Declarações de riscos e segurança da UE
A solução de pararrosanilina é ALTAMENTE INFLAMÁVEL e TÓXICA. Pode causar
cancro. Altamente inflamável. Tóxica por inalação, em contacto com a pele e em caso de
ingestão. Tóxica: possibilidade de efeitos irreversíveis bastante graves por inalação, em
contacto com a pele e em caso de ingestão. Limitado aos utilizadores profissionais.
Atenção – Evitar a exposição – obter instruções especiais antes da utilização. Conservar
longe de qualquer fonte de ignição – não fumar. Usar vestuário de protecção e luvas
adequadas. Em caso de acidente ou de indisposição, consultar imediatamente um médico
(mostrar-lhe o rótulo se possível).
O álcool reagente é ALTAMENTE INFLAMÁVEL e IRRITANTE. Altamente inflamável.
Irritante para os olhos, vias respiratórias e pele. Manter o recipiente adequadamente
fechado. Conservar longe de qualquer fonte de ignição – não fumar. Em caso de contacto
com os olhos, lavar imediata e abundantemente com água e consultar um médico. Usar
vestuário de protecção adequado.
O metanol é ALTAMENTE INFLAMÁVEL e TÓXICO. Altamente inflamável. Tóxico por
inalação, em contacto com a pele e em caso de ingestão. Tóxico: possibilidade de efeitos
irreversíveis bastante graves por inalação, em contacto com a pele e em caso de ingestão.
Manter o recipiente adequadamente fechado. Conservar longe de qualquer fonte de
ignição – não fumar. Usar vestuário de protecção e luvas adequadas. Em caso de acidente
ou de indisposição, consultar imediatamente um médico (mostrar-lhe o rótulo se possível).
O xilol é NOCIVO. Inflamável. Nocivo por inalação e em contacto com a pele. Irritante
para a pele. Evitar o contacto com os olhos.
COLORAÇÃO DE FERRO
ACCUSTAIN ®
(Procedimento N.º HT20)
UTILIZAÇÃO PREVISTA
A coloração de ferro da Sigma-Aldrich destina-se a ser utilizada na coloração
histológica do ferro em esfregaços do sangue ou da medula óssea. Os reagentes de
coloração de ferro destinam-se à “utilização em diagnóstico in vitro”.
A coloração de ferro baseia-se na reacção1 bem conhecida de azul da Prússia, em
que o ferro iónico reage ao ferrocianeto ácido produzindo uma cor azul. Ambos os
procedimentos standard e um procedimento para coloração rápida no microondas2-4
estão descritos.
REAGENTES
SOLUÇÃO DE FERROCIANETO DE POTÁSSIO, N.º de Catálogo HT20-1
Ferrocianeto de potássio, 4% p/v.
SOLUÇÃO DE ÁCIDO CLORÍDRICO, N.º de Catálogo HT20-2
Ácido clorídrico, 1,2 mmol/L.
SOLUÇÃO DE PARARROSANILINA, N.º de Catálogo HT20-3
Cloridrato de pararrosanilina, 1% p/v, em metanol com um estabilizador.
PROCEDIMENTO:
COLHEITA DE AMOSTRAS:
Recomenda-se que a colheita de amostras seja realizada de acordo com o
documento M29-A2 da NCCLS. Nenhum método de teste conhecido poderá garantir
totalmente que as amostras sanguíneas ou de tecido não irão transmitir infecções. Por
essa razão, todos os derivados sanguíneos ou amostras de tecido deverão ser
considerados potencialmente infecciosos.
Qualquer secção de tecido bem preparada e cortada em 5–6 microns e fixada em
formalina tamponada neutra é satisfatória para a coloração de ferro. Os esfregaços de
sangue ou medula óssea são preparados de acordo com os procedimentos normais, são
secos ao ar durante, pelo menos, 30 minutos e fixados em metanol absoluto durante
7 minutos.5
ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE:
Armazenar os reagentes à temperatura ambiente (18–26°C). Os reagentes
permanecem estáveis até ao final do prazo de validade indicado nos rótulos.
PREPARAÇÃO:
Preparar a SOLUÇÃO DE TRABALHO DE COLORAÇÃO DE FERRO misturando
volumes iguais de solução de ferrocianeto de potássio, N.º de Catálogo HT20-1 e solução
de ácido clorídrico, N.º de Catálogo HT20-2. Utilizar uma vez e, em seguida, eliminar.
A SOLUÇÃO DE TRABALHO DE PARARROSANILINA é preparada através da adição
de 1 mL de Solução de Pararrosanilina, N.º de Catálogo HT20-3 e 50 mL de água. Preparar
diariamente uma solução fresca. Utilizar uma vez e eliminar.
