Guia rápido para utilizar o Plugin Manual Tracking
1) Obra uma imagem ou vídeo: File -> Open...
2)Plugins-> Tracking -> Manual Tracking
3) Vai aparecer a seguinte janela:
4) No setor Parameters é possível ajustar o tamanho do dot, a largura da linha, tamanho da
fonte.
5) Para começar o tracking basta clicar em Add track e em seguida clicar na imagem no local
desejado para iniciar o tracking. Note que vai aparecer a seguinte tela:
Essa janela mostra o corte avaliado (slice), as coordenadas do ponto em XY, a distancia
percorrida, a velocidade e o valor do pixel. Note que este é o primeiro ponto, desta forma, não
é possível calcular a distancia e a velocidade por isso o valor -1.0.
Esses dados são importantes para que possamos calcular a direcionalidade da célula/objeto de
estudo. VER ITEM 11
6) Continue seguindo o objeto de estudo apenas clicando sobre ele. Se clicar em Show path é
possível visualizar a trajetória desenhada durante o processo. Ao finalizar basta clicar em End
tracks. Caso tenha errado algum ponto basta clicar em Delete last point.
7) Para fazer tracking de outro ponto basta clicar novamente em Add track. Os dados desse
novo track vão aparecer na janela Results mas com o Track n° diferente. Note que é possível
deletar o track ( Delete track n°->colocar o numero)
8) Para visualizar o deslocamento do objeto utilizar as opções em Drawing. Nos três primeiros
é possível visualizar apenas a trajetória do objeto sem sobreposição da imagem. Nos demais, a
trajetória está sobreposta à imagem.
9) Salve a imagem como achar mais adequado.
10) A opção Retrieve Z Coordinates pode ser utilizada para visualizar as trajetória em 3D. Mas
para isso a imagem deve ser uma série Z.
11) A direcionalidade é um parâmetro que indica se um objeto realiza uma trajetória aleatória
ou direcionada a algo. Varia de 0-1, quanto mais próximo de zero mais direcional o objeto é.
Sendo assim, é possível saber, por exemplo, se uma célula migra em resposta a algum
estimulo.
Cálculo da Direcionalidade:
Direcionalidade= Distância Relativa/Distância Total
Os dados obtidos da tabela de Results deverão ser transferidos para um planilha no excel com
o intuito de facilitar os cálculos.
Repare que adicionei duas novas colunas: X processado e Y processado. Pra obter esses valores
basta subtrair uma coordenada da coordenada anterior. Como demonstrado na figura abaixo.
Esses valores de X processado e Y processado são necessários para o calculo da distancia
relativa.
Basta calcular a média dos valores de X e Y: Soma todos os valores de X e divide pelo numero
total de valores somados. Fazer o mesmo para Y.
A Distância Relativa pode ser calculada como a
X2+y2
X2 é a média de Xprocessado ao quadrado: 22= 4
Y2 é a média de Yprocessado ao quadrado: (-1)2= 1
Dis Relat: 5= 2,2
A Distância total é a soma das distâncias: 17,906µm
Então a Direcionalidade vai ser: Dis rel/ Dis total= 2,2/17,906= 0,124
Ou seja, mais próximo de zero logo, essa célula não realizou uma trajetória direcional.
Direcionalidade varia de 0-1.