BUTZLER
63514
SELECTIVE MEDIUM FOR THE ISOLATION OF CAMPYLOBACTER
1- INTENDED USE
Butzler agar is used for the selective isolation of C. jejuni and C. coli from diarrhoeal stools (bacteria constituting a frequent
cause of bacterial gastroenteritis).
2- PRINCIPLE
The selectivity of this medium is based on the presence of an antifungal and antibiotic mixture, which inhibits the growth of
associated flora (Enterobacteriaceae, Pseudomonas, Staphylococci, enterococci, yeasts).
Selective mixture:
- Cefoperazone and colistin inhibit the majority of Gram (-) bacteria; the growth of Pseudomonas and certain strains of
Enterobacteriaceae frequently resistant to antibiotics (Proteus, Serratia, Citrobacter) is also inhibited.
- Rifampicin inhibits the growth of most Gram (+) bacteria.
- Amphotericin B inhibits the growth of the majority of yeasts.
The growth of Campylobacter is promoted by the presence of sheep blood.
3- HOW SUPPLIED
• Ready to use medium:
- box of 10 Petri dishes (90 mm) (BUTZ)
code 63514
4- THEORETICAL COMPOSITION (g/l of distilled water)
Basic medium for blood agar:
Mixture of peptones
16
Meat extract
2.5
Yeast extract
2.5
Sodium chloride
5
Agar
14
Selective supplement (Cefoperazone, Rifampicin, Amphotericin B, Colistin)
+ 5% of sterile sheep blood
5- STORAGE
• Ready to use medium: at +2-8°C.
The expiry date and batch number are indicated on the packaging.
6- INSTRUCTIONS
Material:
• Material provided: Butzler medium.
Inoculation:
Soft or liquid stools are deposited directly onto the medium; preculture in enrichment broth is not necessary. Microscopic
examination of the stools of patients with Campylobacter enteritis is very characteristic: disruption of the normal equilibrium of
bowel flora, which is replaced by a very large number of Campylobacter with very typical morphology and motility (so-called
“corkscrew” or “flight of swallows” appearance).
Refer to current recommendations for the storage of stools (1).
Incubation:
Incubate for 48 hours at 35-37°C in a micro-aerophilic atmosphere. If the culture is negative after 48 hours, observe the agar
medium daily until the 5th day.
N.B.: Incubation at 42°C reinforces the selective effect for thermophilic Campylobacter (C. coli and C. jejuni).
Reading:
Appearance of the colonies:
- at 24 hours: very small, pin-head colonies.
- at 48 hours: larger, round, prominent, shiny or very flat with characteristic spreading along the inoculation streak.
Gram stain of the colonies:
- After 24 to 48 hours of culture: Gram negative commas, S-shaped, short spirillae.
- Older cultures: coccoid forms, with poor Gram staining that are difficult to subculture.
Biochemical identification of the colonies
Catalase
Oxidase
Culture at 25°C
Culture at 37°C
Culture at 42°C
Hydrolysis of hippurate (1)
Sensitivity to nalidixic acid (2)
C. JEJUNI
+
+
++
+++
+
S
C. COLI
+
+
++
+++
S
C. FETUS
+
+
+
+
V
R
V = variable
(1) Test performed on a dense suspension in 0.4 ml of 1% sodium hippurate solution in phosphate buffer pH 7.3 after 2 hours of incubation at 37°C, with
revelation by the addition of a freshly prepared 3.5% ninhydrin solution in a mixture of butanol-acetone (50/50); a positive reaction corresponds to the
formation of a violet colour in less than 10 minutes.
7
(2) Agar diffusion technique using a 30 mg disk and an inoculum of 10 bacteria/ml.
7- PERFORMANCE/QUALITY CONTROL OF THE TEST
• Appearance of the ready to use medium: red agar
• The growth performances of Butzler medium are verified with the following strains:
STRAINS
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Salmonella typhimurium ATCC 14028
Candida albicans ATCC 2091
Campylobacter jejuni
Campylobacter coli
CULTURE RESULT AFTER 48 hours at 35-37°C
No growth
No growth
No growth
Good growth
Good growth
8- QUALITY CONTROL OF THE MANUFACTURER
All manufactured reagents are prepared according to our Quality System, starting from reception of raw material to the final
commercialization of the product. Each lot is submitted to quality control assessments and is only released to the market, after
conforming to pre-defined acceptance criteria. The records relating to production and control of each single lot are kept within
Bio-Rad.
9•
•
•
•
LIMITS OF USE
Some strains, such as Campylobacter fetus subsp., may not grow on this medium due to their nutritional requirements.
Some strains of Enterobacteriaceae may not be totally inhibited.
The inhibitory effect is decreased in the presence of an excessively heavy inoculum.
Complementary tests must be performed to identify the species of the strain isolated.
10- REFERENCES
1.Basic Laboratory Procedures in Clinical Bacteriology. World Health Organization, Geneva. 1991. 1st edition
2.BUTZLER J.P., DEKEYSER P., DETRAIN M., DEHAEN F. 1973. J. Pediat 82 : p. 493
3.LAUWERS, S., DE BOECK, M., BUTZLER J.P. 1978. Lancet 1 : p. 604-605.
BUTZLER
63514
MILIEU D'ISOLEMENT SÉLECTIF POUR CAMPYLOBACTER
IVD
1- APPLICATION
La gélose Butzler est un milieu utilisé pour l’isolement sélectif de C. jejuni et de C. coli à partir de selles diarrhéiques (germes
représentant une cause fréquente de gastro-entérites bactériennes).
2- PRINCIPE
La sélectivité de ce milieu est basée sur la présence d’un mélange antibiotique et antifongique, qui inhibe la flore associée
(entérobactéries, Pseudomonase, staphylocoques, entérocoques, levures).
Mélange sélectif :
- La céfopérazone et la colistine inhibe la majorité des bactéries à Gram (-) ; les Pseudomonas et certaines entérobactéries
fréquemment résistantes aux antibiotiques (Proteus, Serratia, Citrobacter) sont inhibées.
- La rifampicine inhibe la plupart des bactéries à Gram (+).
- L’amphotéricine B inhibe la majorité des levures.
La croissance des campylobacter est favorisée par la présence de sang de mouton.
3- PRESENTATION
• Milieu prêt à l’emploi
- coffret de 10 boites de Petri (90 mm) (BUTZ)
code 63514
4- COMPOSITION (en g/l d’eau distillée)
Milieu de base pour gélose au sang :
Mélange de peptones
16
Extrait de viande
2,5
Extrait de levure
2,5
Chlorure de sodium
5
Agar
14
Supplément sélectif (Céfopérazone, Rifampicine, Amphotéricine B, Colistine)
+ 5 % de sang de mouton stérile
5- CONSERVATION
• Milieu prêt à l’emploi : + 2 - 8°C
La date de péremption et le numéro de lot sont indiqués sur le conditionnement.
6- UTILISATION
Matériel :
• Matériel fourni : milieu Butzler
Ensemencement :
Les selles molles ou liquides sont déposées directement sur le milieu; une pré-culture en bouillon d’enrichissement n’est pas
nécessaire. L’examen microscopique des selles de patients présentant une entérite à Campylobacter est très caractéristique :
déséquilibre de la flore normale remplacée par un très grand nombre de Campylobacter à morphologie et mobilité très typiques
(dites en "tire-bouchon", ou en "vol d’hirondelles").
Pour la conservation des selles, se référer aux recommandations en vigueur (1).
Incubation :
Incuber pendant 48 heures à 35-37°C, en atmosphère micro-aérophile. Si la culture est négative en 48 heures, observer le milieu
gélosé tous les jours jusqu’au 5ème jour.
N.B. : Une incubation à 42°C renforce l’effet sélectif pour les Campylobacter thermophiles (C. coli et C. jejuni).
1
Lecture :
Aspect des colonies :
- à 24 heures : très petites, en tête d’épingle.
- à 48 heures : plus grosses, rondes, bombées, brillantes ou très plates avec étalement caractéristique le long de la strie d’isolement.
Coloration de Gram sur les colonies :
- Cultures de 24 à 48 heures : virgules, S, courtes spirilles à Gram négatif.
- Cultures plus âgées : formes coccoïdes, prenant mal la coloration de Gram et difficilement repiquables.
