Introdução
 O gene MGP codifica uma proteína da matriz extracelular (Matrix Gla
Protein)
 Proteína membro da família de proteínas com domínio Gla, dependentes
de vitamina K
Carboxilação
Resíduos de glutamato
Gama carboxiglutamato
Vitamina K
Alta afinidade para cálcio
ionizado
 Proteínas Gla : fatores II, VII, IX e X, Proteína C e S, proteína Gla da matriz,
osteocalci na
Introdução
Proteína Gla da matriz
 Existente numa variedade de tecidos – car tilagem, osso, ar térias, coração,
pulmão, rim
MGP
Carboxilação
Fosforilação
MGP ativa
 Principal função:
 inibição da calcificação vascular e da cartilagem
 Inibição da formação de hidroxiapatite no osso
Vitamina K
Introdução
Proteína Gla da matriz
 Síndrome de Keutel – mutação com perda de função do gene MGP
 Calcificação ectópica e ossificação
 Estenose da artéria pulmonar
 Dismorfia facial
 Ratinhos M GP knoc kout (M GP
-/ - ) 1
 Mineralização vascular maciça com morte por rutura vascular às 8 semanas de
nascimento
1Luo
G. et al. Spontaneous calcification of arteries and cartilage in mice lacking matrix GLA protein. Nature 1997; 385
Introdução
Proteína Gla da matriz
 N o s o u t ro s te c i d o s te m s i d o s u g e r i d o u m p a p e l n a d i fe r e n c ia ç ã o c e l ul a r e n a
p r o g r e s s ã o t u m o r al
MGP e carcinogénese
 Papel da proteína MGP na oncogénese não está definido
 Correlação entre expressão tumoral e cancro depende do local do tumor
Introdução
MGP e carcinogénese
 Carcinoma de células renais2 – aumento da expressão de MGP
 Relação inversa entre o nível de expressão de MGP e tamanho do tumor, metastização
ganglionar e grau tumoral
 Cancro da mama3 – níveis de mRNA de MGP mais elevados nos doentes com pior prognóstico
 Glioblastomas4 – sobre-expressão de MGP – associação com pior prognóstico, via invasão tumoral
2Levedakou
E.N. et al. Expression of the matrix Gla protein in urogenital malignancies. Int J Cancer 1992; 52 (4): 534-7
K. et al. Prognostic value of matrix Gla protein in breast cancer. Molecular Medicine Reports 2009; (2): 549-553
4Mertsch S. et al. Matrix GLA protein (MGP): an overexpressed and migration-promoting mesenchymal component in glioblastoma. BMC Cancer 2009; 9 (302)
3Yoshimura
Introdução
No cancro coloretal5…
 Diminuição da expressão do mRNA MGP no tecido tumoral em comparação
com tecido coloretal adjacente
 Sem relação com grau de diferenciação tumoral/estadiamento
Objetivo
 Caracterizar a expressão deste gene e identificar eventual relação com os diferentes
estadios do CCR
5 Fan
CW et al. Down regulation of matrix Gla protein messenger RNA in human colorectal adenocarcinomas. Cancer Letters. 2001;165: 63-69
MATERIAL E MÉTODOS
 Selecionados doentes com adenocarcinoma coloretal
 Registados dados demográficos (idade, sexo) e do tumor (localização , grau
de diferenciação e estadiamento TNM)
 Durante a colonoscopia, foram efetuadas biópsias de mucosa coloretal
adjacente normal (a > de 5cm do tumor) e de tumor
 Colocadas as amostras em tubos de colheita próprios
Mucosa
Normal
Mucosa
Tumoral
MATERIAL E MÉTODOS
 Armazenamento imediato das amostras em congelador
 Extração do RNA das amostras 
Homogenização
das amostras
Mistura com
fenol/clorofórmio
Centrifugação e
extração de RNA
Quantificação e
análise da
integridade do
RNA
 Análise da expressão do gene MGP através da técnica de Polimer ase Chain
Reaction (PCR) em tempo real
Chomczynski
et al. Analytical Biochemistry (1987)
RESULTADOS
 20 doentes
 Idade média: 71 ±13 anos
 Género:
11 (55%)
9 (45%)
Sexo masculino
Sexo feminino
 História familiar de cancro coloretal: 7 doentes (35%)
 Marcadores tumorais:
 CEA elevado – 60%
 CA 19.9 elevado – 20%
RESULTADOS
 Localiz ação tumoral:
Ângulo hepático - 1
 Cólon direito - 6 (30%)
C. Ascendente 1
 Cólon esquerdo - 4 (20%)
 Reto - 10 (50%)
Cego – 4
Sigmóide - 4
Reto – 10
 Grau de diferenciação tumoral:
11 (55%)
8 (40%)
1 (5%)
Bem
Moderadamente
Pouco
RESULTADOS
 Estadiamento TNM:
6
3
2
3
2
2
1
I
IIA
IIB
 M utação K -r as : 7 doentes (35%)
IIIA
1
IIIB
IIIC
IVA
IVB
RESULTADOS
 Expressão do Gene M GP
Sobre-expressão do gene MGP no tecido tumoral
comparativamente com mucosa normal
DISCUSSÃO E CONCLUSÃO
 L i m i t aç õ e s d o e s t ud o :
 Amostra pequena
 Conservação dos tecidos para extração do RNA
 Estudo prospetivo
 Resultados preliminares mostram uma sobre-expressão do gene nas amostras tumorais
 Necessário aumentar a amostra, apurar técnica de conservação das amostras/análise das amostras
 Avaliar associação com estadiamento para mais conclusões
 Tentar perceber o papel deste gene a nível fisiológico no adenocarcinoma do cólon
DISCUSSÃO E CONCLUSÃO
 A c o n f i r ma r e m – s e e s te s d a d o s e u m a a s s o c i a ç ã o c o m m a i o r g r av i d a d e , e s te g e n e
p o d e r á te r u m p a p e l p r o g n ó s t i co r e l eva n te , e m c o n j ug a ç ã o c o m o u t ro s f a to r e s , b e m
c o m o s e r a l v o p o te n c i al d e te r a p i a g e n é t i c a
OBRIGADA