PRECAUÇÕES:
Deverão ser aplicadas as precauções normais relativamente ao manuseamento de
reagentes laboratoriais. Eliminar os resíduos de acordo com todos os regulamentos locais,
estaduais, regionais ou nacionais. Consultar a ficha de dados de segurança dos materiais
para obter informações mais actualizadas sobre os riscos, perigos ou segurança.
As lâminas de controlo Iron TISSUE-TROL são lâminas de tecido humano embebidas
em parafina que contêm ferro, pelo que devem ser consideradas como potencialmente
infecciosas.
MATERIAIS ESPECIAIS NECESSÁRIOS MAS NÃO FORNECIDOS:
As lâminas de controlo positivo, como as Sigma Tissue-Trol™ Ferro N.º de Catálogo I 3387,
devem ser incluídas em cada execução.
Etanol, absoluto ou álcool reagente
Metanol, sem acetona, (NOTA: necessário apenas para os esfregaços de sangue/medula
óssea)
APENAS APLICÁVEL AO PROCEDIMENTO PARA MICROONDAS:
Forno microondas H2100 ACCUMATE™, N.º de Catálogo A 9084 (110 v), ou A 9209 (220 v)
Jarras de coloração, N.º de Catálogo S 5641
Declarações de riscos e segurança dos EUA
Atenção: Evitar o contacto e inalação da solução de ferrocianeto de potássio. Órgão
alvo: Sangue.
A solução de ácido clorídrico é TÓXICA. Tóxica por inalação. Provoca queimaduras.
Em caso de contacto com os olhos, lavar imediata e abundantemente com água e
consultar um médico. Usar vestuário de protecção, luvas e equipamento de protecção para
os olhos/face adequados. Em caso de acidente ou de indisposição, consultar
imediatamente um médico (mostrar-lhe o rótulo se possível).
A solução de pararrosanilina é INFLAMÁVEL e TÓXICA. Pode causar cancro. Tóxica
por inalação, em contacto com a pele e em caso de ingestão. Tóxica: possibilidade de
efeitos irreversíveis bastante graves por inalação, em contacto com a pele e em caso de
ingestão. Irritante para os olhos e pele. Manter o recipiente adequadamente fechado. Evitar
a exposição – obter instruções especiais antes da utilização. Conservar longe de qualquer
fonte de ignição – não fumar. Evitar o contacto com a pele. Evitar acumulação de cargas
electrostáticas. Usar vestuário de protecção, luvas e equipamento de protecção para os
olhos/face adequados. Em caso de acidente ou de indisposição, consultar imediatamente
um médico (mostrar-lhe o rótulo se possível).
O álcool reagente é INFLAMÁVEL e IRRITANTE. Irritante para os olhos, vias
respiratórias e pele. Manter o recipiente adequadamente fechado. Conservar longe de
qualquer fonte de ignição – não fumar. Em caso de contacto com os olhos, lavar imediata
e abundantemente com água e consultar um médico. Usar vestuário de protecção
adequado. Órgãos alvo: Nervos e fígado.
O metanol é INFLAMÁVEL e TÓXICO. Tóxico por inalação, em contacto com a pele e
em caso de ingestão. Tóxico: possibilidade de efeitos irreversíveis bastante graves por
inalação, em contacto com a pele e em caso de ingestão. Irritante para os olhos e pele.
Manter o recipiente adequadamente fechado. Conservar longe de qualquer fonte de
ignição – não fumar. Evitar acumulação de cargas electrostáticas. Evitar o contacto com a
pele. Usar vestuário de protecção e luvas adequadas. Em caso de acidente ou de
indisposição, consultar imediatamente um médico (mostrar-lhe o rótulo se possível).
O xilol é INFLAMÁVEL e NOCIVO. Possibilidade de risco de comprometimento da
fertilidade. Pode ser prejudicial para o feto. Nocivo por inalação e em contacto com a pele.
Irritante para as vias respiratórias e pele. Risco de lesões oculares graves. Conservar longe
de qualquer fonte de ignição – não fumar. Em caso de contacto com os olhos, lavar
imediata e abundantemente com água e consultar um médico. Usar vestuário de
protecção, luvas e equipamento de protecção para os olhos/face adequados. Em caso de
acidente ou de indisposição, consultar imediatamente um médico (mostrar-lhe o rótulo
se possível).
NOTAS:
Se for utilizado o forno microondas H2100 da Sigma-Aldrich, consultar o Manual do
Utilizador para obter as instruções.
Os depósitos de ferro poderão ser retirados utilizando ácido que contenha fixadores.7
Os dados obtidos com este procedimento servem apenas para auxiliar o diagnóstico
e deverão ser analisados em conjunto com outros testes de diagnóstico ou informações
clínicas.