Identification biochimique des colonies
C. JEJUNI
C. COLI
C. FETUS
Catalase
+
+
+
Oxydase
+
+
+
Culture à 25°C
-
-
+
Culture à 37°C
++
++
+
Culture à 42°C
+++
+++
V
Hydrolyse de l’hippurate (1)
+
-
-
Sensibilité à l’acide nalidixique (2)
S
S
R
V = variable
(1) Recherche effectuée à l’aide d’une suspension dense dans 0,4 ml d’une solution d’hippurate de Na à 1 % en tampon phosphate pH 7,3 après 2 heures
d’incubation à 37°C, la révélation se fait par l’addition d’une solution extemporanée de ninhydrine à 3,5 % en mélange butanol-acétone (50/50) ; une réaction
positive se traduit par l’apparition d’une coloration violette en moins de 10 minutes.
(2) Technique par diffusion en gélose avec disque à 30 mg et un inoculum de 107 bactéries/ml.
7- PERFORMANCES / CONTRÔLE QUALITE DU TEST
• Aspect du milieu prêt à l’emploi : gélose rouge
• Les performances culturales du milieu Butzler sont contrôlées à l’aide des souches suivantes :
SOUCHES
RÉSULTAT DE LA CULTURE
EN 48 H à 35-37°C
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Inhibition
Salmonella Typhimurium ATCC 14028
Inhibition
Candida albicans ATCC 2091
Inhibition
Campylobacter jejuni
Bonne croissance
Campylobacter coli
Bonne croissance
8- CONTRÔLE QUALITE DU FABRICANT
Tous les produits fabriqués et commercialisés par la société Bio-Rad sont placés sous un système d'assurance qualité de la réception
des matières premières jusqu'à la commercialisation des produits finis. Chaque lot de produit fini fait l'objet d'un contrôle de qualité
et n'est commercialisé que s'il est conforme aux critères d'acceptation. La documentation relative à la production et au contrôle de
chaque lot est conservée par le fabricant.
9- LIMITES D’UTILISATION
• Du fait de leurs exigences nutritionnelles, certaines souches telles que Campylobacter fetus subsp. peuvent ne pas se développer
sur ce milieu.
• Certaines souches d’entérobactéries peuvent ne pas être totalement inhibées.
• L'effet inhibiteur est amoindri quand l'inoculum est trop important.
• Il est nécessaire de faire des tests complémentaires pour une identification d’espèce de la souche isolée.
10-REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
1.Basic Laboratory Procedures in Clinical Bacteriology. World Health Organization, Geneva. 1991. 1st edition
2.BUTZLER J.P., DEKEYSER P., DETRAIN M., DEHAEN F. 1973. J. Pediat 82 : p. 493
3.LAUWERS, S., DE BOECK, M., BUTZLER J.P. 1978. Lancet 1 : p. 604-605.
Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette France
Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00
Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33
07/2003
code: 18005 - A4
2
BUTZLER
63514
MEDIO SELECTIVO PARA EL AISLAMIENTO DE CAMPYLOBACTER
1- USO PREVISTO
El agar Butzler se usa para el aislamiento selectivo de C. jejuni y C. coli de heces diarreicas (bacterias que suponen una causa
frecuente de gastroenteritis bacteriana).
2- PRINCIPIO
La selectividad de este medio se basa en la presencia de una mezcla de antifúngicos y antibióticos, que inhibe el crecimiento
de la flora asociada (Enterobacteriaceae, Pseudomonas, Staphylococci, enterococci, levaduras).
Mezcla selectiva:
- La cefoperazona y la colistina inhiben la mayoría de las bacterias Gram (-); el crecimiento de Pseudomonas y
determinadas cepas de Enterobacteriaceae con frecuencia resistentes a los antibióticos (Proteus, Serratia, Citrobacter)
también se inhibe.
- La rifampicina inhibe el crecimiento de la mayoría de las bacterias Gram (+).
- La anfotericina B inhibe el crecimiento de la mayoría de las levaduras.
Se promueve el crecimiento de Campylobacter con la presencia de sangre de oveja.
3- CÓMO SE SUMINISTRA
• Medio listo para usar:
- caja de 10 placas de Petri (90 mm) (BUTZ) código 63514
4- COMPOSICIÓN TEÓRICA (g/l de agua destilada)
Medio básico para agar sangre:
Mezcla de peptonas
16
Extracto de carne
2,5
Extracto de levadura
2,5
Cloruro sódico
5
Agar
14
Suplemento selectivo (Cefoperazona, rifampicina, anfotericina B, colistina).
+ 5% de sangre de oveja estéril
5- CONSERVACIÓN
• Medio listo para usar: a +2-8°C
La fecha de caducidad y el número de lote están indicados en el envasado.
6- INSTRUCCIONES
Material:
• Material suministrado: Medio Butzler.
Inoculación:
Las heces blandas o líquidas se depositan directamente sobre el medio; no es necesario el precultivo en caldo de
enriquecimiento. El examen microscópico de las heces de pacientes con enteritis por Campylobacter es muy característico:
alteración del equilibrio normal de la flora intestinal, que es sustituida por un gran número de Campylobacter con morfología y
movilida muy típicas (aspecto llamado de “sacacorchos” o “vuelo de golondrinas”)
Véanse las recomendaciones actuales sobre la conservación de heces (1).
Incubación:
Incube durante 48 horas a 35-37 °C en una atmósfera microaerófila. Si el cultivo es negativo después de 48 horas, observe el
medio agar diariamente hasta el 5° día.
Nota: La incubación a 42°C refuerza el efecto selectivo para el termófilo Campylobacter (C. coli y C. jejuni).
Lectura:
Aspecto de las colonias:
- a las 24 horas: colonias muy pequeñas, de cabeza de alfiler.
- a las 48 horas: mayores, redondas, prominentes, brillantes o muy planas con extensión característica a lo largo de la
línea de inoculación.
Tinción de Gram de las colonias:
- Después de 24 a 48 horas de cultivo: Comas Gram negativas, espirilas cortas, en forma de S.
- Cultivos más antiguos: formas cocoides, con escasa tinción de Gram, que son difíciles de subcultivar.
Identificación bioquímica de las colonias
Catalasa
Oxidasa
Cultivo a 25°C
Cultivo a 37°C
Cultivo a 42°C
Hidrólisis de hipurato (1)
Sensibilidad al ácido nalidíxico (2)
C. JEJUNI
+
+
++
+++
+
S
C. COLI
+
+
++
+++
S
C. FETUS
+
+
+
+
V
R
V = variable
(1) Prueba realizada en una suspensión densa en 0,4 ml de una solución de hipurato sódico al 1% en tampón fosfato pH 7,3 después de 2 horas de
incubación a 37°C, con revelación por la adición de una solución de ninhidrina al 3,5% recién preparada en una mezcla de butanol-acetona (50/50); una
reacción positiva corresponde a la formación de un color violeta en menos de 10 minutos.
7
(2) Técnica de difusión en agar usando un disco de 30 mg y un inóculo de 10 bacterias/ml.
7•
•
RENDIMIENTO / CONTROL DE CALIDAD DE LA PRUEBA
Aspecto del medio listo para usar: agar rojo
Los rendimientos de crecimiento del medio Butzler se verifican con las siguientes cepas:
CEPAS
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Salmonella typhimurium ATCC 14028
Candida albicans ATCC 2091
Campylobacter jejuni
Campylobacter coli
RESULTADO DEL CULTIVO DESPUÉS DE 48 horas
a 35-37 °C
Sin crecimiento
Sin crecimiento
Sin crecimiento
Buen crecimiento
Buen crecimiento
8- CONTROL DE CALIDAD DEL FABRICANTE
Todos los reactivos fabricados se elaboran según nuestro sistema de calidad, que va desde la recepción de las materias
primas hasta la comercialización final del producto. Cada lote se somete a valoraciones de control de calidad y sale al mercado
sólo cuando está de acuerdo con los criterios de aceptación predefinidos. Los registros relativos a la producción y al control de
cada lote se conservan en Bio-Rad.
9•
•
•
•
LÍMITES DE USO
Debido a los requisitos nutricionales, algunas cepas, como las subespecies de Campylobacter fetus, pueden no crecer en
este medio.
Algunas cepas de Enterobacteriaceae pueden no inhibirse totalmente.
El efecto inhibidor disminuye en presencia de un inóculo excesivamente pesado.
Deben realizarse pruebas complementarias para identificar la especie de la cepa aislada.
