UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AMBIENTAL MAPA CONCEPTUAL: Metabolitos secundarios y actividad antimicrobiana de Pluchea carolinensis. AUTORES: Lic. Wilmer Hervet Perera Córdova, Lic. Leonora González Mesa, Armando Luis Payo Hill CURSO: BIOTECNOLOGIA DOCENTE: Dr. HEBERT HERNAN SOTO GONZALES ESTUDIANTE: ELVIS JOEL ZEGARRA PUMA CICLO: VII METABOLITOS SECUNDARIOS Y ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE PLUCHEA CAROLINENSIS METODOS INTRODUCCION Especie Pluchea carolinensis (salvia de playa) un arbusto silvestre. Utilizada en medicina tradicional para eliminar fiebres, digestiones lentas, dolores de riñones, de cabeza, reumatismo, aires y ronqueras y la tintura de las hojas presenta actividad antiinflamatoria Colecta y preparación del material vegetal Marzo de 2003 en Sierra de Rosario, provincia Pinar del Río Se secó a temperatura ambiente y posteriormente en estufa a 50 oC y se molinó hasta reducirlas a partículas finamente divididas, obteniéndose 85g. Tamizaje fitoquímico De 10 g de las hojas secas y molinadas se realizaron extracciones mediante reflujo utilizando n-hexano, etanol y agua. n-hexánico: alcaloides, triterpenos/esteroides, quinonas…; extracto etanólico: compuestos reductores, agrupamientos lactónicos, quinonas, saponinas…, y extracto acuoso: saponinas, alcaloides, fenoles y/o taninos, compuestos reductores y flavonoides. METODOS Fraccionamiento 85 g de las hojas secas y pulverizadas a temperatura ambiente 5 veces durante 72 h en EtOH:H2O en una relación (7:3), se filtró y se reflujó con similar mezcla hidroalcohólica por un tiempo de 3 h. Se realizaron extracciones líquido-líquido empleando: nhexano, CHCl3 , AcOEt, n-BuOH, obteniéndose 5 extractos: 2,2 g del hexánico 0,95 g de clorofórmico 1,7 g del acetato de etilo 1,2 g del butanólico 11,4 g del acuoso Evaluación de la actividad antimicrobiana Se realizó frente a los microorganismos Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Candida albicans, Aspergillus niger, Trichophyton mentagrophytes y Fusarium oxysporum. Método de inoculación directo en placas de agar: discos de 6 mm de diámetro de papel de filtro a los cuales se les aplicó el extracto a valorar a 100, 500 y 1 000 µg. Se aplicó un disco impregnado con 10 µL del vehículo utilizado en la dilución de las muestras con etanol. Control positivo: 10 µg de ampicilina contra la bacteria grampositivo y 30 µg de amikacina para gramnegativo. Ensayo de la actividad antifúngica: tubos con 5 mL de caldo Sabouraud-dextrosa inoculados con 5 µL de suspensión de levaduras. Para el control positivo se utilizaron 8 µg de nistatina Tabla 1. Grupos químicos presentes en las hojas de P. carolinensis Metabolitos RESULTADOS Extractos nhexánic o Se ensayaron 12 grupos químicos en las hojas de la especie Pluchea carolinensis mediante reacciones de coloración o formación de precipitados. Alcaloides etanólico - + Aminas/aminoácidos - Agrupamientos lactónicos Evaluación de la actividad antimicrobiana + - Azúcares reductores + + Fenoles/taninos - + Glicósidos cardiotónicos - Carotenos Los 5 extractos obtenidos por fraccionamiento fueron evaluados frente a 7 microorganismos, tres bacterias, 3 hongos y una levadura acuoso - Lípidos/aceites esenciales + Quinonas - - Triterpenos/esteroides + + DISCUSION Evaluación de la actividad antimicrobiana Saponinas - + Flavonoides + + Tabla 2. Evaluación de la actividad antimicrobiana de los 5 extractos Los extractos AcOEt y n-BuOH provocaron halos de inhibición de 10 y 9, mientras el extracto CHCl3 7 mm. Si tenemos en cuenta que los extractos CHCl3, AcOEt y nBuOH fueron los únicos que mostraron un perfil cromatográfico característico de flavonoides y que estos metabolitos se les ha reportado este efecto biológico. CMI: concentración mínima inhibitoria, A: Escherichia coli, B: Staphylococcus aureus, C: Bacillus subtilis D: Candida albicans , E: Aspergillus niger, F: Trichophyton mentagrophytes, G: Fuserium oxysporum. Muestra Microorganismos ensayados (CMI, µg/mL) A B C D E F G Extracto nhexano - - - - - - - Extracto CHCl3 - - > 1 000 - - - - Extracto AcOEt - > 1 000 > 1 000 - - - - Extracto n-BuOH - > 1 000 > 1 000 - - - - Extracto acuoso - - - - - - - CONCLUSION Se detectaron alcaloides, agrupamientos lactónicos, azúcares reductores, fenoles/taninos, lípidos/aceites esenciales, triterpenos/esteroides, saponinas y flavonoides en las hojas de Pluchea carolinensis. Los extractos CHCl3, AcOEt y n-BuOH obtenidos por fraccionamiento fueron los únicos en los que se detectó la presencia de flavonoides. Los extractos AcOEt y n-BuOH inhibieron el crecimiento de las bacterias Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis, mientras que el extracto CHCl3 mostró resultados positivos frente a Bacillus subtilis.