AVALIAÇÃO IN VITRO NA ELIMINAÇÃO DE PROTOTHECA sp UTILIZANDO AS TÉCNICAS DE
ULTRASSOM E OZÔNIO
Universidade Camilo Castelo Branco - UNICASTELO/Instituto de Engenharia Biomédica, Estrada Dr. Altino
Bondesan, 500 - São José dos Campos, SP
Márcio Silva da Conceição, Carlos José de Lima, Lívia Helena Moreira da Silva, Adriana Barrinha
Fernandes
[email protected], [email protected], [email protected], [email protected]
Resumo- A Prototecose é uma doença causada por Prothoteca sp. A doença apresenta aspecto emergente
acometendo principalmente vacas em lactação, que quando são acometidas são descartadas do rebanho
por ser incurável. As técnicas de UltrassoM e Ozônio serão utilizadas em cepas, Padrão e Selvagem, em
diferentes dosagens para se averiguar um possível protocolo de combate a este microrganismo.
Palavras-chave: Prototecose, mastite, bovino, ultrassom, ozônio.
Área do Conhecimento: Bioengenharia
Introdução
A Prototecose, doença causada pela alga
Prototheca, são algas saprófitas e aclorofiladas. A
doença é considerada emergente, pois sua
ocorrência tem aumentado consideravelmente
(Costa et al, 1996). As mastites causada por
Prothoteca sp torna a patologia incurável, aspecto
importante com a recomendação do descarte dos
animais acometidos devido a inexistência de
tratamento antimicrobiano eficaz (Dipersio, 2001).
O ozônio, de fórmula química O3, é uma
forma alotrópica do oxigênio, sendo formado
quando este gás puro ou do ar é exposto a uma
luz ultravioleta de alta densidade, como ocorre
quando a luz solar penetra na atmosfera da terra
criando a camada de ozônio. A molécula
apresenta ação fungicida, viricida e bactericida e
pode ser usada no tratamento de diversas
enfermidades (Sunnen, 2001).
Os efeitos mecânicos do ultrassom de
energia em sistemas químicos em um meio líquido
é principalmente atribuída à cavitação e esta
mesma força tem um efeito dramático sobre
sistemas biológicos. Cavitação acústica pode ser
dividida em dois tipos, de transição e estável. A
primeira ocorre quando as bolhas de cavitação,
cheias com gás ou vapor, são submetidas a
oscilações irregulares e, finalmente, implode. Isso
produz altas temperaturas e pressões locais que
desintegram células biológicas e / ou desnatura as
enzimas presentes. A bolha ao implodir também
produz forças de cisalhamento elevadas e jatos de
líquido em que o solvente também pode ter
energia suficiente para danificar fisicamente a
parede da célula ou membrana celular. Efeitos
mecânicos deste tipo têm sido utilizados em
pequena escala, para a desinfecção de água
contaminada com esporos microbianos, embora, a
energia acústica necessária é elevada. Cavitação
estável, por outro lado, referem-se as bolhas que
oscilam de uma forma regular para muitos ciclos
acústicos. As bolhas ao induzir microstreaming –
ocorre devido ao crescimento e à retração das
bolhas de cavitação - no líquido circundante, que
também pode induzir stress de qualquer espécie
microbiológica presente. O efeito microstreaming
proporciona uma grande força, sem que as bolhas
venham a se a rebentar. Este tipo de cavitação é
importante para uma variedade de aplicações do
ultrassom
na
área
de
biotecnologia
(MASON;TIEHM,2001).
Baseado nessas informações o trabalho
objetiva desenvolver um protocolo eficaz no
combate a Prototheca sp in vitro utilizando as
técnicas de ultrassom e ozônio em cepas padrão e
selvagem.
Metodologia
Serão estudadas in vitro as Cepas Padrão
(ATCC) e Selvagem de Prototheca sp. A amostra
Selvagem será oriunda do leite de um animal com
mastite clínica persistente por Prototheca sp.
