Syva®
actividade enzimática. A enzima activa converte o dinucleótido de adenina nicotinamida (NAD)
para NADH, resultando numa alteração na absorvância que é medida espectrofotometricamente.
A G6PDH sérica endógena não interfere, pois a coenzima funciona apenas com a enzima
bacteriana (Leuconostoc mesenteroides) utilizada no ensaio.
d.a.u.®
Cannabinoid 20 ng Assay
4
▼
Informações actualizadas:
Consultar as secções 12, 14 e o painel final.
®
Syva
3M694UL.15SL
Reagentes
REF
Descrição do produto
3M619
Aproximadamente 300 testes
Ensaio Emit ® d.a.u.® Canabinóide 20 ng
Reagente A Anticorpo/Substrato
6 ml*
Anticorpos monoclonais de rato reactivos a ∆9-THC,†
glicose-6-fosfato, dinucleótido de adenina nicotinamida,
Tampão Tris, agentes espessantes, estabilizadores,
e azida de sódio 0.05%
Ensaio Canabinóides
1
Fim a que se destina
O Ensaio Emit ® d.a.u.® Canabinóide 20 ng é um imunoensaio enzimático homogéneo que se
destina a ser utilizado na análise qualitativa e semiquantitativa de canabinóides em urina
humana. Este ensaio utiliza um nível de "cutoff" de 20 ng/ml para distinguir as amostras
positivas das negativas.
Emit ®
d.a.u.®
O Ensaio
Canabinóide 20 ng fornece apenas um resultado preliminar de teste
analítico. Deve ser utilizado um método químico alternativo 1 com maior especificidade para
obter um resultado analítico confirmado. O método de confirmação preferido é a
cromatografia gasosa/espectrometria de massa (CG/EM).1 Encontram-se disponíveis outros
métodos de confirmação química. A consideração clínica e a avaliação profissional deverão
ser utilizadas em qualquer resultado do teste de droga de abuso, particularmente quando
são utilizados resultados positivos preliminares.
2
Quantidade/Volume
Reagente B Enzima
∆9-THC marcado com glicose-6-fosfato desidrogenase
bacteriana,† Tampão Tris, agentes espessantes,
estabilizadores, e azida de sódio 0.05%
6 ml*
Tampão concentrado Emit ® para o ensaio de drogas
Quando diluído, contém Tampão Tris, surfactante e
azida de sódio 0.05%
13.3 ml
9A049
Calibrador Emit ® de Nível 0 (negativo)‡
5 ml*
9M209
Calibrador Emit ® de 20 ng/ml Emit ® ∆9 Canabinóide‡
5 ml*
9M509
Calibrador Emit ® de 50 ng/ml Emit ® ∆9 Canabinóide‡
9A059
Calibrador Emit ® de Nível 0 (negativo)‡
(Consultar Tabela 1 para as concentrações da droga)
5 ml*
25 ml*
*Os reagentes e calibradores são enviados sob a forma liofilizada. O volume indicado é o
volume necessário para a reconstituição.
†
A titulação do anticorpo e a actividade do conjugado enzimático podem variar de lote para
lote.
‡
Necessário para utilização com o Ensaio Emit ® d.a.u.® Canabinóide 20 ng. Vendido em
separado.
Resumo e explicação do teste
Marijuana é uma mistura de folhas secas e as extremidades em flor da planta Cannabis sativa L.
Os agentes que produzem os efeitos alucinogénicos e outros efeitos biológicos da marijuana
são denominados canabinóides.
O canabinóide ∆9-tetrahidrocanabinol (∆9-THC) é o principal ingrediente psicoactivo na
marijuana e no haxixe. O composto ∆9-THC é rápida e eficientemente absorvido através da
inalação ou a partir to tracto gastrointestinal,2 e é quase totalmente metabolizado pelas enzimas
do fígado.3 Os níveis máximos de plasma de ∆9-THC ocorrem dentro de 10 minutos da inalação
e aproximadamente 1 hora após ingestão.2 A excreção dos metabolitos urinários e a excreção
através das fezes inicia-se dentro de 72 horas após a exposição.2,3 A concentração depende do
montante total de THC absorvido, da frequência de abuso, taxa de libertação do tecido gordos e
da hora da colheita da amostra em relação à utilização. Em utilizadores crónicos, o THC pode
acumular em tecido gordo mais rapidamente do que pode ser eliminado. Esta acumulação dá
origem a tempos de detecção mais longos na análise de urina para os utilizadores crónicos do
que para utilizadores ocasionais.4
Nota: Os reagentes A e B são fornecidos como um conjunto correspondente. Não devem ser
trocados com componentes de kits com números de lote diferentes.
