Questionário - Proficiência Clínica Área: Microbiologia Rodada: Jun/12 Tema COLETA E PROCESSAMENTO INICIAL DE AMOSTRAS CLÍNICAS Elaboradora Carmen Paz Oplustil. Biomédica formada pela UNISA, Mestre em microbiologia pelo ICB-USP, Diretora da Formato Clinico – Projetos em Medicina Diagnóstica. Introdução A coleta de amostras para os exames de microbiologia é a fase mais importante do exame. Uma coleta realizada de forma padronizada e dentro das melhores normas garante o resultado correto do exame. O processamento inicial das amostras também tem papel importante no resultado final do exame microbiológico, porque após uma coleta bem feita os procedimentos realizados internamente devem ser adequados para garantir a recuperação dos microrganismos que eventualmente possam existir no material clinico examinado. Questão 1 Existem diversos pontos importantes a serem observados para garantir a qualidade do processo de coleta dos exames de microbiologia. Em termos gerais qual item dos citados abaixo não está correto? Questão 2 Questão 3 Questão 4 1. Coletar material do sítio atual de infecção com técnica de anti-sepsia adequada; 2. Materiais de coleta e transporte utilizados devem garantir a manutenção dos microrganismos antes do processamento inicial no laboratório; 3. Sempre que possível, coletar a amostra antes da administração de antimicrobianos; 4. No caso de coleta de hemocultura a coleta da amostra deve ser realizada no pico febril. A seguir apresentamos diversas formas de coleta de amostras clinicas, tempo de transporte e temperatura até o processamento inicial para cultura. Entre estas formas, qual delas não está de acordo com as normas de boas práticas de microbiologia? 1. Amostras do trato respiratório inferior devem ser colhidas em frasco estéril e encaminhadas até 2 horas a temperatura ambiente e podem ser mantidas no laboratório refrigeradas até 24 horas para o processamento inicial; 2. Amostras de urina devem ser colhidas em frasco estéril de boca larga e encaminhadas até 6 horas a temperatura ambiente e podem ser mantidas refrigeradas até 24 horas até o processamento inicial; 3. Amostras de fezes para coprocultura devem ser colhidas em frasco com conservante e encaminhadas ao laboratório até 12 horas e se mantidas refrigeradas podem ser encaminhadas até 24 horas após a coleta; 4. Amostras de líquor devem ser colhidas em tubo estéril e encaminhadas imediatamente ao laboratório à temperatura ambiente para processamento. Os laboratórios devem manter uma lista de amostras clínicas que devem ser rejeitadas para processamento em microbiologia. Das alternativas a seguir, assinale a opção correta: 1. Amostras de escarro com aspecto de saliva, amostras de urina de 24 horas para cultura de micobactérias, cultura de secreção vaginal para cultura de anaeróbios, cateter de Foley, secreção traqueal para cultura de microrganismos aeróbios em geral; 2. Urina de jato médio, fezes sem conservante, ponta de cateter em tubo estéril, biopsia em frasco estéril sem solução salina estéril, escarro para cultura de microrganismos em geral; 3. Amostras em formalina, escarro de 24 horas para pesquisa de micobactérias, cateter de Foley, ponta de cateter em meio de transporte, fezes sem conservante colhido a mais de 24 horas, sangue para bacterioscopia pelo Gram; 4. Amostra de lavado brônquico para pesquisa de anaeróbios, urina de jato médio, ponta de cateter em frasco estéril, um swab único de secreção de ferida cirúrgica para cultura de aeróbios, anaeróbios e fungos. A coleta de amostras de urina para cultura deve ser realizada de forma correta para garantir um resultado adequado. Das normas descritas a seguir, assinale a alternativa correta: 1. Coletar a amostra antes da antibioticoterapia. Solicitar ao paciente para reter a urina de 2 a 3 horas antes da coleta. Fazer anti-sepsia da região genital com água e sabão ou clorexidina aquosa a 0,2%. Coletar a amostra em um frasco estéril de boca larga desprezando o primeiro jato de urina e coletando o jato médio; 2. Solicitar ao paciente para reter a urina de 2 a 3 horas antes da coleta. Fazer a anti-sepsia com clorexidina aquosa a 0,2%, coletar toda a amostra em um frasco de boca larga até o volume máximo de 30 ml; 3. Coletar a amostra antes da antibioticoterapia. Fazer anti-sepsia da região genital com água e sabão ou clorexidina aquosa a 0,2% e coletar toda a amostra em frasco estéril de boca larga até o volume de 30 ml de urina; 4. Coletar toda a amostra