10- BIBLIOGRAFÍA
1.Basic Laboratory Procedures in Clinical Bacteriology. World Health Organization, Geneva. 1991. 1st edition
2.BUTZLER J.P., DEKEYSER P., DETRAIN M., DEHAEN F. 1973. J. Pediat 82 : p. 493
3.LAUWERS, S., DE BOECK, M., BUTZLER J.P. 1978. Lancet 1 : p. 604-605.
BUTZLER
63514
SELEKTIVES MEDIUM FÜR DIE ISOLIERUNG VON CAMPYLOBACTER
1- VERWENDUNGSZWECK
Butzler-Agar wird für die selektive Isolierung von C. jejuni und C. coli aus Diarrhoe-Stuhlproben verwendet (Bakterien sind die
Ursache für eine bakterielle Gastroenteritis).
2- PRINZIP
Die Selektivität dieses Mediums basiert auf dem Vorliegen einer Mischung aus Antimykotika und Antibiotika, die das Wachstum
assoziierter Flora (Enterobacteriaceae, Pseudomonas, Staphylokokken, Enterokokken, Hefen) hemmt.
Selektive Mischung:
- Cefoperazon und Colistin hemmen die meisten gramnegativen Bakterien; das Wachstum von Pseudomonas und
manchen, gegenüber Antibiotika (Proteus, Serratia, Citrobacter) häufig resistenten Enterobacteriaceae-Stämmen wird
ebenfalls gehemmt.
- Rifampicin hemmt das Wachstum der meisten grampositiven Bakterien.
- Amphotericin B hemmt das Wachstum der meisten Hefen.
Das Wachstum von Campylobacter wird durch das vorhandene Schafsblut gefördert.
DARREICHUNGSFORM
Gebrauchsfertiges Medium:
Packung mit 10 Petrischalen (90 mm) (BUTZ)
3•
Art.-Nr. 63514
4- THEORETISCHE ZUSAMMENSETZUNG (g/l destilliertes Wasser)
Basismedium für Blutagar:
Pepton-Mischung
16
Fleischextrakt
2,5
Hefeextrakt
2,5
Natriumchlorid
5
Agar
14
Selektiver Zusatz (Cefoperazon, Rifampicin, Amphotericin B, Colistin)
+ 5% steriles Schafsblut
LAGERUNG
Gebrauchsfertiges Medium: bei +2 - 8°C.
Das Verfallsdatum und die Chargennummer sind auf der Verpackung angegeben.
5•
6- GEBRAUCHSANWEISUNG
Material:
• Geliefertes Material: Butzler-Medium.
Beimpfung:
Weiche oder flüssige Stuhlproben werden direkt auf das Medium gegeben. Eine Vorkultur in Anreicherungsbouillon ist nicht
erforderlich. Unter dem Mikroskop weisen die Stuhlproben der Patienten mit Campylobacter-Enteritis typische Merkmale auf:
Störung des normalen Gleichgewichts der Darmflora, die durch eine große Anzahl an Campylobacter mit typischer Morphologie
und Motilität (der so genanntem “Korkenzieher-“ oder “Schwalbenschwarm”-Erscheinung) ersetzt ist.
Die Lagerbedingungen für Stuhlproben entnehmen Sie bitte den aktuellen Empfehlungen (1).
Inkubation:
48 Stunden bei 35-37°C in mikroaerophiler Atmosphäre inkubieren. Ist die Kultur nach 48 Stunden negativ, das Agarmedium
täglich bis zum 5. Tag beobachten.
Bitte beachten: Eine Inkubation bei 42°C verstärkt den selektiven Effekt thermophiler Campylobacter (C. coli und C. jejuni).
Ablesen der Ergebnisse:
Erscheinung der Kolonien:
- nach 24 Stunden: sehr kleine Stecknadelkopf-Kolonien.
- nach 48 Stunden: größere, runde, herausragende, glänzende oder sehr flache Kolonien mit typischer Verteilung über den
Ausstrich.
Gramfärbung der Kolonien:
- Nach 24 bis 48 Stunden der Kultur: gramnegative Kommabazillen, S-förmige, kurze Spirillen.
- Ältere Kulturen: kokkenähnliche Formen mit geringer Gramfärbung, von denen nur schwierig eine Subkultur angelegt
werden kann.
Biochemische Identifizierung der Kolonien
Catalase
Oxidase
Kultur bei 25°C
Kultur bei 37°C
Kultur bei 42°C
Hydrolyse von Hippurat (1)
Empfindlichkeit gegen Nalidixinsäure (2)
C. JEJUNI
+
+
++
+++
+
S
C. COLI
+
+
++
+++
S
C. FETUS
+
+
+
+
V
R
V = variabel
(1) Der Test wurde mit einer dichten Suspension in 0,4 ml 1%iger Natriumhippuratlösung in Phosphatpuffer, pH 7,3, nach 2stündiger Inkubation bei 37°C
mit Nachweis durch Zugabe einer frisch hergestellten, 3,5%igen Ninhydrinlösung in einer Butanol-Aceton-Mischung durchgeführt (50/50); eine positive
Reaktion entspricht dem Auftreten einer violetten Färbung in weniger als 10 Minuten.
7
(2) Agardiffusion mittels einem 30 mg-Blättchen und einem Inokulum von 10 Bakterien/ml.
7•
•
LEISTUNG/QUALITÄTSKONTROLLE DES TESTS
Erscheinung des gebrauchsfertigen Mediums: roter Agar.
Die Leistungsmerkmale des Wachstums auf Butzler-Medium werden mit folgenden Stämmen überprüft:
STÄMME
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Salmonella typhimurium ATCC 14028
Candida albicans ATCC 2091
Campylobacter jejuni
Campylobacter coli
KULTURERGEBNIS NACH 48 Stunden bei 35-37°C
Kein Wachstum
Kein Wachstum
Kein Wachstum
Gutes Wachstum
Gutes Wachstum
8- QUALITÄTSKONTROLLE DES HERSTELLERS
Alle von der Firma Bio-Rad hergestellten Reagenzien unterliegen einem Qualitätssicherungssystem vom Rohstoffeingang bis
zur Vermarktung der Fertigprodukte. Jede Fertigproduktcharge wird einer Qualitätskontrolle unterzogen und nur dann verkauft,
wenn sie den Freigabekriterien entspricht. Die Unterlagen bezüglich Herstellung und Kontrolle der einzelnen Chargen werden
bei Bio-Rad aufbewahrt.
9•
•
•
•
GRENZEN DES TESTS
Aufgrund spezifischer Anforderungen an die Nährstoffe wachsen manche Stämme, wie z. B. die Subspezies Campylobacter
fetus, auf diesem Medium unter Umständen nicht.
Manche Enterobacteriaceae-Stämmen werden unter Umständen nicht vollkommen gehemmt.
Die Hemmwirkung wird durch ein übermäßig schweres Inokulum gesenkt.
Zur Identifizierung der Spezies des isolierten Stammes müssen zusätzliche Tests durchgeführt werden.
10- LITERATUR
1.Basic Laboratory Procedures in Clinical Bacteriology. World Health Organization, Geneva. 1991. 1st edition
2.BUTZLER J.P., DEKEYSER P., DETRAIN M., DEHAEN F. 1973. J. Pediat 82 : p. 493
3.LAUWERS, S., DE BOECK, M., BUTZLER J.P. 1978. Lancet 1 : p. 604-605.
BUTZLER
63514
MEZZO SELETTIVO PER L’ISOLAMENTO DI CAMPYLOBACTER
1- USO PREVISTO
L’agar Butzler è usato per l’isolamento selettivo di C. jejuni e C. coli da feci diarroiche (batteri che costituiscono una causa
frequente di gastroenterite batterica).
2- PRINCIPIO
La selettività di questo mezzo è basata sulla presenza di una miscela antifungina e antibiotica, che inibisce la crescita di flora
associata (Enterobacteriaceae, Pseudomonas, Stafilococchi, Enterococchi, lieviti).
Miscela selettiva:
- Cefoperazone e colistina inibiscono la maggioranza dei batteri Gram (-): la crescita di Pseudomonas e alcuni ceppi di
Enterobacteriaceae frequentemente resistenti agli antibiotici (Proteus, Serratia, Citrobacter) è anch’essa inibita.
- Rifampicina inibisce la crescita della maggior parte dei batteri Gram (+).
- Amfotericina B inibisce la crescita della maggior parte dei lieviti.
La crescita di Campylobacter à favorita dalla presenza di sangue di pecora.