As amostras, Padrão e Selvagem, de
Prothoteca sp. serão semeadas em caldo de
Saboroud enriquecida com dextrose, em seguida
o
adicionadas em estufa bacteriológica a 37 C por
um período de 48hs para o seu isolamento e
crescimento. Após este período será feito a
Encontro de Pós-Graduação e Iniciação Científica – Universidade Camilo Castelo Branco
337
caracterização as colônias identificando-as
conforme morfologia e provas bioquímicas
especificas para a diferenciação das espécies, a
seguir será realizado três protocolos:
No primeiro, o tubo de ensaio contendo o
caldo enriquecido mais o microrganismo será
posicionado a uma distância de 0,5 cm com
relação ao fundo da cuba de aço inoxidável do
limpador ultrassônico marca Cole Parmer modelo
8891E-DTH, de potência acústica de 100 Watts e
frequência da vibração mecânica do cristal
piezelétrico de 40 KHz. Os tempos de atuação da
vibração ultrassônica serão de 5, 10, 15, 20, 25 e
30 minutos, o que resulta em valores de dosagens
acústicas de 30, 60, 90, 120, 150 e 180 KJ
respectivamente.
No
segundo,
ozonizará
água
desmineralizada utilizando gerador de ozônio
marca Z-Ozone, modelo ZOT-5G110V até atingir o
valor de concentração de 4.7 PPM, a medida
quantitativa de ozônio na água será realizada com
medidor pelo método colorimétrico marca
CHEMetrics, modelo R-7402. Em seguida,100 ml
da água ozonizada será adicionada em cada tubo
de ensaio com a Prototheca sp a fim de se
verificar o desempenho biocida, serão adotados os
seguintes tempos de atuação do gás O3 sobre as
placas infectadas: 0.5, 1, 2, 3, 4 e 5 minutos, o que
resulta nas dosagens 2.5, 5, 10, 15, 20, e 25 PPM.
No terceiro experimento, será utilizado o
hibrido associando as duas técnicas de Ultrassom
e Ozônio nos mesmos tempos e dosagens das
técnicas anteriores.
Referências
- COSTA, E.O. et al. Relato de um caso de
consumo de queijo fresco contaminado com
Prototheca spp. NAPGAMA, n.1, p.9-10, 1998.
- DIPERSIO J.R. 2001. Prototheca and
protothecosis. Clin. Microbiol. Newsletter 23
(15):115-120.
MASON, T.J.; TIEHM, A. Advances
Sonochemistry. Estados Unidos, 2001, 283p
in
- SILVA M.V.M. & ARAÚJO K.P.C. Mastite e
qualidade do leite. Revista Veterinária e
Zootecnia em Minas 15:20-23. 2008.
- SUNNEN, G. Ozone in medicine: overview and
future
directions.
Disponível
em:
<http://
www.ozoneservice.com>. Acesso em 02 outubro
2001.
Resultados Esperados
O trabalho ainda se encontra em fase de
elaboração experimental. Espera-se que os
estudos in vitro com Prototheca sp, possam
auxiliar nos trabalhos futuros em tratamentos in
vivo.
Discussão
Os programas de controle das mastites
visam diminuir a prevalência da doença em níveis
aceitáveis, utilizando medidas de higienização,
como pré e pós-dipping, para se evitar doenças
oportunistas (SILVA, et al. 2008). A mastite
ambiental causada por Prototheca sp em vacas
ocorre de forma esporádica, com prevalência
baixa na ordem de 45%, este fato se dá por falta
de conhecimento no campo, falta de diagnóstico
adequado, difícil controle e irradicação.
Conclusão
A mastite causada por Prototheca é uma
zoonose e a sua etiologia está relacionada ao
manejo do animal. Com a utilização das técnicas
de Ultrassom e Ozônio aplicados in vitro espera-se
desenvolver um protocolo eficaz no combate a
este agente etiológico.
Encontro de Pós-Graduação e Iniciação Científica – Universidade Camilo Castelo Branco
338