DIAGNÓSTICO DE CONTAMINAÇÃO FECAL- CANAL DE SANTA CRUZ, ITAPISSUMA, PE Lira, J.A.M.(1); Oliveira, F.H.P.C.(2); Luz, B.R.A.(1); Santos, E.C.P.(1) [email protected] (1) (2) Universidade de Pernambuco - UPE, Recife - PE, Brasil; Companhia Pernambucana de Saneamento - COMPESA, Recife - PE, Brasil. RESUMO O presente trabalho avaliou a qualidade microbiológica das amostras de água provenientes do Canal de Santa Cruz (CSC), às margens do município de Itapissuma- PE- Brasil. O Canal de Santa Cruz tem sido alvo de despejos possivelmente domésticos e industriais que contribuem para a sua contaminação e consequentemente degradam o ecossistema local. O esgoto lançado pode afetar as atividades pesqueiras e principalmente a saúde dos consumidores de frutos-do-mar, sendo assim o trabalho objetivou a verificação da qualidade ambiental através da confirmação da presença de Escherichia coli, Coliformes totais, Clostridium e Enterococcus nas amostras coletadas. As coletas foram realizadas nos meses de novembro e dezembro de 2012 em quatro pontos, onde foram coletadas quatro amostras por mês.Os resultados confirmaram a presença desses microrganismos, com destaque para Clostridium, que apresentou resultado >23NMP/mL em todos os pontos. A confirmação da presença desses patógenos, juntamente com a visível poluição do local, contribuem para um diagnóstico de má qualidade dessas águas. Palavras –chaves: Qualidade Microbiológica, Poluição, Saúde Pública. Resumos Expandidos do I CONICBIO / II CONABIO / VI SIMCBIO (v.2) Universidade Católica de Pernambuco - Recife - PE - Brasil - 11 a 14 de novembro de 2013 INTRODUÇÃO O município de Itapissuma é o maior fornecedor de pescados do Estado de Pernambuco, cerca de 70% da sua população depende direta ou indiretamente da pesca artesanal (FIGUEIREDO E LEITÃO, 2009). O manguezal do Canal de Santa Cruz é de extrema importância para as comunidades ribeirinhas é considerado fonte de vida, alimento e trabalho, o despejo de esgotos industriais e domésticos lançados no Canal de Santa Cruz é apontado como uma das causas da poluição, dessa maneira, causa a degradação do meio ambiente e prejudica a pesca no município de Itapissuma (LIMA & QUINAMO, 2000). A qualidade das águas pode ser avaliada através de indicadores microbiológicos de poluição fecal como: Coliformes Termotolerantes, Coliformes Totais, Escherichia coli e Enterococcus (SHIBATHA et al, 2004). No entanto, também são utilizadas bactérias do gênero Clostridium e a espécie Pseudomonas aeruginosa (MENDES, 2010). O Canal de Santa Cruz tem sido alvo de lançamentos de rejeitos orgânicos. Com base nessas informações e sobre os riscos que a poluição pode causar fez-se necessária a confirmação da presença de Escherichia coli, Coliformes totais, Clostridium e Enterococcus como indicadores de poluição fecal, com a finalidade de verificar a qualidade ambiental dessas águas. 2 Resumos Expandidos do I CONICBIO / II CONABIO / VI SIMCBIO (v.2) Universidade Católica de Pernambuco - Recife - PE - Brasil - 11 a 14 de novembro de 2013 MATERIAL E MÉTODOS Descrição da área de estudo O município de Itapissuma fica localizado no litoral norte do Estado de Pernambuco a 34,89° W e 7,77°S, está inserido na Área de Proteção Ambiental por ser cercado de ecossistema de manguezais, resquícios de Mata Atlântica e Restinga. Esse município margeia o Canal de Santa Cruz, que fica localizado a 7° 34’00’’- 7 ° 55’16’’S e 34° 48’48’’34º52’48’’W (CPRH, 2011). O Canal de Santa Cruz é definido como um braço de