3•
PRESENTAZIONE
Mezzo pronto all’uso:
scatola da 10 piastre Petri (90 mm) (BUTZ)
4- 4 - COMPOSIZIONE TEORICA (G/L DI ACQUA DISTILLATA)
Mezzo base per agar ematico:
Miscela di peptoni
Estratto di carne
Estratto di lievito
Cloruro di Sodio
Agar
supplemento selettivo (Cefoperazone, Rifampicina, Amfotericina B, Colistin).
+ 5% di sangue di pecora sterile
codice 63514
16
2,5
2,5
5
14
CONSERVAZIONE
Mezzo pronto all’uso: a +2-8°C
La data di scadenza e il numero di lotto sono indicati sulla confezione.
5-
•
6- ISTRUZIONI
Materiale:
•
Materiale fornito: Mezzo Butzler
Inoculazione:
Feci molli o liquide sono depositate direttamente sul mezzo; la precoltura in brodo di arricchimento non è necessaria. L’esame
al microscopio delle feci dei pazienti con Campylobacter enterite è molto caratteristica: Interruzione del normale equilibrio della
flora intestinale che è sostituita da un numero molto ampio di Campylobacter con morfologia e motilità molto peculiari
(cosiddetto aspetto “a spirale” o a “volo di rondine”).
Per le condizioni di conservazione delle feci, fare riferimento alle raccomandazioni vigenti (1).
Incubazione:
Incubare per 48 ore a 35-37°C in un’atmosfera micro-aerofila. Se la coltura è negativa dopo 48 ore, osservare il mezzo agar
quotidianamente fino al 5° giorno.
N.B.: L’incubazione a 42°C rafforza l’effetto selettivo per Campylobacter termofilo (C. coli e C. jejuni).
Lettura
Aspetto delle colonie:
- a 24 ore: colonie molto piccole, a capocchia di spillo.
a 48 ore: più ampie arrotondate, prominenti, lucenti o molto piatte con caratteristiche diffuse lungo la stria di inoculazione.
Colorazione Gram delle colonie:
- Dopo 24-48 ore di coltura: Virgole Gram negative, a forma di S, spirilli corti.
Colture più vecchie: forme coccoidi, con scarsa colorazione Gram difficili da sottocoltivare.
Identificazione biochimica delle colonie
Catalasi
Ossidasi
Coltura a 25°C
Coltura a 37°C
Coltura a 42°C
Idrolisi di appurato (1)
Sensibilità all’acido nalidissico (2)
C. JEJUNI
+
+
++
+++
+
S
C. COLI
+
+
++
+++
S
C. FETUS
+
+
+
+
V
R
V = variabile
(1) Il test effettuato su una sospensione densa in 0,4 ml di soluzione di ippurato sodico in tampone fosfato pH 7,3 dopo 2 ore di incubazione a 37°C, con
rivelazione mediante l’aggiunta di una soluzione di ninidrina al 3,5% appena preparata in una miscela di butanolo-acetone (50-50); una reazione positiva
corrisponde alla formazione di un colore viola in meno di 10 minuti.
7
(2) Tecnica di diffusione su agar usando un disco da 30 mg e un inoculo di 10 batteri/ml.
7- PERFORMANCE / CONTROLLO DI QUALITÀ DEL TEST
• Aspetto del mezzo pronto all’uso: agar rosso
• Le prestazioni di crescita del mezzo Butzler sono verificate sui ceppi seguenti:
CEPPI
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Salmonella typhimurium ATCC 14028
Candida albicans ATCC 20921
Campylobacter jejuni
Campylobacter coli
RISULTATO DELLA COLTURA DOPO 48 ore a 35-37°C
Nessuna crescita
Nessuna crescita
Nessuna crescita
Crescita idonea
Crescita idonea
8- CONTROLLO DI QUALITÀ DEL PRODUTTORE
Tutti i reagenti realizzati sono preparati in base al nostro Sistema di Assicurazione di Qualità dal ricevimento delle materie
prime, alla commercializzazione finale del prodotto. Ciascun lotto di prodotto finito è sottoposto a un controllo di qualità e viene
messo in commercio soltanto se risulta conforme ai criteri di approvazione predefiniti. La documentazione relativa alla
produzione e al controllo di ciascun singolo lotto è conservata presso Bio-Rad.
9- LIMITI DI UTILIZZO
• È possibile che alcuni ceppi, come la sottospecie Campylobacter fetus, non crescano su questo mezzo a causa delle loro
necessità nutrizionali.
• Alcuni ceppi di Enterobactericeae possono non essere totalmente inibiti.
• L’effetto inibitorio è diminuito in presenza di un inoculo eccessivamente pesante.
• Test complementari devono essere effettuati per identificare la specie del ceppo isolato.
10- BIBLIOGRAFIA
1.Basic Laboratory Procedures in Clinical Bacteriology. World Health Organization, Geneva. 1991. 1st edition
2.BUTZLER J.P., DEKEYSER P., DETRAIN M., DEHAEN F. 1973. J. Pediat 82 : p. 493
3.LAUWERS, S., DE BOECK, M., BUTZLER J.P. 1978. Lancet 1 : p. 604-605.
BUTZLER
63514
MEIO SELECTIVO PARA O ISOLAMENTO DE CAMPYLOBACTER
1- UTILIZAÇÃO PRETENDIDA
O meio gelosado de Butzler é utilizado para o isolamento selectivo de C. jejuni e C. coli a partir de fezes diarreicas (bactérias
que frequentemente causam gastroenterites bacterianas).
2- PRINCÍPIO
A selectividade deste meio baseia-se na presença de uma mistura de antifúngicos e antibióticos, os quais inibem o crescimento
da flora associada (Enterobactérias, Pseudomonas, Estafilococos, Enterococos, leveduras).
Mistura selectiva:
- A cefoperazona e a colistina inibem a maioria das bactérias Gram (-); é também inibido o crescimento de
Pseudomonas e de certas estirpes de Enterobactérias frequentemente resistentes aos antibióticos (Proteus, Serratia,
Citrobacter).
- A rifampicina inibe o crescimento da maioria das bactérias Gram (+).
- A anfotericina B inibe o crescimento da maioria das leveduras.
O crescimento do Campylobacter é promovido pela presença de sangue de ovelha.
3- APRESENTAÇÃO
• Meio pronto a usar:
- embalagem com 10 caixas de Petri (90 mm) (BUTZ)
código 63514
4- COMPOSIÇÃO TEÓRICA (g/l de água destilada)
Meio de base para gelose-sangue:
Mistura de peptonas
16
Extracto de carne
2,5
Extracto de levedura
2,5
Cloreto de sódio
5
Gelose
14
Suplemento selectivo (Cefoperazona, Rifampicina, Anfotericina B, Colistina)
+ 5% de sangue de ovelha estéril
5- CONSERVAÇÃO
• Meio pronto a usar: a +2-8°C.
prazo de validade e o número do lote estão indicados na embalagem.
6- INSTRUÇÕES
Material:
• Material fornecido: meio de Butzler.
Inoculação:
As fezes moles ou líquidas são directamente depositadas no meio; não é necessária uma pré-cultura num meio líquido de
enriquecimento. A observação microscópica das fezes dos doentes com enterite provocada por Campylobacter é muito
característica: perda do equilíbrio normal da flora intestinal, a qual é substituída por um elevado número de Campylobacter que
apresentam mobilidade e uma morfologia muito típica (aspecto denominado “rolha de cortiça” or “vôo de andorinhas”).
Refer to current recommendations for the storage of stools (1).
Incubação:
Incube durante 48 horas a 35-37°C numa atmosfera microaerofílica. Se a cultura for negativa ao fim de 48 horas, observe o
meio gelosado diariamente até ao 5º dia.
N.B.: A incubação a 42°C reforça o efeito selectivo para os Campylobacter termofílicos (C. coli e C. jejuni).
Leitura:
Aspecto das colónias:
- ao fim de 24 horas: colónias muito pequenas, semelhantes a cabeças de alfinete.
- ao fim de 48 horas: colónias de maiores dimensões, redondas, proeminentes, brilhantes ou muito planas, encontrando-se
caracteristicamente espalhadas ao longo da estria de inoculação.
Coloração Gram das colónias:
- Ao fim de 24 a 48 horas de cultura: bastonetes Gram negativos, em forma de S, com curtos flagelos.
- Culturas mais antigas: formas cocóides, com uma fraca coloração Gram, sendo difícil a sua subcultura.