Os Calibradores Emit ® ∆9 Canabinóide, quando reconstituídos, contêm as concentrações de
11-nor-∆9-THC-9-COOH apresentadas na Tabela 1.
∆9-THC-9-COOH nos calibradores Emit ® ∆9 Canabinóide
Tabela 1 — Concentrações de 11-nor-∆
Calibrador
Concentração (ng/ml)
®
Calibrador Emit de Nível 0 (negativo)
0
Calibrador de 20 ng/ml Emit ® ∆9 Canabinóide
20
Calibrador de 50 ng/ml Emit ® ∆9 Canabinóide
50
Para utilização em diagnóstico in vitro.
O Ensaio Emit d.a.u. Canabinóide 20 ng detecta o principal metabolito do ∆ -THC,
11-nor-∆9-THC-9-ácido carboxílico na urina humana. Detecta igualmente outros metabolitos
∆9-THC. O nível de "cutoff" para a distinção entre as amostras positivas e negativas é de
20 ng/ml.* A inalação passiva do fumo da marijuana pode produzir resultados positivos com
ensaios canabinóides de baixo "cutoff". As amostras de urina de não fumadores podem testar
positivas relativamente a metabolitos canabinóides, mas apenas após exposição a elevadas
concentrações de fumo de marijuana numa área pequena não ventilada. Tais condições
extremas de exposição são claramente não típicas das situações sociais usuais.5
Precauções
• Os reagentes e o tampão contêm azida de sódio. A azida de sódio pode reagir com as
canalizações de chumbo ou cobre formando azidas metálicas altamente explosivas. Se os
resíduos forem eliminados através dos esgotos, enxaguar com um grande volume de água
para prevenir a formação de azidas.
Não se observaram resultados positivos em amostras contendo outros compostos
estruturalmente não relacionados com os canabinóides.
Preparação e armazenamento dos componentes do ensaio
Reagentes
Para reconstituir os reagentes A e B:
®
®
9
*Este ensaio não se destina a testes sob as directrizes SAMHSA (Substance Abuse and
Mental Health Services Administration) (previamente normativas NIDA). O nível de "cutoff"
recomendado pela SAMHSA é de 50 ng/ml.
Os métodos utilizados historicamente para a detecção de canabinóides em líquidos biológicos
incluem o radioimunoensaio, cromatografia gasosa/espectrometria de massa, cromatografia
gasosa e imunoensaio enzimático.2,3
Apesar de outras técnicas de confirmação para além da CG/EM poderem ser adequadas para
algumas drogas de abuso, a CG/EM é geralmente aceite como uma técnica de confirmação
eficaz para todas as drogas, uma vez que fornece o melhor nível de confiança no resultado.1
3
Princípio
O Ensaio Emit ® é uma técnica de imunoensaio enzimático homogéneo utilizada para a análise de
compostos específicos em urina humana.6 O ensaio baseia-se na competição para os locais de
ligação dos anticorpos entre a droga presente na amostra e a droga marcada com a enzima
glucose-6-fosfato desidrogenase (G6PDH). A actividade enzimática diminui após a ligação com
o anticorpo, pelo que a concentração da droga na amostra pode ser medida em termos de
• Após a reconstituição inicial, cada kit não contém mais do que 0.0025% p/v de mercúrio,
sob a forma de timerosal (timerosal 0.005% p/v). Manusear e eliminar de forma adequada.
• Registar a data de reconstituição.
• Retirar o selo metálico e a tampa de borracha do frasco.