mar localizado entre o Município de Itapissuma e a Ilha de Itamaracá que sofre influência de águas dulcícolas e oceânicas (KEMPF , 1970). Metodologia de campo As coletas foram realizadas às margens do Canal de Santa Cruz durante os meses de novembro e dezembro de 2012. Foram determinados quatro pontos, os quais são mais frequentados pelos pescadores: ponto 1 margem esquerda a oeste (Mangue do Aterro localizado próximo à colônia de pescadores Z-10),ponto 2 margem direita a oeste (Mangue do Arame, localizado próximo ao presídio agrícola), ponto 3 margem direita a leste (Mangue das Garças localizado próximo ao Nazareno Dorf) e ponto 4 na margem esquerda a leste ( Mangue do Suruajá localizado próximo ao estaleiro Navessul). 3 Resumos Expandidos do I CONICBIO / II CONABIO / VI SIMCBIO (v.2) Universidade Católica de Pernambuco - Recife - PE - Brasil - 11 a 14 de novembro de 2013 Dessa forma foram coletadas, aleatoriamente, quatro amostras de água/mês contendo 1000mL cada. Também foram considerados dados ambientais como temperatura da água (aferida “in loco”, por meio de um termômetro digital) e valores de pH, fornecidos pela Agência Pernambucana de Recursos Hídricos (CPRH,2012). As amostras foram coletadas em sacos plásticos estéreis, em seguida foram devidamente identificadas e armazenadas em recipientes de isopor com gelo. Logo após essas amostras foram transportadas até o Laboratório de microbiologia do Laboratório de Experimentação e Analise de Alimentos (LEAAL), pertencente à Universidade Federal de Pernambuco (UFPE), onde foram realizadas as análises microbiológicas no prazo de 24 horas após as coletas, conforme descrito por Standard Methods for the Examination of Water and Wasterwater, (APHA, 1998) Metodologia de laboratório Os primeiros ensaios realizados foram E.coli e Coliformes Totais/100mL, seguiu conforme as orientações relacionadas (APHA, 1998). Sendo assim foram transferidos 100mL da amostra para frascos estéreis, em seguida foram adicionados os substratos cromogênico e fluorogênico (ONPG e MUG). Dessa forma, a mistura foi homogeneizada e colocada em estufa a 35,0° C ±1,0°C durante 24 ± 2 horas, para posterior observação da mudança da sua coloração ( cor amarelo escuro como indicativo da presença de Coliformes Totais). A 4 Resumos Expandidos do I CONICBIO / II CONABIO / VI SIMCBIO (v.2) Universidade Católica de Pernambuco - Recife - PE - Brasil - 11 a 14 de novembro de 2013 mistura também foi submetida à luz ultra violeta para confirmar a sua capacidade de fluorescência ( indicativo da presença de E. coli). Clostrídio sulfito redutor NMP/100mL, baseou-se nas instruções normativas nº 62, de 23 de agosto de 2003 do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA, 2003). Sendo assim foi utilizada uma série contendo 10 tubos de ensaio com 10mL de caldo DRCM em concentração dupla, distribuídos por meio de pipetador calibrado e ponteira descartável estéril. Antes da realização dos ensaios foi feita a assepsia da abertura dos sacos estéreis contendo as amostras de água, por meio de álcool etílico a 70% .Em seguida foram pipetados 10mL da amostra nos 10 tubos com caldo DRCM, transferindo-os para jarra GasPak® juntamente com um gerador de anaerobiose e tubo controle inoculado com cepa de referência e tubo branco sem amostra. Dessa maneira, a jarra foi incubada em estufa com temperatura controlada em 35,0°C ± 1,0°C durante 48 ±2 horas. Após o período de incubação foi feita cuidadosamente a abertura da jarra, para verificar se havia