PROCEDIMENTO:
PROCEDIMENTO PARA AS SECÇÕES TECIDULARES:
1. Desparafinar e hidratar o tecido em água desionizada.
2. Colocar as lâminas em solução de trabalho de coloração de ferro durante 10 minutos.
3. Lavar em água desionizada.
4. Proceder à coloração em solução de trabalho de pararrosanilina durante 3–5 minutos.
5. Lavar em água desionizada.
6. Desidratar rapidamente em álcool e xilol e montar.
PROCEDIMENTO PARA OS ESFREGAÇOS DE SANGUE OU MEDULA ÓSSEA:
1. Colocar os esfregaços fixados na solução de trabalho de coloração de ferro durante
10 minutos.
2. Lavar em água desionizada.
3. Realizar uma contracoloração durante 5 minutos em solução de trabalho de
pararrosanilina.
4. Passar por água desionizada e deixar secar ao ar.
PROCEDIMENTO NO FORNO MICROONDAS H2100 ACCUMATE™:
1. Desparafinar as lâminas e hidratar em água desionizada. Nos casos de coloração de
esfregaços de sangue periférico ou medula óssea, fixar em metanol durante
7 minutos e, em seguida, hidratar em água desionizada.
2. Colocar as lâminas em 40 mL de solução de trabalho de coloração de ferro contida
numa jarra de Coplin plástica. Cobrir folgadamente com a tampa antes de colocar no
forno ou utilizar jarras de Coplin com tampas com orifícios perfurados.
3. Colocar no microondas a 400 watts durante 30 segundos. Eliminar a solução após
a utilização.
4. Lavar em água desionizada.
5. Colocar as lâminas em 40 mL de solução de trabalho de pararrosanilina contida numa
jarra de Coplin plástica.
1-PT
6.
7.
Colocar no microondas a 800 watts durante 10 segundos. Deixar incubar durante
2 minutos. Utilizar uma vez e eliminar.
Lavar as secções tecidulares em água desionizada, desidratar rapidamente em álcool,
limpar em xilol e montar. Passar os esfregaços de sangue ou medula óssea por água
desionizada e deixar secar ao ar.
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO
SECÇÕES TECIDULARES
Pigmento férrico – Azul claro
Núcleos – Vermelhos
Citoplasma – Cor-de-rosa claro
NOTA: Os depósitos mais carregados aparecem a azul escuro.
ESFREGAÇOS DE SANGUE OU MEDULA ÓSSEA
Sideroblastos: Consistem em eritrócitos nucleados contendo, pelo menos, um grânulo
azul de pequena dimensão. Se os grânulos azuis se situarem à volta do núcleo, trata-se de
sideroblasto em anel.
Siderócitos: Consistem em eritrócitos não nucleados contendo, pelo menos, um grânulo azul.
Ferro reticuloendotelial: Normalmente observado sob a forma de partículas azuis no
esfregaço de medula óssea ou como partículas azuis no citoplasma ou células fagocitárias.
Se os resultados observados forem diferentes dos esperados, contactar a Assistência
Técnica da Sigma-Aldrich para mais informações.
BIBLIOGRAFIA
1. Theory and Practice of Histotechnology, 2nd ed. DC Sheehan, BB Hrapchak, Editors, CV
Mosby, St. Louis (MO) 1980 p 217
2. Leong AS-Y, Milios J: Rapid immunoperoxidase staining of lymphocyte antigens using
microwave irradiation. J Pathol 148:183, 1986
3. Brinn NT: Rapid metallic histologic staining using the microwave oven. J Histotechnol
6:125, 1983
4. Valle S: Special stains in the microwave oven. J Histotechnol 9:237, 1986
5. Carson: A Self Instructional Text. ASCP Press, Chicago (IL), 1990
6. Atlas of Cytochemistry and Immunochemistry of Hematologic Neoplasms. T Sun, C-Y Li,
LT Yam, Editors, ASCP, Chicago (IL), 1985, p 205
7. Theory and Practice of Histological Techniques, 5th Edition JD Bancroft, M Gamble,
Editors Churchhill Livingstone, New York 2002 p 244
A Sigma-Aldrich, Inc. garante que os seus produtos estão em conformidade com as
informações contidas nesta e em outras publicações da Sigma-Aldrich. O comprador
deverá determinar a adequação do(s) produto(s) ao fim particular a que se destinam.
Poderão aplicar-se termos e condições adicionais. Consultar o verso da factura ou carta de
porte para mais informações sobre os termos e condições de venda adicionais.
Procedimento N.º HT20
Revisão Anterior: 2003-09
Revisto: 2006-08
AR-MED Ltd., Runnymede Malthouse
Egham, TW20 9BD Reino Unido
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