• Marcar a tampa de borracha para a identificar com o frasco.
• Adicionar 6 ml de água destilada ou desionizada.
• Colocar a tampa de novo no frasco.
• Agitar o frasco até o pó se encontrar dissolvido.
Manter os reagentes reconstituídos a uma temperatura ambiente de 18–25°C (64–77°F) durante
pelo menos uma hora antes da utilização; alternativamente, reconstituir os reagentes no dia
anterior a serem utilizados e armazenar em frigorífico (2–8°C, 36–46°F) de um dia para o outro.
Permitir que os reagentes atinjam a temperatura ambiente antes da sua utilização.
Calibração
Os seguintes três níveis de calibradores disponíveis a partir da Syva Company destinam-se a
utilização com o Ensaio Emit ® d.a.u.® Canabinóide 20 ng: o Calibrador Emit ® de Nível 0
(negativo), Calibrador Emit ® ∆9 Canabinóide 20 ng/ml ("cutoff"), e o Calibrador Emit ® ∆9
Canabinóide 50 ng/ml (máximo). Para analisar os dados, utilizar o Calibrador Emit ® ∆9
Canabinóide 20 ng/ml para a análise qualitativa e os três calibradores para a análise
semiquantitativa. Calibrar no início de cada dia de trabalho. Recalibrar se mudar de reagentes ou
de acordo com as indicações dos resultados de controlo.
Tampão
Para preparar a solução tampão a partir do tampão concentrado:
• Registar a data da preparação do tampão.
• Retirar a tampa e o selo do frasco de tampão concentrado.
• Deitar a totalidade do tampão concentrado para um contentor de plástico ou de vidro, limpo
e graduado.
• Enxaguar o frasco do concentrado várias vezes com água destilada ou desionizada, deitando
a água no contentor de cada vez que o fizer.
Consultar as instruções de utilização do Calibrador Emit ® ∆9 Canabinóide ou o Manual do
operador do Sistema Syva ® ETS ® Plus.
• Encher o contentor até atingir a marca dos 200 ml com água destilada ou desionizada.
Controlo da Qualidade
Validar a calibração diária através do ensaio de um controlo positivo e de um negativo. Se os
resultados se situarem dentro dos limites aceitáveis definidos pelo seu laboratório e as
separações mínimas se mantiverem, efectuar o ensaio das amostras. (Para obter informações
específicas do calibrador ou da curva de calibração, consultar o cartão de especificações do
calibrador fornecido no kit do ensaio).
• Colocar a tampa no contentor e inverter várias vezes para misturar exaustivamente.
Tabela 2 — Preparação, armazenamento e estabilidade dos componentes do ensaio
Componente
Temperatura
de armazen.
Volume
Tempo e Temp.
Estabilidade*
de Reconst.
Mínimos
Preparado/
(ml)
de Reconst.
Não aberto
Aberto
Reagente A
2–8°C
(36–46°F)
6
1h
18–25°C
(64–77°F)
Prazo val.
9 sem
Reagente B
2–8°C
(36–46°F)
6
1h
18–25°C
(64–77°F)
Prazo val.
9 sem
Nenhum
Prazo val.
—
—
12 sem
Prazo val.
12 sem
Tampão
Não aberto
Diluído
Calibradores†
2–8°C
(36–46°F)
18–25°C
(64–77°F)
2–8°C
(36–46°F)
200
5 ou
25 (cal neg)
1h
18–25°C
(64–77°F)
Manutenção diária
Consultar os procedimentos de encerramento e manutenção do Manual do operador do Sistema
Syva ® ETS ® Plus.
8
O Calibrador de 20 ng/ml Emit ® ∆9 Canabinóide é utilizado como uma referência para distinguir
amostras ''positivas'' de amostras ''negativas''.
Resultados positivos
Uma amostra que apresente uma alteração do valor de absorvância (∆A) igual ou superior ao
valor ∆A do Calibrador Emit ® ∆9 Canabinóide 20 ng/ml ("cutoff") deve ser interpretada como
positiva. A amostra contém canabinóides.