ocorrido turvação e enegrecimento dos tubos confirmativo da presença do gênero Clostridium. Para realização do ensaio Enterococos NMP/100mL foi necessário o preparo de Caldo azida dextrose em dupla concentração, dessa maneira foram preparados 100mL e assim foram distribuídos 10mL, por meio de pipeta calibrada, em 10 tubos de ensaio. Após as distribuições os 5 Resumos Expandidos do I CONICBIO / II CONABIO / VI SIMCBIO (v.2) Universidade Católica de Pernambuco - Recife - PE - Brasil - 11 a 14 de novembro de 2013 tubos pipetados foram autoclavados a 121°C e 1 ATM. Também foram utilizados os controles branco ( 10m L de Caldo azida) e positivo, sendo esse último inoculado com 10µ L da cepa de referência, mantida sob refrigeração em Agar nutriente inclinado (APHA, 1998). Dessa forma, todos os tubos pipetados foram incubados na estufa com temperatura controlada em 35,0°C ±1,0°C durante 24 horas ±2 horas. Após esse intervalo verificou-se se havia turvação ou formação de precipitado no meio, como indicativo presuntivo da presença de Streptococcus faecalis. A confirmação da presença da espécie ocorreu através da pipetagem de 200μL dos tubos positivos no teste presuntivo para as placas de petri com meio Agar enteroccosel, as quais foram invertidas e incubadas em estufa controlada a 35,0°C ±1,0°C durante 24± 2 horas. No final, foi possível observar crescimento de colônias negras com halos marrons, sendo esse um indicativo da presença da espécie. RESULTADOS E DISCUSSÃO Os resultados confirmaram a presença de todos os microrganismos estudados. Foi confirmada a presença de E.coli e Coliformes totais em todas as amostras (Figura 1 A),sendo assim apontamos o lançamento de esgotos domésticos e industriais não tratados, como possíveis causadores da poluição no local. 6 Resumos Expandidos do I CONICBIO / II CONABIO / VI SIMCBIO (v.2) Universidade Católica de Pernambuco - Recife - PE - Brasil - 11 a 14 de novembro de 2013 As resoluções nº 274 (CONAMA, 2000) e nº 357 (CONAMA, 2005) estabelecem respectivamente, limite de 800 E.coli/100mL e 1000 Coliformes termotolerantes/100mL para as águas salobras. No Entanto, não foi possível comparar os nossos resultados com os parâmetros mencionados, pois o método utilizado permitiu a análise dos dados qualitativos. Também foi confirmada a presença incontável do Gênero Clostridium em todas as amostras, sendo os resultados expressos como >23 NMP/100mL (Figura 1B). A presença desses microrganismos é um forte indicativo de contaminação por esgotos, uma vez que eles habitam a nossa flora intestinal. O gênero Enterococcus foi encontrado apenas nos pontos 1 e 4 do mês de dezembro, sendo assim apresentaram resultados de 15 NMP/100mL e 20NMP/100mL respectivamente (Figura 1 C). Esse gênero é bastante resistente à salinidade e pode habitar o trato intestinal do homem e de outros animais, dessa forma os resultados reforçam as suspeitas de contaminação por esgoto não tratado. Das normas brasileiras só a resolução n° 274 (CONAMA, 2000) estabelece limites para tal ensaio, nossos resultados estão dentro dos padrões estabelecidos, que preconizam limite de até 100 Enterococos NMP/100mL. A poluição do Canal de Santa Cruz foi abordada por Rasp (1999), que apontou os causadores de problemas ambientais da região como: implantação de indústrias, agroindústrias e lançamento de esgoto 7 Resumos Expandidos do I CONICBIO / II CONABIO / VI SIMCBIO (v.2) Universidade Católica de Pernambuco - Recife - PE - Brasil - 11 a 14 de novembro de 2013 doméstico. Outro