Roteiro de aula prática 1º ano Prática 12: Mitocôndria e Respiração Pergunta: Onde ocorre e quais são as etapas da respiração celular? Objetivo: Mostrar, de forma prática, a ocorrência de respiração. I) Introdução Quando falamos de Respiração Celular nos referimos a todos os mecanismos intracelulares de síntese de ATP que envolve a cadeira respiratória, sendo então o processo responsável pela geração de energia em muitos organismos. A respiração pode ser aeróbica, quando o aceptor final de elétrons na cadeia respiratória é o oxigênio, ou anaeróbica, quando o aceptor final de elétrons não é o oxigênio, e sim outra substância (sulfato, nitrato, etc). A respiração aeróbica é realizada por organismos procariontes, protistas, fungos e também por plantas e animais. Entretanto, isso não impede que a respiração anaeróbica também possa ser realizada nesses organismos. O processo de respiração celular pode ser dividido em três etapas (glicólise, ciclo de Krebs e cadeira respiratória). Em sistemas fechados a ocorrência de respiração acidifica o meio aquoso, devido a liberação de CO2. A reação que explica esse acontecimento segue abaixo: CO2 CO2 (aquoso) H2CO3 H+ + HCO3+ II) Materiais Suspensão de levedo, em solução de sacarose a 10%; Suspensão de levedo, em água destilada; Suspensão de levedo fervido; Folha fina (gramínea, por exemplo); Malha de plástico ou suportes metálicos; Água contendo CO2 (água mineral gasosa); Sementes de milho em germinação; Canudos de refresco ou pipetas; Solução de azul de bromotimol; Tubos de ensaio grandes; Tubos de ensaio pequenos; Estante para tubos de ensaio; Plástico preto ou papel alumínio; Rolhas de borracha; Conta gotas; HCl 0,1M; NaOH 0,1M. III) Procedimentos 1- Enumere 6 tubos de ensaio de tamanho grande e adicione neles 5 gotas de azul de bromotimol. 2- Coloque no fundo dos tubos de número 2 a 6 um suporte metálico para manter uma plataforma cerca de 1 cm acima do nível do indicador. Este arranjo servirá de apoio para um tubo menor, que conterá o material a ser investigado, e que não deve tocar na solução indicadora. Com esses tubos proceda aos seguintes ensaios: Tubo 1: Testemunha, para referência da coloração inicial do indicador. Tubo 2: Coloque a suspensão de levedo preparada em solução de sacarose a 10% até a metade de um tubo de ensaio pequeno, que será introduzido no tubo maior até tocar o suporte. Tubo 3: Proceda da mesma forma anterior, mas usando solução de levedo preparada em água. Tubo 4: Proceda da mesma maneira que a anterior, porém usando suspensão de levedo previamente fervida. Tubo 5: Proceda da mesma forma anterior, colocando sementes recém-germinadas de milho no tubo pequeno ou sobre uma mecha de algodão umedecido, mas que não esteja em contato com a solução indicadora. Tubo 6: Coloque uma tira de folha no suporte, acima do indicador. Enrole o tubo de ensaio no papel alumínio para evitar a entrada de luz. 3- Arrolhe bem todos os tubos imediatamente após a montagem e aguarde cerca de 1h. 4- Observe as mudanças de cor do indicador e anote suas observações, adotando um sistema de convenção para as variações de cor da solução indicadora. Enquanto espera, execute os seguintes ensaios: Teste 1: Coloque 3 a 4 gotas do indicador em tubo de ensaio e acrescente uma gota de HCl 0,1M. Observe o que ocorre. Em seguida, adicione NaOH 0,1M, gota a gota, até que haja nova mudança de cor. Anote essas mudanças e explique os resultados. Teste 2: Coloque 10 a 12 gotas do indicador em um tubo de ensaio. Sopre devagar, através de um canudo de refresco (ou pipeta), de modo que o ar borbulhe na solução. Anote a mudança de cor. Comentários: Antes de realizar a prática em aula e antes de explicar o conteúdo é aconselhável testar a mesma. Uns dois dias antes de realizar a prática coloque o milho para germinar em água. Durante a execução da prática deve-se arrolhar o tubo grande. É interessante que seja utilizada uma folha fina (como a de gramínea) e jovial para sucesso na realização do experimento. Ao realizar o Teste 1 deve-se explicar a função do indicador de PH e sua ação perante o ácido e a base. E, ao realizar o Teste 2, deve-se explicar que o CO2 torna o meio ácido. IV) Para pensar 1- O que é uma solução indicadora? Por que há mudança de coloração? Resposta sugerida: Solução indicadora é aquela que possui a propriedade de, ao ser adicionada em pequena proporção a outra solução, expor características químicas do objeto de estudo. Uma solução indicadora de pH, por exemplo, será capaz de evidenciar se dada amostra possui caráter acido, básico ou neutro. A mudança de coloração em soluções indicadoras de pH ocorre pois quando adicionados a uma solução, os indicadores de pH ligam-se aos íons H+ ou OH- e a ligação a estes íons provoca uma alteração da configuração eletrônica destes indicadores e, consequentemente, altera sua cor. 2- Por que se observa diferença de coloração nas diferentes suspensões de levedo? Resposta sugerida: As diferentes colorações observadas nas suspensões de levedo são decorrentes dos diferentes índices de pH encontrados. V) Referências -Figura 1 – Mitocôndria Disponível em: http://www.infoescola.com/ Acessado em: fevereiro de 2009. -Figura 2 – Respiração Celular Disponível em: http://biologiacesaresezar.editorasaraiva.com.br/ Acessado em: fevereiro de 2009. -Wikipedia - A enciclopédia livre. Indicador de pH. Disponível em: http://pt.wikipedia.org Acessado em: fevereiro de 2009. -LOPES, S. Bio: volume único. Editora Saraiva ,1ª ed. São Paulo , 2004. -MAESTRI, M. et al. Fisiologia Vegetal; exercícios práticos [por] Moacir Maestri [e outros]. – 8ª ed. Viçosa: UFV, 2009.