UPCII M Microbiologia
Teórica 6-7
2º Ano
2014/2015
Sumário
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Capítulo V. Diagnóstico Microbiológico
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Produtos biológicos para análise
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Colheita e transporte de amostras
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Identificação do agente infecioso:
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Métodos Fenotípicos (Culturais e Bioquímicos)
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Métodos Genotípicos (Moleculares)
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Métodos Imunológicos (Serológicos)
T6 MJC
17-09-2014
Diagnóstico Microbiológico
Paciente
Pedido de Exame
Diagnóstico e Terapia
Colheita
Interpretação
Transporte
Resultado
Laboratório
T6 MJC
17-09-2014
Colheitas a partir de:
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Excreções
Secreções
Tecidos
Órgãos
T6 MJC
17-09-2014
Colheita e Transporte das amostras
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Anaeróbios / Fastidiosos / Vírus
Psicrófilos / Mesófilos
Colheitas de locais com MI
Contaminação do ambiente (Expetoração e saliva)
Meio de recolha  Eficácia
Meio de transporte
Antibioterapia precedente
Tempo da colheita /Rota de infecção e ciclo de infecção
Tempo de espera para processamento
17-09-2014
T6 MJC
Métodos de diagnóstico
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Fenotípicos
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Morfológicos
Fisiológicos/Bioquímicos
Químicos
Genotípicos
Imunológicos
Baseados em cultura
Podem ser
independentes de
cultura
Resultados preliminares e definitivos
T6 MJC
17-09-2014
Métodos fenotípicos - Observação directa - MO
Ovos de helmintas
Espiroquetas
Cryptococcus neoformans
Preparação Tzanck (infecção por vírus
herpes simplex ou varicella-zoster)
17-09-2014
T6 MJC
Métodos fenotípicos - Observação directa
- Colorações
A= Não acid fast
Fluido CerebroEspinal
Bacillus antracis
B=Acid Fast
T6 MJC
17-09-2014
Métodos fenotípicos - Observação directa - ME
T6 MJC
17-09-2014
Métodos fenotípicos - Observação directa Imunocitoquímica
T6 MJC
17-09-2014
Métodos fenotípicos - Bioquímicos
• Fermentação de vários hc
• Hidrólise de gelatina, amido e outros
• Catalase, oxidase, coagulase
• metabolitos
T6 MJC
17-09-2014
Métodos fenotípicos - Outros



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Serotipagem
Biotipagem
Tipagem de fagos
Tipagem de bacteriocinas
T6 MJC
Cultura
Meios de Cultura: Função?
Meios de transporte: Função?
Incubação: (Temperatura e oxigénio)
T6 MJC
17-09-2014
Cultura
Reacções com o meio de cultura
Streptococcus beta hemolítico
T6 MJC
17-09-2014
Cultura-tipagem fenotípica e bioquímica

Após cultura segue-se identificação:
T6 MJC
17-09-2014
Cultura-tipagem fenotípica e bioquímica

Após cultura segue-se identificação:
T6 MJC
17-09-2014
Cultura – Permite antibiograma
T6 MJC
17-09-2014
Métodos genotípicos – sondas moleculares
T6 MJC
Métodos genotípicos

PCR – gene 16sRNA
T6 MJC
17-09-2014
Métodos genotípicos

PCR
Visualização
Utilização noutras técnicas
T6 MJC
17-09-2014
T6 MJC
Diagnóstico serológico
T6 MJC
Há dois tipos de reação
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Primária:

Formação do complexo antigénio/anticorpo ou imuno
complexo.


Normalmente o anticorpo é marcado (radioatividade, fluorescência
ou imunoenzimas - colorimetria e luminescência)
Secundária:

Alterações físicas ou funcionais resultantes da formação do
imuno complexo.


Físicas: precipitação ou aglutinação
Funcionais: fixaçãodo complemento ou seroneutralização
T6 MJC
Métodos Imunológicos – indiretamente
17-09-2014
T6 MJC
Métodos Imunológicos diretamente
17-09-2014
T6 MJC
Métodos Imunológicos - Aglutinação
T6 MJC
Métodos Imunológicos - Precipitação
T6 MJC
Métodos Imunológicos – Western Blotting
T6 MJC
Métodos Imunológicos
T6 MJC
Métodos Imunológicos – Teste do Complemento
T6 MJC
Métodos Imunológicos – Anticorpos flourescentes
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Diretos
T6 MJC
Métodos Imunológicos – Anticorpos flourescentes

Indiretos
T6 MJC
Métodos Imunológicos - Elisa
T6 MJC
Métodos Imunológicos - Elisa
T6 MJC
Métodos Imunológicos – Elisa sandwich
T6 MJC
Sensibilidade e Especificidade
Presença do
Microrganismo
Ausência do
Microrganismo
17-09-2014
+
-
Verdadeiro
(V+)
Falso
(F-)
Verdadeiro
(V-)
Falso
(F+)
T6 MJC
T6 MJC
Bibliografia
Capítulo 15-17
Capítulo 6
Capítulo 17
T6 MJC
17-09-2014