autor que aborda o mesmo tema é Mellancon (1995), o qual confirma a contaminação fecal no Canal de Santa Cruz expressa por >2400 NMP/100mL. O autor também faz um alerta sobre o lançamento de esgoto doméstico no local, sendo assim podemos observar que a poluição é um problema antigo. Dados mais recentes do CPRH (2012) também confirmaram a contaminação por Coliformes termotolerantes, nesse grupo está incluso E.coli. cujo valor foi 2300 NMP/100mL, também foram fornecidos valores de pH(7,8) e temperatura (29°C) durante o mês de novembro, a temperatura aferida por nós no local da coleta variou de 28,9°C a 30,6°C, aproximando-se do valor informado pelo CPRH. Essas variáveis contribuem para a multiplicação das bactérias mesófilas, cuja temperatura (10°C a 50°C) e Ph( 5,0 a 8,0) estão dentro desses valores considerados ótimos para o crescimento (TORTORA, 2005). O CPRH classifica o ponto próximo ao mercado de Itapissuma,como poluído e de alta ação antrópica, esses resultados enfatizam as suspeitas de contaminação por esgoto, próximo ao local de coleta existe lançamento de resíduos ( Figura 1D). Os resultados obtidos em outros trabalhos também estão de acordo com os nossos, como é o caso de Vieira (2008), cuja contaminação por E.coli e Coliformes totais esteve presente em 100% das suas amostras. Miotto (2009) confirmou a presença do gênero Enterococcus nas 8 Resumos Expandidos do I CONICBIO / II CONABIO / VI SIMCBIO (v.2) Universidade Católica de Pernambuco - Recife - PE - Brasil - 11 a 14 de novembro de 2013 amostras de água, cujo resultado variou de <1,8 NMP/100mL e 210 NMP/100 mL apresentando contaminação mais relevante, diferente dos nossos resultados, em que obtivemos a ausência do micro-organismo. Figura 1. (A) Representação da contaminação por E. coli e coliformes totais em 100% das amostras. (B) Representação da contaminação incontável do gênero Clostridium, em todas as amostras. (C) Representação da baixa contaminação do gênero Enterococcus nas amostras. (D) Lançamento de esgoto próximo ao mercado de Itapissuma. Galvão (2004) também realizou ensaios para verificar a presença do gênero Clostridium, seus resultados oscilaram entre 3,2 NMP/100mL e 1,5 NMP/100mL, enquanto os nossos foram incontáveis em todos os pontos estudados. 9 1D Resumos Expandidos do I CONICBIO / II CONABIO / VI SIMCBIO (v.2) Universidade Católica de Pernambuco - Recife - PE - Brasil - 11 a 14 de novembro de 2013 CONCLUSÃO De acordo com os resultados, os pontos de coleta estão contaminados pelos patógenos analisados nesse estudo, com exceção do gênero Enterococcus que está dentro dos padrões estabelecidos. De maneira geral o Canal de Santa Cruz, no trecho de Itapissuma, está contaminado e oferece riscos à saúde pública, pois deles são retirados os frutos- do –mar mais consumidos da Região Metropolitana do Recife. Apontamos a conscientização ambiental e maior fiscalização por parte dos órgãos competentes, como soluções para minimização da poluição no local. REFERÊNCIAS AGÊNCIA ESTADUAL DO MEIO AMBIENTE E RECURSOS HÍDRICOS. Dados do monitoramento do Canal de Santa Cruz. 2012. AGÊNCIA ESTADUAL DE MEIO AMBIENTE E RECURSOS HÍDRICOS. A pesca no litoral Norte. Diagnóstico sócioambiental- Litoral Norte de Pernambuco.p. 91-98.2011.Disponível em: < http://www.cprh.pe.gov.br>. Acesso em: 16/05/12. APHA; AWWA; WEF. Standard methods for the examination of water andwastewater, 20 ed. Washington: APHA, 1998. BRASIL. 