em frasco limpo após fazer uma limpeza da região genital com água (utilizar o chuveirinho). Observar o volume mínimo de 10 ml e máximo de 30 ml. Página 1 de 4 Questionário - Proficiência Clínica Área: Microbiologia Rodada: Jun/12 Questão 5 Questão 6 Questão 7 Questão 8 Questão 9 Quando falamos da coleta de hemocultura existe uma grande divergência no que se refere a definição do que realmente é uma hemocultura. Assinale a alternativa correta sobre a definição de hemocultura: 1. Uma hemocultura é definida como uma amostra de sangue obtida de uma punção venosa e que é inoculada em um frasco aeróbio e outro anaeróbio, ou dois frascos aeróbios; 2. Uma hemocultura é definida como a coleta de sangue em dois frascos sendo cada frasco inoculado com sangue colhido de um local de punção diferente (braço esquerdo e depois direito); 3. Uma hemocultura é definida como a coleta de um frasco aeróbio de uma única punção; 4. Uma hemocultura é definida como a coleta de dois pares de frascos (4 frascos) de uma única punção venosa. Quanto à coleta de hemocultura existem vários pontos importantes que devem ser considerados. Das alternativas a seguir qual está incorreta? 1. Coletar a amostra após rigorosa anti-sepsia com clorexidina alcoólica, na ascensão da temperatura e se possível antes da antibioticoterapia; 2. Em crianças o ideal é fazer anti-sepsia com álcool 70% já que em alguns casos a clorexidina pode ser tóxica; 3. O índice aceitável de contaminação nas coletas de hemocultura é de até 3%; 4. Ao fazer a coleta de sangue do cateter, desprezar o volume inicial de sangue antes de colocar a amostra no frasco apropriado para cultura. O Streptococcus beta-hemolítico do grupo B é um agente importante a ser pesquisado em mulheres grávidas. Existe uma padronização para a coleta de material para a pesquisa deste agente em mulheres na 35ª. a 37ª. semana de gestação. Qual das alternativas a seguir não está correta? 1. Deve ser colhido material do introito vaginal e anorretal com auxílio de um swab. O ideal é coletar um swab de cada local; 2. Não há necessidade de se fazer anti-sepsia prévia para a coleta do material para este exame; 3. Sempre deve ser colhida uma lâmina para realizar o Gram do material para verificar a qualidade da amostra; 4. O ideal é coletar o material com swab que tenha meio de transporte como Amies ou Stuart. A Hemocultura é um dos exames considerados críticos na microbiologia. O processamento adequado é muito importante para o sucesso do exame. Em relação ao processamento inicial devemos observar vários detalhes. Das alternativas a seguir qual não está correta? 1. Após a coleta de hemocultura, os frascos, independente da metodologia utilizada, devem ser colocados em uma estufa até o momento de serem encaminhados ao laboratório uma vez que a amostra já está em meio de cultura e ao colocar na estufa vamos agilizar o resultado; 2. Ao receber os frascos no laboratório colocar na estufa ou no equipamento sem realizar nenhum procedimento inicial; 3. Para laboratórios que utilizam métodos manuais para a hemocultura o ideal seria realizar um subcultivo e um Gram da amostra após 24 horas, 48 horas e 7 dias de incubação; 4. Para laboratórios que utilizam métodos automatizados o período total de incubação para a rotina é de 5 dias, após esse período os frascos podem ser descartados como negativos sem necessidade de realizar subcultivos ou Gram para confirmar o resultado. Recebemos no laboratório uma amostra de urina de uma criança de 2 anos de idade que foi coletada com saco coletor. A solicitação médica é de cultura de urina e exame de urina. O volume total de urina recebido foi de 1 ml. Como devemos proceder? 1. Semear a amostra com alça calibrada de 10 ul em meio de cultura apropriado. Colocar 10 ul da urina em uma lâmina para fazer um Gram e encaminhar o material para o setor que irá realizar o exame de urina (urinálise); 2. Solicitar nova amostra porque o volume não é o ideal para realizar o exame de cultura e de urina; 3. Colocar 10 ul da urina não centrifugada em uma lâmina para fazer um Gram e encaminhar o restante da amostra para o setor de urinálise; 4. Encaminhar a amostra para o setor de urinálise e informar que o volume não é suficiente para a realização dos dois exames e o melhor é realizar o exame de urina e não a cultura. Página 2 de 4 Questionário - Proficiência Clínica Área: Microbiologia Rodada: Jun/12 Questão 10 O processamento inicial dos materiais clínicos recebidos no