Resultados negativos
Uma amostra que apresente uma alteração do valor de absorvância (∆A) igual ou inferior ao
valor ∆A do Calibrador Emit ® ∆9 Canabinóide 20 ng/ml ("cutoff") deve ser interpretada como
negativa. Ou a amostra não contém canabinóides ou estes estão presentes em concentrações
inferiores ao nível de "cutoff" para este ensaio.
*A estabilidade depende da manipulação dos reagentes conforme indicado.
†
Após a reconstituição, armazenar os calibradores sempre na vertical.
Permitir que todos os componentes armazenados em frigorífico atinjam a temperatura ambiente
de 18–25°C (64–77°F) antes da utilização. Não congelar ou expor a temperaturas acima de
32°C (90°F).
5
Resultados
Resultados semiquantitativos
É possível efectuar determinações semiquantitativas de concentrações de canabinóides através
do Ensaio Emit ® d.a.u.® Canabinóide 20 ng. Quando forem pretendidas estimativas das
concentrações relativas de canabinóides, deve ser preparada uma curva padrão através da
elaboração de um gráfico com os valores ∆A relativos ao Calibrador de Nível 0 Emit ® e os
Calibradores Emit ® ∆9 20 ng/ml e 50 ng/ml contra as respectivas concentrações de 11-nor-∆9THC-9-ácido carboxílico. Os valores de ∆A das amostras positivas podem ser comparados com
esta curva padrão.
Instrumentos
A Syva Company fornece instruções para a utilização do Sistema Syva ® ETS ® Plus.7,8 Contactar
o Centro de assistência técnica nos EUA ou o representante local da Syva Company para obter
mais informações.
• As amostras de urina podem ser recolhidas em contentores de plástico (isto é, polipropileno,
policarbonato, polietileno) ou de vidro. Alguns plásticos adsorvem os fármacos.
Os imunoensaios que produzem um único resultado na presença de múltiplos componentes não
podem quantificar completamente a concentração dos componentes individuais. A
interpretação dos resultados deve também ter em consideração que as concentrações de urina
podem variar muito com a ingestão de líquidos e com outras variáveis biológicas. Deve ser
utilizado um método químico alternativo com maior especificidade para obter um resultado
analítico confirmado (consultar a Secção 1, Fim a que se destina).
• Se não forem analisadas imediatamente, as amostras podem ser armazenadas sem
refrigeração durante um período máximo de sete dias após a colheita.
9
6
Colheita e preparação das amostras
Limitações
• Durante o ensaio, as amostras devem estar à temperatura ambiente de 18–25°C (64–77°F).
• As amostras com turvação elevada devem ser centrifugadas antes da análise.
• O ensaio foi concebido para ser utilizado apenas com urina humana.
• As amostras de urina com um pH situado dentro dos limites normais (4.5–8) não requerem
qualquer ajuste prévio de pH.
• Um resultado positivo do ensaio indica a presença de canabinóides mas não indica nem
mede o nível de intoxicação.
• As amostras com pH situado fora dos limites normais devem ser alvo de suspeita de
adulteração.
• Outras substâncias e/ou outros factores não referidos (por ex., erros técnicos ou de
procedimento) podem interferir com o teste e produzir resultados falsos.
• A adulteração da amostra de urina poderá originar resultados erróneos. Se houver suspeita
de adulteração, obter outra amostra.
10
• As amostras de urina humanas deverão ser manipuladas e tratadas como se fossem
potencialmente infecciosas.
7
Valores esperados
Quando o Ensaio Emit ® d.a.u.® Canabinóide 20 ng é utilizado como um ensaio qualitativo, a
quantidade de drogas e metabolitos detectada pelo ensaio em determinada amostra não pode
ser estimada. Os resultados do ensaio distinguem as amostras positivas das negativas—positivo
indicando amostras que contêm canabinóides.
Procedimento
Quando utilizado semiquantitativamente, o ensaio produz concentrações cumulativas
aproximadas da droga detectada pelo ensaio (consultar a Secção 8, Resultados).