Identificação bioquímica das colónias
Catalase
Oxidase
Cultura a 25°C
Cultura a 37°C
Cultura a 42°C
Hidrólise do hipurato (1)
Sensibilidade ao ácido nalidíxico (2)
C. JEJUNI
+
+
++
+++
+
S
C. COLI
+
+
++
+++
S
C. FETUS
+
+
+
+
V
R
V = variável
(1) Ensaio realizado numa suspensão densa em 0,4 ml de uma solução de hipurato de sódio a 1% em tampão de fosfato de pH 7,3 após 2 horas de
incubação a 37°C, com revelação através da adição de uma solução de ninidrina a 3,5% numa mistura de butanol-acetona (50/50) recentemente
preparada (50/50); uma reacção positiva corresponde à formação de uma coloração violeta em menos de 10 minutos.
7
(2) Técnica de difusão em gelose usando um disco de 30 mg e um inóculo de 10 bactérias/ml.
7- DESEMPENHO/CONTROLO DE QUALIDADE DO ENSAIO
• Aspecto do meio pronto a usar: gelose vermelha
• As taxas de crescimento do meio de Butzler são verificadas com as seguintes estirpes:
ESTIRPES
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Salmonella typhimurium ATCC 14028
Candida albicans ATCC 2091
Campylobacter jejuni
Campylobacter coli
RESULTADO DA CULTURA APÓS 48 horas a 35-37°C
Inexistência de crescimento
Inexistência de crescimento
Inexistência de crescimento
Bom crescimento
Bom crescimento
8- CONTROLO DE QUALIDADE DO FABRICANTE
Todos os reagentes fabricados são preparados de acordo com o nosso Sistema de Qualidade, desde a recepção das matérias
primas até à comercialização final do produto. Cada lote é submetido a avaliações de controlo de qualidade, sendo apenas
colocado no mercado se estiver em conformidade com os critérios de aceitação pré-definidas. Os registos relativos à produção
e controlo de cada lote são conservados pela Bio-Rad.
9- LIMITES PARA A SUA UTILIZAÇÃO
• Algumas estirpes, como é o caso do Campylobacter fetus subsp., poderão não se desenvolver neste meio devido aos seus
requisitos nutricionais.
• Algumas estirpes de Enterobacteriaceae poderão não ser totalmente inibidas.
• O efeito inibitório diminui na presença de um inóculo excessivamente pesado.
• Devem realizar-se ensaios complementares para identificar a espécie da estirpe isolada.
10- REFERÊNCIAS
1.Basic Laboratory Procedures in Clinical Bacteriology. World Health Organization, Geneva. 1991. 1st edition
2.BUTZLER J.P., DEKEYSER P., DETRAIN M., DEHAEN F. 1973. J. Pediat 82 : p. 493
3.LAUWERS, S., DE BOECK, M., BUTZLER J.P. 1978. Lancet 1 : p. 604-605.
BUTZLER
63514
SELEKTIVT MEDIUM FÖR ISOLERING AV CAMPYLOBACTER
1- ANVÄNDNINGSOMRÅDE
Butzler-agar används för selektiv isolering av C. jejuni och C. coli från diarroisk avföring (bakterier som utgör en vanlig
anledning till bakteriell gastroenterit).
2- PRINCIP
Mediets selektivitet baseras på närvaron av en antimykotisk och antibiotisk blandning som hämmar tillväxt av associerad flora
(Enterobacteriaceae, Pseudomonas, Staphylococci, enterokocker, jästsvampar).
Selektiv blandning:
- Cefoperazon och kolistin hämmar de flesta gramnegativa bakterier. Tillväxten av Pseudomonas och vissa stammar av
Enterobacteriaceae, som ofta är resistenta mot antibiotika (Proteus, Serratia, Citrobacter), inhiberas även.
- Rifampicin hämmar tillväxten av de flesta grampositiva bakterier.
- Amfotericin B hämmar tillväxten av de flesta jästsvampar.
Tillväxten av Campylobacter främjas av närvaron av fårblod.
3- INNEHÅLL
•
Medium färdigt att använda:
ask med 10 Petri-skålar (90 mm) (BUTZ) kod 63514
4- TEORETISK SAMMANSÄTTNING (i g/l destillerat vatten)
Basmedium för blodagar:
Blandning av peptoner
16
Köttextrakt
2,5
Jästextrakt
2,5
Natriumklorid
5
Agar
14
Selektiv tillsats (cefoperazon, rifampicin, amfotericin B, kolistin)
+ 5 % sterilt fårblod
FÖRVARING
Medium färdigt att använda: i +2–8 °C.
Utgångsdatum och partinummer står på förpackningen.
5•
6- INSTRUKTIONER
Material:
• Material som medföljer: Butzler-medium.
Inokulering:
Mjuka eller flytande avföringar dispenseras direkt på mediet. Förodling i anrikningsbuljong är inte nödvändig.
Mikroskopundersökning av avföring från patienter med tarminflammation av Campylobacter är mycket karakteristisk. Upplösning
av tarmflorans normala jämvikt, vilken ersätts med ett mycket stort antal Campylobacter med mycket typisk morfologi och
motilitet (så kallat korkskruvs- eller svalflyktsutseende).
Följ aktuella rekommendationer vid förvaring av avföringsprover (1).
Inkubering:
Inkubera i 35–37 °C i 48 timmar i en mikroaerofil atmosfär. Om odlingen är negativ efter 48 timmar, ska agarmediet iakttas
dagligen till den 5:e dagen.
Obs! Inkubering i 42 °C förstärker den selektiva effekten för termofila Campylobacter (C. coli och C. jejuni).
Avläsning:
Utseende på kolonierna:
- efter 24 timmar: mycket små, knappnålshuvudliknande kolonier.
- efter 48 timmar: större, runda, upphöjda, blanka eller mycket plana med karakteristisk spridning längs inokuleringsutstryket.
Gramfärgning av kolonierna:
- Efter 24 till 48 timmars odling: Gramnegativa kommabaciller, S-formade, korta spiriller
- Äldre odlingar: kockoida former med dålig gramfärgning som är svåra att subodla.
Biokemisk identifiering av kolonierna
Katalas
Oxidas
Odling i 25 °C
Odling i 37°C
Odling i 42°C
Hydrolys av hippurat (1)
Känslighet för nalidixinsyra (2)
C. JEJUNI
+
+
++
+++
+
S
C. COLI
+
+
++
+++
S
C. FETUS
+
+
+
+
V
R
V = varierande
(1) Testet utfördes på en tjock suspension i 0,4 ml 1-procentig natriumhippuratlösning i fosfatbuffert pH 7,3 efter 2 timmars inkubering i 37 °C med
framkallning genom tillsats av en nyberedd 3,5-procentig ninhydrinlösning i en blandning av butanol-aceton (50/50). Vid en positiv reaktion bildas en violett
färg på mindre än 10 minuter.
7
(2) Agardiffusionsteknik med en lapp på 30 mg och ett inokulat på 10 bakterier/ml.
7•
•
TESTRESULTAT/KVALITETSKONTROLL AV TESTET
Mediets utseende (färdigt att använda): röd agar
Tillväxtresultatet för Butzler-medium verifieras med följande stammar:
STAMMAR
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Salmonella typhimurium ATCC 14028
Candida albicans ATCC 2091
Campylobacter jejuni
Campylobacter coli
ODLINGSRESULTAT EFTER 48 timmar i 35–37 °C
Ingen tillväxt
Ingen tillväxt
Ingen tillväxt
God tillväxt
God tillväxt
8- TILLVERKARENS KVALITETSKONTROLL
Alla reagenser tillverkas och bereds i enlighet med vårt kvalitetssystem, från mottagandet av råmaterial till den slutliga
marknadsföringen av produkten. Varje parti genomgår en kvalitetskontroll och släpps endast ut på marknaden om det
överensstämmer med fördefinierade acceptanskriterier. Handlingar som beskriver produktion och kontroll av varje enskilt parti
sparas hos Bio-Rad.
9•
•
•
•
ANVÄNDNINGENS BEGRÄNSNINGAR
Vissa stammar, till exempel Campylobacter fetus subsp., kan inte växa på det här mediet på grund av deras krav på näring.
Vissa stammar av Enterobacteriaceae hämmas eventuellt inte fullständigt.
Den hämmande effekten minskar vid för tungt inokulat.
Kompletterande tester måste utföras för att identifiera arterna i den isolerade stammen.