2001. Conselho Nacional do Meio Ambiente –CONAMA. Resolução nº 274, de novembro de 2000. Diário Oficial da República 10 Resumos Expandidos do I CONICBIO / II CONABIO / VI SIMCBIO (v.2) Universidade Católica de Pernambuco - Recife - PE - Brasil - 11 a 14 de novembro de 2013 Federativa do Brasil. Brasília, DF. Disponível <http://www.mma.gov.br/conama/res/res05/res35705.pdf.> Acesso em: em: 08 de janeiro de 2013. CONSELHO NACIONAL DO MEIO AMBIENTE. Resolução n° 357 de 17 de março de 2005. Diário Oficial da República Federativa do Brasil. Brasília, DF. Disponível em: <http://www.mma.gov.br/conama/res/res05/res35705.pdf.> Acesso em: 19 de outubro 2012. FIGUEIREDO,A.C.A.O;LEITÃO;M.R.F.A. O processo da extensão pesqueira no Município de Itapissuma- Pernambuco Período de 1995-2009, 2009. GALVÃO,J.A. Qualidade microbiológica da água de cultivo e do mexilhão Perna perna (Linnaeus, 1758), comercializados em Ubatuba, SP.128 f.Dissertação( Mestrado em Ciência e Tecnologia de Alimentos)- Escola Superior de Agricultura,Universidade de São Paulo, Piracicaba, 2004. KEMPF, M. Nota preliminar sobre os fundos costeiros da região de Itamaracá (norte do Estado de Pernambuco, Brasil). Trab. Oceanografia. Universidade Federal de Pernambuco. PE. Recife, v. 9/11, p. 95-110, 1970. LIMA, T. & QUINAMO, T."Características sócio-econômicas". In: BARROS, H. M.; ESKINAZI-LEÇA, E.; Macedo, S. J. & Lima, T.(eds.): Gerenciamento Participativo de Estuários e Manguezais. Recife: Editora Universitária. p.181-225, 2000. MELANCON, M. J. Bioindicators used in aquatic and terrestrial monitoring. In: HOFFMAN, D. J.; RATTNER, B. A.; BURTON JR, G.A.; CAIRNS JR, J. (Eds.) Handbook of ecotoxicology. Flórida: Lewis Publishers/CRC Press. p. 220-240,1995. MENDES, B. Microbiologia da água. Pag 506-522 in Ferreira, W.F.C, Sousa, J.C.F. & Lima, N. (coords.). Microbiologia. Lidel-Edições técnicas, Lda. Lisboa. 622 f. 2010. 11 Resumos Expandidos do I CONICBIO / II CONABIO / VI SIMCBIO (v.2) Universidade Católica de Pernambuco - Recife - PE - Brasil - 11 a 14 de novembro de 2013 MINISTÉRIO DA AGRICULTURA,PECUÁRIA E ABASTECIMENTO.Instrução normativa n° 62 de 26 de agosto de 2003. Sistema de consulta à legislação. Disponível em: < http://sistemasweb.agricultura.gov.br>. Acesso em: 12/05/2013. MIOTTO, L.A. Coliformes termotolerantes e Enterococcus sp em Ostras e águas salinas utilizadas para cultivo de moluscos bivalves na Baía Sul da Ilha de Santa Catarina- Brasil.104 f.Dissertação em Ciências do Alimentos – Centro de Ciências Agrárias. Universidade Federal de Santa Catarina.Florianópolis:Santa Catarina, 2009. RASP, U. Ambiente e saúde em área de manguezal: o caso de Vila Velha – Itamaracá- PE. Dissertação em Saúde Pública – Departamento de estudos em Saúde Coletiva. 110f. Recife, 1999. SHIBATA, T.; SOLO-GABRIELE, H.M.; FLEMING L.E.; ELMIR. S.Monitoring marine recreational water quality usingmultiple microbial indicators in an urban tropical environment. Water Research, v.38, p.31193131,2004. TORTORA, G. J; FUNKE, B. R; CASE, C. L. Microbiologia: Doenças Microbianas do Sistema Digestivo. Porto Alegre: Artmed Editora S/A, Ed 8, cap. 25, p. 705-709, 2005. VIEIRA, R.H.S.F; ATAYDE, M.A; CARVALHO, E.M.R; CARVALHO, F.C.T; FONTELLES FILHO, A.A. Contaminação fecal da ostra Crassostrea rhizophorae e da água de cultivo do estuário do rio Pacoti (Eusébio, Estado do Ceará): isolamento e identificação de Escherichia coli e sua suscetibilidade a diferentes antimicrobianos.Brazillian Journal of Veterinary Reserarch and Animal Science. São Paulo, n 3, v .45, p . 180-189, 2008. 12