Materiais fornecidos
Ensaio Emit ® d.a.u.® Canabinóide 20 ng
Reagente A
Reagente B
Tampão concentrado para o ensaio de drogas
11
Desempenho
Os dados apresentados nesta secção foram recolhidos a partir do Sistema Syva ® ETS ®.
Materiais necessários mas não fornecidos
Calibrador Emit ® de Nível 0 (negativo)
Calibrador de 20 ng/ml Emit ® ∆9 Canabinóide
Calibrador de 50 ng/ml Emit ® ∆9 Canabinóide
Outros Items:
Pipeta volumétrica de Classe A
Água destilada ou desionizada
Exactidão
Cento e seis (106) amostras clínicas de urina foram testadas utilizando o Ensaio Emit ® d.a.u.®
Canabinóide 20 ng. Estas mesmas amostras foram testadas por CG/EM, utilizando um nível de
referência de 5 ng/ml 11-nor-∆9-THC-9-ácido carboxílico para distinguir os resultados positivos
dos negativos. Das 106 amostras testadas, 56 apresentaram resultados positivos em ambos os
métodos e 47 amostras apresentaram resultados negativos em ambos os métodos. As três
amostras restantes foram negativas pelo ensaio Emit ® d.a.u.® e positivas por CG/EM, estas
amostras continham entre 7 e 11 ng/ml de 11-nor-∆9-THC-9-ácido carboxílico conforme
determinado por CG/EM.
Sequência do ensaio
Para executar o ensaio, consultar o Manual do operador do Sistema Syva ® ETS ® Plus.
2
3M694UL.15SL
Em investigações clínicas, a precisão intra-ensaio foi determinada utilizando calibradores Emit ®
contendo concentrações de 11-nor-∆ 9-THC-9-ácido carboxílico de 0 ng/ml, 20 ng/ml e
50 ng/ml. Os resultados são apresentados na Tabela 3.
13
Bibliografia
1. Urine Testing for Drugs of Abuse. National Institute on Drug Abuse (NIDA) Research
Monograph 73, 1986.
Tabela 3 — Precisão intra-ensaio
2. Baselt RC: Disposition of Toxic Drugs and Chemicals in Man, ed 3. Chicago, IL, Year Book
Medical Publishers Inc., 1990, pp 780–783.
N
Média
∆A)
(∆
24
643
5.8
0.89
3. Ellenhorn MJ, Barceloux DG: Medical Toxicology. New York, Elsevier Science Publishing
Company, Inc, 1988, pp 675-682.
Calibrador de 20 ng/ml ∆9
24
(20 ng/ml 11-nor-∆9-THC-9-ácido carboxílico)
713
8.4
1.2
4. Wyngarrden JB, LH Jr (eds): Cecil Textbook of Medicine. Philadelphia, WB Saunders Co,
1986, pp 52–58.
Calibrador de 50 ng/ml ∆9
24
(50 ng/ml 11-nor-∆9-THC-9-ácido carboxílico)
795
7
0.88
5. Kwong TC, et al: Critical issues in urinalysis of abused substances: report of the substance
abuse testing committee. Clin Chem 1988; 34/3: 605–632.
Especificidade
O Ensaio Emit ® d.a.u.® Canabinóide 20 ng detecta os principais metabolitos do ∆9-THC na
urina. Na tabela 4 são apresentados os compostos detectados por este ensaio e os níveis nos
quais esses compostos têm uma resposta aproximadamente equivalente à do calibrador "cutoff"
(Calibrador Emit ® ∆9 Canabinóide 20 ng/ml). Cada concentração representa o nível de
reactividade para o composto referido, quando é adicionado a uma amostra de urina negativa.
Se uma amostra contém mais do que um composto detectado pelo ensaio, pode ocorrer a
combinação de concentrações inferiores às referidas em baixo para produzir uma taxa
aproximadamente equivalente ou superior à do calibrador "cutoff".
6. Henry JB: Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods. Philadelphia,
WB Saunders Co. 1991, p 866.