10- REFERENSER
1.Basic Laboratory Procedures in Clinical Bacteriology. World Health Organization, Geneva. 1991. 1st edition
2.BUTZLER J.P., DEKEYSER P., DETRAIN M., DEHAEN F. 1973. J. Pediat 82 : p. 493
3.LAUWERS, S., DE BOECK, M., BUTZLER J.P. 1978. Lancet 1 : p. 604-605.
BUTZLER
63514
SELEKTIVT MEDIUM TIL ISOLERING AF CAMPYLOBACTER
1- FORMÅL
Butzleragar anvendes til selektiv isolering af C. jejuni og C. coli fra diaréagtig fæces (bakterier er en hyppig årsag til bakteriel
mavetarmkatar).
2- PRINCIP
Dette mediums selektivitet er baseret på tilstedeværelsen af en antifungal og antibiotisk blanding, som hæmmer væksten af
associeret flora (Enterobakterier, Pseudomonas, stafylokokker, enterokokker, gær).
Selektiv blanding:
- Cefoperazon og colistin hæmmer størstedelen af de Gram-negative bakterier; væksten af Pseudomonas og visse
stammer af enterobakterier, som ofte er resistente over for antibiotika (Proteus, Serratia, Citrobacter), hæmmes ligeledes.
- Rifampicin hæmmer væksten af de fleste Gram-positive bakterier.
- Amphotericin B hæmmer væksten af de fleste gærkulturer.
Væksten af Campylobacter fremmes af det indeholdte fåreblod.
3•
PRODUKTETS INDHOLD
Brugsklart medium:
- Æske med 10 Petri-plader (90 mm) (BUTZ)
kode 63514
4- TEORETISK SAMMENSÆTNING (G/L DESTILLERET VAND)
Basismedium for blodagar:
Blanding af peptoner
16
Kødekstrakt
2,5
Gærekstrakt
2,5
Natriumchlorid
5
Agar
14
Selektivt supplement (Cefoperazone, Rifampicin, Amphotericin B, Colistin)
+ 5% sterilt fåreblod
OPBEVARING
Brugsklart medium: ved +2-8°C.
Udløbsdatoen og partinummeret er angivet på emballagen.
5•
6- BRUGSVEJLEDNING
Materialer:
• Materialer, der medfølger: Butzler-medium
Inokulation:
Fæces i blød eller flydende form tilsættes direkte i mediet; forkultur i berigelsessuppe er ikke nødvendig. Mikroskopisk
undersøgelse af fæces fra patienter med Campylobacter enteritis er meget karakteristisk: tarmfloraens normale ligevægt
afbrydes og erstattes med et meget stort antal Campylobacter med meget typisk morfologi og motilitet (såkaldt "skrue" eller
"svaleflugt" udseende).
Kontroller de gældende anbefalinger for opbevaring af fæces (1).
Inkubation:
Inkuber i 48 timer ved 35-37°C i en microaerofil atmosfære. Hvis kulturen er negativ efter 48 timer, skal agarmediet kontrolleres
dagligt til den femte dag.
NB: Inkubation ved 42°C forstærker den selektive effekt for thermophil Campylobacter (C. coli og C. jejuni).
Aflæsning:
Koloniernes præsentation:
efter 24 timer: meget små knappenålshoved-kolonier.
efter 48 timer: større, runde, fremstående, skinnende eller meget flade med karakteristisk spredning langs
inokulationsudstrygningen.
Gramfarvning af kolonierne:
Efter 24 til 48 timers dyrkning: Gramnegative kommaer, S-formede, korte spiraler.
Ældre kulturer: kugleformede med dårlig Gramfarvning, som er vanskelige at subkultivere.
Biokemisk identifikation af kolonierne:
Katalase
Oxidase
Dyrkning ved 25°C.
Dyrkning ved 37°C.
Dyrkning ved 42°C.
Hydrolyse af hippurat (1)
Sensitivitet over for nalidixinsyre (2)
C. JEJUNI
+
+
++
+++
+
S
C. COLI
+
+
++
+++
S
C. FETUS
+
+
+
+
V
R
V = variable
(1) Testen blev udført på en tyk suspension i 0,4 ml 1% natriumhippuratopløsning i en phosphatbuffer med pH 7,3 efter to timers inkubation ved 37°C, med
afsløring ved tilsætning af frisk fremstillet 3,5% ninhydrinopløsning i en blanding af butanol-acetone (50/50); en positiv reaktion svarer til dannelsen af violet
farve på mindre end 10 minutter.
7
(2) Agarspredningsteknik ved brug af en 30 mg plade og en podedosis på 10 bakterier/ml.
7•
•
KAPACITETS/KVALITETSKONTROL AF TESTEN
Brugsklart mediums præsentation: rød agar
Butzlermediets vækstkapacitet kontrolleres med følgende stammer:
STAMMER
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Salmonella typhimurium ATCC 14028
Candida albicans ATCC 2091
Campylobacter jejuni
Campylobacter coli
KULTURS RESULTAT EFTER 48 timer
ved 35-37°C
Ingen vækst
Ingen vækst
Ingen vækst
God vækst
God vækst
8- PRODUCENTENS KVALITETSKONTROL
Alle producerede reagenser fremstilles ifølge vores kvalitetssikringssystem, lige fra modtagelsen af råmaterialerne til
markedsføringen af slutproduktet. Hvert parti af slutproduktet gennemgår kvalitetskontrol og markedsføres kun, hvis det opfylder
de foruddefinerede kvalitetskriterier. Dokumentation vedrørende produktion og kontrol af hvert parti opbevares inden for
virksomheden.
9•
•
•
•
BEGRÆNSNINGER FOR BRUG
Visse stammer såsom Campylobacter fetus subsp. vokser måske ikke på dette medium på grund af deres næringsmæssige
krav.
Visse stammer af Enterobacteriaceae hæmmes måske ikke fuldt ud.
Den hæmmende effekt nedsættes ved brug af en meget stor podedosis.
Der kræves supplerende test for at kunne artsbestemme den isolerede stamme.
10- REFERENCER
1.Basic Laboratory Procedures in Clinical Bacteriology. World Health Organization, Geneva. 1991. 1st edition
2.BUTZLER J.P., DEKEYSER P., DETRAIN M., DEHAEN F. 1973. J. Pediat 82 : p. 493
3.LAUWERS, S., DE BOECK, M., BUTZLER J.P. 1978. Lancet 1 : p. 604-605.
BUTZLER
63514
SELEKTIVNÍ MÉDIUM PRO IZOLACI KAMPILOBAKTERU
1- POUŽITÍ
Agar podle Butzlera se používá k izolaci C. jejuni a C. coli z průjmové stolice (baktérie vytvářející častou příčinu bakteriální
gastroenteritidy).
2- PRINCIP
Selektivita tohoto média je založena na přítomnosti antimykotické a antibiotické směsi, která inhibuje růst přidružené flóry
(Enterobacteriaceae, Pseudomonas, Stafylokoky, enterokoky, kvasinky).
Selektivní směs:
- Cefoperazon a kolistin inhibují většinu Gram(-) bakterií; inhibován je rovněž růst druhů rodu Pseudomonas a určitých kmenů
čeledi Enterobacteriaceae, často rezistentních k antibiotikům (Proteus, Serratia, Citrobacter).
- Rifampicin inhibuje růst většiny Gram(+) bakterií.
- Amfotericin B inhibuje růst většiny kvasinek.
Růst bakterií Campylobacter podporuje přítomnost ovčí krve.
3- BALENÍ
• Médium hotové k použití:
- krabice s 10 Petriho miskami (90 mm) (BUTZ)
kód 63514
4- SLOŽENÍ (g/l destilované vody)
Základní médium pro krevní agar:
Směs peptonů
16
Masový extrakt
2,5
Kvasničný extrakt
2,5
Chlorid sodný
5
Agar
14
Selektivní doplněk (Cefoperazon, Rifampicin, Amfotericin B, Kolistin)
+ 5% sterilní ovčí krev
5- UCHOVÁVÁNÍ
• Médium hotové k použití: při 2 - 8 °C.
Datum exspirace a číslo šarže jsou uvedeny na obalu.
6- PRACOVNÍ POSTUP
Materiál:
• Dodávaný materiál: Butzlerovo médium.
Inokulace:
Měkká nebo tekutá stolice se nanese přímo na médium; předchozí kultivace v obohaceném bujónu není nutná. Mikroskopické
vyšetření stolice pacientů s kampylobakterovou enteritidou je velmi charakteristické: narušení normální rovnováhy střevní flóry,
která je nahrazena velmi vysoký počtem bakterií rodu Campylobacter s výrazně typickou morfologií a pohyblivostí (tzv. vzhled
„vývrtky“ nebo „let vlaštovky“).