laboratório de microbiologia é uma das partes importantes da análise geral do exame. Existe uma variedade de meios de cultura disponíveis para o processamento inicial dos materiais clínicos, mas o laboratório deve escolher o melhor meio para o isolamento do patógeno mais provável de ser encontrado no material clínico processado. Na lista a seguir, correlacione quais são os meios mais adequados para o processamento inicial das amostras citadas e assinale a alternativa correta: Material Clínico Questão 11 Questão 12 Questão 13 Questão 14 Meio de Cultura A. Secreção vaginal 1. ágar sangue B. Urina jato médio 2. ágar chocolate C. Hemocultura 3. ágar Mcconkey D. Secreção ocular 4. CLED E. Urina primeiro jato 5. Thayer Martin 1. A:1-5/ B:3-4/ C:1-2-3/ D:1-2/ E:2-5; 2. A:1/ B:4/ C:1-3/ D:1/ E:2; 3. A:1-5/ B:4/ C:1/ D:2/ E:5; 4. A:1-2/ B:3-4/ C:1-2/ D:2/ E:1-5. As amostras de escarro em geral devem ser avaliadas antes de serem processadas para cultura para verificar se a amostra apresenta boa qualidade. Isto significa que a amostra deve ter: 1. Menos que 10 células epiteliais/campo e mais que 25 leucócitos por campo; 2. Menos que 10 células epiteliais/campo e mais de 10 leucócitos por campo; 3. Menos de 25 células epiteliais/campo e mais de 10 leucócitos por campo; 4. Menos de 25 células epiteliais/campo e mais de 25 leucócitos por campo. O processamento inicial de amostra para coprocultura deve ser realizado com o objetivo de isolar os patógenos que mais frequentemente causam diarreia em determinada faixa etária. No caso de uma amostra de coprocultura de uma criança de 2 anos em quais meios de cultura deve-se semear a amostra? 1. Ágar MacConkey, ágar SS, ágar Karmali e caldo tetrationato; 2. Ágar EMB, ágar SS e caldo tetrationato; 3. Ágar MacConkey,ágar verde-brilhante; 4. Ágar EMB, ágar CIN e caldo tetrationato. O processamento inicial de líquido ascítico e pleural é de extrema importância uma vez que o volume recebido muitas vezes é grande e a quantidade de bactérias presentes pode não ser muito grande. Pensando nisso qual das alternativas a seguir não está correta quando falamos do processamento inicial destas amostras? 1. Se o volume de líquido for maior que 1 ml centrifugar uma parte da amostra de 3000 a 5000 rpm/15 minutos, do sedimento realizar uma lâmina para Gram e semear por esgotamento em ágar sangue e ágar chocolate (este apenas para o líquido pleural), a outra parte inocular em um frasco de hemocultura (10 ml por frasco); 2. Colocar até 5 ml em um frasco de hemocultura; 3. Se o volume for menor que 1 ml centrifugar de 3000 a 5000 rpm/15 minutos, do sedimento realizar uma lâmina para Gram e semear por esgotamento em ágar sangue e ágar chocolate (este apenas para o líquido pleural); 4. Se o volume for maior que 1 ml colocar o líquido em um frasco de hemocultura (10 ml por frasco). Em toda solicitação de cultura de micobactérias deve ser realizada uma baciloscopia do material quando recebido no laboratório. O resultado dessa baciloscopia deve ser liberado em no máximo: 1. 48 horas do recebimento da amostra no laboratório; 2. 48 horas da entrega da amostra pelo paciente no laboratório; 3. 24 horas da entrega da amostra pelo paciente no laboratório; 4. 36 horas do recebimento da amostra no laboratório. Página 3 de 4 Questionário - Proficiência Clínica Área: Microbiologia Rodada: Jun/12 Questão 15 Referências Bibliográficas Materiais que contém flora habitual normal devem ser descontaminados para realizar a cultura de micobactérias. No processo de descontaminação um dos passos importantes é a centrifugação da amostra após o tratamento. O mais adequado é centrifugar a: 1. 2500 rpm por 15 minutos; 2. 3000 x g/15 minutos; 3. 5000 rpm/10 minutos; 4. 3000 rpm/ 10 minutos • Oplustil,C.P;Zoccoli,C.M;Toboui,N.R.;Sinto,S.I. Procedimentos Básicos em Microbiologia Clínica. São Paulo, 3ª.ed. Sarvier, 2010. • Mendes, C.M.;Oplustil, C.P.;Zoccoli, C.M.;Sinto,S.I.. Microbiologia Clinica: 156 perguntas e respostas. São Paulo, Sarvier, 2005. • Manual Nacional de Vigilância Laboratorial da Tuberculose e outras Micobactérias. Ministério da Saúde – Secretaria de Vigilância em Saúde – Departamento de Vigilância Epidemiológica. Brasília – 2008. • Garcia, L. Clinical Microbiology Procedures Handbook. Second Update, 3ed. Washington, D.C., American Society for Microbiologia, 2007. • Versalovic, J. Manual of Clinical Microbiology, 10th ed. Washington, D.C , American Society for Microbiology, 2011. Página 4 de 4