7. Syva ® ETS ® Plus System Operator’s Manual, Cupertino, CA, Syva Company.
8. Syva ® ETS ® Plus System Guide, Cupertino, CA, Syva Company.
▼
Calibrador negativo
(0 ng/ml 11-nor-∆9-THC-9-ácido carboxílico)
Padrão
Coeficiente de
∆A) Variação (%)
Desvio (∆
14
Chave dos símbolos
Tabela 4 — Concentração dos compostos que produzem um resultado aproximadamente
equivalente ao Calibrador de 20 ng/ml Emit ® ∆9 Canabinóide
Composto
Fabricado por
EC REP
Concentração (ng/ml)
9
11-nor-∆ -THC-9-ácido carboxílico
20
8-β-11-Dihidroxi-∆9-THC
30
8-β-Hidroxi-∆9-THC
18
11-Hidroxi-∆8-THC
25
11-Hidroxi-∆9-THC
35
IVD
Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro
LOT
Código do Lote
EXP
YYYY-MM-DD
A Tabela 5 apresenta as concentrações dos compostos que foram testados e que apresentaram
uma resposta negativa. Não se observaram resultados positivos em amostras contendo outros
compostos estruturalmente não relacionados com os canabinóides.
2° C
Amitriptilina
1000
Anfetamina
100
Benzoilecgonina
400
Clorpromazina
Meperidina
REF
Número de Catálogo
Consulte as Instruções de Utilização
2001-12-13 PT-1
12
1000
Metaqualona
500
Morfina
200
Oxazepam
300
Fenciclidina
1000
Prometazina
125
Propoxifeno
100
Secobarbital
1000
Risco e segurança
Tóxico. Contém azida de sódio, timerosal, D-glicose-6-fosfato, sal monossódico.
R20/21: Nocivo por inalação e em contacto com a pele.
R25:
Tóxico por ingestão.
R32:
Em contacto com ácidos liberta gases muito tóxicos.
R33:
Perigo de efeitos cumulativos.
R43:
Pode causar sensibilização em contacto com a pele.
Nota: Esta classificação refere-se ao produto liofilizado; após a reconstituição, os
ingredientes perigosos serão diluídos e estas precauções poderão não ser aplicáveis.
S36/37: Usar vestuário de protecção e luvas adequadas.
▼
▼
Marca CE
1000
S45:
Limitação da Temperatura
Concentração testada (µg/ml)
Ácido acetilsalicílico
12
A data em "Utilizar antes de" encontra-se no
formato ano-mês-dia (AAAA-MM-DD)
8°C
Tabela 5 — Compostos que produzem uma resposta negativa
Composto
Representante Autorizado
Para obter assistência técnica, contactar a Syva Company:
1-800-227-8994 nos EUA
1-800-264-0083 no Canadá
Fora dos EUA e Canadá, contactar o representante local da Syva Company.
Aviso: A adulteração dos reagentes, a utilização de instrumentos inadequados ou outra falha
no cumprimento das instruções definidas neste rótulo podem afectar as características do
desempenho e as indicações do rótulo explícitas ou implícitas.
®
Syva
, Syva ®, d.a.u. ®, ETS ® e Emit ® são marcas comerciais registadas da Syva Company nos
EUA e noutros países.
© 1996, Syva Company
Em caso de acidente ou de indisposição, consultar imediatamente o médico (se
possível mostrar-lhe o rótulo).
Preparado em conformidade com a Directiva 92/32/EEC do Concelho da UE sobre etiquetas.
EINECS 258-921-0
EINECS 247-852-1
EINECS 200-210-4
Para obter informações adicionais sobre saúde e segurança, consultar a ficha de material de
segurança (Material Safety Data Sheet - MSDS) disponível no site Internet da Dade Behring Inc.,
www.dadebehring.com, ou contactar o seu representante local.
EC REP
Dade Behring Limited
Regus House, Atterbury
Milton Keynes MK10 9RG
United Kingdom
Syva Company
Dade Behring Inc.
Cupertino, CA 95014
Printed in USA
Revisto Outubro 2002
3M694UL.15SL
02/04/03 • Part No. 3M694UL.15SL_Portuguese • Layout: 8-1/2" x 11"
• Final size: N/A • Folded to: N/A
• Doc # 204-03-22-02 (if applicable) • Colors: Black