Přečtěte si aktuální doporučení pro uchovávání stolice (1).
Inkubace:
Inkubujte 24 - 48 hodin při teplotě 35 - 37 °C v mikroaerofilní atmosféře. Je-li kultura negativní po 48 hodinách, pozorujte
agarové médium denně až do 5. dne.
Poznámka: Inkubace při 42 °C zvyšuje selektivní účinek pro termofilní druhy rodu Campylobacter (C. coli a C. jejuni).
Vyhodnocení:
Vzhled kolonií:
- po 24 hodinách: velmi malé kolonie velikosti špendlíkové hlavičky.
- po 48 hodinách: větší, kulaté, Význačné, lesklé nebo velmi ploché kolonie charakteristicky rozložené podél inokulačního
pruhu.
Gramovo barvení kolonií:
- po 24-48 hodinách kultivace: Gramnegativní tyčky, esovité, krátké spirily.
- Starší kultivace: kokoidní formy, špatně se barvící podle Grama, které se obtížně subkultivují.
C. JEJUNI
C. COLI
C. FETUS
Kataláza
+
+
+
Oxidáza
+
+
+
Biochemická identifikace kolonií
Kultivace při 25 °C
-
-
+
Kultivace při 37 °C
++
++
+
Kultivace při 42 °C
+++
+++
V
Hydrolýza hipurátu (1)
+
-
-
Senzitivita k nalidixové kyselině (2)
S
S
R
V = variabilní
(1) Test prováděný s hustou suspenzi v 0,4 ml 1% hipurátu sodného ve fosfátovém pufru pH 7,3 po 2 hodinách inkubace při
37°C, vyvíjí se přidáním čerstvě připraveného 3,5% roztoku ninhydrinu ve směsi butanol-aceton (50/50); pozitivní reakce
odpovídá vzniku fialového zbarvení za méně než 10 minut.
(2) Difúzní metoda na agaru s použitím 30 mg disku a inokula 107 s bakterií/ml.
7- ÚČINNOST A KONTROLA KVALITY TESTU
• Vzhled média hotového k použití: červený agar.
• Růstové vlastnosti Butzlerova média jsou kontrolovány pomocí těchto kmenů:
KMEN
VÝSLEDEK KULTIVACE PO 48 HODINÁCH PŘI
35-37 °C
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Žádný růst
Salmonella typhimurium ATCC 14028
Žádný růst
Candida albicans ATCC 2091
Žádný růst
Campylobacter jejuni
Dobrý růst
Campylobacter coli
Dobrý růst
8- KONTROLA KVALITY PROVÁDĚNÁ VÝROBCEM
Všechny vyráběné reagencie jsou připravovány podle našeho systému jakosti, počínaje převzetím surovin až po finální
komercionalizaci produktu. Každá šarže je podrobena kontrole kvality a je propouštěna na trh pouze tehdy, jestliže odpovídá
předem definovaným akceptačním kritériím. Dokumentace týkající se výroby a kontroly každé jednotlivé šarže je uchovávána
u společnosti Bio-Rad.
9- OMEZENÍ TESTU
•
•
•
•
Některé kmeny, např. Campylobacter fetus subsp. nemusí růst na tomto médiu vzhledem k jejich nutričním požadavkům.
Některé kmeny Enterobacteriaceae nemusí být zcela inhibovány.
Inhibiční účinek se snižuje v přítomnosti nadměrného inokula.
K identifikaci izolovaných kmenů je nutné provést doplňující testy.
10- LITERATURA
Viz francouzská verze.
Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette France
Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00
Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33
07/2003
code: 18005-A4
63514
BUTZLER
SELEKTÍVNE MÉDIUM NA IZOLÁCIU KAMPILOBAKTERA
1- POUŽITIE
Agar podľa Butzlera sa používa na izoláciu C. jejuni a C. coli z hnačkovej stolice (baktérie spôsobujúce častú bakteriálnu
gastroenteritídu).
2- PRINCÍP
Selektivita tohto média je založená na prítomnosti antimykotickej a antibiotickej zmesi, ktorá inhibuje rast pridruženej flóry
(Enterobacteriaceae, Pseudomonas, Stafylokoky, enterokoky, kvasinky).
Selektívna zmes:
- Cefoperazon a kolistín inhibujú väčšinu Gram(-) baktérií; inhibovaný je tiež rast druhov rodu Pseudomonas a určitých
kmeňov čeľade Enterobacteriaceae, často rezistentných na antibiotiká (Proteus, Serratia, Citrobacter).
- Rifampicín inhibuje rast väčšiny Gram(+) baktérií.
- Amfotericín B inhibuje rast väčšiny kvasiniek.
Rast baktérií Campylobacter podporuje prítomnosť ovčej krvi.
3- BALENIE
• Médium pripravené na použitie:
- krabica s 10 Petriho miskami (90 mm) (BUTZ)
kód 63514
4- ZLOŽENIE (g/l destilovanej vody)
Základné médium pre krvný agar:
Zmes peptónov
16
Mäsový extrakt
2,5
Kvasničný extrakt
2,5
Chlorid sodný
5
Agar
14
Selektívny doplnok (Cefoperazon, Rifampicín, Amfotericín B, Kolistín)
+ 5 % sterilná ovčia krv
5- UCHOVÁVANIE
• Médium pripravené na použitie: pri 2 - 8 °C.
Dátum exspirácie a číslo šarže sú uvedené na obale.
6- PRACOVNÝ POSTUP
Materiál:
• Dodávaný materiál: Butzlerovo médium.
Inokulácia:
Mäkká alebo tekutá stolica sa nanesie priamo na médium; predchádzajúca kultivácia v obohatenom bujóne nie je potrebná.
Mikroskopické vyšetrenie stolice pacientov s kampylobakterovou enteritídou je veľmi charakteristické: narušenie normálnej
rovnováhy črevnej flóry, ktorá je nahradená veľmi veľkým počtom baktérií rodu Campylobacter s výrazne typickou
morfológiou a pohyblivosťou (tzv. vzhľad „ vývrtky “ alebo „ let lastovičiek “).
Prečítajte si aktuálne doporučenia pre uchovávanie stolice (1).
Inkubácia:
Inkubujte 24 - 48 hodín pri teplote 35 - 37 °C v mikroaerofilnej atmosfére. Ak je kultúra negatívna po 48 hodinách, pozorujte
agarové médium denne až do 5. dňa.
Poznámka: Inkubácia pri 42 °C zvyšuje selektívny účinok pre termofilné druhy rodu Campylobacter (C. coli a C. jejuni).
Vyhodnotenie:
Vzhľad kolónií:
- po 24 hodinách: veľmi malé kolónie o veľkosti špendlíkovej hlavičky.
- po 48 hodinách: väčšie, guľaté, význačné, lesklé alebo veľmi ploché kolónie charakteristicky rozložené pozdĺž inokulačného
pruhu.
Gramovo farbenie kolónií:
- po 24-48 hodinách kultivácie: Gramnegatívne tyčky, esovité, krátke spirily.
- Staršie kultivácie: kokoidné formy, zle sa farbiace podľa Grama, ktoré sa obtiažne subkultivujú.
C. JEJUNI
C. COLI
C. FETUS
Kataláza
+
+
+
Oxidáza
+
+
+
Biochemická identifikácia kolónií
Kultivácia pri 25 °C
-
-
+
Kultivácia pri 37 °C
++
++
+
Kultivácia pri 42 °C
+++
+++
V
Hydrolýza hipurátu (1)
+
-
-
Senzitivita ku nalidixovej kyseline (2)
S
S
R
V = variabilný
(1) Test robený s hustou suspenziou v 0,4 ml 1% hipurátu sodného vo fosfátovom pufri pH 7,3 po 2 hodinách inkubácie pri 37°C,
vyvíja sa pridaním čerstvo pripraveného 3,5 % roztoku ninhydrínu v zmesi butanol-acetón (50/50); pozitívna reakcia odpovedá
vzniku fialového sfarbenia za menej než 10 minút.
(2) Difúzna metóda na agare s použitím 30 mg disku a inokula 107 baktérií/ml.
7- ÚČINNOSŤ A KONTROLA KVALITY TESTU
• Vzhľad média pripraveného na použitie: červený agar.
