Avaliação da resposta imunológica murina contra
epitopos miméticos de Cysticercus bovis
Rodrigo Pedroso Madlener de Almeida
UFPR/TN
Juliana Ferreira de Moura, Larissa Magalhães Alvarenga, Alessandra Becker
Introdução
A cisticercose bovina é uma doença parasitária provocada pelo
desenvolvimento dos metacestódeos de Taenia saginata
(Cysticercus bovis) nos tecidos musculares de bovinos, sendo
considerada um problema de saúde pública causador de prejuízos
na pecuária de corte. A obtenção de peptídeos miméticos
imunogênicos permite uma gama de possibilidades de estudo,
dentre elas a produção de anticorpos com a finalidade de
diagnosticar determinadas doenças ou imunoproteger um
organismo. Tendo isso em vista, o objetivo deste trabalho foi
avaliar a indução de resposta imunológica humoral de peptídeos
miméticos de T. saginata e sua interação com o antígeno de
origem.
Resultados
Gráfico 1 Foram testadas diferentes
diluições dos soros utilizando as
proteínas de C. bovis imobilizadas na
microplaca, que após leitura a 492 nm
em espectrofotômetro, resultaram no
gráfico ao lado com as absorbâncias
das amostras nas diferentes diluições.
A reatividade foi baixa, ficando em
torno de 0,350 para a menor diluição
(1:50), mesmo os soros apresentando
uma titulação alta (1:8000).
Figura 1 Após eletrotransferência para membrana de
PVDF da corrida eletroforética das proteínas de C. bovis,
os soros dos 4 mimotopos utilizados foram testados (3-6)
em conjunto com 2 controles negativos (1 e 2),
resultando na figura ao lado, na qual as linhas azuis
representam os pesos moleculares em kDa. Apesar de
apresentarem algumas bandas não recorrentes no perfil
dos controles negativos, foi preciso uma diluição 16
vezes menor (1:500) do que a titulação (1:8000),
indicando que
houve produção de anticorpos
específicos, mas, provavelmente, em baixa quantidade.
Material e Métodos
•Imunização de camundongos fêmea SWISS composto de 4 doses
com 14 dias de intervalo e uma 5ª dose, 3 dias após a 4ª dose com
fagotopos obtidos através da técnica de Phage Display
selecionados por sua reatividade com proteínas extraídas de C.
bovis.
•ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay) para titulação dos
soros murinos obtidos ao final do programa de imunização e para a
confirmação da reatividade dos anticorpos murinos produzidos com
proteínas de C. bovis.
•Western Blotting para comparação com o resultado do ELISA em
relação a reatividade dos anticorpos murinos com proteínas de C.
bovis.
CUI, J., REN, H. J.; LIU, R. D. ; WANG, L. ; ZHANG, Z. F. ; WANG, Z.Q. Phage-displayed specific
polypeptide antigens induce significant protective immunity against Trichinella spirallis infection
in BALB/c mice. Vaccine. v. 31, p. 1171-1177. 2013.
HELL, R. C., AMIM, P., de ANDRADE, H. M., de AVILA, R. A., FELICORI, L., OLIVEIRA, A. G.,
OLIVEIRA, C. A., NASCIMENTO, E., TAVARES, C. A., GRANIER, C., & CHAVEZ-OLORTEGUI, C.
Immunodiagnosis of human neurocysticercosis using a synthetic peptide selected by phagedisplay. Clinical Immunology, 131, 129-138. 2009.
YANG, W.; LAI, J.; PENG, K.; CHIANG. ; WENG, C. ; SHIUAN, D. Epitope mapping of Mycoplasma
hyopneumoniae using phage displayed peptide libraries and the immune responses of the selected
phagotopes. Journal of Immunological Methods, v. 304, n. 1-2, p. 15-29. 2005.
Conclusão
Os resultados indicam que houve produção específica de anticorpos contra os
mimotopos, evidenciada pela alta titulação dos soros murinos (1:8000) em
comparação com trabalhos similares (Yang et al., 2005, Hell et al., 2009 e Cui et
al., 2013) e pelas bandas específicas no perfil de Western Blotting. Porém, os
anticorpos gerados não foram capazes de reconhecer, satisfatoriamente, as
proteínas de C. bovis, sendo necessários futuros estudos, possivelmente com
peptídeos sintéticos, para nova tentativa de produção mais específica de
anticorpos durante a imunização dos animais.