• Rastové vlastnosti Butzlerovho média sú kontrolované pomocou týchto kmeňov:
KMEŇ
VÝSLEDOK KULTIVÁCIE PO 48 HODINÁCH
PRI 35-37 °C
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Žiadny rast
Salmonella typhimurium ATCC 14028
Žiadny rast
Candida albicans ATCC 2091
Žiadny rast
Campylobacter jejuni
Dobrý rast
Campylobacter coli
Dobrý rast
8- KONTROLA KVALITY VYKONÁVANÁ VÝROBCOM
Všetky vyrábané reagencie sú pripravované podľa nášho systému kvality, počínajúc prevzatím surovín až po konečnú
komercializáciu produktu. Každá šarža je podrobená kontrole kvality a je uvoľnená na trh len vtedy, keď odpovedá vopred
definovaným akceptačným kritériám. Dokumentácia týkajúca sa výroby a kontroly každej jednotlivej šarže je uchovávaná u
spoločnosti Bio-Rad.
9- OBMEDZENIA TESTU
•
•
•
•
Niektoré kmene, napr. Campylobacter fetus subsp. nemusia na tomto médiu rásť vzhľadom na ich nutričné požiadavky.
Niektoré kmene Enterobacteriaceae nemusia byť úplne inhibované.
Inhibičný účinok sa znižuje za prítomnosti nadmerného inokula.
Na identifikáciu izolovaných kmeňov je nutné urobiť doplňujúce testy.
10- LITERATÚRA
Viď francúzsku verziu.
Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette France
Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00
Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33
07/2003
BUTZLER
63514
SZELEKTÍV TÁPTALAJ CAMPYLOBACTER IZOLÁLÁSÁHOZ
1- FELHASZNÁLÁS
A Butzler agart C. jejuni és C. coli szelektív izolálásához használjuk hasmenéses
székletből (gyakran ezek a baktériumok okozzák a bakteriális gastroenteritist).
2- ALAPELV
A közeg szelektivitása a hozzáadott gombaellenes szerek és antibiotikumok keverékének
köszönhető, amelyek megakadályozzák a társult flóra (enterobaktériumok, Pseudomonas,
staphylococcusok, enterococcusok, élesztők) növekedését.
Szelektáló adalék:
- a cefoperazon és a colistin gátolja a Gram negatív baktériumok többségét, a
Pseudomonas, és az antibiotikumokra gyakran rezisztens enterobaktériumok egyes
törzseinek (Proteus, Serratia, Citrobacter) a növekedését is.
- a rifampicin gátolja a legtöbb Gram pozitív baktérium növekedését.
- az amphotericin B gátolja az élesztők többségének növekedését.
A Campylobacter növekedését elősegíti az adalékként alkalmazott birkavér.
3- KISZERELÉS
• Felhasználásra kész közeg:
- 10 db Petri-csészét (90 mm) (BUTZ) tartalmazó doboz kódszám 63514
4- ELVI ÖSSZETÉTEL (G/L DESZTILLÁLT VÍZ)
A véres agarhoz szükséges alap:
Peptonkeverék
16
Húskivonat
2,5
Élesztőkivonat
2,5
Nátrium-klorid
5
Agar
14
Szelektáló adalék (cefoperazon, rifampicin, amphotericin B, colistin)
+ 5% steril birkavér
Végső pH-érték: 7,3 ± 0,2.
5- TÁROLÁS
• A felhasználásra kész közeget +2-8°C között tároljuk.
A szavatossági idő és a gyártási sorozat száma a csomagoláson olvasható.
6- HASZNÁLATI ÚTMUTATÓ
Anyag:
• A forgalmazó által szállított Butzler közeg.
Leoltás:
Lágy vagy folyékony székletet viszünk fel közvetlenül a közegre. Nem kell dúsító
bouillonon előtenyészteni. A mikroszkópos megfigyelés nagyon jellegzetesnek mutatja a
Campylobacter okozta enteritises betegek székletét: a bélflóra normális egyensúlya
felborul, s ahelyett nagyszámú, igen jellegzetes morfológiájú
motilitású („fecskék szárnyalása”) Campylobacter-t láthatunk.
Ld. székletminták tárolására vonatkozó aktuális ajánlások (1).
(ún. „dugóhúzó”) és
Inkubálás:
Inkubáljuk 48 órán át 35-37°C-on mikroaerofil atmoszférában. Ha a tenyészet 48 óra
múltán negatív, akkor az 5. napig naponta vizsgáljuk meg az agart.
Megjegyzés: a 42°C-os inkubálás javítja a szelektivitást a termofil Campylobacter-ek (C.
coli és C. jejuni) esetében.
Leolvasás:
A telepek megjelenése:
- 24 óra múltán: nagyon kicsi, gombostűfejnyi kolóniák.
- 48 óra múltán: nagyobb, kerek, kiemelkedő, fényes, vagy nagyon lapos telepek, amelyek
jellegzetes módon az oltási vonal mentén helyezkednek el.
A telepek Gram festése:
- 24-48 órás tenyésztés után: Gram-negatív pálcák, S-alakú, rövid spirillumok.
- Öregebb tenyészetek: coccoid formák, gyengén festődnek Gram festéssel, és nehéz
szubkultúrát készíteni belőlük.
A telepek biokémiai identifikálása
Kataláz
Oxidáz
25°C-os tenyészet
37°C-os tenyészet
42°C-os tenyészet
Hippurát hidrolízis (1)
Nalidixsav-érzékenység (2)
C. JEJUNI
+
+
++
+++
+
É
C. COLI
+
+
++
+++
É
C. FETUS
+
+
+
+
V
R
V = változó
(1) A vizsgálatot sűrű, 0,4 ml, 7,3-es pH-jú foszfát pufferes, 1%-os nátrium-hippurátos
szuszpenzióban végezték, 2-órás, 37°C-os inkubálás után. Az előhíváshoz frissen készített
3,5%-os, butanolos-acetonos (50:50) ninhidrin oldatot adtak hozzá; pozitív reakció
esetében 10 percen belül ibolyaszín fejlődik.
(2) Korongdiffúziós vizsgálat 30 mg-os koronggal, 107 baktérium/ml inokulummal.
7- MINŐSÉG/A TÁPTALAJ MINŐSÉGÉNEK ELLENŐRZÉSE
• A felhasználásra kész közeg megjelenése: piros agar.
• A Butzler táptalaj szaporítóképességét az alábbi törzsekkel ellenőrizzük:
TÖRZSEK
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Escherichia coli ATCC 25922
Salmonella typhimurium ATCC 14028
Candida albicans ATCC 20921
Campylobacter jejuni Lior 2
EREDMÉNYEK 48-órás, 35-37°C-os
TENYÉSZTÉS UTÁN
Nincs növekedés
Nincs növekedés
Nincs növekedés
Nincs növekedés
Jó növekedés
Campylobacter jejuni Lior 7
Campylobacter coli Lior 45
Jó növekedés
Jó növekedés
8- A GYÁRTÓNÁL FOLYÓ MINŐSÉGELLENŐRZÉS
Az összes termékünk a saját minőségellenőrző rendszerünk szerint készült, a nyersanyag
átvételétől kezdve a termék forgalmazásáig. Minden egyes gyártási sorozat minőségét
ellenőrizzük, és csak akkor hozzuk forgalomba, ha az megfelel az előre felállított
kritériumoknak. Minden sorozat gyártási és minőségellenőrzési jegyzőkönyve megtalálható
a Bio-Radnál.
9- AZ ALKALMAZÁS KORLÁTAI
• Előfordulhat, hogy egyes törzsek, például a Campylobacter fetus alfaj a speciális
tápanyagigénye miatt nem növekszik ezen a közegen.
• Előfordulhat, hogy az enterobaktériumok egyes törzseit nem gátolja teljesen a közeg.
• A gátló hatás csökken, ha túl nagy mennyiségű inokulummal oltottunk le.
• Kiegészítő vizsgálatokat is kell végezni az izolált törzshöz tartozó fajok identifikálásához.
10- HIVATKOZÁSOK
1.Basic Laboratory Procedures in Clinical Bacteriology. World Health Organization,
Geneva. 1991. 1st edition
2.BUTZLER J.P., DEKEYSER P., DETRAIN M., DEHAEN F. 1973. J. Pediat 82 : p. 493
3.LAUWERS, S., DE BOECK, M., BUTZLER J.P. 1978. Lancet 1 : p. 604-605.